脂肪酸組合物的制作方法
【專利說明】
[0001] 本發(fā)明申請(qǐng)是基于申請(qǐng)日為2012年7月20日、申請(qǐng)?zhí)枮?01280035948.X(國際申請(qǐng) 號(hào)為PCT/US2012/047731)、名稱為"脂肪酸組合物"的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 和本申請(qǐng)一起提交的電子遞交序列表（"sequencelisting.txt，5,136字節(jié)，2011 年7月20日創(chuàng)建"）的內(nèi)容W其整體通過引用并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明設(shè)及經(jīng)分離微生物W及其菌株和突變體、生物質(zhì)、微生物油、組合物和培養(yǎng) 物;生產(chǎn)微生物油、生物質(zhì)和突變體的方法;和使用經(jīng)分離微生物、生物質(zhì)、培養(yǎng)物和微生物 油的方法。
【背景技術(shù)】
[0004]基于碳鏈的長度和飽和特征，將脂肪酸分類?；阪溨写嬖诘奶紨?shù)目，脂肪酸被稱 為短鏈、中等長度鏈或長鏈脂肪酸；當(dāng)碳原子之間不存在雙鍵時(shí)稱為飽和脂肪酸，當(dāng)存在雙 鍵時(shí)被稱為不飽和脂肪酸。當(dāng)僅存在一個(gè)雙鍵時(shí)，不飽和長鏈脂肪酸是單不飽和的，當(dāng)存在 多于一個(gè)雙鍵時(shí)，是多不飽和的。
[000引基于脂肪酸的甲基端的第一個(gè)雙鍵的位置，將多不飽和脂肪酸(PUFA)分類：ω-3 (η-3)脂肪酸在第Ξ個(gè)碳處含有第一個(gè)雙鍵，而ω-6(η-6)脂肪酸在第六個(gè)碳處含有第一個(gè) 雙鍵。例如，二十二碳六締酸r'DHA")是具有22個(gè)碳的鏈長度和6個(gè)雙鍵的ω-3長鏈多不飽 和脂肪酸化C-PUFA)，通常命名為"22: 6η-3"。其他ω-3LC-PUFA包括二十碳五締酸ΓΕΡΑ")， 命名為"20: 5η-3"、ω-3二十二碳五締酸r'DPAη-3")，命名為"22: 5η-3"。0齡和ΕΡΑ已被稱 作"基本'脂肪酸。ω-6LC-PUFA包括花生四締酸TARA")，命名為"20: 4η-護(hù)和ω-6二十二碳 五締酸r'DPAη-護(hù)），命名為"22: 5η-護(hù)。
[0006]由于位于細(xì)胞膜中，ω-3脂肪酸是影響細(xì)胞生理功能的重要的生物學(xué)分子，它能 調(diào)節(jié)生物活性化合物的產(chǎn)生與基因表達(dá)，并起到生物合成底物的作用。Roche，Η.Μ.， Proc.Nu化.5〇。.58:397-401(1999)。例如，0齡在人類大腦皮層中構(gòu)成約15%至20%的脂 質(zhì)，在視網(wǎng)膜中構(gòu)成30%至60%的脂質(zhì)，在睪丸與精子中富集，并且是母乳中的一個(gè)重要組 分。Berg自，J.P.和Barnathan'G..Adv.Biochem.Eng.Biotechno1.96:49-125(2005)oDHA在 腦中構(gòu)成至多97%的ω-3脂肪酸，且在視網(wǎng)膜中構(gòu)成至多93%的ω-3脂肪酸。此外，DHA是 胎兒與嬰兒發(fā)育W及維持成人認(rèn)知功能所必需的。（參考文獻(xiàn)同上。）因?yàn)樵谌梭w中無法從 頭合成ω-3脂肪酸，因此運(yùn)些脂肪酸必須從營養(yǎng)來源獲取。
[0007]亞麻仁油與魚油被認(rèn)為是良好的ω-3脂肪酸膳食來源。亞麻仁油不含有Ε Ρ A、 DHA、DPA或ARA，但卻含有亞麻酸(C18:3n-3)，其是使機(jī)體能夠制造EPA的一種結(jié)構(gòu)單元。然 而有證據(jù)顯示代謝轉(zhuǎn)換的速率緩慢且多變，特別在健康不佳的那些個(gè)體中。根據(jù)具體的種 及其飲食，魚油在脂肪酸組成的類型與水平方面存在顯著的差異。例如，與野生魚類相比， 水產(chǎn)養(yǎng)殖所飼養(yǎng)的魚的ω-3脂肪酸水平較低。此外，魚油具有含環(huán)境污染物的風(fēng)險(xiǎn)，并且可 能與穩(wěn)定性問題和魚的腥臭或味道有關(guān)。
[000引破囊壺菌是破囊壺菌目（Τ虹austochyhiales)的微生物。破囊壺菌包括裂殖壺菌 屬（Schizochy1:;rium)與破囊壺菌屬（Thraustochy1:;rium)的成員，并且已經(jīng)確認(rèn)為包括DHA 與EPA在內(nèi)的ω-3脂肪酸的一種替代來源。參見第5130242號(hào)美國專利。與相應(yīng)的魚油或微 藻油相比，由運(yùn)些海生異營性微生物所生產(chǎn)的油通常具有較簡單（simpler)的多元不飽和 脂肪酸譜(profiles)sLewis,Τ.Ε.iMar.Biotechnol. 1:580-587(1999)。已報(bào)導(dǎo)破囊壺菌種 的菌株所生產(chǎn)的ω-3脂肪酸，在該生物體所生產(chǎn)的總脂肪酸中占很高的百分比。第5130242 號(hào)美國專利；Huang，J.等的J.Am.Oil.Chem.Soc. 78 :605-610( 2001) ;Huang，J.等的 Mar.Biotechnol. 5:450-457(2003)。然而，分離的破囊壺菌在所生產(chǎn)的LC-PUFA的種類和量 方面不同，運(yùn)使得一些先前所述的菌株在培養(yǎng)中可能具有不期望的ω-6脂肪酸水平和/或 會(huì)表現(xiàn)低的生產(chǎn)力。因此，一直存在對(duì)展現(xiàn)出高生產(chǎn)力和所期望的LC-PUFA分布的微生物的 分離的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009 ] 本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212保藏的種的經(jīng)分離的微生物。
[0010] 本發(fā)明設(shè)及具有WATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212保藏的種的特征的經(jīng)分離的微生物。
[0011] 本發(fā)明設(shè)及包含下述18srRNA的經(jīng)分離的微生物，所述18srRNA包含沈QIDNO: 1多核巧酸序列或與SEQIDNO: 1具有至少94%同一性的多核巧酸序列。
[0012] 本發(fā)明設(shè)及包含18srRNA多核巧酸序列的經(jīng)分離的微生物，所述18srRNA多核巧 酸序列與WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的微生物的18srRNA多核巧酸序列具有至少94%同 一性。
[0013] 本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的經(jīng)分離的微生物，其中由微生物 生產(chǎn)的總脂肪酸包含W重量計(jì)超過約10%的二十碳五締酸。
[0014] 本發(fā)明設(shè)及具有WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的特征的經(jīng)分離的微生物，其 中由微生物生產(chǎn)的總脂肪酸包含W重量計(jì)超過約10%二十碳五締酸。
[0015]本發(fā)明設(shè)及生產(chǎn)甘油Ξ醋組分的經(jīng)分離的微生物，其中甘油Ξ醋組分的二十碳五 締酸含量為W重量計(jì)至少約12%。
[0016] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物是突變菌株。
[0017] 本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)口了4-10212、口了4-10213、口了4-10214、口了4-10215、口了八-10208、PTA-10209、PTA-10210 或PTA-10211 保藏的經(jīng)分離的微生物。
[0018] 本發(fā)明設(shè)及包含本發(fā)明的微生物的任一種或其混合物的生物質(zhì)。
[0019] 本發(fā)明設(shè)及分離的生物質(zhì)，其中W重量計(jì)生物質(zhì)干細(xì)胞重量的至少約20%是脂肪 酸，其中W重量計(jì)脂肪酸的超過約10%是二十碳五締酸，且其中脂肪酸包含W重量計(jì)各低 于約5%的花生四締酸和二十二碳五締酸n-6。在一些實(shí)施方式中，W重量計(jì)脂肪酸的至少 約25%是二十二碳六締酸。
[0020] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及包含甘油Ξ醋的分離的生物質(zhì)，其中W重量計(jì)甘 油Ξ醋的至少約12%是二十碳五締酸。
[0021] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及本發(fā)明的分離的生物質(zhì)的任何一種，其中脂肪酸 還包含W重量計(jì)各低于約5%的油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳締酸和芥酸。
[0022] 本發(fā)明設(shè)及包含本發(fā)明的微生物的任一種或其混合物的分離的培養(yǎng)物。
[0023]本發(fā)明設(shè)及用于非人類動(dòng)物或人類的包含本發(fā)明的微生物或生物質(zhì)的任一種或 其混合物的食用產(chǎn)品、化妝品或藥物組合物。
[0024]本發(fā)明設(shè)及下述微生物油，所述微生物油包含W重量計(jì)至少約20%的二十碳五締 酸和W重量計(jì)各低于約5%的花生四締酸、二十二碳五締酸n-6、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十 碳締酸、芥酸和十八碳四締酸的。在一些實(shí)施方式中，微生物油還包含W重量計(jì)至少約25% 的二十二碳六締酸。
[0025]發(fā)明設(shè)及下述微生物油，所述微生物油包含W重量計(jì)至少約10%的甘油Ξ醋組 分，其中甘油Ξ醋組分中W重量計(jì)至少約12%的脂肪酸是二十碳五締酸，其中甘油Ξ醋組 分中W重量計(jì)至少約25%的脂肪酸是二十二碳六締酸，和其中甘油Ξ醋組分中W重量計(jì)低 于約5%的脂肪酸是花生四締酸。
[0026]本發(fā)明設(shè)及用于非人類動(dòng)物或人類的包含本發(fā)明的微生物油的任一種的食用產(chǎn) 品、化妝品或藥物組合物。在一些實(shí)施方式中，食用產(chǎn)品是嬰幼兒配方。在一些實(shí)施方式中， 嬰幼兒配方適于早產(chǎn)兒。在一些實(shí)施方式中，食用產(chǎn)品是牛奶、飲料、治療性飲品、營養(yǎng)飲品 或其組合。在一些實(shí)施方式中，食用產(chǎn)品是非人類動(dòng)物或人類產(chǎn)品的添加劑。在一些實(shí)施方 式中，食用產(chǎn)品是營養(yǎng)補(bǔ)充劑。在一些實(shí)施方式中，食用產(chǎn)品是動(dòng)物飼料。在一些實(shí)施方式 中，動(dòng)物飼料是水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料。在一些實(shí)施方式中，動(dòng)物飼料是家養(yǎng)動(dòng)物飼料、動(dòng)物園動(dòng)物 飼料、耕畜飼料、家畜飼料或其組合。
[0027]本發(fā)明設(shè)及生產(chǎn)包含ω-3脂肪酸的微生物油的方法，所述方法包括:在培養(yǎng)物中 培養(yǎng)本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物的任一種或其混合物W生產(chǎn)包含ω-3脂肪酸的油。在一些實(shí) 施方式中，所述方法還包括提取油。
[0028]本發(fā)明設(shè)及生產(chǎn)包含ω-3脂肪酸的微生物油的方法，所述方法包括從本發(fā)明的生 物質(zhì)的任一種中提取包含ω-3脂肪酸的油。在一些實(shí)施方式中，使用有機(jī)溶劑提取方法(例 如己燒提取)來提取微生物油。在一些實(shí)施方式中，使用無溶劑提取方法來提取微生物油。 [0029]本發(fā)明設(shè)及由本發(fā)明的方法生產(chǎn)的微生物油。
[0030]本發(fā)明設(shè)及用于生產(chǎn)本發(fā)明的生物質(zhì)的方法，其包括:在培養(yǎng)物中培養(yǎng)本發(fā)明的 經(jīng)分離的微生物的任一種或其混合物W生產(chǎn)生物質(zhì)。
[0031]本發(fā)明設(shè)及由本發(fā)明的方法生產(chǎn)的生物質(zhì)。
[0032]本發(fā)明設(shè)及用于生產(chǎn)本發(fā)明的突變菌株的方法，其包括:對(duì)本發(fā)明的微生物的任 一種進(jìn)行誘變處理并分離突變菌株。
[0033]本發(fā)明設(shè)及本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油的任一種或其混合物用 于制造治療炎癥或其相關(guān)病況(condition)的藥物的用途。
[0034]本發(fā)明設(shè)及本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油的任一種或其混合物用 于治療炎癥或其相關(guān)病況的用途。
[0035]本發(fā)明設(shè)及用于治療炎癥或其相關(guān)病況的本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物、生物質(zhì)或微 生物油的任一種或其混合物。
[0036]本發(fā)明設(shè)及用于治療需要的個(gè)體的炎癥或其相關(guān)病況的方法，其包括給個(gè)體施用 本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油的任一種或其混合物和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0037]本發(fā)明設(shè)及經(jīng)分離的微生物W及其菌株和突變體，W及其生物質(zhì)、微生物油、組合 物和培養(yǎng)物。本發(fā)明設(shè)及從本發(fā)明的微生物生產(chǎn)微生物油、生物質(zhì)和突變體的方法和使用 微生物、生物質(zhì)和微生物油的方法。本文描述的微生物是高生產(chǎn)力的并產(chǎn)生獨(dú)特的脂肪酸 譜，所述脂肪酸譜部分特征為高水平的ω-3脂肪酸，特別是高水平的EPA。
[0038]具體地，本發(fā)明設(shè)及如下各項(xiàng)：
[0039] 1. -種微生物油，其包含ω-3多不飽和脂肪酸，所述ω-3多不飽和脂肪酸包含W 重量計(jì)占ω-3多不飽和脂肪酸總量的約含90%量的二十二碳六締酸和二十碳五締酸，其中 二十碳五締酸的量為W重量計(jì)占二十二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約19 %至約 55%，且二十二碳六締酸的量為W重量計(jì)占二十二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約 35% 至約 71%。
[0040] 2.根據(jù)項(xiàng)1所述的油，其中所述二十碳五締酸的量為W重量計(jì)占二十二碳六締酸 和二十碳五締酸總量的從約19%至約43%，且所述二十二碳六締酸的量為W重量計(jì)占二十 二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約35%至約47%。
[0041] 3.根據(jù)項(xiàng)1所述的油，其中所述二十碳五締酸的量為W重量計(jì)占二十二碳六締酸 和二十碳五締酸總量的從約27%至約54%，且所述二十二碳六締酸的量為W重量計(jì)占二十 二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約36%至約63%。
[0042] 4.根據(jù)項(xiàng)1所述的油，其中所述二十碳五締酸的量為W重量計(jì)占二十二碳六締酸 和二十碳五締酸總量的從約26%至約38%，且所述二十二碳六締酸的量為W重量計(jì)占二 十二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約52%至約64%。
[0043] 5.根據(jù)項(xiàng)1所述的油，其中所述二十碳五締酸的量為W重量計(jì)占二十二碳六締酸 和二十碳五締酸總量的從約28%至約36%，且所述二十二碳六締酸的量為W重量計(jì)占二十 二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約54%至約62%。
[0044] 6.根據(jù)項(xiàng)1-5任一項(xiàng)所述的油，其中所述油包含每克油從約120mg至約220mg的二 十碳五締酸和每克油從約240mg至約450mg的二十二碳六締酸。
[0045] 7.根據(jù)項(xiàng)1-5任一項(xiàng)所述的油，其中所述油包含每克油從約130mg至約195mg的二 十碳五締酸和每克油從約320mg至約480mg的二十二碳六締酸。
[0046] 8.根據(jù)項(xiàng)1-5任一項(xiàng)所述的油，其中所述ω-3多不飽和脂肪酸還包含W重量計(jì)占 ω-3多不飽和脂肪酸總量的約0%至約10%量的二十二碳五締酸。
[0047] 9.根據(jù)項(xiàng)8所述的油，其中所述油包含每克油約150mg至約300mg的二十碳五締酸； 每克油從約200mg至約400mg的二十二碳六締酸；和每克油從約0至約55mg的二十二碳五締 酸。
[0048] 10.根據(jù)項(xiàng)1-9任一項(xiàng)所述的油，其中所述油由裂殖壺菌屬種生產(chǎn)。
[0049] 11.根據(jù)項(xiàng)任一項(xiàng)所述的油1-10,其中所述油包含W重量計(jì)各少于約5%的花生四 締酸、二十二碳五締酸n-6、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳締酸、芥酸和十八碳四締酸。
[0050] 12.根據(jù)項(xiàng)1-11任一項(xiàng)所述的油，其中所述油包含W重量計(jì)至少約10%的甘油Ξ 醋組分，其中所述甘油Ξ醋組分中W重量計(jì)至少約12%的脂肪酸是二十碳五締酸，其中所 述甘油Ξ醋組分中W重量計(jì)至少約25%的脂肪酸是二十二碳六締酸和其中所述甘油Ξ醋 組分中W重量計(jì)少于約5%的脂肪酸是花生四締酸。
[0051] 13. -種包含ω-3多不飽和脂肪酸的微生物油，所述ω-3多不飽和脂肪酸包含W 重量計(jì)占ω-3多不飽和脂肪酸總量的約含90%量的二十二碳六締酸和二十碳五締酸，和W 重量計(jì)占ω-3多不飽和脂肪酸總量的約ο%至約2%量的二十二碳五締酸;其中W重量計(jì)二 十碳五締酸的量為二十二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約10%至約25%，W重量計(jì)二 十二碳六締酸的量為二十二碳六締酸和二十碳五締酸總量的從約75%至約90%。
[0052] 14.根據(jù)項(xiàng)13所述的油，其中所述油包含每克油為從約55mg至約150mg的二十碳五 締酸;每克油為從約410mg至約540mg的二十二碳六締酸和每克油為從約0至約12mg的二十 二碳五締酸。
[0053] 15.根據(jù)項(xiàng)1-6和8-13任一項(xiàng)所述的油，其中所述ω-3多不飽和脂肪酸總量為每克 油至少約400mg。
[0054] 16.根據(jù)項(xiàng)1-6和8-13任一項(xiàng)所述的油，其中所述二十二碳六締酸和二十碳五締酸 總量為每克油約400mg。
[0055] 17.根據(jù)項(xiàng)1-14任一項(xiàng)所述的油，其中所述ω-3多不飽和脂肪酸總量為每克油從 約 400mg至約 750mg。
[0056] 18.根據(jù)項(xiàng)任一項(xiàng)1-14所述的油，其中所述ω-3多不飽和脂肪酸總量為每克油至 少約500mg。
[0057] 19.根據(jù)項(xiàng)任一項(xiàng)1-14所述的油，其中所述二十二碳六締酸和二十碳五締酸總量 為每克油約500mg。
[0058] 20.根據(jù)項(xiàng)1-19任一項(xiàng)所述的油，其中所述油具有W重量計(jì)總ω-3多不飽和脂肪 酸的選自 1:1至1:1.5、1:1至1:2、1:1.5至1:2、1:1至1:2.5、1:2至1:2.5和1:4至1:7 的ΕΡΑ: DHA比率。
[0059] 21.-種口服劑型，其包含根據(jù)項(xiàng)1-20任一項(xiàng)所述的油。 巧060] 發(fā)明詳述
[0061]本發(fā)明設(shè)及經(jīng)分離的微生物及由其所衍生的菌株。由本發(fā)明的經(jīng)分離的微生物所 "衍生"的菌株可W是天然衍生的或人工衍生的，比如突變體、變體或重組菌株。本文中使用 時(shí)，術(shù)語"分離的"并不一定反映分離物已被純化的程度，而是指從天然形式或天然環(huán)境中 分離（isolation)或隔離（separation)。分離物可包括但不限于分離的微生物、分離的生物 質(zhì)、分離的培養(yǎng)物、分離的微生物油及分離的序列（比如本文中所公開的分離的多核巧酸序 列）。本文中使用時(shí)，術(shù)語"微生物'包括但不限于術(shù)語"微藻"、"破囊壺菌"及與本文中所述 的任一種保藏微生物相關(guān)的分類學(xué)分類。與本發(fā)明的任一種微生物(包括本文中所述的保 藏微生物）相關(guān)時(shí)所用的術(shù)語"破囊壺菌目"（"Thraustochytriales")、"破囊壺菌" ("thraustochytrid")、''裂殖壺菌屬"（"Schizochytrium")及。破囊壺菌屬" TThraustochytrium")基于囊括可獲得的系譜信息的當(dāng)前分類學(xué)分類，并且在本申請(qǐng)遞交 日后修訂分類學(xué)分類的情況下不意圖其限制作用。
[0062] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的種的經(jīng)分離的微 生物。與ATCC登錄號(hào)PTA-10212相關(guān)的分離的微生物在本文中也稱為破囊壺菌屬種 (Thraustoch}rtriumsp.)ATCCPTA-10212,即破囊壺菌屬菌種27797。與ATCC登錄號(hào)PTA-10212相關(guān)的經(jīng)分離的微生物是在布達(dá)佩斯條約(BudapestTreaty)下于2009年7月14日保 藏于美國維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道化niversityBoulevard) 10801號(hào)的美國典型培養(yǎng)物保藏中屯、(AmericanTypeQiltureCollection)的專利保藏庫 (PatentD邱ositoiT)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的經(jīng) 分離的菌株。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的經(jīng)分離的菌 株。
[0063]在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及具有WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的種的特征的 經(jīng)分離的微生物或由其所衍生的菌株。WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的種的特征可W包括 其生長性質(zhì)與表型性質(zhì)(表型性質(zhì)的例子包括形態(tài)學(xué)性質(zhì)和繁殖性質(zhì)）、其物理性質(zhì)和化學(xué) 性質(zhì)（比如干重和脂質(zhì)譜）、其基因序列及其組合，其中所述特征使運(yùn)些種區(qū)別于先前鑒定 過的種。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及具有WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的種的特征的經(jīng) 分離的微生物，其中所述特征包括:包含SEQIDNO: 1的多核巧酸序列或與SEQIDNO: 1的 同一性為至少94%、95 %、96 %、97 %、98 %或99 %的多核巧酸序列的18srRNA，WATCC登錄 號(hào)PTA-10212保藏的種的形態(tài)學(xué)性質(zhì)與繁殖性質(zhì)，W及WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的種的 脂肪酸譜。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的分離的微生物具有與WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏 的微生物基本相同的生長特征。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的分離的微生物具有與WATCC 登錄號(hào)PTA-10212保藏的微生物基本相同的生長性質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及經(jīng)分 離的微生物，其包含具有SEQIDNO: 1的多核巧酸序列或與SEQIDNO: 1的同一性為至少 94%、95%、96%、97%、98%或99%的多核巧酸序列的183誠酷。在一些實(shí)施方式中，本發(fā) 明設(shè)及經(jīng)分離的微生物，其包含與WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的微生物的18srRNA多核 巧酸序列的同一性為至少94 %的18srRNA多核巧酸序列。
[0064] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的微生物的突變菌 株。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該突變菌株是WATCC登錄號(hào)PTA-10213(即破囊壺菌屬菌種 27797-2)、PTA-10214(即破囊壺菌屬菌種27797-13)或PTA-10215(即破囊壺菌屬菌種 27797-20)保藏的菌株。與ATCC登錄號(hào)PTA-10213、PTA-10214及PTA-10215相關(guān)的微生物是 在布達(dá)佩斯條約（BudapestTreaty)下于2009年7月14日保藏于美國維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道(UniversityBoulevard) 10801號(hào)的美國典型培養(yǎng)物保 藏中屯、(AmericanTypeQiltureCollection)的專利保藏庫（PatentDepository)。
[0065] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的經(jīng)分離的微 生物。與ATCC登錄號(hào)PTA-10208相關(guān)的分離的微生物在本文中也稱為裂殖壺菌屬種 (Schizoch^riumsp)ATCCPTA-10208,即裂殖壺菌屬菌種27173(9.l)-3-E。與ATCC登錄號(hào) PTA-10208相關(guān)的微生物是在布達(dá)佩斯條約(BudapestTreaty)下于2009年7月14日保藏于 美國維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道(UniversityBoulevard) 10801 號(hào)的美國典型培養(yǎng)物保藏中屯、（AmericanTypeCultureCollection)的專利保藏庫 (PatentD邱ositoiT)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的經(jīng) 分離的菌株。
[0066] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的經(jīng)分離的微 生物，其中由微生物生產(chǎn)的總脂肪酸包含W重量計(jì)超過約10%、超過約11 %、超過約12%、 超過約13%、超過約14%、超過約15%、超過約16%、超過約17%、超過約18%、超過約19% 或超過約20%的EPA。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的 經(jīng)分離的微生物，其中由微生物生產(chǎn)的總脂肪酸包含W重量計(jì)約10%至約55%、約10%至 約50%、約10%至約45%、約10%至約40%、約10%至約35%、約10%至約30%、約15%至約 55 %、約15 %至約50%、約15 %至約45 %、約15%至約40 %、約15 %至約35%、約15 %至約 30 %、約20 %至約55 %、約20 %至約50 %、約20 %至約45 %、約20 %至約40 %、約20 %至約 35 %或約20 %至約30 %的EPA。
[0067]在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及具有WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的特征的 經(jīng)分離的微生物，其中由微生物生產(chǎn)的總脂肪酸包含W重量計(jì)超過約10%的二十碳五締 酸。WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的微生物的特征包括其生長性質(zhì)與表型性質(zhì)（表型性質(zhì)的 例子包括形態(tài)學(xué)性質(zhì)和繁殖性質(zhì)）、其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)（比如干重和脂質(zhì)譜）、其基因 序列及其組合，其中所述特征使運(yùn)些種區(qū)別于先前鑒定過的種。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明 設(shè)及具有WATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的種的特征的經(jīng)分離的微生物，其中所述特征包括： 包含SEQIDN0:2的多核巧酸序列的18srRNA，WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的形態(tài)學(xué) 性質(zhì)與繁殖性質(zhì)，W及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的種的脂肪酸譜。在一些實(shí)施方式中， 本發(fā)明的分離的微生物具有與WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的那些微生物基本相同的物理 和化學(xué)性質(zhì)。
[006引在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及WATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的微生物的突變菌 株。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該突變菌株是WATCC登錄號(hào)PTA-10209(即裂殖壺菌屬菌種 27173(9.l)-3-E#2)、PTA-10210(即裂殖壺菌屬菌種27173(9.l)-3-E#4)或PTA-10211(即裂 殖壺菌屬菌種27173(9.1)-3-E#8)保藏的菌株。與ATCC登錄號(hào)PTA-10209、PTA-10210和PTA-10211相關(guān)的微生物是在布達(dá)佩斯條約(BudapestTreaty)下于2009年9月25日保藏于美國 維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道(UniversityBoulevard) 10801號(hào)的 美國典型培養(yǎng)物保藏中屯、（AmericanTypeCultureCollection)的專利保藏庫（Patent Depository)。
[0069]在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明設(shè)及生產(chǎn)