專利名稱：檢測(cè)CDH23基因c.403C>T突變的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及用于檢測(cè)CDH23基因突變的試劑盒，本發(fā)明還涉及CDH23突變基因及其在診斷和/或治療遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
耳聾是人口與健康領(lǐng)域中常見、高發(fā)的致殘性疾病，是全球關(guān)注的重大公共衛(wèi)生問題。據(jù)WH02005年估計(jì)全球聽力殘疾人口達(dá)2. 78億，占世界總?cè)丝诘?. 6%，我國(guó)因聾致殘者高達(dá)2780萬，占我國(guó)殘疾人總數(shù)的33. 52%。聾病不但影響個(gè)人及家庭，而且給全社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。耳聾是由遺傳或/和環(huán)境因素引起的聽覺傳導(dǎo)通路障礙所致的常見聽覺疾病，目前研究表明，約60%的是遺傳因素造成的。⑶H23基因與UsherlD綜合征及DFNB12表型相關(guān)，在不同地區(qū)的遺傳性耳聾和/ 或Usher ID綜合征人群中突變頻率和突變熱點(diǎn)具有差異性。⑶H23基因DNA序列全長(zhǎng)約419，014bp，包含70個(gè)外顯子，定位于常染色體10q21_q22。該基因的編碼區(qū)序列如SEQ IDNO. I所示，該基因編碼的蛋白質(zhì)cadherin23鈣黏蛋白(如SEQ ID NO. 2所示)含有3354個(gè)氨基酸，擁有27個(gè)胞外重復(fù)區(qū)域，I個(gè)跨膜區(qū)和I個(gè)胞內(nèi)區(qū)域，是耳蝸毛細(xì)胞的靜纖毛間的連接蛋白。⑶H23基因產(chǎn)物主要表達(dá)在纖毛頂端連接(tip link)、動(dòng)纖毛，在聽覺傳導(dǎo)纖毛運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，介導(dǎo)纖毛間機(jī)械能向電能的傳遞。同時(shí)，該基因?qū)τ诰S持毛細(xì)胞在長(zhǎng)期對(duì)抗聲壓強(qiáng)度中的穩(wěn)定性不可或缺，該基因缺失表達(dá)后，sputnik斑馬魚模型中，表現(xiàn)為動(dòng)物耳蝸的形態(tài)學(xué)異常，毛細(xì)胞束斷裂且殘存的發(fā)生方向異常而在基因敲除小鼠waltzer模型中，也表現(xiàn)為聽泡毛細(xì)胞發(fā)育障礙。而在錯(cuò)義突變的salsa小鼠模型中，則表現(xiàn)為耳蝸毛細(xì)胞纖毛的頂端連接(tip link)非常脆弱，在承受聲壓時(shí)更易斷裂而不易修復(fù)，從而導(dǎo)致毛細(xì)胞崩解。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)了該基因的150余種突變，但少見我國(guó)耳聾患者該基因的突變報(bào)道。申請(qǐng)人所在課題組針對(duì)108名中國(guó)遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征患者開展了該基因的篩查，并發(fā)現(xiàn)⑶H23基因的c. 403C>T(p. Q135X)新突變，該突變位點(diǎn)位于基因產(chǎn)物鈣粘素蛋白23的胞外功能域，其27個(gè)重復(fù)序列的第一個(gè)和第二個(gè)重復(fù)區(qū)域之間，將導(dǎo)致其后26個(gè)胞外重復(fù)序列不能表達(dá)，對(duì)蛋白質(zhì)功能影響重大。同時(shí)該段序列在多物種間保守性很高，提示該序列功能的重要性，如果發(fā)生截?cái)嗤蛔儯瑒t產(chǎn)生蛋白質(zhì)的很大影響。同時(shí)，經(jīng)過眼科學(xué)隨診檢查，發(fā)現(xiàn)攜帶該突變的患者伴有嚴(yán)重的視網(wǎng)膜色素變性，符合Usher ID的臨床診斷。這樣，從遺傳學(xué)和臨床診斷角度，均證實(shí)該突變可導(dǎo)致Usher ID遺傳性耳聾綜合征。申請(qǐng)人課題組進(jìn)而研發(fā)了檢測(cè)該基因C.4030T突變的試劑盒。該成果有助于快速、高效地在更大范圍的耳聾人群中進(jìn)行突變位點(diǎn)的檢測(cè)，進(jìn)而對(duì)耳聾患者病因?qū)W的深入研究具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供用于檢測(cè)CDH23基因c. 403C>T突變的試劑盒，其技術(shù)方案為一種用于檢測(cè)與遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征相關(guān)的位于⑶H23基因的c. 4030T突變的試劑盒，所述試劑盒包括從待測(cè)樣品中提取DNA的試劑；用于擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑；對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序的試劑；其中，所述擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑包括PCR引物，所述PCR弓丨物擴(kuò)增的目標(biāo)片段包含⑶H23基因403位堿基。具體地，上述的PCR引物為選自CDH23-6F-1 (SEQ ID NO. 3) :5' -TGGGGTCACAGGATTTCT-3'，CDffiS-GR-I(SEQIDNOj)A' -GCTCTCCCCACCTGACTCT-3'；CDH23-6F-2 (SEQ ID NO. 5) :5' -AGGGTGGAAGAGGCCAGAGT-3'，CDH23-6R-2 (SEQ ID NO. 6) :5' -TTCGCCAACCTGCTCAGAGT-3'；CDH23-6F-3 (SEQ ID NO. 7) :5' -CCGCCTTTCTCTTGCCAGGT-3'，CDH23-6R-3 (SEQ ID NO. 8) :5' -GAAAGCCCCTTCCTAGAACTGCAT-3'；CDH23-6F-4 (SEQ ID NO. 9) :5' -CCCCCCTCCCTCTCTCACT-3'，CDH23-6R-4 (SEQ ID NO. 10) :5' -AGCAGCAGGTCTCTGATACCC-3'；CDffiS-GF-S(SEQIDNCXll)=S' -TTCACCGTGGAGTTCTCTGT-3'，CDH23-6R-5 (SEQ ID NO. 12) :5' -AACCCCAGTGGCTCCTACCT-3';中的一對(duì)。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述試劑盒用于檢測(cè)位于⑶H23基因的c. 4030T雜合突變的方法，包括以下步驟I)采集待測(cè)個(gè)體的血液、體液或組織樣本，提取DNA ；2)以該DNA為模板，以PCR引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到PCR反應(yīng)產(chǎn)物；其中，所述PCR引物擴(kuò)增的目標(biāo)片段包含⑶H23基因第403位堿基；3)將得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與CDH23正?；虻男蛄羞M(jìn)行比較，確定是否存在⑶H23基因的c. 4030T雜合突變位點(diǎn)。進(jìn)一步地,上述方法還包括下述步驟4)按照正常閱讀框架進(jìn)行翻譯以確定c. 4030T雜合突變使第135位的谷氨酰胺發(fā)生無義突變，并使氨基酸的編碼提前終止于第135位的氨基酸(p. Q135X)。本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供上述的試劑盒在用于檢測(cè)遺傳性耳聾和/或UsherID綜合征中的用途，將為在遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征患者中開展易感基因篩查提供方便確實(shí)的方法；同時(shí)可以指導(dǎo)臨床治療，并為將來利用這一突變作為靶點(diǎn)開展耳聾的基因治療提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。使用本發(fā)明的試劑盒的檢測(cè)方法為通過檢測(cè)來自于患者的待測(cè)樣本中是否存在⑶H23基因c. 403C>T突變，而判斷該患者遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征發(fā)生原因及類型。其中，CDH23基因的c. 4030T堿基改變引起氨基酸編碼過程中在135位的谷氨酰胺發(fā)生無義突變(P. Q135X)，導(dǎo)致編碼提前終止，形成⑶H23的截短肽鏈，喪失其功能，不成熟的表達(dá)產(chǎn)物誘導(dǎo)啟動(dòng)體內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)制，使變異的mRNA降解。⑶H23基因突變相關(guān)的遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征以常染色體隱性遺傳的方式傳遞。發(fā)明人應(yīng)用候選基因篩查的方法對(duì)108例遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征患者和100例聽力正常且無家族史的對(duì)照進(jìn)行篩查，在一例確診為UsherlD綜合征的耳聾患者發(fā)現(xiàn)⑶H23基因的c. 4030T突變，目前國(guó)際上報(bào)道與耳聾相關(guān)的⑶H23突變有150余種，尚無c. 4030T突變的報(bào)道。圖I給出CDH23編碼區(qū)氨基酸與核酸堿基的序列圖，并示出突變位點(diǎn)(方框標(biāo)記處)，該突變使位于CDH23基因編碼區(qū)的第403位中的C堿基突變?yōu)門堿基，使得氨基酸編碼第135位發(fā)生無義突變，由編碼谷氨酰胺的氨基酸密碼子變?yōu)榻K止密碼子(p. Q135X)，突變發(fā)生后基因表達(dá)產(chǎn)物由正常的3354個(gè)氨基酸變成了 134個(gè)氨基酸肽鏈。截?cái)嗟陌被犭逆渾?dòng)體內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)制，使變異的mRNA降解。檢測(cè)該突變可用本領(lǐng)域的任何檢測(cè)點(diǎn)突變的方法來進(jìn)行，例如PCR (聚合酶鏈反應(yīng))一測(cè)序法、采用標(biāo)記的CDH23基因DNA探針雜交法或用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法或序列特異性引物的方法等等。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，采用PCR擴(kuò)增-直接測(cè)序法來檢測(cè)樣本，具體包括下 述步驟I)采集待測(cè)個(gè)體的樣本，例如血液、體液或組織，提取基因組DNA ；2)以該DNA為模板，以針對(duì)⑶H23基因或⑶H23編碼區(qū)第403位堿基附近設(shè)計(jì)的PCR引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；3)將得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序分析，將所得到的序列與CDH23正?；虻男蛄羞M(jìn)行比較，確定是否存在CDH23突變位點(diǎn)。4)根據(jù)以上結(jié)果判斷待測(cè)個(gè)體是否為CDH23基因突變c. 403C>T導(dǎo)致的Usher ID綜合征。進(jìn)一步的，該方法可以選擇性的包括如下步驟5)按正常閱讀框進(jìn)行翻譯以確定是否存在第135位的谷氨酰胺的無義突變(p. Q135X)。在發(fā)明人進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中，通過聾病門診及資源收集網(wǎng)絡(luò)收集各種感音神經(jīng)性耳聾患者，包括遺傳性耳聾患者，建立資源庫(kù)。在患者自愿的前提下，簽署知情同意書后，留取5-10ml血樣，并建立門診病歷資料庫(kù)，詳細(xì)記錄患者病情、家系中的發(fā)病情況以及聯(lián)系方式。然后，應(yīng)用酚氯仿抽提的方法提取基因組DNA，定量后入庫(kù)，-20° C保存，每份DNA樣品均詳細(xì)對(duì)應(yīng)于登記的患者臨床資料。然后，應(yīng)用在線引物設(shè)計(jì)軟件Primerf設(shè)計(jì)引物，包含CDH23整個(gè)編碼區(qū)，應(yīng)用PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物直接測(cè)序測(cè)序引物與PCR擴(kuò)增引物相同，正反向測(cè)序，應(yīng)用ABI公司3700DNA測(cè)序儀。得到的序列與Genbank中的序列(登錄號(hào)NC_000010. 10)比較確定⑶H23突變位點(diǎn)。按正常閱讀框進(jìn)行翻譯以確定⑶H23的突變位點(diǎn)。上述步驟2所得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物還可以用雜交探針來檢測(cè)，所用的雜交探針可以是與正常的CDH23核苷酸序列雜交，或與突變的核苷酸序列雜交，或與它們的互補(bǔ)序列雜交的探針。這些探針可以用放射性同位素、發(fā)色物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記，尤其是可利用等位基因特異探針，也可用限制性酶切的方法篩查是否存在已被確定的突變。因此，檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的試劑選自測(cè)序檢測(cè)試劑、限制性內(nèi)切酶酶切檢測(cè)試劑、限制性長(zhǎng)度多態(tài)性檢測(cè)試劑、序列特異性引物檢測(cè)試劑和探針雜交檢測(cè)試劑。在上述方法中使用的PCR引物可以依據(jù)已知的核苷酸序列設(shè)計(jì)，通常為15 30個(gè)堿基，GC含量為45 50%左右，在適當(dāng)?shù)臏囟认屡c末端特異性結(jié)合，其可以利用專門的計(jì)算機(jī)程序設(shè)計(jì)。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，應(yīng)用在線引物設(shè)計(jì)軟件primer 3. 0設(shè)計(jì)了一對(duì)PCR引物，其序列為上游引物CDffiS-eF-lj'-TGGGGTCACAGGATTTCT-3' (ntll4103_ntll4120)下游引物0)1123-61^-1:5'-GCTCTCCCCACCTGACTCT-3' (ntll4352_ntll4370)CDH23正?；虻臉?biāo)準(zhǔn)序列可以參考例如Genbank NC_000010. 10。用于檢測(cè)⑶H23基因c. 4030T突變的試劑盒中可以包含以下試劑用于擴(kuò)增樣本DNA中⑶H23基因或⑶H23基因編碼區(qū)第403位堿基附近的PCR弓I物；以及以下一種或幾種試劑的組合 從待測(cè)樣品中提取DNA的試劑；PCR反應(yīng)試劑；對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序的試劑。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中提供一個(gè)檢測(cè)⑶H23基因c. 4030T突變的試劑盒，容器內(nèi)裝有用以檢測(cè)CDH23基因c.403C>T突變的成分，與之同時(shí)提供的可以是經(jīng)政府藥物管理機(jī)構(gòu)審核的、有關(guān)藥品或生物制品的制造、使用及銷售信息。例如，采用PCR擴(kuò)增后，直接檢測(cè)樣品中CDH23基因c. 4030T突變位點(diǎn)的試劑盒，可含有擴(kuò)增引物、dNTPs、用于PCR反應(yīng)的DNA聚合酶及其緩沖液、或測(cè)序反應(yīng)所需試劑等的一種或多種。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，以上組分僅是示意性的，例如,所述的引物可以采用上述的一對(duì)⑶H23-6F-1和⑶H23-6R-1引物，所述用于PCR反應(yīng)的DNA聚合酶是能夠用于PCR擴(kuò)增的酶。所述試劑盒的使用方法主要包括如下步驟(I)提取待測(cè)血樣的DNA，利用上述的一對(duì)CDH23-6F-1和CDH23-6R-1引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到PCR反應(yīng)產(chǎn)物；(2)PCR反應(yīng)產(chǎn)物純化后直接測(cè)序，將所得的序列與Genbank中的標(biāo)準(zhǔn)序列比較確定突變位點(diǎn)的存在；所述步驟還可進(jìn)一步包括(3)按正常閱讀框進(jìn)行翻譯以確定是否存在第135位谷氨酰胺的無義突變(p. Q135X)。該試劑盒可簡(jiǎn)便快捷地檢測(cè)⑶H23突變位點(diǎn)，從而應(yīng)用于遺傳性耳聾和/或UsherID綜合征相關(guān)基因的檢測(cè)及其診斷或治療方法中。本發(fā)明也提供了 CDH23突變基因在診斷或治療人類遺傳性耳聾和/或UsherlD綜合征中的應(yīng)用。通過檢測(cè)來自患者的待測(cè)樣本中是否存在⑶H23基因c. 4030T突變而判斷該患者的Usher ID綜合征發(fā)生原因及類型，進(jìn)而為臨床診斷和治療提供依據(jù)；此外，在進(jìn)一步的臨床治療方面，在檢測(cè)為發(fā)生了⑶H23基因c. 403C>T突變之后，可以將正常基因?qū)霐y帶突變基因的細(xì)胞并在其中表達(dá)，它可與內(nèi)源性突變基因發(fā)生重組，從而可以進(jìn)行基因治療。本發(fā)明提出了通過檢測(cè)患者中是否存在⑶H23基因新的突變而診斷UsherlD綜合征發(fā)生的原因和類型的檢測(cè)方法，這將有利于為不同類型遺傳性耳聾患者確定個(gè)體化治療方案。
下面結(jié)合附圖，通過對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施方式的說明，詳細(xì)描述但不限制本發(fā)明。


圖I為⑶H23基因編碼區(qū)核苷酸與氨基酸的序列突變位于⑶H23基因第403位中的C堿基，用方框圈起來的是突變的堿基和對(duì)應(yīng)的氨基酸，突變后的第135位的谷氨酰胺發(fā)生無義突變，使編碼的氨基酸序列提前終止。圖2為本發(fā)明方法中PCR反應(yīng)過程示意圖，示出了反應(yīng)溫度和時(shí)間，其中*表示每個(gè)循環(huán)降低0.5°C。圖3為本發(fā)明方法中，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳定量的瓊脂糖凝膠電泳圖譜，圖中示出、了定量Marker的片段位置。發(fā)明的
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所用試驗(yàn)材料，如無特別說明，均為市售購(gòu)買產(chǎn)品。實(shí)施例I待測(cè)血樣提取與⑶H23基因編碼區(qū)的PCR擴(kuò)增一、待測(cè)對(duì)象血樣DNA的制備I、研究對(duì)象對(duì)108例散發(fā)遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征患者和100名無家族史的聽力正常對(duì)照按照下述方法進(jìn)行CDH23基因的篩查。發(fā)現(xiàn)I例耳聾患者的CDH23基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)患者為c. 4030T純合突變，該患者同時(shí)伴有視網(wǎng)膜色素變性，已被確診為Usher ID綜合征。在其家系中，耳聾表型與該基因型共分離。對(duì)100名聽力正常者的篩查中未發(fā)現(xiàn)c. 4030T突變者。對(duì)所有參加者詳細(xì)調(diào)查其病史以及家族史，并對(duì)其進(jìn)行體格檢查，耳科檢查包括耳鏡檢查、聽力學(xué)評(píng)估。在簽署知情同意書以后每人采集血樣5 10ml。2、基因組DNA提取采用酚氯仿抽提法。第一天I)抗凝血用PBS作I倍稀釋。2)在離心管中加入2倍體積的淋巴分離液(18° C 28° C)，上面鋪一層I倍體積已稀釋的血液，室溫，IOOOXg,離心20分鐘。3)吸棄上清液，小心吸出中間有核細(xì)胞層，轉(zhuǎn)入5ml Ep管中，5000 X g，離心10分鐘，然后用PBS洗一次。5000Xg,離心10分鐘。4)將細(xì)胞懸于 2ml TE 緩沖液(IOmM Tris. HCl, ImM EDTA，pH8. 0)中，加 10% 的 SDS(十二烷基硫酸)至終濃度 0.5% (100 iil)，蛋白激酶 k 100 200 ii g/ml (10mg/ml )，50° C水浴3 5小時(shí)。5)用酚氯仿提取。用等體積的飽和酚，加入混勻，5000Xg，離心10分鐘。6)吸上清液至新離心管中，棄下層沉淀，加入等體積酚氯仿混合物，混勻，5000 Xg,離心10分鐘。7)吸上清液至新離心管中，棄下層沉淀，加入等體積氯仿異戊醇混合物，混勻，5000 Xg,離心10分鐘。8)吸上清液至新離心管中，棄下層沉淀，加入1/10體積的乙酸鈉，混勻。
9)加入2. 5倍體積的無水乙醇。10)-20。C 沉淀 DNA 過夜。第二天11)高速離心，10000Xg，10 分鐘，4。C。12)棄上清液，加入75%乙醇2ml，高速離心10000 X g，5分鐘13)棄上清液，吹干。14)用 TE 緩沖液溶解(200 ii I TE/5ml 全血，400TE/10ml 全血)。15)分裝。1%瓊脂糖電泳和分光光度計(jì)定量。二、⑶H23基因編碼區(qū)的PCR擴(kuò)增I、引物序列上游引物CDffiS-eF-lj'-TGGGGTCACAGGATTTCT-3' (ntll4103_ntll4120)下游引物0)1123-61^-1:5'-GCTCTCCCCACCTGACTCT-3' (ntll4352_ntll4370)注CDH23基因序列檢索號(hào)NC_000010. 10。2、PCR反應(yīng)體系的建立(表I)表I⑶H23基因的PCR反應(yīng)體系
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)與遺傳性耳聾和/或Usher ID綜合征相關(guān)的位于CDH23基因的c.4030T突變的試劑盒，所述試劑盒包括 從待測(cè)樣品中提取DNA的試劑； 用于擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑； 對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序的試劑； 其中，所述擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑包括PCR引物，所述PCR弓丨物擴(kuò)增的目標(biāo)片段包含⑶H23基因403位堿基。
2.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其中所述的PCR引物為選自下述引物中的一對(duì) CDffiS-GF-U' -TGGGGTCACAGGATTTCT-3'，0)1123-61^-1:5' -GCTCTCCCCACCTGACTCT-3'；CDH23-6F-2:5, -AGGGTGGAAGAGGCCAGAGT-3'，CDH23-6R-2:5' -TTCGCCAACCTGCTCAGAGT-3'； CDffiS-GFU' -CCGCCTTTCTCTTGCCAGGT-3'，CDH23-6R-3:5' -GAAAGCCCCTTCCTAGAACTGCAT-3'； CDffiS-GFU' -CCCCCCTCCCTCTCTCACT-3',0)1123-61^-4:5'-AGCAGCAGGTCTCTGATACCC-3'；CDH23-6F-5:5' -TTCACCGTGGAGTTCTCTGT-3',CDH23-6R-5:5' -AACCCCAGTGGCTCCTACCT-3'。
3.如權(quán)利要求I或2所述試劑盒，所述試劑盒用于檢測(cè)位于CDH23基因的c.4030T雜合突變的方法，包括以下步驟 1)采集待測(cè)個(gè)體的血液、體液或組織樣本，提取DNA； 2)以該DNA為模板，以PCR引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到PCR反應(yīng)產(chǎn)物； 其中，所述PCR引物擴(kuò)增的目標(biāo)片段包含CDH23基因第403位堿基； 3)將得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與CDH23正?；虻男蛄羞M(jìn)行比較，確定是否存在⑶H23基因的c. 4030T雜合突變位點(diǎn)。
4.如權(quán)利要求3所述試劑盒，所述方法還進(jìn)一步包括下述步驟 4)按照正常閱讀框架進(jìn)行翻譯以確定c.4030T雜合突變使第135位的谷氨酰胺發(fā)生無義突變，并使氨基酸的編碼提前終止于第135位的氨基酸(p. Q135X)。
5.如權(quán)利要求I所述的試劑盒在用于檢測(cè)遺傳性耳聾和/或UsherID綜合征中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了檢測(cè)CDH23基因c.403C>T突變的試劑盒，通過檢測(cè)患者中是否存在該突變基因而診斷遺傳性耳聾和/或Usher 1D綜合征發(fā)生的原因和類型。該突變基因和檢測(cè)方法將有利于臨床上開展遺傳性耳聾患者的CDH23突變篩查工作，為遺傳性耳聾和/或Usher 1D綜合征患者的診斷和治療提供依據(jù)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102732616SQ20121017175
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月29日
發(fā)明者王秋菊 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院, 王秋菊