一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基，其組分按每升培養(yǎng)基水溶液中所含物質(zhì)的質(zhì)量計包括：KNO3 1900mg,NH4NO31650mg，CaCl·2H2O 440mg，MgSO4·7H2O 370mg，KH2PO4 170mg，F(xiàn)eSO4·7H2O 27.8mg，Na2EDTA 37.3mg，MnSO4·4H2O 22.3mg，ZnSO4·7H2O 8.6mg，H3BO3 6.2mg，KI 0.83mg，Na2MoO4·2H2O 0.25mg，CuSO4·5H2O 0.025mg，CoCl2·6H2O 0.025mg，肌醇100mg，甘氨酸 2mg，鹽酸吡哆醇0.5mg，鹽酸硫胺素0.5mg，煙酸0.5mg，瓊脂 6.5g，蔗糖30g，布洛芬 5-20mg，乙酰水楊酸1-5mg，谷氨酰胺30-70mg，S-亞硝基-N-乙酰青霉胺 15-25mg。該培養(yǎng)基對虎杖的生長發(fā)育具有較好的促進(jìn)效果，能顯著提高虎杖中白藜蘆醇的合成速度及含量。
【專利說明】一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來的大量研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可降低血液粘稠度，抑制血小板凝結(jié)，并能促進(jìn) 血管舒張，保持血液暢通，預(yù)防癌癥的發(fā)生及發(fā)展，具有抗動脈粥樣硬化和防治冠心病，缺 血性心臟病，高血脂的作用，還具抑制腫瘤的作用和雌激素樣作用，可用于治療乳腺癌等疾 病，還證實(shí)白藜蘆醇具有抗氧化及抗衰老的功效，因此成為非常有前途的保健型藥物。
[0003] 白藜蘆醇在植物中的含量一般都很低，虎杖是白藜蘆醇含量最高的植物，多年生 根中白藜蘆醇含量最高可達(dá)lmg/g，葉中含量也可達(dá)到0. 7647 mg/g，因此成為工廠化提取 白藜蘆醇的主要植物。然而，虎杖是一種野生藥用植物，生長速度慢，靠傳統(tǒng)的采挖遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿 足不了人們對白藜蘆醇的需求。
[0004] 利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)在室內(nèi)大量繁殖虎杖是一個很有發(fā)展前景的方法。植物組 織培養(yǎng)是指在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體，培養(yǎng)在人工配制的 培養(yǎng)基上，給予適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，使細(xì)胞增殖或使其長成完整的植株。
[0005] 提供一種適合虎杖生長的培養(yǎng)基，以提高白藜蘆醇含量正是本發(fā)明的目的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一是提供一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是： 構(gòu)成該培養(yǎng)基的組分按每升培養(yǎng)基水溶液中所含物質(zhì)的質(zhì)量計包括： KNO3 1900mg, NH4NO3 1650 mg, CaCl · 2H20 440 mg, MgSO4 · 7H20 370 mg, KH2PO4 170 mg, FeSO4 *7H20 27.8 mg, Na2EDTA 37.3 mg, MnSO4 *4H20 22.3 mg, ZnSO4 *7H20 8.6 mg, H3BO3 6. 2 mg, KI 0· 83 mg, Na2MoO4 · 2H20 0· 25 mg, CuSO4 · 5H20 0· 025 mg, CoCl2 · 6H20 0.025 mg,肌醇100 mg,甘氨酸2 mg,鹽酸批卩多醇0.5 mg,鹽酸硫胺素0.5 mg,煙酸0.5 mg,瓊脂 6. 5g,鹿糖30g,布洛芬 5-20 mg,乙酰水楊酸1-5 mg,谷氨酰胺30-70 mg, S-亞硝基-N-乙酰青霉胺15-25 mg。
[0008] 本發(fā)明的目的之二是提供一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基的制備方法。
[0009] 本發(fā)明采用包含以下步驟的制備方法來達(dá)到本發(fā)明的目的： (1) 大量元素母液的配制 稱取 KNO3 19000mg，NH4NO3 16500mg，MgSO4WH2O 3700mg，KH2PO4 1700mg，CaCl2CH2O 4400mg，分別用蒸餾水充分溶解后，按先后次序倒入1000ml的容量瓶中，充分混合，最后定 容到 IOOOml ; (2) 微量元素母液的配制 稱取 MnS04.4H20 2230mg，ZnS04.7H20 860mg，H3BO3 620mg，KI 83mg，Na2MoO4CH2O 25mg，CuS04*5H20 2. 5mg，C〇C12*2H20 2. 5mg，分別用蒸饋水充分溶解后，按先后次序倒入 IOOOml的容量瓶中，充分混合，最后定容到IOOOml ; (3) 鐵鹽母液的配制 稱取Na2*EDTA 3730mg，F(xiàn)eSO4MH2O 2780mg，分別用蒸餾水充分溶解后，按先后次序倒 入500ml的容量瓶中，充分混合，最后定容到500ml ; (4) 有機(jī)化合物母液的配制 稱取甘氨酸IOOmg,鹽酸批卩多醇25mg，鹽酸硫胺素 25mg，煙酸25mg，肌醇5000mg，分別 用蒸饋水充分溶解后，按先后次序倒入500ml的容量瓶中，充分混合，最后定容到500ml ; (5) 植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制 將布洛芬、乙酰水楊酸和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺用蒸餾水分別配制成濃度均為 1的布洛芬母液、乙酰水楊酸母液和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺母液；將谷氨酰胺用 蒸饋水配制成濃度為IOmg^r 1的谷氨酰胺母液； (6) 培養(yǎng)基的配制 (a)將6. 5g瓊脂和30g蔗糖加入到少于IOOOml的蒸餾水中，加熱使瓊脂和蔗糖完全 融化；(b)然后再加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml、鐵鹽母液10ml、有機(jī)化合物 母液IOml ;(c)高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至60-70°C時，加入布洛芬母液5-20ml、乙酰水楊 酸母液l-5ml、谷氨酰胺母液3-7ml、S-亞硝基-N-乙酰青霉胺15-25ml，用蒸餾水定容至 1000ml，調(diào)節(jié)pH值為5. 8?6. 4,冷卻凝固后即得凝膠狀培養(yǎng)基。
[0010] 本發(fā)明組方中提供了虎杖生長所需的氮、磷、鉀等大量元素，銅、鐵、錳等微量元 素，以及肌醇、甘氨酸等有機(jī)化合物，為虎杖的生長提供豐富的營養(yǎng)物質(zhì)。尤其是植物生長 調(diào)節(jié)劑布洛芬、乙酰水楊酸、谷氨酰胺和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺的引入，在改善虎杖的生 長代謝、縮短生長周期以及提高白藜蘆醇合成速度等方面具有積極的意義；其中，布洛芬（ Ibuprofen)和乙酰水楊酸（Aspirin)都是人工合成的解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥，具有較好的解熱、 鎮(zhèn)痛作用，可用于感冒、發(fā)燒等。這兩種醫(yī)藥的結(jié)構(gòu)和某些生長素類植物生長調(diào)節(jié)劑有共 同之處，是一種植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，不僅參與植物開花、種子發(fā)育、膜透性、吸收等生理活 性，還與植物抗病性有關(guān)。谷氨酰胺是合成生物體內(nèi)極其重要的抗氧化劑-還原型谷胱甘 肽的前體物質(zhì)，是構(gòu)成蛋白質(zhì)中氨基酸和合成含氨生物物質(zhì)的氮源，與組織生長和修補(bǔ)有 密切的關(guān)系，在生命活動中起重要作用；S-亞硝基-N-乙酰青霉胺是一氧化氮的供體，一氧 化氮是一種廣泛分布于生物體的氣體活性分子，具有多種生理功能，一氧化氮是生物體內(nèi) 分布極為廣泛的信號分子之一，除哺乳動物外，一氧化氮在原生動物、細(xì)菌、酵母和植物中 也作為一種普遍存在的信號分子而起作用。
[0011] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1)營養(yǎng)豐富，可使虎杖生長更旺盛，（2)提高了虎杖中白 藜蘆醇的合成速度，使虎杖中白藜蘆醇含量明顯增加，達(dá)到野生虎杖白藜蘆醇含量，并且比 野生虎杖的生長周期縮短10倍左右。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明技術(shù)方案，這些實(shí)施例僅是用來詳細(xì)展現(xiàn)本發(fā) 明的技術(shù)構(gòu)思及其可實(shí)施性，并不是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，利用本發(fā)明技術(shù)構(gòu)思做出 的等效替換和變通仍然在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0013] 實(shí)施例1 提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基，其組分按每升培養(yǎng)基水溶液中所含物質(zhì)的質(zhì)量計 為： KNO3 1900mg, NH4NO3 1650 mg, CaCl · 2H20 440 mg, MgSO4 · 7H20 370 mg, KH2PO4 170 mg, FeSO4 *7H20 27.8 mg, Na2EDTA 37.3 mg, MnSO4 *4H20 22.3 mg, ZnSO4 *7H20 8.6 mg, H3BO3 6. 2 mg, KI 0· 83 mg, Na2MoO4 · 2H20 0· 25 mg, CuSO4 · 5H20 0· 025 mg, CoCl2 · 6H20 0.025 mg,肌醇100 mg,甘氨酸 2 mg,鹽酸批咳醇0. 5 mg,鹽酸硫胺素0. 5 mg,煙酸 0.5 mg,瓊脂6. 5g,鹿糖30g,布洛芬5 mg,乙酰水楊酸I mg,谷氨酰胺30 mg, S-亞硝 基-N-乙酰青霉胺15 mg。
[0014] 實(shí)施例2 提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基，其組分按每升培養(yǎng)基水溶液中所含物質(zhì)的質(zhì)量計 為： KNO3 1900mg, NH4NO3 1650 mg, CaCl · 2H20 440 mg, MgSO4 · 7H20 370 mg, KH2PO4 170 mg, FeSO4 *7H20 27.8 mg, Na2EDTA 37.3 mg, MnSO4 *4H20 22.3 mg, ZnSO4 *7H20 8.6 mg, H3BO3 6. 2 mg, KI 0· 83 mg, Na2MoO4 · 2H20 0· 25 mg, CuSO4 · 5H20 0· 025 mg, CoCl2 · 6H20 0.025 mg,肌醇100 mg,甘氨酸 2 mg,鹽酸批咳醇0. 5 mg,鹽酸硫胺素0. 5 mg,煙酸 0.5 mg,瓊脂6. 5g,鹿糖30g,布洛芬IOmg,乙酰水楊酸2 mg,谷氨酰胺50 mg, S-亞硝 基-N-乙酰青霉胺20 mg。
[0015] 實(shí)施例3 提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基，其組分按每升培養(yǎng)基水溶液中所含物質(zhì)的質(zhì)量計 為： KNO3 1900mg, NH4NO3 1650 mg, CaCl · 2H20 440 mg, MgSO4 · 7H20 370 mg, KH2PO4 170 mg, FeSO4 *7H20 27.8 mg, Na2EDTA 37.3 mg, MnSO4 *4H20 22.3 mg, ZnSO4 *7H20 8.6 mg, H3BO3 6. 2 mg, KI 0· 83 mg, Na2MoO4 · 2H20 0· 25 mg, CuSO4 · 5H20 0· 025 mg, CoCl2 · 6H20 0.025 mg,肌醇100 mg,甘氨酸2 mg,鹽酸批卩多醇0.5 mg,鹽酸硫胺素0.5 mg,煙酸0.5 mg,瓊脂 6. 5g,鹿糖30g,布洛芬 20 mg,乙酰水楊酸5 mg,谷氨酰胺70 mg, S-亞硝 基-N-乙酰青霉胺25 mg。
[0016] 實(shí)施例4 提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下： (1) 大量元素母液的配制 稱取 KNO3 19000mg，NH4NO3 16500mg，MgSO4WH2O 3700mg，KH2PO4 1700mg，CaCl2CH2O 4400mg，分別用蒸餾水充分溶解后，按先后次序倒入IOOOml的容量瓶中，充分混合，最后定 容到 IOOOml ; (2) 微量元素母液的配制 稱取 MnS04.4H20 2230mg，ZnS04.7H20 860mg，H3BO3 620mg，KI 83mg，Na2MoO4CH2O 25mg，CuS04*5H20 2. 5mg，C〇C12*2H20 2. 5mg，分別用蒸饋水充分溶解后，按先后次序倒入 IOOOml的容量瓶中，充分混合，最后定容到IOOOml ; (3) 鐵鹽母液的配制 稱取Na2*EDTA 3730mg，F(xiàn)eSO4MH2O 2780mg，分別用蒸餾水充分溶解后，按先后次序倒 入500ml的容量瓶中，充分混合，最后定容到500ml ; (4) 有機(jī)化合物母液的配制 稱取甘氨酸IOOmg,鹽酸批卩多醇25mg，鹽酸硫胺素25mg，煙酸25mg，肌醇5000mg，分別 用蒸饋水充分溶解后，按先后次序倒入500ml的容量瓶中，充分混合，最后定容到500ml ; (5) 植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制 將布洛芬、乙酰水楊酸和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺用蒸餾水分別配制成濃度均為 1的布洛芬母液、乙酰水楊酸母液和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺母液；將谷氨酰胺用 蒸饋水配制成濃度為IOmg^r 1的谷氨酰胺母液； (6) 培養(yǎng)基的配制 (а) 將6. 5g瓊脂和30g蔗糖加入到少于IOOOml的蒸餾水中，加熱使瓊脂和蔗糖完全融 化；(b)然后再加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml、鐵鹽母液10ml、有機(jī)化合物母 液IOml ; (c)高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至60-70°C時，加入布洛芬母液10ml、乙酰水楊酸母 液2ml、谷氨酰胺母液5ml、S-亞硝基-N-乙酰青霉胺20ml，用蒸餾水定容至1000ml，調(diào)節(jié) PH值為6,冷卻凝固后即得凝膠狀培養(yǎng)基。
[0017] 實(shí)施例5 提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下： (1) 大量元素母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（1)相同； (2) 微量元素母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（2)相同； (3) 鐵鹽母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（3)相同； (4) 有機(jī)化合物母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（4)相同； (5) 植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（5)相同； (б) 培養(yǎng)基的配制 (а) 將6. 5g瓊脂和30g蔗糖加入到少于IOOOml的蒸餾水中，加熱使瓊脂和蔗糖完全融 化；(b)然后再加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml、鐵鹽母液10ml、有機(jī)化合物母 液IOml ;(c)高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至60-70°C時，加入布洛芬母液5ml、乙酰水楊酸母液 lml、谷氨酰胺母液3ml、S-亞硝基-N-乙酰青霉胺15ml，用蒸餾水定容至1000ml，調(diào)節(jié)pH 值為5. 8,冷卻凝固后即得凝膠狀培養(yǎng)基。
[0018] 實(shí)施例6 提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下： (1) 大量元素母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（1)相同； (2) 微量元素母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（2)相同； (3) 鐵鹽母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（3)相同； (4) 有機(jī)化合物母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（4)相同； (5) 植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制，該步驟與實(shí)施例4的步驟（5)相同； (б) 培養(yǎng)基的配制 (a)將6. 5g瓊脂和30g蔗糖加入到少于IOOOml的蒸餾水中，加熱使瓊脂和蔗糖完全融 化瓊脂直至沸騰；(b)然后再加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml、鐵鹽母液10ml、 有機(jī)化合物母液IOml ; (c)高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至60-70°C時，加入布洛芬母液20ml、 乙酰水楊酸母液5ml、谷氨酰胺母液7ml、S-亞硝基-N-乙酰青霉胺25ml，用蒸饋水定容至 1000ml，調(diào)節(jié)pH值為6. 4,冷卻凝固后即得凝膠狀培養(yǎng)基。
[0019] 下面通過對比試驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明對提高虎杖中白藜蘆醇含量有積極效果。
[0020] 一、制備培養(yǎng)基 1.對照培養(yǎng)基的制備：即制備不含布洛芬、乙酰水楊酸、谷氨酰胺、S-亞硝基-N-乙酰 青霉胺的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基大致按照實(shí)施例4的方法制備，其制備步驟包括（1)- (5)五個 步驟，其中步驟（1)-(4)與實(shí)施例4完全相同，步驟（5)也由（a)、（b)和（c)三個小步驟 構(gòu)成，其中的（a)和（b)與實(shí)施例4的步驟（6)中的（a)和（b)完全相同，不同之處在于步 驟（c)，步驟（c)按下述操作：高壓滅菌鍋滅菌后，用蒸餾水定容至1000ml，調(diào)節(jié)pH值為6， 裝入培養(yǎng)瓶冷卻凝固，記為1號培養(yǎng)基。
[0021] 2.含布洛芬和乙酰水楊酸培養(yǎng)基的制備：制備含布洛芬和乙酰水楊酸的培養(yǎng)基。 該培養(yǎng)基大致按照實(shí)施例4的方法制備，也包括步驟（1)- (6)，其中步驟（1)- (4)與實(shí)施 例4的步驟（1) - (4)完全相同，步驟（5)按照實(shí)施例4的步驟（5)所述的方法只配制布洛 芬和乙酰水楊酸的母液，步驟（6)中的（a)和（b)與實(shí)施例4的步驟（6)中的（a)和（b)完 全相同，不同之處在于步驟（c)，步驟（c)按下述操作：高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至60-70°C 時，加入布洛芬母液IOml和乙酰水楊酸母液2ml，用蒸饋水定容至1000ml，調(diào)節(jié)pH值為6， 裝入培養(yǎng)瓶冷卻凝固，記為2號培養(yǎng)基。
[0022] 3.含乙酰水楊酸、谷氨酰胺和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺培養(yǎng)基的制備：制備含 乙酰水楊酸、谷氨酰胺和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基大致按照實(shí)施例4 的方法制備，也包括步驟（1)- (6)，其中步驟（1)- (4)與實(shí)施例4的步驟（1)- (4)完全 相同，步驟（5)按照實(shí)施例4的步驟（5)所述的方法只配制乙酰水楊酸、谷氨酰胺和S-亞 硝基-N-乙酰青霉胺的母液，步驟（6)中的（a)和（b)與實(shí)施例4的步驟（6)中的（a)和 (b)完全相同，不同之處在于步驟（c)，步驟（c)按下述操作：高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至 60-70°C時，加入乙酰水楊酸母液2ml、谷氨酰胺母液5ml和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺20ml， 用蒸餾水定容至1000ml，調(diào)節(jié)pH值為6,裝入培養(yǎng)瓶冷卻凝固，記為3號培養(yǎng)基。。
[0023] 4.含布洛芬、乙酰水楊酸、谷氨酰胺和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺培養(yǎng)基的制備： 即制備含布洛芬、乙酰水楊酸、谷氨酰胺和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基 完全按照實(shí)施例4的方法制備，只是培養(yǎng)基溶液裝入培養(yǎng)瓶中冷卻凝固，記為4號培養(yǎng)基。
[0024] 二、虎杖組培苗的接種 取約0. 5厘米長的帶芽的虎杖無菌苗莖段，將其形態(tài)學(xué)下端插入到上述四種培養(yǎng)基 中，每瓶中插入4段，并均勻分布，插完后用封口膜將培養(yǎng)瓶封口。
[0025] 三、培養(yǎng)及觀察 將已接種無菌苗的培養(yǎng)瓶置于恒溫培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室中培養(yǎng)約1個月。培養(yǎng)條件為溫 度25°C左右，光照為20001X，每天光照時間為14小時。四周后，從每種培養(yǎng)基中隨機(jī)抽取 3株虎杖組培苗，觀察虎杖組培苗的生長狀況，用直尺測量其高度，并對其葉片進(jìn)行記數(shù)，然 后稱量鮮重，統(tǒng)計好數(shù)據(jù)。
[0026] 培養(yǎng)1個月后，所測得的虎杖組培苗的芽數(shù)、葉數(shù)、株高和鮮重見表1。
[0027] 表1虎杖組培苗的芽數(shù)、葉數(shù)、株高和鮮重表

【權(quán)利要求】
1. 一種提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基，其特征在于構(gòu)成該培養(yǎng)基的組分按每升培 養(yǎng)基水溶液中所含物質(zhì)的質(zhì)量計包括： KNO3 1900mg, NH4NO3 1650 mg, CaCl ? 2H20 440 mg, MgSO4 ? 7H20 370 mg, KH2PO4 170 mg, FeSO4 *7H20 27.8 mg, Na2EDTA 37.3 mg, MnSO4 *4H20 22.3 mg, ZnSO4 *7H20 8.6 mg, H3BO3 6. 2 mg, KI 0? 83 mg, Na2MoO4 ? 2H20 0? 25 mg, CuSO4 ? 5H20 0? 025 mg, CoCl2 ? 6H20 0.025 mg,肌醇100 mg,甘氨酸2 mg,鹽酸批卩多醇0.5 mg,鹽酸硫胺素0.5 mg,煙酸0.5 mg,瓊脂 6. 5g,鹿糖30g,布洛芬 5-20 mg,乙酰水楊酸1-5 mg,谷氨酰胺30-70 mg, S-亞硝基-N-乙酰青霉胺15-25 mg。
2. 權(quán)利要求1所述提高虎杖中白藜蘆醇含量的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以 下步驟： (1) 大量元素母液的配制 稱取 KNO3 19000mg，NH4NO3 16500mg，MgSO4WH2O 3700mg，KH2PO4 1700mg，CaCl2CH2O 4400mg，分別用蒸餾水充分溶解后，按先后次序倒入1000ml的容量瓶中，充分混合，最后定 容到 IOOOml ; (2) 微量元素母液的配制 稱取 MnS04.4H20 2230mg，ZnS04.7H20 860mg，H3BO3 620mg，KI 83mg，Na2MoO4CH2O 25mg，CuS04*5H20 2. 5mg，C〇C12*2H20 2. 5mg，分別用蒸饋水充分溶解后，按先后次序倒入 IOOOml的容量瓶中，充分混合，最后定容到IOOOml ; (3) 鐵鹽母液的配制 稱取Na2*EDTA 3730mg，F(xiàn)eSO4MH2O 2780mg，分別用蒸餾水充分溶解后，按先后次序倒 入500ml的容量瓶中，充分混合，最后定容到500ml ; (4) 有機(jī)化合物母液的配制 稱取甘氨酸IOOmg,鹽酸批卩多醇25mg，鹽酸硫胺素25mg，煙酸25mg，肌醇5000mg，分別 用蒸饋水充分溶解后，按先后次序倒入500ml的容量瓶中，充分混合，最后定容到500ml ; (5) 植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制 將布洛芬、乙酰水楊酸和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺用蒸餾水分別配制成濃度均為 1的布洛芬母液、乙酰水楊酸母液和S-亞硝基-N-乙酰青霉胺母液；將谷氨酰胺用 蒸饋水配制成濃度為IOmg^r 1的谷氨酰胺母液； (6) 培養(yǎng)基的配制 (a)將6. 5g瓊脂和30g蔗糖加入到少于IOOOml的蒸餾水中，加熱使瓊脂和蔗糖完全 融化；(b)然后再加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml、鐵鹽母液10ml、有機(jī)化合物 母液IOml ; (c)高壓滅菌鍋滅菌后，冷卻至60-70°C時，加入布洛芬母液5-20ml、乙酰水楊 酸母液l-5ml、谷氨酰胺母液3-7ml、S-亞硝基-N-乙酰青霉胺15-25ml，用蒸餾水定容至 1000ml，調(diào)節(jié)pH值為5. 8?6. 4,冷卻凝固后即得凝膠狀培養(yǎng)基。
【文檔編號】C12P7/22GK104313061SQ201410450833
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】夏海武, 曹慧, 萬永霞, 郭祖寶 申請人:濰坊學(xué)院