一種利用oprk1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為的方法及試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種利用OPRK1基因SNP檢測綿羊規(guī)癖行為的方法及試劑。以PCR-SSCP技術(shù)為手段，發(fā)現(xiàn)了OPRK1基因在綿羊中的單核苷酸多態(tài)性T118A或G90A，并且該基因多態(tài)性和綿羊規(guī)癖行為性狀相關(guān)，通過該檢測，不需要長時(shí)間觀測動物，不需要再進(jìn)行必要分輔助治療，即可盡早、盡快發(fā)現(xiàn)綿羊是否患有行為規(guī)癖，簡單易行，降低了生產(chǎn)損失，提高了動物生產(chǎn)能力。
【專利說明】-種利用0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為 的方法及試劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種利用0PRK1基因 SNP檢測綿羊規(guī)癖行為 的方法及試劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 有研究把豬長時(shí)間靜止站立確定為是一種動物"規(guī)癖行為"。圈養(yǎng)條件下，動物長 時(shí)間臥息或者站立觀望可以認(rèn)為是動物的一種"規(guī)癖"或者"呆板"行為。有學(xué)者認(rèn)為，行 為規(guī)癖的出現(xiàn)是由于對生產(chǎn)性狀的過度選育而造成的，也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)規(guī)癖是由于動物 在圈養(yǎng)條件下，其生存環(huán)境單調(diào)狹小造成的。Grandin(1998)在70年代沒有發(fā)現(xiàn)牛卷舌和 其它異常行為，而在1996年發(fā)現(xiàn)荷斯坦牛品種表現(xiàn)為卷舌規(guī)癖，這可能是長期定向選擇的 結(jié)果，對高產(chǎn)母豬（產(chǎn)仔數(shù)高）的研究也發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)較多的行為規(guī)癖。對動物園動物研究 表明，動物園中馴養(yǎng)的靈長類動物因飼養(yǎng)環(huán)境單調(diào)狹小帶來的緊張對其健康不利，導(dǎo)致動 物出現(xiàn)無目的踱步、咬柵欄、搖擺身體、空嚼等呆板行為。因此，在綿羊馴化飼養(yǎng)過程中，由 于選擇選配或者飼養(yǎng)環(huán)境單調(diào)狹小，可能造成其規(guī)癖行為顯著升高，比如長時(shí)間呆立觀望 行為。
[0003] 目前的養(yǎng)殖現(xiàn)狀分析表明，長期圈養(yǎng)對綿羊行為帶來一系列影響，比如應(yīng)激行為 的產(chǎn)生，特別是隨著應(yīng)激時(shí)間的積累，這種應(yīng)激可轉(zhuǎn)變成行為規(guī)癖，即規(guī)癖行為。規(guī)癖行為 對綿羊生產(chǎn)性能造成一定的影響，主要體現(xiàn)在長時(shí)間來回踱步、呆立或靜立、啃咬毛發(fā)、異 物等現(xiàn)象。嚴(yán)重者厭食少食、日漸消瘦。公羊性能力低下，無法完成交配，母羊則不表現(xiàn)發(fā) 情或者假發(fā)情，無法配種懷孕，對生產(chǎn)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。國內(nèi)對規(guī)癖行為涉獵很少，特 別是利用分子生物學(xué)的方法檢測規(guī)癖行為，現(xiàn)在還沒有發(fā)現(xiàn)。
[0004] 20世紀(jì)70年代，發(fā)現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)能引起機(jī)體分泌多種內(nèi)源性阿片肽，包括內(nèi)啡 肽、腦啡肽、強(qiáng)啡肽。目前發(fā)現(xiàn)并克隆3種阿片受體，分別為Kappa受體、Mu受體和Delta受 體，Kappa阿片受體又稱作0PRK1 (Kappa Opoioid Receptor 1)基因，該基因?qū)儆贕蛋白偶 聯(lián)受體家族成員，有7個(gè)疏水性的跨膜段，3個(gè)細(xì)胞內(nèi)環(huán)和3個(gè)細(xì)胞外環(huán)，在氨基端存在數(shù)個(gè) 糖苷化位點(diǎn)，胞內(nèi)環(huán)區(qū)及羧基端有多個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)，第1和第2胞外環(huán)區(qū)各有一個(gè)可 形成二硫鍵的Cys。研究表明0PRK1阿片受體主要分布在與痛覺、情緒、行為等有關(guān)的中樞 神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)域，對影響動物的神經(jīng)反應(yīng)和行為表現(xiàn)有重要作用。
[0005] 李劍虹等曾利用SNP方法對大白、長白和杜洛克豬的Kappa阿片（0PRK1)受體進(jìn) 行分析，結(jié)論認(rèn)為，Kappa阿片受體基因 SNP對母豬靜止站立行為性狀存在一定影響。有研 究報(bào)道Kappa阿片受體基因敲除的小鼠對激動劑的鎮(zhèn)痛作用消失，運(yùn)動減少和煩躁不安的 作用也大大降低。Kappa阿片受體也參與腦內(nèi)系統(tǒng)神經(jīng)回路的活動，系統(tǒng)神經(jīng)回路上的神 經(jīng)遞質(zhì)（包括多巴胺和阿片肽）通過調(diào)節(jié)特定的靶神經(jīng)元群的活動，從而作為一系列行為 如學(xué)習(xí)、記憶、睡眠、攝食、飲水、性行為、攻擊等行為和情緒變化的物質(zhì)基礎(chǔ)。同樣在小鼠上 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了 Kappa阿片受體基因的多態(tài)性。
[0006] 動物行為是一個(gè)復(fù)雜的生物現(xiàn)象，其行為性狀是長期的自然選擇和人工選擇的產(chǎn) 物，本發(fā)明選擇0PRK1作為影響綿羊行為性狀的候選基因，采用SNP方法分析該基因部分外 顯子序列單核苷酸位點(diǎn)突變和行為性狀的關(guān)系，結(jié)果表明，通過0PRK1基因引物對檢測到 基因多態(tài)性，且不同基因型對綿羊的修飾、臥息、觀望行為產(chǎn)生顯著影響，因此，初步認(rèn)為本 研究結(jié)果與動物行為規(guī)癖有相關(guān)，運(yùn)用該位點(diǎn)基因多態(tài)性，結(jié)合行為分析，可以對綿羊的行 為規(guī)癖進(jìn)行盡早盡快識別。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明一方面提供一種利用0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為的 方法，其特征在于，通過提取受試綿羊基因組DNA，測定0PRK1基因 T118A和G90A的單核苷 酸多態(tài)性，確定綿羊是否患有行為規(guī)癖。
[0008] 本發(fā)明另一方面提供一種確定綿羊是否患有行為規(guī)癖的0PRK1基因單核苷酸多 態(tài)性位點(diǎn)，其特征在于，所述單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)分別位于如SEQ ID N0 :1-2,以及SEQ ID NO :3-4的寡核苷酸引物對擴(kuò)增片段的T118A和G90A。
[0009] 本發(fā)明另一方面提供一種利用0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為 的寡核苷酸引物對，其特征在于，所述0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性為T118A和G90A。
[0010] 優(yōu)選地，所述引物對序列如下所示：

【權(quán)利要求】
1. 一種利用0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為的方法，其特征在于，通 過提取受試綿羊基因組DNA，測定0PRK1基因 T118A和G90A的單核苷酸多態(tài)性，確定綿羊是 否患有行為規(guī)癖。
2. -種確定綿羊是否患有行為規(guī)癖的0PRK1基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，其特征在于， 所述單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)分別位于如SEQ ID NO: 1-2,以及SEQ ID NO :3-4的寡核苷酸引 物對擴(kuò)增片段的T118A和G90A。
3. -種利用0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為的寡核苷酸引物對，其特 征在于，所述0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性為T118A和G90A。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的寡核苷酸引物對，其特征在于，所述寡核苷酸引物對的序列分別 如 SEQ ID NO :1-2,以及 SEQ ID NO :3-4 所示。
5. -種利用0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性檢測綿羊規(guī)癖行為的試劑盒，其特征在于， 包含以下試劑：Taq酶，dNTPs，10Xbuffer (含Mg2+)，以及寡核苷酸引物對。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的試劑盒，其特征在于，所述0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性為T118A 和 G90A。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6的試劑盒，其特征在于，所述寡核苷酸引物對的序列分別如SEQ ID NO : 1-2,以及 SEQ ID NO :3-4 所示。
8. -種檢測0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性的引物對在制備用于檢測綿羊規(guī)癖行為的 試劑盒的用途，其特征在于，所述引物對序列分別如SEQ ID N0:l-2,以及SEQ ID N0:3-4 所示，所述0PRK1基因的單核苷酸多態(tài)性為所述引物對擴(kuò)增片段的T118A和G90A。
【文檔編號】C12Q1/68GK104120175SQ201410245163
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年6月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月5日
【發(fā)明者】呂慎金 申請人:臨沂大學(xué)