專利名稱：血液測試鑒別疾病使用的保藏非傳染性對照細胞的制作方法
本申請與1991年10月22日申請的美國專利US5,059,518相關(guān)。本申請和US,5,059,518歸共同的受讓人，Coulter Corporation，Hialeah，F(xiàn)lorida所有。
本發(fā)明涉及對照細胞和生產(chǎn)用于免疫檢測的該細胞的方法。尤其是，本發(fā)明涉及具有至少一種特定細胞類型的種群或數(shù)量的保藏非傳染性對照細胞，所述特定細胞類型種群或數(shù)量是患病哺乳動物血液或組織樣品中所述細胞種群或數(shù)量的指示特征，與正常血液或組織樣品的其數(shù)量相比，所述疾病可導(dǎo)致上述細胞數(shù)量改變。具體地說，非傳染性對照細胞通過減少或擴增在正常血液中發(fā)現(xiàn)的反映特定的疾病狀態(tài)的一種或多種細胞類型，從正常、非傳染性、非疾病變化的血液中產(chǎn)生的。然后將這種減少或擴增的正常血液樣品保藏，例如，凍干，以便延長其保存期，隨后將其用于臨床和免疫分析方法中。
對照細胞是準確無誤的臨床和免疫檢測中所必需的。需要對照細胞來確保測試設(shè)備和測試方法的可靠性和準確性，并保證在不同的時間和不同的實驗室的可重復(fù)性。管理這些檢測的美國州和聯(lián)邦法規(guī)通常要求使用多級對照以證實設(shè)備在一定值內(nèi)性能運行正常。免疫檢測中，新鮮的正常細胞為這種設(shè)備檢測的標(biāo)準對照細胞。為了免除獲得和保持新鮮細胞所需的費用和開支，已評估了各種保藏新鮮細胞的方法。例如，US,5,059,518(’518專利)描述了使用凍干的正常哺乳動物細胞作對照細胞。
也曾經(jīng)采用異常血細胞樣品作為對照細胞來證實疾病的存在并確定其階段，但是已將它們的使用限制在從患者抽取的新鮮或鮮凍樣品。因此這些樣品的供應(yīng)受到內(nèi)在的限制。再者，由于許多這樣的血樣與傳染性疾病有關(guān)，由于健康和社會以及有時技術(shù)上的原因，這些血樣不能大規(guī)范生產(chǎn)和銷售，并且這些血樣需要特別的處理方法。
本發(fā)明描述通過使用經(jīng)修飾的正常對照細胞樣品作為上述異常對照細胞的替代物而反映人血中存在于表現(xiàn)出特定疾病的人血液中的一種或多種特定細胞類型的種群或數(shù)量。
本發(fā)明提供反映表現(xiàn)出疾病的，以及血液中存在的細胞類型、數(shù)量或生理化學(xué)性質(zhì)上有改變的哺乳動物血樣中特定細胞種群的對照細胞，以及生產(chǎn)與保藏這些對照細胞的方法。對照細胞反映以下兩個方面的血細胞種群的異?，F(xiàn)狀；(1)由于疾病的存在而使特定類型細胞在數(shù)量上的增加或減少，增加或減少的量與正常血樣中這些細胞的數(shù)量有關(guān)；或(2)存在在正常血樣中不應(yīng)發(fā)現(xiàn)的細胞，這些細胞在大小、形狀或其它物理特性上有差異，或具有未在正常細胞發(fā)現(xiàn)的分子和/或抗原位點。第一種類型的對照細胞通過減少正常存在于血液中的特定細胞的血樣至正常水平以下或通過添加這些細胞至存在于血液中的正常水平之上來制備，且隨后保藏該樣品。第二種類型的對照細胞通過將不是正常存在于血液中的細胞加到正常血樣中并隨后保藏該樣品。


圖1(a)-(d)表示正常血樣的流動血細胞計數(shù)分析，其中白細胞已與標(biāo)記的抗CD-19單克隆抗體的PE(藻紅蛋白)和標(biāo)記了抗CD-10單克隆抗體的FITC(異硫氰酸熒光素)結(jié)合。
圖2(a)-(d)表示含有添加了CD10陽性細胞的正常血樣的流動血細胞計數(shù)分析。
圖3(a)-(d)表示患有普通急性淋巴白血病患者血樣的流動血細胞計數(shù)分析。
圖4(a)-(d)表示正常白樣的淋巴細胞流動血細胞計數(shù)分析。
圖5(a)-(d)表示AIDS患者血樣淋巴細胞的細胞計數(shù)分析。
圖6(a)-(d)表示按本發(fā)明已減少了CD4的淋巴細胞的細胞計數(shù)分析。
圖7圖示當(dāng)正常細胞樣品用增加體積減少了CD4的樣中品稀釋時，CD4細胞百分率的降低。
圖8圖示當(dāng)正常細胞樣品用增加體積的減少了CD4的樣品稀釋時，每毫立升樣品體積中CD4細胞數(shù)量上的變化。
本文中采用的術(shù)語“異常對照細胞樣品”是指細胞的種群或數(shù)量或是總數(shù)或是特定類型不同于正常血樣的細胞樣品；或存在的不存在于正常血樣中的異常血樣細胞。例如，全部白細胞(白血細胞或WBC)總數(shù)的正常值為4,300至10,800每立方毫米。有差異的白細胞數(shù)量中各種細胞類型的正常值為分裂中性白細胞(segmented neutrophil)＝34-75％，帶狀中性白細胞(band neutrophis)＝0-8％，淋巴細胞＝12-50％；單核細胞＝3-15％。嗜曙紅細胞＝0-5％和嗜堿性粒細胞＝0-3％(The Merck Manual，14th Ed.R.Berkow，ed(Merck Sharp&Dohme，Rahway，New Jersey 1982)，p2182)。異常血樣中，這些值有所不同。例如，(1)慢性粒細胞自血病患者的樣品中，WBC數(shù)量可升至15,000至500,000或更高(文獻同上，p1142)；(2)血友病者會患有輕微至嚴重的VIII因子缺陷，該因子鑒別為一種抗原(文獻同上，p1127-1129)；和(3)普通急性淋巴母細胞白血病(CALL)患者的樣品中，細胞會含有不正常出現(xiàn)的CD10抗原，該抗原可由抗CD10單克隆抗體如J5(Coulter Corporation，Hialeah，F(xiàn)lorida)特殊地鑒別。
術(shù)語“生理化學(xué)性質(zhì)”包括細胞的抗原特性，不論這些特性是正常存在的還是由于疾病導(dǎo)致未存在的。
本發(fā)明可由許多不同形式和與不同哺乳動物種類有關(guān)的實施方案來實現(xiàn)。雖然本文描述的詳細實施例涉及人及與AIDS和CALL有關(guān)的分析，這些實施例將被看作本發(fā)明原理的舉證，而并非旨在將本發(fā)明的范圍限定至這些特定的實施方案。再者，雖然用來鑒別細胞類型的分子結(jié)構(gòu)是人獨有的且在其它哺乳動物中一般是沒有的，但本發(fā)明的實施不限于人對照細胞樣品和制備該樣品的方法。例如可制備用于診斷貓白血病病毒或猿猴T細胞親淋巴病毒1(STLV-1)，以及其它對照細胞樣品。
異常對照細胞通常與兩種情況之一有關(guān)。首先，特定類型細胞種群或數(shù)量的增加或降低。例如，從HIV(AIDS)感染的病人定期抽取的血樣將顯示CD4陽性淋巴細胞隨疾病發(fā)晨而降低。其次，出現(xiàn)正常血樣中未發(fā)現(xiàn)的細胞。例如，普通急性淋巴母細胞白血病患者的外周血樣中出現(xiàn)CD10陽性細胞[CALL；K.A.Foon et al.，“Immunologic Classification of Leukemia and Lymphoma”，Blood 681-31(1986)]。通常用儀器，加上將特異的單克隆抗體與特定細胞類型其上或其中的特異分子結(jié)構(gòu)結(jié)合，完成有關(guān)各種細胞種群血樣的免疫分析。例如，通過將抗CD4單克隆抗體結(jié)合到CD4分子的抗原位點上，鑒別CD4陽性淋巴細胞?？梢栽趩我坏募毎翔b別幾種不同分子結(jié)構(gòu)，以便鑒別特定的細胞類型或是與特定疾病有關(guān)的特定細胞類型。可以將大類的(broad class)細胞增分成更小和更具體的亞型。為了從幾大類中區(qū)分一大類細胞并從選出的大類中進一步區(qū)分所選大類亞型，可將不同的標(biāo)記結(jié)合到不同的單克隆抗體上。例如，可以使用單獨或組合的、含有分子、酶和染料(特別是熒光染料)的放射成分作為這樣的標(biāo)記物。優(yōu)選的是熒光染料，且此染料的例子包括熒光素，異硫氰酸熒光素(FITC)，異硫氰酸四甲基若丹明(TRITC)，藻紅蛋白(PE或RD)，藻紅蛋白-得克薩其紅結(jié)合物和別藻藍蛋白，等等。
降低特異細胞的數(shù)量對于對照細胞來說是重要的，通常，制備此對照細胞的方法包括采集正常的、白血球富集的、抗凝固的血樣；將其中的紅血球(RBCs)溶胞并洗滌樣品以去除溶胞碎片或由任何其它適宜的方法，例如US4,752,863中描述的方法，使用與可剝離底物諸如玻璃、陶瓷或聚合物珠，優(yōu)選磁珠結(jié)合的單克隆抗體，從樣品中去除特異細胞類型；去除RBC，并將去除的細胞重新加至可以表示疾病發(fā)展的不同階段的特定水平。然后將樣品長期保藏，例如，根據(jù)US5,059,518中描述的方法凍干樣品(其方法引入本文中作為參考)，或通過其它適合的細胞保藏技術(shù)。除了那些特異的與疾病相關(guān)的其數(shù)目已增加或降低的細胞，或已加入那些特異的與疾病有關(guān)的細胞之外，由此生產(chǎn)的對照細胞顯示正常的白血球細胞譜。
給出以下實施例是作說明之用，而不應(yīng)看作限定本發(fā)明。
HIV患者的血液中表現(xiàn)出CD4(T4)細胞的含量降低。由于CD4細胞在抵抗許多直接導(dǎo)致AIDS患者死亡的繼發(fā)性疾病中起著重要作用，進行CD4數(shù)量測定可以指示HIV感染的程度和患者避免繼發(fā)性感染的能力。由于患者的血樣分析是絕對必要的，因此人們希望用于分析的對照細胞是非傳染性的，這樣便可將任何疾病的偶然傳播降至最低限度。實施例1 制備用作AIDS對照細胞的CD4減少的正常血細胞將若干ACD(檸檬酸葡萄糖)或CPD(檸檬酸，磷酸葡萄糖)抗凝固的、自細胞富體的、正常血集合物在容器中合并，得到大量白細胞富集的血樣。用0.83％(重量比)的氯化銨溶液將樣品中的紅血球溶胞。溶胞后，用Hepes-鹽水-牛血清白蛋白溶液(HSB)將白血細胞洗滌幾次。然后將白血細胞從最終洗滌液中分離出來并置于含有等滲10％海藻糖溶液容器中作為保藏介質(zhì)。保留部分白血細胞備用。另外，通過例如由US4,752,563描述的那些方法，以及其它方法，將抗CD4單克隆抗體如T4(Coulter Corporation，Hialeah)結(jié)合到磁珠上。將抗CD4結(jié)合的磁珠加到洗滌的白細胞樣品中并混合30分鐘。采用磁性裝置例如手持磁分離器或市售磁分離器將珠和結(jié)合于其上的細胞從容器中除去。將留在容器中的細胞離心分離，去除上層的清液并將細胞重懸浮于等滲海藻糖溶液中，最好是等滲10％海藻糖溶液作為保藏介質(zhì)。然后將CD4減少的樣品與來自其它帶已知數(shù)量CD4細胞的樣品中的不同數(shù)量保留白細胞或正常、無白細胞紅血球混合，制備含不同數(shù)量CD4細胞的樣品。例如1級CD4細胞等體積的保留白細胞和CD4減少的白細胞混合，得到在原正常采集的血樣中有50％CD4細胞的樣品。
2級CD4細胞三個體積的保留自細胞和一個體積CD4減少的白細胞混合，得到在原采集的血樣中有25％CD4細胞的樣品。
3級CD4細胞九個體積的保留白細胞和一個體積CD4減少的白細胞混合，得到在原采集的血樣中有10％CD4細胞的樣品。
圖7和8以圖表示按所述方法制備的CD4對照細胞。圖7描述當(dāng)含正常CD4的樣品用增加量的CD4減少的血稀釋時，陽性細胞百分率的變化。圖8描述當(dāng)稀釋度增加時，每立方毫米CD4陽性細胞絕對數(shù)量的變化。
此外，采集其它的正常的ACD或CPD抗凝固的、富集白細胞血集合物，將紅血細胞溶胞且如本文前面所述的方法洗滌白細胞。采集樣品中存在的CD4細胞數(shù)量可由使用熒光標(biāo)記的T4單克隆抗體的流動血白細胞計數(shù)法確定。然后將該采集含CD4的樣品的等分物與各種量的CD4減少的白細胞混合而制備具有不同濃度的CD4細胞的對照細胞樣品。實施例2 制備CD10(CALLA)擴增的對照細胞采集大量的正常ACD或PCD抗凝固的、富集白細胞的紅血細胞集合物，并用0.83％(重量比)的氯化銨溶液將紅血細胞溶胞。溶胞后，用HSB洗滌白細胞幾次。然后將白細胞從最終洗滌液分離并置于含有等滲10％海藻糖溶液的容器中作為保藏介質(zhì)。另外使用市售CALLA陽性，一種美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)的CALLA樣品、或其它來源的細胞，制備培養(yǎng)的CALLA(CD10陽性，普通急性淋巴母細胞白血病抗原)陽性細胞。在這里使用的細胞來自ATCC，保藏號CRL1596。然后將培養(yǎng)的CD10+細胞以不同的量加入到各等份保藏溶液中的正常白細胞中。實施例3 凍干用作非傳染疾病細胞對照的穩(wěn)定正常細胞將由實施例1和2所示描述的方法制備的對照細胞根據(jù)US5,059,518(其方法入本文作為參考)凍干。具體地，將懸浮在等滲10％海藻糖溶液中的1、2或3級CD4對照細胞或CALLA對照細胞懸浮于300μl凍干的管形瓶中等滲的10％海藻糖溶液中，蓋上管形瓶并冷卻至4℃，然后攪拌以保證將管形瓶置于約-70℃的冷凍器中至少一小時使細胞分布均勻。冷凍完之后，立刻將管形瓶置于凍干器中約15小時。15小時結(jié)束后將凍干的管形瓶從凍干器中移出并貯藏在溫度為2-8℃的冰箱中。此對照細胞可貯藏6個月或更長。向凍干管形瓶中加入去離子水或蒸餾水至300μl體積可重建凍干細胞。為在流動血細胞計數(shù)器口進行對照檢測，將再懸浮的重建細胞染色，或作標(biāo)記成記號，然后用標(biāo)準流動血細胞計數(shù)方法分析。也可在其它類型的測定或其它適合的診斷方法中使用再懸浮細胞。
圖1、2和3(a)-(d)將正常細胞(圖1)與患者細胞(圖3)以及根據(jù)本發(fā)明方法制備的對照細胞(圖2)相比。這些數(shù)字表明，使用對照細胞，該檢測手段能檢測出可能存在于得病的患者血樣中的異常CD10+和CD19+細胞。
圖4、5和6(a)-(d)，表示該檢測手段能檢測出在AIDS患者中能見到的少量的CD4+細胞。圖4中四邊形1表示正常血樣中出現(xiàn)的CD4+細胞。圖5中，四邊形1表示AIDS患者中見到的減少的CD4+細胞數(shù)量。圖6中四邊形1表示該儀器能檢測由本發(fā)明減少的對照細胞表示的減少的CD4+。
圖4中的(b)、(c)、(d)分析數(shù)據(jù)分別如表I、表II、表III所示表I最小 最大計數(shù)百分率 平均SD HPCV1 x0 2 1562 44.60.0 0.2y7 63 23.93.7 11.62 x3 63 124 3.5 24.09.0 10.6y7 63 14.78.1 9.713 x0 2 689 19.70.0 0.2y0 6 1.0 1.84 x3 63 1126 32.226.66.4 8.26y0 6 0.8 1.6表II最小最大計數(shù)百分率平均SD HPCV1 20 255 123135.2 108.3 24.6 4.44表III最小最大計數(shù)百分率平均SD HPCV31 255 1654 47.3 95.517.1 9.66
圖5中的(a)-(d)分析數(shù)據(jù)分別如表IV-表VII所示表IV最小最大計數(shù)百分率平均SD HPCV1 x 1 1 0 0.0y 7 72 x 0 0 1 0.0y 0 03 x 13 13 3 0.0y 16 164 x 3 3 4 0.0y 16 16
表V最小最大計數(shù)百分率平均SDHPCV1 x 0.102 2.426 -245 4.9 0.192 0.140y 2.103 1023. 20.99 9.44 24.42 x 2.428 1023. 20.0 5.359 0.386 12.2y 2.103 1023. 7.146 1.546 6.113 x 0.102 2.426 1109 22.2 0.193 0.164y 0.102 2.101 0.149 0.0854 x 2.428 1023. 3643 72.9 21.07 10.48 24.9y 0.102 2.101 0.108 0.023表VI最小最大計數(shù)百分率平均 SD HPCV1 x 575.8 1023. 3553 23.5 814.058.9y 29 5742.8 1.8 3.742 x 8.367 76.72 387 2.6 20.978.34 30.5y 18 4128.1 5.51 9.23 x 13.66 15.75 00.0y 0 04 x 0.102 0.118 10.0y 0 0
表VII最小最大 計數(shù)百分率平均SDHPCV1 x 0.102 2.101-25977.3 0.197 0.140y 7.679 1023. 22.39 6.72 28.02 x 2.103 1023.76 22.7 18.73 13.96 32.2y 7.679 1023. 18.73 6.01 29.13 x 0.102 2.1010 0.0y 0.102 7.6724 x 2.103 1023.0. 0.0y 0.102 7.672圖6中的(b)-(d)分析數(shù)據(jù)如表VIII-表X所示
表VIII最小最大計數(shù)百分率 平均SDHPCV1 x 0 3 175 5.0 0.1 0.5y 8 6324.97.5 3.492 x 4 63 78 2.2 28.49 8.9 3.83y 8 6312.16.8 7.333 x 0 3 1150 33.0 0.1 0.5y 0 7 1.1 1.94 x 4 63 2090 59.7 28.27.1 7.54y 0 7 1.1 2.0表IX最小最大計數(shù)百分率平均SD HPCV1 26 255 213060.9 115.9 26.1 5.41表X最小最大計數(shù)百分率平均SD HPCV1 34 249 231 6.6 90.335.權(quán)利要求
1.一種反映患病的哺乳動物血樣中特定細胞種群的對照細胞，所述疾病在發(fā)作時，與正常血樣相比，存在于所述血樣中的細胞在類型、數(shù)量或生理化學(xué)性質(zhì)上有所變化，所述的對照細胞包含從正常血樣中獲得的正常白細胞種群，除了(a)至少一種已減少至低于正常白細胞樣品中存在的數(shù)量的特定類型的細胞，或(b)至少一種已增加至高于正常白細胞樣品中存在的數(shù)量的特定類型細胞，或(c)至少有一種不存在于正常白細胞樣品中的特定類型細胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的對照細胞，其中能將所述細胞重組成用于免疫測定的生物對照物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的對照細胞，其中所述細胞適合于替代在細胞流動細胞計數(shù)分析中作為標(biāo)準物的新鮮異常細胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的對照細胞，其中所述的細胞是從正常哺乳動物外周血細胞中得到的。
5.一種制備反映患病的哺乳動物血樣中特定細胞種群保藏的對照細胞的方法，所述疾病在發(fā)作時，與正常血樣相比，存在于所述血樣中的細胞在類型、數(shù)量或生理化學(xué)性質(zhì)上有所變化，所述的方法包括(a)去除正常血樣中的紅血細胞；(b)將余下的細胞懸浮于保藏溶液中；(c)保留步驟(b)的部分細胞；(d)(ⅰ)通過將單克降抗體結(jié)合到可剝離的底物上，從步驟(b)的非保留細胞中減少反映疾病的特定細胞類型，并且(ⅱ)步驟(d)(ⅰ)的減少的樣品與(1)步驟(c)中保留的不同量的細胞混合，得到不同程度地減少了所述特定細胞類型的樣品；或(2)根據(jù)步驟(a)和(b)處理的不同的正常血樣，得到不同程度地減少了所述特定細胞類型的樣品；或(e)將正常存在于血液中的特定類型其他細胞加到步驟(b)的細胞中，以便增加所述特定細胞的數(shù)量，使其高于反映疾病的正常數(shù)量；(f)將特定類型的其他細胞加到步驟(b)的細胞中，所述特定類型的其它細胞正常不存在于血液中但存在于患病而產(chǎn)生所述細胞的哺乳動物血液中；和(g)保藏步驟(d)(e)和(f)中制備的細胞。
6.一種制備保藏的對照細胞的方法，所述的對照細胞反映患病哺乳動物血樣中特定的細胞種群，所述疾病在發(fā)作時，與正常血樣相比，存在于所述的血樣中的細胞在類型、數(shù)量或生理化學(xué)性質(zhì)上有所變化，所述的方法包括(a)將正常血樣中的紅血細胞溶胞、并洗滌所述樣品中余下的細胞以去除溶胞碎片；(b)余下的細胞懸浮于保藏溶液中；(c)保留步驟(b)部分的細胞；(d)(ⅰ)通過單克隆抗體與可剝離的底物連接，將反映疾病的特定細胞類型從步驟(b)的非保留細胞中減少；(ⅱ)將步驟(d)(ⅰ)的減少的樣品與(1)步驟(C)中保留不同量的細胞混合，得到不同程度減少所述細胞類型的樣品；或(2)根據(jù)步驟(a)和(b)處理的不同的正常血樣，得到不同程度減少所述細胞類型的樣品；或(e)向步驟(b)的細胞加入正常存在于血液中的特定類型其他細胞，使所述特定細胞的數(shù)量增至高于反映疾病的正常數(shù)量；(f)將特定類型的其他細胞加到步驟(b)的細胞中，所述特定類型的其他細胞正常不存在于血液中但存在于患病而產(chǎn)生所述細胞的哺乳動物血中；和(g)保藏步驟(d)(e)和(f)中制備的細胞。
7.一種反映患病的哺乳動物血樣中特定細胞種群的對照細胞，所述疾病在發(fā)作時，與正常血樣相比，存在于所述血樣的細胞在類型、數(shù)量或生理化學(xué)性質(zhì)上有所變化，所述的對照細胞包含從正常血樣中獲得的正常白細胞種群，除了；(a)至少一種已減少至低于正常細胞樣品中的數(shù)量，的特定類型的細胞，或(b)至少一種已增至高于正常白細胞樣品中的數(shù)量的特定類型的細胞，或(c)至少一種不存在于正常白細胞樣品中的特定類型細胞；和(d)用等滲海藻糖溶液通過凍干保藏(a)、(b)和(c)的所述對照細胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的對照細胞，其中能夠?qū)⑺黾毎亟ㄓ米鳛槊庖邫z測的生物對照物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的對照細胞，其中所述的細胞適宜代替細胞流動細胞計數(shù)分析作為標(biāo)準物的新鮮不正常的細胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的對照細胞，其中所述細胞是從正常哺乳動物的外周血細胞得到的。
11.一種制備保藏的對照細胞的方法，所述對照細胞可反映患病哺乳動物血樣中特定細胞種群，所述疾病發(fā)作時，與正常血樣相比，存在于所述血樣中的細胞在類型、數(shù)量或生理化學(xué)性質(zhì)上有所改變，所述方法包括(a)將正常血樣中的紅血細胞溶胞，并洗滌樣品中剩余的細胞以除去溶胞碎片；(b)將剩余的細胞懸浮于等滲海藻糖溶液中；(c)保留步驟(b)的部分細胞；(d)(ⅰ)通過將單克隆抗體與剝離的底物結(jié)合，將反映疾病的特定類型細胞從步驟(b)的非保留細胞中減少；(ⅱ)將步驟(d)(ⅰ)的減少的樣品與(1)步驟(c)中保留不同量的細胞混合，得到不同程度減少所述細胞類型的樣品；或(2)根據(jù)步驟(a)和(b)處理的不同的正常血樣，得到不同程度減少所述細胞類型的樣品，或(e)向步驟(b)的細胞加入正常存在于血液中的特定類型的其他細胞，使所述特定細胞的數(shù)量增至高于反映疾病的正常數(shù)量，或(f)將特定類型的其它細胞加到步驟(b)的細胞中，所述特定類型的其他細胞正常不存在于血液中但存在于患病而產(chǎn)生所述細胞的哺乳動物血液中；和(g)通過凍干在等滲海藻糖溶液中的所述細胞而保藏步驟(d)(e)和(f)中制備的細胞。
全文摘要
本發(fā)明描述從正常的、非傳染的、非病變的血液中，通過減少或擴增一種或多種發(fā)現(xiàn)于正常血中反映特定疾病狀態(tài)的細胞類型，制備非傳染性對照細胞。將由此生產(chǎn)的對照細胞保藏并在此之后重建用于免疫檢測。
文檔編號C12Q1/64GK1116654SQ93117510
公開日1996年2月14日 申請日期1993年9月14日 優(yōu)先權(quán)日1992年9月14日
發(fā)明者約翰A·梅普爾斯, 羅伯特H·雷納, 奧拉維·西伊曼, 梅利莎J·施蒂格利茨, 斯蒂芬F·希利 申請人:庫爾特公司