專利名稱：?jiǎn)挝吨窆?jié)參制劑及其總皂苷制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制劑，具體是涉及一種單味竹節(jié)參制劑及其總皂苷制備方法。
竹節(jié)參為五加科植物竹節(jié)參Panax japonicus C.A.May的干燥根莖，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、散瘀止痛、止血祛痰等功效，現(xiàn)代藥理研究證明其總皂苷(下稱“J原料”)具有1、抗缺血，抗缺氧作用[6]J原料可明顯延長(zhǎng)缺血、缺氧狀態(tài)下小鼠的存活時(shí)間，有顯著的耐缺血、缺氧作用。還可明顯降低腦梗塞率、腦指數(shù)、腦含水量。
2、抗氧化作用[3]J原料可顯著提高SOD活性，降低MDA含量，降低NOS活性，有較強(qiáng)的清除O2-和OH-作用。
3、擴(kuò)張冠脈，降低心肌耗氧量[2]J原料可顯著減慢麻醉犬心率，降低外周阻力及血壓，增加冠狀靜脈竇流量，升高血漿cAMP，降低cGMP。
4、抗血栓作用J原料可抑制血小板聚集，抑制血栓的形成，減少血栓的濕重和干重。
鑒于腦梗塞是腦血管疾病中的常見(jiàn)病、多發(fā)病，約占腦血管病的75％，有一定的病死率，80％的存活者留有程度不等的功能障礙，約40％重度致殘。隨著我國(guó)人口的逐步老齡化，其發(fā)病率還會(huì)不斷上升，病死率和病殘率已躍居諸病之首。雖然隨著現(xiàn)代中西醫(yī)學(xué)的發(fā)展，其診斷與搶救水平有了較明顯的提高，但其治愈率，仍然均不滿意。因此要特別重視超早期及急性期的治療，盡早恢復(fù)缺血區(qū)的血液供應(yīng)，改善微循環(huán)，阻斷腦梗死的病理過(guò)程，據(jù)此開(kāi)發(fā)有效中藥制劑，進(jìn)一步提高療效。
根據(jù)腦血管病的臨床表現(xiàn)，一般均認(rèn)為屬于中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)”病的范圍，當(dāng)前按其出血、缺血的不同，分別稱之為出血性中風(fēng)與缺血性中風(fēng)，后者即系指腦梗塞等而言。中醫(yī)對(duì)中風(fēng)的病因病機(jī)，歷代論述頗多，但其病理基礎(chǔ)，不外風(fēng)、火、痰、瘀、虛諸端，對(duì)缺血性中風(fēng)特別強(qiáng)調(diào)“血瘀”是其病理特點(diǎn)，在應(yīng)用活血化瘀法治療腦梗塞方面，積累了許多經(jīng)驗(yàn)，這與現(xiàn)代溶栓、抗凝、降低血粘和血小板聚集等頗多相通之處。但尤應(yīng)重視審癥求因，針對(duì)血瘀之源，根據(jù)病性虛實(shí)，辨別“氣虛血瘀”、“陰虛風(fēng)動(dòng)”、“風(fēng)痰瘀阻”、“痰熱腑實(shí)”等不同類型，分癥治療。
早在清·王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》就力倡“氣虛血瘀”是中風(fēng)半身不遂的主要病機(jī)病證，并創(chuàng)補(bǔ)陽(yáng)還五湯名方，成為后人治療的圭臬，但就中醫(yī)辨證而言，既可因虛致瘀，亦可見(jiàn)熱郁血瘀，血?dú)馍夏妫鲎枘X絡(luò)之實(shí)證，治療又當(dāng)涼血清熱，化瘀通絡(luò)。臨證表明這類“絡(luò)熱血瘀”、“風(fēng)痰瘀阻”之證，既可見(jiàn)于急性期，亦可發(fā)生在恢復(fù)期以至后遺癥期，從而補(bǔ)充了單一強(qiáng)調(diào)益氣祛瘀治法的不足，并為本制劑的研制提供了理論基礎(chǔ)。
然而目前有關(guān)竹節(jié)參的研究報(bào)道并無(wú)其總皂苷提取的詳細(xì)研究，也沒(méi)有用其治療醒腦血管疾病的制劑，故本發(fā)明提供了一種單味竹節(jié)參制劑及其總皂苷制備方法。
本發(fā)明的初步藥理藥效研究如下1.對(duì)急性實(shí)驗(yàn)性全腦缺血小鼠的保護(hù)作用①取ICR小鼠80只，雌雄兼?zhèn)洌S機(jī)分為4組，即生理鹽水組1、J原料(po)I(15mg/kg)、J原料(po)II(30mg/kg)、J原料(po)III(60mg/kg)3個(gè)劑量組共4組；J原料(po)各組均通過(guò)口服給藥，給藥容積為20ml/kg。口服給藥30min后，仰臥位固定，用0號(hào)手術(shù)縫線兩端結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(合并迷走神經(jīng))后中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時(shí)間。結(jié)果顯示J原料在30mg/kg口服時(shí)，與生理鹽水組比，即能顯著延長(zhǎng)急性實(shí)驗(yàn)性全腦缺血小鼠的存活時(shí)間。見(jiàn)表1。
表1 J原料口服對(duì)急性實(shí)驗(yàn)性小鼠全腦缺血作用(X±SD)劑量動(dòng)物數(shù) 呼吸維持時(shí)間組別(mg/kg) (只) (分鐘)生理鹽水組 -11 1.89±0.70J原料I(po) 15 11 2.18±0.45J原料II(po) 30 11 3.88±1.41*J原料III(po)60 11 4.66±1.94*與模型組比較*P＜0.05②取ICR小鼠100只，雌雄兼?zhèn)?，隨機(jī)分為5組，即模型組(給予等容積的生理鹽水)、陽(yáng)性藥物組(尼膜同溶液2mg/kg)、J原料(iv)I(0.75mg/kg)、II(1.5mg/kg)、III(3.0mg/kg)3個(gè)劑量組共5組；各組均通過(guò)尾靜脈給藥，給藥容積為10ml/kg。靜脈給藥10min后，仰臥位固定，用0號(hào)手術(shù)縫線兩端結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(合并迷走神經(jīng))后中間剪斷。記錄小鼠的呼吸維持時(shí)間。
結(jié)果顯示，J原料靜脈注射各劑量組均能延長(zhǎng)急性腦缺血的小鼠存活時(shí)間，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 J原料靜脈注射對(duì)小鼠急性腦缺血的保護(hù)作用(X±SD)劑量動(dòng)物數(shù) 呼吸維持時(shí)間組別(mg/kg) (只) (分鐘)模 型 組-20 2.94±0.91尼膜同組220 7.08±3.72**J原料(iv)I 240 20 4.63±3.22*J原料(iv)II 480 20 6.84±3.89料J原料(iv)III960 20 8.71±5.55**與模型組比較*P＜0.05，料P＜0.012.對(duì)大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓重量及抑制率的影響SD雄性大鼠50只，體重250～350g，隨機(jī)分為5組，即模型組(給予等容積生理鹽水)、陽(yáng)性藥物組(8g/kg的復(fù)方丹參注射液)、J原料(iv)I(0.75mg/kg)、II(1.5mg/kg)、III(3.0mg/kg)3個(gè)劑量組，給藥容積為10ml/kg。以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，仰位固定，分離右頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈。取3段聚乙烯管，其中兩段管內(nèi)徑為1mm，長(zhǎng)約6cm，中間段內(nèi)徑為2mm，長(zhǎng)約6.5cm。在三段管的中段放入一根長(zhǎng)約5cm的4號(hào)手術(shù)線。用充滿肝素生理鹽水(50u/ml)的聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈，在將聚乙烯管的另一端插入右頸總動(dòng)脈，給藥后30min開(kāi)放血流，15min后中斷血流，迅速取出絲線稱重，血栓濕重為總重量減去絲線重。再將血栓充分干燥(60℃，24h)，稱重。按下列公式計(jì)算血栓抑制率，并采用組間t檢驗(yàn)法與模型組進(jìn)行顯著性測(cè)定比較
結(jié)果顯示，J原料(iv)3.0mg/kg對(duì)大鼠動(dòng)靜脈短路血栓的濕重具有明顯的降低作用，與模型組比較，差異顯著(p＜0.05)；J原料(iv)3.0mg/kg劑量組、1.5mg/kg劑量組血栓干重均明顯低于模型組，差異顯著(p＜0.05、p＜0.01)，干、濕重抑制率亦明顯增高。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 J原料(iv)對(duì)大鼠動(dòng)靜脈血栓干、濕重及抑制率的影響(n＝10，X±s)劑量 血栓濕重濕重抑制率血栓干重 干重抑制率組別(mg/kg) (mg) (％) (mg) (％)生理鹽水組 -- 34.41±28.72 --4.66±1.13 --復(fù)方丹參組 8g/kg 9.51±4.38* 72.36 1.18±0.54**74.68J原料(iv)I 0.7521.31±8.78 38.07 3.59±1.27 22.96J原料(iv)II 1.5 18.17±7.72 47.20 3.27±1.44* 29.83J原料*(iv)III3.0 14.68±5.14*57.34 2.79±0.92**40.13與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)果表明J原料口服與靜脈注射能顯著延長(zhǎng)急性實(shí)驗(yàn)性全腦缺血小鼠的存活時(shí)間。J原料靜脈注射對(duì)大鼠動(dòng)靜脈短路血栓的濕重、血栓干重具有明顯的降低作用；對(duì)大鼠動(dòng)靜脈短路血栓干、濕重抑制率亦明顯增高。有關(guān)其他藥理藥效正在作進(jìn)一步研究。
本發(fā)明的另一目的是提供了單味竹節(jié)參制劑的備方法，該方法包括下列步驟
①、將竹節(jié)參藥材初粉加1.0％Caco3[1]粉末，再加4倍量水浸泡5-6小時(shí)，再將水加至藥材10倍量，煮沸2.0小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再分別加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.20(50℃)。以上步驟用HPLC控制苷元齊敦果酸。濃縮液備用。
②、將濃縮液用95％乙醇調(diào)醇至80％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味，用水飽和正丁醇萃取至無(wú)總皂苷，合并正丁醇萃取液③、加0.2％NaOH水溶液適量洗滌正丁醇萃取液兩次，去堿水層，用正丁醇飽和水洗丁醇層至中性，減壓回收正丁醇至干④、加適量30％乙醇完全溶解，緩慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，邊加入邊攪拌，過(guò)濾，沉淀用適量丙酮洗滌，95℃吹風(fēng)干燥得類白色竹節(jié)參總皂苷(J原料)。
⑤、制備單味竹節(jié)參制劑粉針J原料取5g，滅菌分裝，用注射用水溶解，凍干即得。
用本發(fā)明方法制得的單味竹節(jié)參制劑檢測(cè)結(jié)果如下一、本品的質(zhì)量控制a.本品為注射用無(wú)菌粉末(內(nèi)容物為白色粉末狀物質(zhì))b.裝量差異應(yīng)符合中國(guó)藥典2000版注射用無(wú)菌粉項(xiàng)下的規(guī)定c.無(wú)菌應(yīng)符合中國(guó)藥典2000版注射劑項(xiàng)下的規(guī)定d.不溶性微粒應(yīng)符合中國(guó)藥典2000版注射劑項(xiàng)下的規(guī)定二、半成品的質(zhì)量控制總皂苷的含量5％香草醛冰乙酸、高氯酸顯色，545nm，紫外分光光度法測(cè)定J原料中總皂苷大于80％。
本發(fā)明還涉及另外一種竹節(jié)參總皂苷的提取方法，具體如下大孔吸附樹(shù)脂法提取總皂甙(J-1原料)將竹節(jié)參藥材初粉加1.0％Caco3[1]粉末，再加4倍量水浸泡5-6小時(shí)，再將水加至藥材10倍量，煮沸2.0小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再分別加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.20(50℃)。以上步驟用HPLC控制苷元齊敦果酸。濃縮液備用。將濃縮液上D101大孔樹(shù)脂柱，以水洗至無(wú)色，45％乙醇洗脫，TLC控制苷元齊敦果酸。硅膠G，展開(kāi)劑苯-乙酸乙酯(1∶1)10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱顯色。收集洗脫液，減壓回收至干，30％乙醇適量溶解，緩慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，邊加入邊攪拌，過(guò)濾，沉淀用適量丙酮洗滌，95℃吹風(fēng)干燥得黃白色總皂苷(J-1原料)。5％香草醛冰乙酸，高氯酸顯色，545nm，紫外分光光度法測(cè)定J原料中總皂苷大于70％。
溶劑法與大孔吸附樹(shù)脂法提取竹節(jié)參總皂苷的比較①薄層鑒別取人參皂苷Rg1、Re各適量用甲醇配成溶液，Rb1、J、J-1各適量分別用甲醇配成溶液。備用。硅膠G，展開(kāi)劑正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上層液，10％硫酸乙醇液，105℃烘約10分鐘顯色。J、J-1、Rb1于相同Rf處有相同顏色斑點(diǎn)，而在人參皂苷Rg1、Re相應(yīng)Rf處則無(wú)斑點(diǎn)。J、J-1斑點(diǎn)基本一致。但J-1背景色深。J無(wú)背景色。
②性狀比較J色淺，呈白色，不易吸濕；J-1，色深，呈淡黃色。易吸濕。
實(shí)例1、制備單味竹節(jié)參粉針劑處方竹節(jié)參 500g制成10000支方法將竹節(jié)參藥材初粉加1.0％Caco3[1]粉末，再加4倍量水浸泡5-6小時(shí)，再將水加至藥材10倍量，煮沸2.0小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再分別加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.20(50℃)。以上步驟用HPLC控制苷元齊敦果酸。濃縮液備用。將濃縮液用95％乙醇調(diào)醇至80％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味，用水飽和正丁醇萃取至無(wú)總皂苷，合并正丁醇萃取液，加0.2％NaOH水溶液適量洗滌正丁醇萃取液兩次，去堿水層，用正丁醇飽和水洗丁醇層至中性，減壓回收正丁醇至干，加適量30％7醇完全溶解，緩慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，邊加入邊攪拌，過(guò)濾，沉淀用適量丙酮洗滌，95℃吹風(fēng)干燥得類白色竹節(jié)參總皂苷(J原料)。J原料滅菌分裝，用注射用水溶解，凍干即得。
實(shí)例2、制備單味竹節(jié)參粉針劑處方J原料5g制成10000支方法同實(shí)例1。
實(shí)例3、制備單味竹節(jié)參片劑處方J原料100g制成10000粒方法J原料，磨細(xì)粉過(guò)100目篩，加適量乳糖混勻，用70％乙醇濕潤(rùn)制粒，過(guò)24目篩，75℃干燥，整粒，加入硬酯酸鎂混勻壓片、包衣制成的片劑。
實(shí)例4、制備單味竹節(jié)參膠囊劑處方J原料100g制成10000粒方法J原料，磨細(xì)粉過(guò)100目篩，加適量乳糖混勻，用70％乙醇濕潤(rùn)制粒，過(guò)24目篩，75℃干燥，整粒，裝膠囊制成10000粒。
實(shí)例5、制備單味竹節(jié)參顆粒劑方法J原料，磨細(xì)粉過(guò)100目篩，加適量乳糖混勻，用70％乙醇濕潤(rùn)制粒，過(guò)24目篩，75℃干燥，整粒分裝即得。
權(quán)利要求
1.一種單味竹節(jié)參制劑，其特征在于該單味竹節(jié)參制劑是由將竹節(jié)參藥材初粉加1.0％Caco3粉末，再加4倍量水浸泡5-6小時(shí)，再將水加至藥材10倍量，煮沸2.0小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再分別加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.20(50℃)。將濃縮液用95％乙醇調(diào)醇至80％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味，用水飽和正丁醇萃取至無(wú)總皂苷，合并正丁醇萃取液，加0.2％NaOH水溶液適量洗滌兩次，去堿水層，用正丁醇飽和水洗丁醇層至中性，減壓回收正丁醇至干，加適量30％乙醇完全溶解，緩慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，邊加入邊攪拌，過(guò)濾，沉淀用適量丙酮洗滌，95℃吹風(fēng)干燥得類白色總皂苷(J原料)。以HPLC控制苷元齊敦果酸。5％香草醛冰乙酸，高氯酸顯色，545nm，紫外分光光度法測(cè)定J原料中總皂苷大于80％。然后與藥用載體組成100％得制劑。
2.一種如權(quán)利要求1所述的單味竹節(jié)參制劑的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟①、將竹節(jié)參藥材初粉加1.0％Caco3粉末，再加4倍量水浸泡5-6小時(shí)，再將水加至藥材10倍量，煮沸2.0小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再分別加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.20(50℃)。以上步驟用HPLC控制苷元齊敦果酸。濃縮液備用。②、將濃縮液用95％乙醇調(diào)醇至80％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味，用水飽和正丁醇萃取至無(wú)總皂苷，合并正丁醇萃取液③、加0.2％NaOH水溶液適量洗滌正丁醇萃取液兩次，去堿水層，用正丁醇飽和水洗丁醇層至中性，減壓回收正丁醇至干④、加適量30％乙醇完全溶解，緩慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，邊加入邊攪拌，過(guò)濾，沉淀用適量丙酮洗滌，95℃吹風(fēng)干燥得類白色竹節(jié)參總皂苷(J原料)。⑤、制備單味竹節(jié)參制劑粉針J原料取5g，滅菌分裝，用注射用水溶解，凍干即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的一種單味竹節(jié)參制劑及制備方法，其特征在于其中所述的單味竹節(jié)參制劑的制備是按提取工藝所得J原料，磨細(xì)粉過(guò)100目篩，加適量乳糖混勻，用70％乙醇濕潤(rùn)制粒，過(guò)24目篩，75℃干燥，整粒，加入硬酯酸鎂混勻壓片、包衣制成的片劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的一種單味竹節(jié)參制劑及制備方法，其特征在于其中所述的單味竹節(jié)參制劑的制備是按提取工藝所得J原料，磨細(xì)粉過(guò)100目篩，加適量乳糖混勻，用70％乙醇濕潤(rùn)制粒，過(guò)24目篩，75℃干燥，整粒，裝膠囊制成膠囊劑。
5.本發(fā)明還涉及另外一種竹節(jié)參總皂苷的提取方法，具體如下大孔吸附樹(shù)脂法提取總皂甙(J-1原料)將竹節(jié)參藥材初粉加1.0％Caco3粉末，再加4倍量水浸泡5-6小時(shí)，再將水加至藥材10倍量，煮沸2.0小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再分別加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并煎煮液，濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.20(50℃)。以上步驟用HPLC控制苷元齊敦果酸。濃縮液備用。將濃縮液上D101大孔樹(shù)脂柱，以水洗至無(wú)色，45％乙醇洗脫，TLC控制苷元齊敦果酸。硅膠G，展開(kāi)劑苯-乙酸乙酯(1∶1)10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱顯色。收集洗脫液，減壓回收至干，30％乙醇適量溶解，緩慢加入6倍量于溶解液的丙酮中，邊加入邊攪拌，過(guò)濾，沉淀用適量丙酮洗滌，95℃吹風(fēng)干燥得黃白色總皂苷(J-1原料)。5％香草醛冰乙酸，高氯酸顯色，545nm，紫外分光光度法測(cè)定J原料中總皂苷大于70％。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥制劑，具體是涉及一種單味竹節(jié)參制劑及其總皂苷制備方法。它可用來(lái)治療心腦血管疾病。本發(fā)明提供了制備方法。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1518999SQ0311272
公開(kāi)日2004年8月11日 申請(qǐng)日期2003年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月23日
發(fā)明者丁永芳 申請(qǐng)人:丁永芳