專利名稱：用pde5抑制劑進(jìn)行勃起功能障礙的每日治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及磷酸二酯酶(PDE)抑制劑和它們?cè)谥圃焖幬镏破分械挠猛?。具體地，本發(fā)明涉及當(dāng)摻入藥品時(shí)可用于治療性功能障礙的3’，5’-環(huán)鳥(niǎo)苷酸特異性的5型磷酸二酯酶(PDE5)的強(qiáng)效抑制劑。
背景技術(shù)：
3’，5’-環(huán)鳥(niǎo)苷酸特異性的磷酸二酯酶(cGMP特異性的PDE)的生化、生理和臨床作用提示了它們?cè)谠S多疾病狀況中的用途，在這些疾病狀況中需要調(diào)節(jié)平滑肌、腎臟、止血、炎癥和/或內(nèi)分泌功能。5型cGMP特異性磷酸二酯酶(PDE5)是血管平滑肌中的主要cGMP水解酶，已經(jīng)報(bào)道了它在陰莖海綿體中的表達(dá)(Taher et al.，J.Urol.，149285A(1993))。因此PDE5是性功能障礙治療中的一個(gè)引人注意的目標(biāo)(Murray，DN & P6(3)150-56(1993))。
一種提供PDE5抑制劑的藥品已經(jīng)可以獲得，其商品名為VIAGRA。VIAGRA的活性成分為西地那非。該產(chǎn)品作為成品出售，包含25、50、100mg的西地那非片劑和包裝插頁(yè)。包裝插頁(yè)說(shuō)明了西地那非是對(duì)PDE5比對(duì)其它已知磷酸二酯酶更強(qiáng)效的抑制劑(比對(duì)PDE1的抑制強(qiáng)80倍以上，比對(duì)PDE2，PDE3和PDE4的抑制強(qiáng)1000倍以上)。據(jù)報(bào)道，西地那非對(duì)PDE5的IC50值為3nM(Drugs of the Future，22(2)，pp.128-143(1997))和3.9nM(Boolell et al.，Int.J.ofImpotence Res.，8 p.4752(1996))。西地那非被描述為對(duì)PDE5的選擇性比對(duì)PDE3的選擇性強(qiáng)4000倍，對(duì)PDE5的選擇性比對(duì)PDE6的選擇性僅僅強(qiáng)10倍。它對(duì)PDE6的選擇性的相對(duì)缺乏是與彩色視覺(jué)相關(guān)的異常的理論基礎(chǔ)。
盡管西地那非獲得了顯著的商業(yè)成功，勃起功能障礙(ED)的治療中仍然存在問(wèn)題。首先，使用西地那非的ED治療是基于按需或PRN治療。“按需”定量給藥定義為在預(yù)備進(jìn)行的性活動(dòng)之前急性(acute)給予治療勃起功能障礙的藥物。因此使用者必須預(yù)先計(jì)劃，并且如目前所標(biāo)明的，在準(zhǔn)備進(jìn)行性活動(dòng)前至少1小時(shí)口服相對(duì)大劑量(至少25mg)的西地那非。當(dāng)西地那非與飲食共同服用時(shí)，有益作用的開(kāi)始可能延遲。
其次，相對(duì)大的按需西地那非劑量導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，包括面部潮紅(10％的發(fā)生率)。因此，盡管可以得到西地那非，仍然需要鑒別在性功能障礙的治療中有用和更方便的改進(jìn)的藥品。
本發(fā)明提供了一種用于人類藥用的制品，包含包裝插頁(yè)、容器、以及單位劑量為約1-10mg/劑型的PDE5抑制劑的口服劑型。包裝插頁(yè)提供了一種定量給藥方案，其特征在于PDE5抑制劑的長(zhǎng)期給藥。長(zhǎng)期定量給藥的有益作用已經(jīng)在臨床研究中通過(guò)以下發(fā)現(xiàn)觀察到給予PDE5抑制劑改進(jìn)或調(diào)節(jié)脈管系統(tǒng)，使得海綿體平滑肌組織反應(yīng)于治療，所述治療劑量低于用按需或急性治療產(chǎn)生同樣反應(yīng)所需要的劑量。低劑量、長(zhǎng)期給予PDE5抑制劑的益處包括改進(jìn)海綿體平滑肌組織中cGMP刺激的舒張的血管反應(yīng)，由于PDE5抑制劑的劑量更低而降低毒性，以及返回常態(tài)，即病人不需要在給予PDE5抑制劑時(shí)附近計(jì)劃性活動(dòng)。本發(fā)明的定量給藥方案允許病人所需要的性活動(dòng)的自發(fā)性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種用于人類藥用的制品，包含包裝插頁(yè)、容器、以及用于長(zhǎng)期、優(yōu)選每日定量給藥的包含約1-10mg PDE5抑制劑/劑型的口服劑型。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種治療男性勃起功能障礙的方法，包括長(zhǎng)期給予有需要的病人包含約1-10mg PDE5，最多為總劑量為10mg/日的口服劑型。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種改善海綿體平滑肌組織中舒張反應(yīng)的方法，包括長(zhǎng)期給予劑量為1mg/日-10mg/日的PDE5抑制劑。
本發(fā)明提供了一種用于人類藥用的制品，包含包裝插頁(yè)、容器、以及約1-10mg選擇性PDE5抑制劑的口服劑型，所述包裝插頁(yè)指出所述制品是用于治療患有勃起功能障礙的病人的長(zhǎng)期PDE5抑制劑給藥。
本發(fā)明提供了一種用于人類藥用的制品，包含包裝插頁(yè)、容器、以及包含選擇性PDE5抑制劑的口服劑型；所述包裝插頁(yè)指出所述制品是用于治療患有勃起功能障礙的病人的長(zhǎng)期PDE5抑制劑給藥。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種用于人類藥用的制品，包含(a)包含約1-10mg PDE5抑制劑的口服劑型，所述PDE5抑制劑的IC50小于10nM，其生物利用度足夠使其在約1-10mg的單位口服劑量下有效；(b)包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是用于治療有需要的病人的性功能障礙，并且具有約1-10mg/日的長(zhǎng)期定量給藥方案，其中長(zhǎng)期定量給藥方案改善血管調(diào)節(jié)；和(c)一個(gè)容器。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種用于人類藥用的制品，包含(a)包含約1-10mg PDE5抑制劑的口服劑型，所述PDE5抑制劑具有(i)小于10nM的IC50，以及(ii)使其在約1-10mg的單位口服劑量下有效的足夠的生物利用度；(b)包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是用于治療有需要的病人的性功能障礙，并且具有約1-10mg/日的長(zhǎng)期定量給藥方案，其中長(zhǎng)期定量給藥方案改善血管調(diào)節(jié)；和(c)一個(gè)容器。
發(fā)明詳述對(duì)于在此公開(kāi)和描述的本發(fā)明，以下術(shù)語(yǔ)和縮寫(xiě)定義如下。
“容器”表示適于儲(chǔ)存、裝運(yùn)、分發(fā)和/或處理藥品的任何器具和封閉物。
“IC50”為一種化合物抑制特定PDE酶(如PDE1c，PDE5，或PDE6)的效力的測(cè)量值。IC50是在單劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致50％酶抑制的化合物濃度。測(cè)定化合物的IC50值很容易通過(guò)已知的體外方法進(jìn)行，如Y.Cheng等，Biochem.Pharmacol.，22，pp.3099-3108(1973)中的描述。
“包裝插頁(yè)”表示伴隨產(chǎn)品的信息，它說(shuō)明了如何給藥，以及允許醫(yī)生、藥劑師和病人了解并決定如何使用該產(chǎn)品所必須的安全性和有效性數(shù)據(jù)。包裝插頁(yè)在藥品中一般稱作“標(biāo)簽”。
“口服劑型”一般用于推薦口服藥品。口服劑型是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括液體制劑、片劑、膠囊和凝膠帽(gelcap)等形式。
“日”和“每日”是指在每大約24小時(shí)內(nèi)給藥1次或更多次，一般1-3次，更優(yōu)選1次?！按蠹s24小時(shí)”是指約20-28小時(shí)的時(shí)間跨度。
“長(zhǎng)期或長(zhǎng)期地”是指在與性活動(dòng)的開(kāi)始無(wú)關(guān)的時(shí)間段中規(guī)律給藥。為了得到本發(fā)明的完整益處，長(zhǎng)期給藥一般是指在很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)期規(guī)律給藥，優(yōu)選每日給藥，共給藥3天或3天以上，優(yōu)選只要病人有勃起功能障礙(無(wú)治療的情況下)，就每日給藥?！伴L(zhǎng)期”給藥也包括除每日定量給藥之外的其它方案。例如，長(zhǎng)期給藥包括定期并且與性活動(dòng)的開(kāi)始無(wú)關(guān)地給予提供足量PDE5抑制劑的持續(xù)釋放制劑。與急性或按需給藥相反，長(zhǎng)期給藥并不使PDE5抑制劑的給藥與性活動(dòng)的開(kāi)始相關(guān)聯(lián)。
“PDE5抑制劑”是指抑制PDE5的IC50小于10nM的化合物。優(yōu)選的PDE5抑制劑選擇性抑制PDE5，如具有以下特征的化合物(1)抑制PDE5的IC50值比抑制PDE6的IC50值小至少100倍；(2)抑制PDE5的IC50值比抑制PDE1c的IC50值小至少1000倍；(3)抑制PDE5的IC50值小于10nM。
PDE5抑制劑在化學(xué)結(jié)構(gòu)上變化很大，它們?cè)诒景l(fā)明中的用途不取決于化學(xué)結(jié)構(gòu)，而是取決于此處所公開(kāi)的效力參數(shù)。
“視覺(jué)異?！北硎居蒔DE6抑制劑導(dǎo)致的以藍(lán)-綠視為特征的視覺(jué)異常。
“游離藥物”是指沒(méi)有緊密包埋在聚合物共沉淀物中的固體藥物顆粒。
如前所述，本發(fā)明涉及一種用于人類藥用的制品，包含包裝插頁(yè)、容器、以及每單位劑型包含約1-10mg PDE5抑制劑的劑型。用于本發(fā)明的PDE5抑制劑抑制PDE5的IC50值小于10nM，其生物利用度足夠使其在約1-10mg的單位劑量下有效。
優(yōu)選的PDE5抑制劑相對(duì)于PDE6和PDE1c而選擇性抑制PDE5。選擇性通過(guò)IC50的差別來(lái)定量。差別表達(dá)為IC50值的PDE6/PDE5之比，即，對(duì)PDE6的IC50值與對(duì)PDE5的IC50值之比(PDE6/PDE5)大于100，更優(yōu)選大于300，最優(yōu)選大于500。
同樣，對(duì)PDE1c的IC50值與對(duì)PDE5的IC50值之比(PDE1c/PDE5)大于1000。優(yōu)選的PDE5抑制劑在對(duì)PDE5和PDE1c的抑制之間的差別大于3000倍，更優(yōu)選在對(duì)PDE5的IC50值與對(duì)PDE1c的IC50值之間的差別大于5000倍。由IC50值所代表的該抑制劑的效力小于10nM，優(yōu)選小于5nM，更優(yōu)選小于2nM，最優(yōu)選小于1nM。
包裝插頁(yè)說(shuō)明了如何給藥，以及允許醫(yī)生、藥劑師和病人了解并決定如何使用該產(chǎn)品所必須的安全性和有效性數(shù)據(jù)。包裝插頁(yè)一般稱作藥品的標(biāo)簽。插入本制品的包裝插頁(yè)指出PDE5可以用于治療需要抑制PDE5的狀況，特別是性功能障礙，特別是男性勃起功能障礙和女性性沖動(dòng)障礙。
包裝插頁(yè)也說(shuō)明了可以長(zhǎng)期給予一種或更多約1-10mg的單位劑型，優(yōu)選每日給藥，持續(xù)至少3天，最多達(dá)到每日10mg的最大總劑量。給藥劑量一般為約1-10mg/日，更優(yōu)選為約2-10mg/日，最優(yōu)選為約5-10mg/日，每日給藥。
由于當(dāng)前要求保護(hù)的制品提供了比按需或急性給藥更有效的長(zhǎng)期定量給藥方案，副作用的發(fā)生率顯著減少。所以，優(yōu)選制品提供的包裝插頁(yè)報(bào)道使用該劑型的病人面部潮紅的發(fā)生率低于2％，優(yōu)選低于1％，最優(yōu)選低于0.5％。潮熱的發(fā)生率證明該制品與先有的含PDE5抑制劑的藥品相比具有顯著的改進(jìn)。
用于本制品中的容器是制藥領(lǐng)域中常規(guī)的。一般說(shuō)來(lái)，該容器為氣泡(blister)包裝、箔包裝、玻璃或塑料瓶，并且具有蓋或密閉，或者其它適于病人或藥劑師使用的物品。優(yōu)選地，所述容器的大小可以容納1-1000個(gè)固體劑型，優(yōu)選1-500個(gè)固體劑型，最優(yōu)選5-30個(gè)固體劑型。
本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的口服劑型包括例如液體制劑、片劑、膠囊和凝膠帽。優(yōu)選的劑型為固體劑型，特別是包含約1-10mg PDE5抑制劑的片劑。任何用于口服的可藥用賦形劑都適于制備這些劑型。適當(dāng)?shù)乃幬飫┬桶ɡ缑枋鲇贐utler的美國(guó)專利5,985,326中的共沉淀物形式。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的單位劑型為不含有共沉淀形式的PDE5抑制劑的固體，而是包含作為游離藥物的固體PDE5抑制劑。
優(yōu)選地，片劑包含一般認(rèn)為是安全的藥物賦形劑，如乳糖、微晶纖維素、淀粉、碳酸鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉和膠體二氧化硅，并且是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)制藥技術(shù)制備的，例如Remington′s PharmaceuticalSciences，18th Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990)中所描述。這些技術(shù)包括，例如，濕?；缓蠛娓?、研磨并在有或無(wú)薄膜包衣的情況下壓成片劑；干粒化，然后在有或無(wú)薄膜包衣的情況下壓成片劑；模塑成片劑；濕?；?，烘干并填入明膠膠囊；將干混合物填入明膠膠囊；或者將懸浮液或溶液填入明膠膠囊。一般說(shuō)來(lái)，將識(shí)別標(biāo)記刻印或壓制在固體劑型的表面。
口服劑型也可以以持續(xù)釋放的制劑形式存在，它可以在幾天到一些天的時(shí)間中給個(gè)體長(zhǎng)期提供約1-10mg/日的PDE5抑制劑。
本發(fā)明是基于詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，以及以下未預(yù)料到的觀察結(jié)果即可以通過(guò)長(zhǎng)期給予抑制PDE5的IC50值小于10nM的低劑量PDE抑制劑來(lái)治療性功能障礙。
大約1-10mg PDE5抑制劑的長(zhǎng)期、優(yōu)選每日定量給藥方案也提供了其它益處，包括(a)性關(guān)系的自發(fā)性，(b)如此低劑量的PDE5抑制劑的預(yù)料不到的效力，包括觀察到劑量低于目前標(biāo)明的25mg急性、按需的西地那非劑量的長(zhǎng)期PDE5抑制劑給藥所產(chǎn)生的反應(yīng)更大，以及(c)由于選擇性的PDE5抑制劑和低劑量，沒(méi)有副作用或副作用很少。
總之，已經(jīng)證明長(zhǎng)期定量給予具有上述列舉的特征的、劑量為約1-10mg的PDE5抑制劑相對(duì)于目前給予的更高的急性按需劑量提供了相同或更好的效力。增強(qiáng)的效力表明每日劑量較低的PDE5抑制劑在治療勃起功能障礙中不依賴于藥物積累，而是由于當(dāng)PDE5抑制劑在血漿中連續(xù)或基本連續(xù)提供時(shí)血管反應(yīng)性的改進(jìn)。
PDE5抑制劑或者總的說(shuō)來(lái)PDE抑制劑的“血管調(diào)節(jié)”作用還沒(méi)有被證實(shí)。具體地說(shuō)，血管調(diào)節(jié)作用在按需定量給予PDE5抑制劑的個(gè)體或在2-3天的短時(shí)間內(nèi)服用急性PDE5抑制劑的個(gè)體中還沒(méi)有觀察到。預(yù)計(jì)在長(zhǎng)期給予PDE5抑制劑后發(fā)生血管調(diào)節(jié)，例如，在給予最多為10mg的每日劑量約3天后，優(yōu)選每日定量給藥5天后，更優(yōu)選每日定量給藥7天后。另外，在每日定量給藥約3天后，間斷漏服一個(gè)劑量將減少血管調(diào)節(jié)，但不會(huì)完全喪失。
已經(jīng)在理論上概括，但沒(méi)有證明，血管調(diào)節(jié)是通過(guò)由糖尿病、動(dòng)脈硬化、吸煙、高血壓或這些因素的組合所引起的陰莖循環(huán)功能障礙的部分或完全恢復(fù)而導(dǎo)致的。所述狀況引起了動(dòng)脈壁增厚、動(dòng)脈順應(yīng)性減小、對(duì)一氧化氮等內(nèi)源性血管擴(kuò)張因子的反應(yīng)性降低。
PDE5抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)多種多樣，本發(fā)明中定義的PDE5抑制劑的用途不取決于其特定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，而是取決于這里所概括的關(guān)鍵參數(shù)。然而，具有所要求的效力和優(yōu)選的選擇性的化合物可以很容易地通過(guò)這里所描述的試驗(yàn)從描述于Daugan的美國(guó)專利No.5,859,006，Daugan等的美國(guó)專利No.5,981,527，Daugan等的美國(guó)專利No.6,001,847的化合物中鑒定出來(lái)，上述每個(gè)專利都在此引入作為參考。
Daugan的美國(guó)專利5,859,006和Daugan等人的美國(guó)專利5,981,527中的優(yōu)選化合物可用結(jié)構(gòu)式(I)表示 式中R0選自氫、鹵素和C1-6烷基；R1選自下列一組基團(tuán)氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵代C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8環(huán)烷基C1-3烷基、芳基C1-3烷基和雜芳基C1-3烷基，其中芳基是苯基或被1～3個(gè)選自鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、亞甲二氧基及其混合物的取代基取代的苯基，且其中雜芳基是噻吩基、呋喃基或吡啶基，各自可任選地被1～3個(gè)選自鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基及其混合物的取代基取代；R2代表任選取代的選自苯、噻吩、呋喃和吡啶的單環(huán)式芳香環(huán)，或任選取代的雙環(huán)式環(huán) 該雙環(huán)式環(huán)通過(guò)苯環(huán)的1個(gè)碳原子連接到該分子的其余部分，其中稠環(huán)A是一個(gè)飽和、部分不飽和或完全不飽和的5或6元環(huán)，且包含碳原子和任選地1或2個(gè)選自氧、硫和氮的雜原子；R3代表氫或C1-3烷基，或者R1和R3合在一起代表1個(gè)C3或C4的烷基鏈或鏈烯基鏈；及其溶劑合物。
其它優(yōu)選的化合物是如下定義的式(I)化合物，其中R0是氫、鹵素或C1-6烷基；R1是氫或C1-6烷基；R2是下式所示的雙環(huán)式環(huán) 該雙環(huán)式環(huán)可任選地被1個(gè)或多個(gè)選自鹵素和C1-3烷基的基團(tuán)取代；以及R3是氫或C1-3烷基。
優(yōu)選的化合物是(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；和(3S，6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2，3-二甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；及其生理學(xué)上可接受的鹽和溶劑化合物(如水合物)。
可用于本發(fā)明的特別優(yōu)選的選擇性PDE5抑制是(6R-反式)-6-(1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基吡嗪并[1′，2′1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮，或者命名為(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮，該化合物公開(kāi)于道根的美國(guó)專利5,859,006中，并用下面結(jié)構(gòu)式II表示 可用于本發(fā)明的其它例示化合物公開(kāi)于Daugan等人的美國(guó)專利6,001,847、WO 97/43267和WO 00/15639中，這些專利文獻(xiàn)并入本文作為參考。
此外，西地那非和瓦地那非(Vardenafil)可用作PDE5抑制劑供每日定量給藥。 西地那非 瓦地那非就西地那非和瓦地那非而言，長(zhǎng)期給藥的劑量為約1～約25mg/日，優(yōu)選約1～約20mg/日。
可用于本發(fā)明的長(zhǎng)期定量給藥方案的其它有用的PDE5抑制包括，但不限于5-(2-乙氧基-5-嗎啉代乙?；交?-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-(5-嗎啉代乙?；?2-正丙氧基苯基)-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-〔2-烯丙氧基-5-(4-甲基1-哌嗪基磺?；?苯基〕-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-{2-乙氧基-5-〔4-(2-丙基)-1-哌嗪基磺?；潮交鶀-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-{2-乙氧基-5-〔4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基磺酰基〕苯基}-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-{5-〔4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基磺?；?2-正丙氧基苯基}-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-〔2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)苯基〕-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；和5-〔2-乙氧基-5-(1-甲基-2-咪唑基)苯基〕-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮。制備人PDE5制備人PDE5的重組產(chǎn)生基本按美國(guó)專利No.5,702,936(在此引入作為參考)中的描述進(jìn)行，除使用了酵母轉(zhuǎn)化載體，該載體來(lái)源于描述于V.Price et al.，Methods in Enzymology，1985，pages 308-318(1990)中的ADH2質(zhì)粒，摻入了酵母ADH2啟動(dòng)子和終止子序列，而不是ADH1啟動(dòng)子和終止子序列，啤酒糖酵母宿主是1998年8月31日保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，Virginia的蛋白酶缺陷株BJ2-54，其保藏號(hào)為ATCC 74465。轉(zhuǎn)化過(guò)的宿主細(xì)胞在2X SC-leu培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，該培養(yǎng)基pH為6.2，含有痕量金屬和維生素。24小時(shí)后，加入含甘油的YEP培養(yǎng)基，使其終濃度達(dá)到2X YEP/3％的甘油。大約24小時(shí)后，收集、洗滌細(xì)胞，并且在-70℃下儲(chǔ)存。
在冰上以等量的裂解緩沖液(25mM Tris-Cl，pH8，5mM MgCl2，0.25mM二硫蘇糖醇，1mM芐脒，和10μM ZnSO4)對(duì)細(xì)胞沉淀物進(jìn)行解凍。在微流化裝置中用20,000psi的N2對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解。離心裂解物并且通過(guò)0.45μm的一次性濾膜進(jìn)行過(guò)濾。將濾過(guò)物加樣到150mL的QSepharose Fast Flow柱(Pharmacia)。用1.5倍體積的緩沖液A(20mM Bis-Tris丙烷，pH6.8，1mM MgCl2，0.25mM二硫蘇糖醇，10μMZnSO4)洗滌柱，并用溶于緩沖液A的125mM NaCl的分級(jí)梯度和溶于緩沖液A的125-1000mM NaCl的線性梯度進(jìn)行洗脫。
將從線性梯度洗脫得到的活性級(jí)分在緩沖液B(20mM Bis-Tris丙烷(pH6.8)，1mM MgCl2，0.25mM二硫蘇糖醇，10μM ZnSO4和250mM KCl)中加樣到180mL羥基磷灰石柱中。加樣后，用2倍體積的緩沖液B洗滌柱并用溶于緩沖液B中的0-125mM磷酸鉀的線性梯度進(jìn)行洗脫。合并活性級(jí)分，用60％的硫酸銨沉淀，并重懸于緩沖液C(20mMBis-Tris丙烷，pH6.8，125mM NaCl，0.5mM二硫蘇糖醇，和10μMZnSO4)中。將合并物加樣到140mL的Sephacryl S-300 HR柱中，并用緩沖液C洗脫。活性級(jí)分稀釋于50％的甘油，并在-20℃下儲(chǔ)存。通過(guò)SDS-PAGE證明得到的制劑純度約為85％。PDE活性測(cè)定可以通過(guò)本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定PDE5活性。例如，可以通過(guò)以下方法測(cè)定PDE的特異性活性。采用炭分離技術(shù)的PDE測(cè)定的進(jìn)行基本描述于Loughney et al.，(1996)，The Journal of BiologicalChemistry，271796-806。在此測(cè)定中，PDE5活性將[32p]cGMP轉(zhuǎn)化為[32P]5′GMP，轉(zhuǎn)化量與提供的PDE5活性量成比例。然后通過(guò)蛇毒5’核苷酸酶將[32P]5′GMP定量轉(zhuǎn)化為游離[32P]磷酸鹽和未標(biāo)記的腺苷。因此，釋放出的[32P]磷酸鹽的量與酶活性成比例。該測(cè)定在30℃下的含(終濃度)40mM Tris-Cl(pH8.0)，1μM ZnSO4，5mM MgCl2，和0.1mg/mL100μL牛血清白蛋白的反應(yīng)混合物中進(jìn)行。PDE5的量使底物水解＜30％(線性測(cè)定濃度)。該測(cè)定是通過(guò)加入底物(1mM[32p]cGMP)而起始的，并且將混合物溫育12分鐘。然后加入75μg Crotalusatrox毒液，溫育再持續(xù)3分鐘(總共15分鐘)。通過(guò)加入200mL活性炭(0.1M NaH2PO4中的25mg/mL的懸浮液，pH4)終止反應(yīng)。離心(750xg下進(jìn)行3分鐘)沉淀炭后，在閃爍計(jì)數(shù)器中對(duì)上清液樣品進(jìn)行放射活性測(cè)定，計(jì)算PDE5活性。制劑的比活性為每毫克蛋白水解約3μmol cGMP。牛血清PDE6制備牛血清PDE6由Dr.N.Virmaux，INSERM U338，Strasbourg提供。牛視網(wǎng)膜的制備見(jiàn)Virmaux et al.，F(xiàn)EBS Letters，12(6)，pp.325-328(1971)，也見(jiàn)Sitaramayya et al.，Exp.Eye Res.，.25，pp.163-169(1977)。簡(jiǎn)言之，除特別指明，所有操作在冰冷條件下和暗紅光下進(jìn)行。在屠宰后將牛的眼睛置于冰冷條件下和暗處，最多達(dá)4小時(shí)。
牛視網(wǎng)膜外段(ROS)的制備基本按照Schichi et al.，J.Biol.Chem.，224529(1969)的描述的程序進(jìn)行。在一個(gè)典型的實(shí)驗(yàn)中，在研缽中以35mL 0.066M的磷酸緩沖液(pH7.0，用蔗糖配制成40％)研磨35個(gè)牛視網(wǎng)膜，然后在Potter勻漿器中勻漿(20上20下)。以25,000xg將懸浮液離心20分鐘。在7.5mL 0.006M的磷酸緩沖液(40％蔗糖)中將沉淀物勻漿，并且小心地在7.5mL磷酸緩沖液(不含蔗糖)中分層。在swing-out轉(zhuǎn)子中以45,000xg離心20分鐘，產(chǎn)生的沉淀在底部為黑色，并且在0.066M.磷酸--40％sucrose/0.066M磷酸交界處有一紅色條帶(粗制ROS)。取出交界處的紅色物質(zhì)，用磷酸緩沖液稀釋，旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生沉淀，按上述方在40％的蔗糖緩沖液中再分布。重復(fù)該程序2或3次，直到不形成沉淀。在磷酸緩沖液中洗滌純化的ROS，并最終在25,000xg下旋轉(zhuǎn)20分鐘產(chǎn)生沉淀。然后將所有材料冷凍，直到使用。
將分離的ROS懸浮在pH7.5的10mM Tris-Cl，1mM EDTA，和1mM二硫赤蘚糖醇中，然后在100,000xg下離心30分鐘，以便制備低滲提取物。
該制備物的比活性為每毫克蛋白水解約35nmol cGMP。從Spodoptera fugiperda細(xì)胞(Sf9)制備PDE1c在冰上以20ml裂解緩沖液(50mM MOPS pH7.4，10μm ZnSO4，0.1mMCaCl2，1mM DTT，2mM芐脒HCl，抑胃酶肽、亮抑酶肽和抑蛋白酶肽各5μg/ml)對(duì)細(xì)胞沉淀物進(jìn)行解凍。使細(xì)胞通過(guò)French壓力室而將其裂解，將溫度維持在10℃以下。得到的細(xì)胞勻漿在4℃下在帶有TI45型轉(zhuǎn)子的Beckman高速離心機(jī)中以36,000rpm離心45分鐘。棄去上清液，通過(guò)用帶有微頭的VibraCell高頻頭超聲處理3×30秒，將得到的沉淀物重懸于40mL溶解緩沖液(含1M NaCl，0.1M MgCl2，1mMCaCl2，20μg/ml鈣調(diào)蛋白和1％Sulfobetaine SB12(Z3-12)的裂解緩沖液)中。為了冷卻，這是在碎冰/鹽混合物中進(jìn)行的。超聲處理后，在4℃下將混合物緩慢攪拌30分鐘，從而完成膜結(jié)合蛋白的溶解。在帶有TI45型轉(zhuǎn)子的Beckman高速離心機(jī)中以36,000rpm離心45分鐘。用含10μg/ml鈣蛋白酶抑制劑I和II的裂解緩沖液稀釋上清液。將沉淀的蛋白在Beckman JA-10轉(zhuǎn)子中以9,000rpm離心20分鐘。然后使回收的上清液接受Mimetic Blue AP瓊脂糖層析。
為了過(guò)Mimetic Blue AP瓊脂糖柱，最初用10倍柱床體積的1％的聚乙烯吡咯烷酮(即分子量為40,000)封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，從而屏蔽樹(shù)脂。以10倍柱床體積的2M NaCl和pH 3.4的10mM檸檬酸鈉洗滌，去除松散結(jié)合的PVP-40。在加入溶解的PDE1c樣品之前，用5倍柱床體積的柱緩沖液A(50mM MOPS pH7.4，10μM ZnSO4，5mMMgCl2，0.1mM CaCl2，1mM DTT，2mM芐脒HCl)平衡柱。
將溶解的樣品以2ml/min的流速循環(huán)加入柱中，使總樣品在12小時(shí)內(nèi)加樣4到5次。當(dāng)加樣完成后，用10倍柱床體積的柱緩沖液A洗滌柱，然后用5倍柱床體積的柱緩沖液B(柱緩沖液A含20mM 5′-AMP)洗滌柱，然后用5倍柱床體積的柱緩沖液C(50mM MOPS pH7.4，10μMZnSO4，0.1mM CaCl2，1mM二硫蘇糖醇，和2mM芐脒HCl)。將酶洗脫到三個(gè)連續(xù)的合并物中。第一個(gè)合并物由用5倍柱床體積的含1mMcAMP的柱緩沖液C洗滌后得到的酶組成。第二個(gè)合并物由用10倍柱床體積的含1M NaCl的柱緩沖液C洗滌后得到的酶組成。最后一個(gè)合并物由用5倍柱床體積的含1M NaCl和20mM cAMP的柱緩沖液C洗滌后得到的酶組成。
收集活性酶合并物，通過(guò)常規(guī)凝膠過(guò)濾層析或羥基磷灰石樹(shù)脂層析去除環(huán)核苷酸。去除環(huán)核苷酸后，用含25mM MOPS pH7.4，10μMZnSO4，500mM NaCl，1mM CaCl2，1mM二硫蘇糖醇，1mM芐脒HCl的透析緩沖液對(duì)酶合并物進(jìn)行透析，然后用含50％甘油的透析緩沖液進(jìn)行透析。用干冰將酶急性冷凍并且儲(chǔ)存于-70℃。
經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)，得到的制劑純度＞約90％。這些制備物的比活性為每毫克蛋白每分鐘水解約0.1-1.0μmol cAMP。IC50值測(cè)定評(píng)價(jià)PDE5和/或PDE1c和PDE6的競(jìng)爭(zhēng)性酶抑制劑的效力的感興趣的參數(shù)為抑制常數(shù)，即Ki。該參數(shù)可以通過(guò)測(cè)定IC50而近似，IC50為在以下條件下的單劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致50％的酶抑制的抑制劑濃度。
抑制劑的濃度總是比酶的濃度大得多，所以游離抑制劑濃度(未知)可以通過(guò)總抑制劑濃度(已知)近似。
選擇了適當(dāng)?shù)囊种苿舛确秶?即，抑制劑濃度至少比實(shí)驗(yàn)中的Ki大幾倍或小幾倍)。一般地，抑制劑濃度為10nM-10μM。
酶和底物濃度的選擇使抑制劑不存在時(shí)底物的消耗少于20％(前提是，如，底物水解最多為10-15％)，使得酶活性在測(cè)定中近似恒定。
底物濃度小于Michaelis常數(shù)的1/10。在這些條件下，IC50將非常接近Ki。這是因?yàn)槭惯@兩個(gè)參數(shù)之間相關(guān)的Cheng-Prusoff等式IC50＝Ki(1+S/Km)，其中當(dāng)S/Km的值很小時(shí)，(1+S/Km)近似于1。
通過(guò)將數(shù)據(jù)適用于酶抑制劑相互作用的適當(dāng)模型，可以從數(shù)據(jù)點(diǎn)估計(jì)IC50值。當(dāng)已知該相互作用涉及抑制劑與底物的簡(jiǎn)單競(jìng)爭(zhēng)時(shí)，可以采用兩參數(shù)模型Y＝A/(1+x/B)其中Y是在抑制劑濃度為x時(shí)測(cè)量到的抑制劑濃度，A是沒(méi)有抑制劑時(shí)的活性，B是IC50值。見(jiàn)Y.Cheng et al.，Biochem.Pharmacol.，223099-3108(1973)。
本發(fā)明的抑制劑對(duì)上述PDE5和PDE6制劑的酶促活性的作用是通過(guò)兩種測(cè)定之一進(jìn)行評(píng)估的，這兩種測(cè)定的主要差別在于度量的基礎(chǔ)不同，而用IC50值表示時(shí)提供基本相同的結(jié)果。兩種測(cè)定都對(duì)Wells etal.，Biochim.Biophys.Acta，384430(1975)的程序進(jìn)行了改進(jìn)。第一種測(cè)定是在200μl的總體積下進(jìn)行的，其中含有50mM Tris，pH7.5，3mM醋酸鎂，1mM EDTA，50μg/ml蛇毒核苷酸酶和50nM[3H]-cGMP(Amersham)。將本發(fā)明的化合物溶解于DMSO，測(cè)定中的終濃度為2％。將測(cè)定物在30℃下溫育30分鐘，通過(guò)加入800μl 10mM TrispH7.5，10mM EDTA，10mM茶堿，0.1mM腺苷和0.1mM鳥(niǎo)苷而終止測(cè)定。將混合物加樣到0.5mL的QAE Sephadex柱，并且用2mL 0.1M的甲酸鹽(pH7.4)洗脫。在Optiphase Hisafe 3中通過(guò)閃爍計(jì)數(shù)測(cè)量被洗脫的放射活性。
采用微量滴定板的第二種PDE測(cè)定是用Multiscreen板和真空多支管進(jìn)行的。該測(cè)定物(100μl)中含有50mM Tris pH7.5，5mM醋酸鎂，1mM EDTA和250μg/mL蛇毒核苷酸酶。反應(yīng)混合物中的其它成分見(jiàn)上文所述。在溫育結(jié)束時(shí)，將測(cè)定的總體積通過(guò)過(guò)濾加入QAESephadex微型柱板。用200μl水洗脫游離放射活性，按上文所述通過(guò)閃爍技術(shù)分析50μl的等分樣品。
以下實(shí)施例時(shí)為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的制劑。本發(fā)明的范圍不應(yīng)解釋為僅僅由以下實(shí)施例組成。
實(shí)施例1按美國(guó)專利5,859,006的描述制備結(jié)構(gòu)式(I)的化合物，并且通過(guò)濕粒化配制成片劑。將聚乙烯吡啶酮溶于水形成10％的溶液。將活性化合物、微晶纖維素、交聯(lián)甲羧纖維素鈉和十二烷基硫酸鈉加入高剪切混合器中，混合2分鐘。用聚乙烯吡啶酮溶液進(jìn)行濕粒化，加入額外的水完成?；５玫降幕旌衔镌谝捍哺稍锲髦懈稍?，進(jìn)入的空氣為70℃±5℃，直到干燥損失小于2.5％。然后使顆粒通過(guò)具有合適的濾網(wǎng)(或篩子)的Comil，并將其加入到適當(dāng)?shù)幕旌掀髦?。使過(guò)量的交聯(lián)甲羧纖維素鈉和十二烷基硫酸鈉以及膠質(zhì)的無(wú)水二氧化硅通過(guò)合適的篩子(如500微米)并加入到混合器中并混合5分鐘。加入硬脂酸鎂并混合2分鐘。用9mm圓形常規(guī)凹面工具將混合物壓制成重量為250mg的壓制品。
在Accelacota(或相似的包衣盤(pán))中用Opadry OY-S-7322的水性懸浮液包被核心藥片，進(jìn)入空氣為50-70℃，直到藥片的重量增加約8mg。Opadry OY-S-7322含有甲羥基丙基纖維素Ph.Eur.，二氧化鈦Ph.Eur.，醋精USP。Opadry使每個(gè)藥片的重量增加至約258mg。每個(gè)藥片使用的薄膜包衣量可以小于所指明的量，這取決于工藝效率。
將藥片裝入氣泡包裝中，并加入描述混合物的安全性和有效性的包裝插頁(yè)。
1)結(jié)構(gòu)式(I)的化合物實(shí)施例2下面的配方是用于制備含有10mg結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的終劑型。
片劑的制造中使用了純凈水，USP。在加工過(guò)程中除去了水，終產(chǎn)品中的水平很低。
片劑的制造采用濕?；に?。該工藝的逐步說(shuō)明如下。對(duì)將進(jìn)行?；乃幬锖唾x形劑安全過(guò)篩。將選擇性PDE5抑制劑與一水合(噴霧干燥的)乳糖、羥基丙基纖維素、交聯(lián)甲羧纖維素鈉和一水合乳糖進(jìn)行干混。在Powrex或其它適當(dāng)?shù)母呒羟性炝C(jī)中用羥基丙基纖維素和十二烷基硫酸鈉的水溶液對(duì)得到的粉末混合物進(jìn)行?；?。加入額外的水，以達(dá)到需要的終點(diǎn)。用磨將濕顆粒分散并促進(jìn)干燥。用液床干燥器或烘干爐對(duì)濕顆粒進(jìn)行干燥。當(dāng)物質(zhì)干燥后，可以篩選其大小，以便去除任何大的團(tuán)塊。將微晶纖維素、交聯(lián)甲羧纖維素鈉、和硬脂酸鎂安全過(guò)篩并且加入到干燥的大小確定的顆粒中。用鼓轉(zhuǎn)箱、螺條混合器或其它的混合設(shè)備對(duì)這些賦形劑和干燥顆粒進(jìn)行混合直到均勻?？梢詫⒒旌线^(guò)程分成兩個(gè)階段。將微晶纖維素、交聯(lián)甲羧纖維素鈉和干燥顆粒加入混合器中，進(jìn)行第一階段混合，然后將硬脂酸鎂加入該顆粒中，并進(jìn)行第二階段混合。
然后用旋轉(zhuǎn)式壓縮機(jī)將混合成的顆粒壓制成片劑。在包衣盤(pán)(如Accela Cota)中用適當(dāng)?shù)闹旌衔锏乃詰腋∫簩?duì)核心藥片進(jìn)行薄膜包衣。用滑石粉對(duì)被包衣的藥片輕微噴粉，以便改進(jìn)藥片的加工特性。
將藥片裝入塑料容器中(30個(gè)藥片/容器)，并放入描述化合物的安全性和有效性的包裝插頁(yè)。
實(shí)施例3在制備5mg結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的終劑型時(shí)，采用以下配方。
實(shí)施例3中的劑型是以與實(shí)施例2的劑型的相同方式制備的。
實(shí)施例4
通過(guò)將準(zhǔn)確填充體積的預(yù)溶解的藥物配方泵入部分密封的膠囊腔，從而精確填充明膠膠囊。在注射填入藥物溶液配方之后，立即將膠囊完全熱密封。
將膠囊裝入塑料容器中，同時(shí)放入包裝插頁(yè)。
實(shí)施例5在兩項(xiàng)隨機(jī)、雙盲安慰劑對(duì)照研究中，將結(jié)構(gòu)式(I)的化合物給予有需要患者，劑量為每日定量給藥和在家中的性經(jīng)歷和性交時(shí)按需給藥。5-20mg劑量的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物為有效的，并且證明沒(méi)有面部潮紅和視覺(jué)異常。證明10mg結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的劑量為完全有效的，并且證明其副作用最小(未報(bào)道面部潮紅和藍(lán)視)。
通過(guò)勃起功能國(guó)際指數(shù)(IIEF)(Rosen et al.，Urology，49，pp.822-830(1997))、性活動(dòng)記錄、以及總體滿意問(wèn)題評(píng)估勃起功能。通過(guò)所有最終結(jié)果的評(píng)估，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物顯著改進(jìn)了勃起功能。在“按需”和每日劑量方案中，1-20mg的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物顯著改進(jìn)了勃起功能。
實(shí)施例6綜合了5個(gè)臨床研究的數(shù)據(jù)，以證明每日定量給予5mg和10mg結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的有效性。一項(xiàng)研究持續(xù)8周，另外4項(xiàng)研究持續(xù)12周。研究藥物“每日”給予患有男性勃起功能障礙的病人?！安鸸δ苷系K(ED)”定義為長(zhǎng)期不能完成和/或保持足夠允許滿意的性行為的勃起。
研究人群由以下4個(gè)亞組組成(a)在研究中30％以下的時(shí)間服用研究藥物；(b)在研究中30％-50％的時(shí)間服用研究藥物；(c)在研究中50％-70％的時(shí)間服用研究藥物；以及(d)在研究中70％以上的時(shí)間服用研究藥物。
口服按照Butler的美國(guó)專利5,985,326制備為研究藥物的共沉淀物的藥片的研究藥物，以及含有作為游離藥物的研究藥物的藥片。研究藥物以5mg和10mg的劑量給藥，不超過(guò)每24小時(shí)一次。不允許用其它批準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)中的藥物、治療方法或設(shè)備治療ED。
兩個(gè)主要的有效性變量為受試者插入其伴侶的能力以及其在性交中保持勃起的能力，這是由勃起功能國(guó)際指數(shù)(IIEF)測(cè)量的。IIEF問(wèn)卷包含15個(gè)問(wèn)題，它是一種簡(jiǎn)單、可靠的勃起功能的測(cè)量方法。見(jiàn)R.C.Rosen et al.，Urology，49，pp.822-830(1997)。
第二有效性的變量為勃起功能、高潮功能、性需要、性交滿意度以及總體滿意度的IIEF評(píng)分；病人達(dá)到勃起的能力；將他的陰莖插入伴侶的陰道的能力；有射精的性交的完成；勃起硬度的滿意程度，以及總體滿意程度，所有這些都是通過(guò)性經(jīng)歷特征(Sexual EncounterProfile(SEP))日記，特別是問(wèn)題2和問(wèn)題3進(jìn)行測(cè)量的。SEP是病人用來(lái)記錄研究過(guò)程中每次性經(jīng)歷的日記。
安全性分析包括了所有參加的受試者，通過(guò)評(píng)價(jià)所有報(bào)道的不良事件，以及臨床實(shí)驗(yàn)室值、生命體征、體檢結(jié)果和心電圖結(jié)果而對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。
總體說(shuō)來(lái)，對(duì)5個(gè)研究的綜合證明了劑量為5mg和10mg時(shí)，用藥頻率增加，所有三個(gè)主要有效性變量反應(yīng)更佳的趨勢(shì)。結(jié)果總結(jié)于以下表2-4。
表2.勃起功能IIEF的總結(jié)研究中服藥的時(shí)間百分比劑量統(tǒng)計(jì)量＜30％30％至50％50％至70％＞70％5mg N 97542813平均基線 13.2 13.5 14.1 13.1平均終點(diǎn) 17.4 17.5 20.9 22.1平均改變 4.3 4.0 6.8 9.010mgN 164 754143平均基線 14.1 14.4 13.9 14.8平均終點(diǎn) 20.0 21.4 21.5 22.2平均改變 5.9 6.9 7.6 7.4表3.SEQ問(wèn)題2的總結(jié)(插入陰莖的能力)研究中服藥的時(shí)間百分比劑量 統(tǒng)計(jì)量 ＜30％30％至50％50％至70％＞70％5mgN 98542813平均基線 42.7 40.8 47.9 42.8平均終點(diǎn) 57.2 57.2 69.3 68.2平均改變 14.4 16.5 21.4 25.510mg N 164 764145平均基線 44.7 47.5 43.6 45.9平均終點(diǎn) 66.2 69.0 73.4 75.6平均改變 21.5 21.5 29.9 29.7表4.SEQ問(wèn)題3的總結(jié)(用以成功性交的足夠長(zhǎng)時(shí)間的勃起)研究中服藥的時(shí)間百分比劑量統(tǒng)計(jì)量＜30％ 30％至50％50％至70％＞70％5mg N 98 542813平均基線 21.816.7 18.7 18.4平均終點(diǎn) 38.240.4 53.5 54.6平均改變 16.423.7 33.8 36.210mgN 164 764145平均基線 24.526.5 20.2 25.3平均終點(diǎn) 53.556.3 63.2 63.9平均改變 28.929.7 43.0 38.6
實(shí)施例7一項(xiàng)雙盲、安慰劑對(duì)照研究評(píng)估了在患有輕度至中度勃起功能障礙的21-72歲的男性中用式(I)化合物(研究藥物)進(jìn)行每日治療的安全性和有效性。排除了曾經(jīng)進(jìn)行過(guò)根治性前列腺切除術(shù)或患有糖尿病的男性。在該研究中，在三周的無(wú)治療加入期后，受試者被隨機(jī)分成用安慰劑或研究藥物(10，25，50，或至100mg)進(jìn)行三周的每日治療。本研究中的所有參加者同意在加入期和治療期進(jìn)行四次性經(jīng)歷。在治療期收集勃起功能國(guó)際指數(shù)(IIEF)的基線評(píng)分，性經(jīng)歷特征(SEP)日記數(shù)據(jù)，以及總體評(píng)估問(wèn)題(GAQ)。主要終點(diǎn)為對(duì)IIEF問(wèn)題3(對(duì)插入能力的療效)和4(對(duì)勃起維持的療效)的基線的改變。次要終點(diǎn)包括所有IIEF和SEP以及GAQ反應(yīng)中對(duì)基線的改變。每日給予10mg研究藥物的組的結(jié)果與每日給予25，50和100mg研究藥物的組的結(jié)果類似，或更佳。
與安慰劑相比，研究藥物顯著改進(jìn)了由所有研究終點(diǎn)所評(píng)估的勃起功能。例如，在用研究藥物治療的組中，每日10mg進(jìn)行治療時(shí)IIEF問(wèn)題3的改變?yōu)榧s1.4(與安慰劑相比)。每日10mg進(jìn)行治療時(shí)IIEF問(wèn)題4的改變?yōu)榧s1.8(與安慰劑相比)。SEP日記中報(bào)道，在服用研究藥物時(shí)，成功的性交率為，在10mg每日治療組中最大達(dá)到82％，而安慰劑組為40.4％。另外，90％的接受每日10mg研究藥物的受試者報(bào)道了GAQ所評(píng)價(jià)的勃起改進(jìn)，而安慰劑組只有30％。不良反應(yīng)為劑量依賴性的，隨連續(xù)的每日治療而減弱。最常見(jiàn)的不良反應(yīng)為頭痛、背痛、肌痛和消化不良。在13-36％的每日接受研究藥物治療的受試者中觀察到了最常見(jiàn)的不良反應(yīng)，即治療相關(guān)的頭痛，而安慰劑組中只有3％。生命體征、ECG或?qū)嶒?yàn)室測(cè)量值沒(méi)有治療相關(guān)的改變。
根據(jù)本發(fā)明，每日劑量單位為約1-10mg，優(yōu)選約2-10mg，最優(yōu)選約5-10mg，每日給藥，最多達(dá)每日10mg，至少持續(xù)3天，可以有效治療ED，使副作用最小或無(wú)副作用，并改進(jìn)血管調(diào)節(jié)。重要的是，為病人的性活動(dòng)提供了自發(fā)性，并且更急性返回到?jīng)_動(dòng)之前的狀態(tài)。令人驚訝的是，除了在個(gè)體中治療勃起功能障礙，在每日服用低劑量時(shí)，發(fā)現(xiàn)比按需服用較高劑量的PDE5抑制劑產(chǎn)生了更大的反應(yīng)，同時(shí)由于較低的劑量，副作用的發(fā)生更少。
前面的說(shuō)明書(shū)中描述了本發(fā)明的原理、優(yōu)選實(shí)施方案和操作方式。然而，本發(fā)明不應(yīng)解釋為限制于公開(kāi)的特殊形式，因?yàn)樗鼈儜?yīng)該認(rèn)為是說(shuō)明性的，而不是限制性的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不離開(kāi)本發(fā)明的精神的前提下進(jìn)行各種修飾和改變。
權(quán)利要求
1.一種用于人類藥用的制品，包含(a)包含PDE5抑制劑的口服劑型，所述PDE5抑制劑抑制PDE5的IC50小于10nM，其生物利用度足夠使其在約1-10mg的單位口服劑量下有效；(b)包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是用于通過(guò)采用長(zhǎng)期定量給藥方案而治療有需要的病人的性功能障礙；和(c)一個(gè)容器。
2.一種用于人類藥用的制品，包含(a)包含PDE5抑制劑的口服劑型，所述PDE5抑制劑的IC50小于10nM，其生物利用度足夠使其在約1-10mg的單位口服劑量下有效；(b)包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是用于通過(guò)采用長(zhǎng)期定量給藥方案而治療有需要的病人的性功能障礙，其中長(zhǎng)期定量給藥方案改善血管調(diào)節(jié)；和(c)一個(gè)容器。
3.一種用于人類藥用的制品，包含(a)包含PDE5抑制劑的口服劑型，所述PDE5抑制劑的IC50小于10nM，其生物利用度足夠使其在約1-10mg的單位口服劑量下有效；(b)包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是用于通過(guò)采用長(zhǎng)期定量給藥方案而治療有需要的病人的性功能障礙，其中長(zhǎng)期定量給藥與西地那非的急性或按需定量給藥相比改善血管調(diào)節(jié)；和(c)一個(gè)容器。
4.一種用于人類藥用的制品，包含(a)包含PDE5抑制劑的口服劑型，所述PDE5抑制劑的IC50小于10nM，其生物利用度足夠使其在約1-10mg的單位口服劑量下有效；(b)包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是用于通過(guò)采用長(zhǎng)期定量給藥方案而治療有需要的病人的性功能障礙，其中長(zhǎng)期定量給藥與瓦地那非的急性或按需定量給藥相比改善血管調(diào)節(jié)；和(c)一個(gè)容器。
5.權(quán)利要求1-4的制品，其中PDE5抑制劑進(jìn)一步具有以下特征(i)抑制PDE5的IC50值與抑制PDE6的IC50值至少差100倍；(ii)抑制PDE5的IC50值與抑制PDE1c的IC50值至少差1000倍。
6.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中口服劑型包含約1mg、約2mg、約5mg、或約10mg PDE5抑制劑。
7.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中長(zhǎng)期定量給藥方案是每日定量給藥方案。
8.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中長(zhǎng)期定量給藥方案包括給予約1mg/日-約10mg/日的PDE5抑制劑。
9.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中包裝插頁(yè)提供約10mg/日的PDE5抑制劑的最大劑量。
10.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中PDE5抑制劑選自(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；(3S，6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2，3-二甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；5-(2-乙氧基-5-嗎啉代乙酰基苯基)-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-(5-嗎啉代乙?；?2-正丙氧基苯基)-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-〔2-烯丙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基磺?；?苯基〕-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-{2-乙氧基-5-〔4-(2-丙基)-1-哌嗪基磺?；潮交鶀-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-{2-乙氧基-5-〔4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基磺酰基〕苯基}-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-{5-〔4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基磺?；?2-正丙氧基苯基}-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；5-〔2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)苯基〕-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；和5-〔2-乙氧基-5-(1-甲基-2-咪唑基)苯基〕-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮。
11.權(quán)利要求10的制品，其中長(zhǎng)期定量給藥方案包括給予約1mg/日-約10mg/日的PDE5抑制劑。
12.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中PDE5抑制劑選自西地那非和瓦地那非。
13.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的制品，其中PDE5抑制劑的結(jié)構(gòu)式為
14.一種治療性功能障礙的方法，包括使用權(quán)利要求1-4的制品。
15.一種治療性功能障礙的方法，包括長(zhǎng)期給予有需要的個(gè)體一種或多種PDE5抑制劑的口服劑型，其量為約1mg/日-約10mg/日，至少給予3日。
16.權(quán)利要求15的方法，其中PDE5抑制劑的長(zhǎng)期給藥是每日給藥。
17.一種改進(jìn)海綿體平滑肌舒張反應(yīng)的方法，包括長(zhǎng)期給予選自(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮的PDE5抑制劑，至少給予3日。
18.權(quán)利要求17的方法，包括長(zhǎng)期給予約1mg/日-約25mg/日的PDE5抑制劑。
19.選自(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮的PDE5抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物具有包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是通過(guò)長(zhǎng)期定量給予約1mg-約10mg的PDE5抑制劑至少3日而治療有需要的病人的性功能障礙。
20.選自(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮的PDE5抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物具有包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是通過(guò)長(zhǎng)期定量給予約1mg-約10mg的PDE5抑制劑至少3日而治療有需要的病人的性功能障礙，并且該治療伴隨血管調(diào)節(jié)改進(jìn)。
21.選自(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮的PDE5抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物具有包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是通過(guò)長(zhǎng)期定量給予約1mg-約10mg的PDE5抑制劑至少3日而治療有需要的病人的性功能障礙，并且與西地那非的長(zhǎng)期或按需定量給藥相比，改進(jìn)血管調(diào)節(jié)。
22.選自(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫化-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)吡嗪并[2′，1′6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮的PDE5抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物具有包裝插頁(yè)，指出PDE5抑制劑是通過(guò)長(zhǎng)期定量給予約1mg-約10mg的PDE5抑制劑至少3日而治療有需要的病人的性功能障礙，并且與瓦地那非的長(zhǎng)期或按需定量給藥相比，改進(jìn)血管調(diào)節(jié)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種磷酸二酯酶(PDE)抑制劑和它們?cè)谒幬镏破分械挠猛尽＞唧w地，本發(fā)明涉及一種3’5’環(huán)鳥(niǎo)苷酸特異性5型磷酸二酯酶(PDE5)的強(qiáng)效抑制劑，當(dāng)其以約1－10mg的單位劑量摻入藥品中時(shí)，可以通過(guò)每日給予PDE5抑制劑而治療性功能障礙。此處描述的制品的特征在于對(duì)PDE5的抑制，因此，提供了需要抑制PDE5的治療領(lǐng)域，特別是勃起功能障礙治療中的益處，同時(shí)減少或消除由于其它磷酸二酯酶的抑制而導(dǎo)致的不良反應(yīng)，并改進(jìn)血管調(diào)節(jié)。
文檔編號(hào)A61K31/00GK1446091SQ01811844
公開(kāi)日2003年10月1日 申請(qǐng)日期2001年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月26日
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