專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種用于棉花品種真實(shí)性鑒定的dna指紋檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，特別是，涉及一種棉花品種真實(shí)性DNA指紋檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：隨著棉花品種數(shù)量的日益增加和遺傳基礎(chǔ)的日益狹窄，使得完全根據(jù)形態(tài)性狀進(jìn)行棉花品種的辨別越來(lái)越困難，給種子生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、管理、維權(quán)等諸環(huán)節(jié)帶來(lái)不同程度的困難，造成諸如品種多、亂、雜的現(xiàn)象。近年來(lái)，分子生物學(xué)的發(fā)展使品種鑒定進(jìn)入到基因水平，與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法和蛋白質(zhì)電泳技術(shù)相比，DNA標(biāo)記技術(shù)能揭示更多的多態(tài)性，具有準(zhǔn)確可靠、簡(jiǎn)單快速、易于自動(dòng)化的優(yōu)點(diǎn)，是品種鑒定技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。與其它分子標(biāo)記相比，以微衛(wèi)星序列為基礎(chǔ)的簡(jiǎn)單重復(fù)序列(SSR)標(biāo)記在DNA指紋鑒定上顯示了獨(dú)特的優(yōu)越性SSR標(biāo)記數(shù)量豐富，覆蓋整個(gè)基因組，揭示的多態(tài)性高，以孟德?tīng)柗绞竭z傳，呈共顯性。SSR標(biāo)記已成為品種鑒定首選技術(shù)之一，并已在玉米，水稻等作物上初步應(yīng)用。目前，我國(guó)棉種的真實(shí)性與品種純度鑒定仍依靠田間小區(qū)種植鑒定方法，需投入大量的人力、物力，成本高、耗時(shí)長(zhǎng)，時(shí)效性差。武耀廷，張?zhí)煺?，郭旺珍等進(jìn)行了陸地棉品種SSR標(biāo)記的多態(tài)性及用于雜交種純度檢測(cè)的研究；馬軒，杜雄明，孫君靈等進(jìn)行了18個(gè)彩色棉品系的SSR指紋分析；殷劍美，陳旭升，狄佳春等進(jìn)行了雜交棉蘇雜118的SSR指紋圖譜構(gòu)建研究。廣大科研工作者普遍認(rèn)為，利用分子標(biāo)記進(jìn)行棉花品種鑒定是可行的。但利用現(xiàn)有的分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行品種鑒定缺乏系統(tǒng)性研究，存在鑒別能力不夠高、操作步驟較多、耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)、實(shí)驗(yàn)成本較高等問(wèn)題，不能完全適應(yīng)實(shí)踐檢測(cè)的需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種棉花品種真實(shí)性DNA指紋檢測(cè)方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足。本發(fā)明通過(guò)對(duì)DNA快速提取法、分子檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)體系(包括PCR擴(kuò)增體系、電泳及銀染檢測(cè))、核心引物篩選等環(huán)節(jié)進(jìn)行全面系統(tǒng)的研究，從實(shí)踐上解決限制DNA指紋技術(shù)商業(yè)化的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，建立了快速準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠的棉花品種DNA指紋鑒定標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)體系，并在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)一種適用于棉花品種真實(shí)性檢測(cè)的方法，采用該方法不僅檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠，而且操作簡(jiǎn)單方便，成本低廉，有利于技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化。本發(fā)明提供一種棉花品種真實(shí)性DNA指紋檢測(cè)方法，其使用分布于棉花全基因組26條染色體上的一套核心引物對(duì)待測(cè)品種進(jìn)行檢測(cè)，所述核心引物的核苷酸序列如下所示<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明中核心引物的篩選確定以來(lái)源于我國(guó)三大棉區(qū)的32份棉花主栽品種為篩選材料，對(duì)現(xiàn)有引物進(jìn)行大量的篩選，從棉花基因組每條染色體上挑選一對(duì)多態(tài)性高、穩(wěn)定性與重復(fù)性好的引物，合計(jì)26對(duì)，作為品種真實(shí)性檢測(cè)的一套核心引物。根據(jù)本發(fā)明的DNA指紋檢測(cè)方法，其包括提取待測(cè)品種的DNA、使用權(quán)利要求1所述26對(duì)核心引物進(jìn)行SSR-PCR擴(kuò)增、電泳和銀染檢測(cè)步驟。其中，所述DNA提取包括以下步驟將去殼棉種粉碎后，加入SDS提取液，漩渦充分后，65°C水?。患尤塍w積比依次為25241的酚、氯仿和異戊醇的混合液，混勻，離心；取上清，加入濃度為lOmg/mlRNase，水??；抽提后離心取上清，加入異丙醇，待DNA成團(tuán)析出后，用乙醇洗滌DNA沉淀，加入TE或ddH20充分溶解DNA，備用。根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，所述DNA提取包括以下步驟將去殼棉種充分粉碎后，加入800μ1SDS提取液，漩渦充分后，65°C水浴30min，間隔IOmin輕搖一次；加入等體積800μ1體積比依次為25241的酚、氯仿和異戊醇的混合液，混勻至不分層，IOOOOrpm離心IOmin；取上清，加入濃度為10mg/ml的1μIRNase，37°C水浴30min；重復(fù)抽提一次后離心取上清，加入0.7倍體積異丙醇，待DNA成團(tuán)析出后，70%乙醇洗滌DNA沉淀2次，加入200μITE或ddH20充分溶解DNA，備用。所述SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中20μ1反應(yīng)液中包括1.5mmol/LMgCl2,0.lmmol/LdNTP,1XBuffer,0.3μmol/LSSR引物，IUTaqDNA聚合酶，2μ1DNA模板；反應(yīng)程序?yàn)?5°C預(yù)變性2min，一個(gè)循環(huán)；94°C變性45s，55°C退火45s，72°C延伸2min，共30個(gè)循環(huán)；72°C延伸7min，一個(gè)循環(huán)；4°C保存待用。所述電泳步驟中，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，恒功率80W電泳Ih0所述銀染檢測(cè)包括以下步驟用10%乙醇和0.5%冰醋酸組成的固定液固定IOmin；用雙蒸水快速漂洗1次；用0.2%AgNO3溶液染色5min；用雙蒸水快速漂洗1次；用3%NaOH和0.5%甲醛組成的顯影液顯影；用10%無(wú)水乙醇和0.5%冰醋酸組成的固定液定影。具體而言，利用上述核心引物進(jìn)行棉花品種真實(shí)性檢測(cè)，包括以下步驟1)單粒棉種DNA快速提取隨機(jī)選取供檢樣品棉種與對(duì)照樣品棉種各5粒，采用電動(dòng)種子粉碎器將去殼棉種充分粉碎后，加入800μ1SDS提取液，漩渦充分后，65°C水浴30min，間隔IOmin左右輕搖一次。加入等體積800μ1酚、氯仿和異戊醇的混合液(其體積比依次為25241)，混勻至不分層，IOOOOrpm離心IOmin0取上清，加入1μIRNase(10mg/ml)，37°C水浴30min。重復(fù)抽提一次后離心取上清，加入0.7倍體積異丙醇，待DNA成團(tuán)析出后，70%乙醇洗滌DNA沉淀2次，加入200μITE或ddH20充分溶解DNA，備用。該方法相比常規(guī)的以葉片為材料的CTAB提取法不僅能獲得高質(zhì)量的DNA，而且簡(jiǎn)單快速，省去了育苗時(shí)間和液氮研磨等環(huán)節(jié)，降低實(shí)驗(yàn)成本的同時(shí)大大提高了工作效率。2)SSR-PCR擴(kuò)增體系20μ1反應(yīng)液中包括1.5mmol/LMgCl2,0.lmmol/LdNTP,1XBuffer,0.3μmol/LSSR引物(26對(duì)核心引物)，IUTaqDNA聚合酶，2μ1DNA模板。反應(yīng)程序95°C預(yù)變性2min，一個(gè)循環(huán)；94°C變性45s，55°C退火45s(退火溫度可根據(jù)引物TM值進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整)，72°C延伸2min，共30個(gè)循環(huán)；72°C延伸7min，一個(gè)循環(huán)；4°C保存待用。該SSR-PCR擴(kuò)增體系穩(wěn)定可靠，確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。3)電泳PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，恒功率80W電泳Ih。相比非變性膠和瓊脂糖凝膠電泳，6%變性膠更適于高分辨率的棉種DNA指紋鑒定，不僅有效提高品種指紋鑒別能力，而且縮短了電泳時(shí)間。4)銀染檢測(cè)采用快速銀染法，流程如下固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)固定IOmin；—雙蒸水快速漂洗1次；一0.2%AgNO3溶液染色5min；—雙蒸水快速漂洗1次；一顯影液(3%NaOH,0.5%甲醛)顯影；一固定液(10%無(wú)水乙醇，0.5%冰醋酸)定影。該銀染法操作簡(jiǎn)單，背景容易掌握，靈敏度高，且減少了冰醋酸的使用量，30分鐘內(nèi)即可獲得背景清晰的染色效果。5)結(jié)果分析對(duì)供檢樣品與對(duì)照樣品的26個(gè)位點(diǎn)的DNA指紋譜帶進(jìn)行比較引物位點(diǎn)差異彡2，判定兩個(gè)品種為不同品種；引物位點(diǎn)差異=1，判定兩個(gè)品種為近似品種；引物位點(diǎn)差異=0，判定兩個(gè)品種為相同品種；本發(fā)明棉花品種真實(shí)性DNA指紋檢測(cè)方法具有以下有益效果本發(fā)明建立了快速準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠的棉花DNA指紋鑒定標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)體系，并在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)了一種適用于棉花品種真實(shí)性DNA指紋檢測(cè)的方法，利用該方法對(duì)棉花品種真實(shí)性進(jìn)行檢測(cè)，一份樣品從送樣到出結(jié)果僅需2d，且檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠，容易統(tǒng)計(jì)。該方法適用于我國(guó)主栽棉花品種真實(shí)性快速檢測(cè)。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。如非特別指明，實(shí)施例中所涉及的百分比濃度，固體藥劑均為質(zhì)量濃度，液體藥劑均為體積濃度。實(shí)施例1鑒定市面上正在熱銷(xiāo)的雜交棉品種X是否為主推棉花雜交種中棉所48檢測(cè)流程如下1、DNA提取隨機(jī)挑取待測(cè)品種X與中棉所48干種子各5粒進(jìn)行DNA制備(1)將單粒棉花種子去殼，充分粉碎后轉(zhuǎn)入2ml的離心管中。(2)加Λ800ulDNA提取液(1%SDS,0.01mol/LEDTA8.0,0.7mol/LNaCl，0.05mol/LTris-HCl,0.5%山梨醇，PVP,1%β_巰基乙醇)，漩渦至充分混勻后，65°C水浴30min，間隔IOmin左右輕搖一下。(3)水浴結(jié)束后，加入等體積800μ1苯酚、氯仿和異戊醇的混合液(其體積比依次為25241)，上下顛倒混勻至不分層，IOOOOrpm離心lOmin。(4)吸取上清液轉(zhuǎn)移到另一2ml離心管中，加入IuLRNase酶(10mg/ml)，混勻后37°C水浴30min。(5)加入等體積SOOul的苯酚氯仿異戊醇(25241)，上下顛倒混勻至不分層，IOOOOrpm離心IOmin。(6)將上清液轉(zhuǎn)移到另一2ml離心管中，加入0.7倍體積異丙醇緩慢搖動(dòng)幾次，靜置30min，絮狀DNA成團(tuán)析出。(7)用剪口槍頭吸取DNA轉(zhuǎn)移至盛有70%乙醇的離心管中，浸泡兩次，第一次約2小時(shí)，第二次浸泡過(guò)夜。(8)倒掉乙醇，自然通風(fēng)干燥DNA，加入200ulTE(pH8.0)或ddH20，充分溶解備用。(9)紫外檢測(cè)DNA濃度，用ddH20將DNA原液稀釋至使用濃度20ng/μ1，4°C保存?zhèn)溆谩?、SSR-PCR擴(kuò)增采用26對(duì)核心引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增(引物信息見(jiàn)表1)，PCR反應(yīng)體系如下<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>反應(yīng)程序95°C預(yù)變性2min，一個(gè)循環(huán)；94°C變性45s，55°C退火45s(退火溫度可根據(jù)引物TM值進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整)，72°C延伸2min，共30個(gè)循環(huán)；72°C延伸7min，一個(gè)循環(huán)；4°C保存待用。3、電泳檢測(cè)(1)清洗玻璃板用自來(lái)水沾上洗滌靈把玻璃板反復(fù)擦洗干凈，用純水擦洗一遍，再用95%酒精擦洗一遍。在方板上涂上ImlBindingSilane(0.5，凹板上涂上ImlRepelsilane(2%)0操作過(guò)程中防止兩塊玻璃板互相污染。(2)6%膠的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注40%PA膠190gacrylamide+lOgbisacrylamide用水稀釋至500ml。TEMED和10%APS在灌膠前加入。(3)灌膠灌膠過(guò)程中防止出現(xiàn)氣泡，輕輕插入梳子，使其聚合2小時(shí)以上。(4)變性20μ1PCR樣品加上5μ16XLoalingbuffer，混勻后，在PCR儀上運(yùn)行變性程序95°C變性5分鐘，4°C冷卻10分鐘(或置于冰上冷卻)。(5)電泳用移液器吹吸加樣槽，清除氣泡，擦入樣品梳子，每一個(gè)加樣孔點(diǎn)入3μ1樣品。80W(1600V/50mA)恒功率電泳至上部的Loadingbuffer帶(二甲苯青)至膠板的另一前沿(約1小時(shí))。電泳結(jié)束后，小心分開(kāi)兩塊玻璃板，膠會(huì)緊貼在涂Bindingsilane的玻璃板上。4、銀染固定10%無(wú)水乙醇+0.5%冰醋酸固定液，輕輕晃動(dòng)10分鐘；漂洗雙蒸水快速漂洗，不超過(guò)10秒；染色0·2%AgNO3溶液中染色5分鐘；漂洗雙蒸水快速漂洗，時(shí)間不超過(guò)10秒；顯影3%Na0H+0.5%甲醛顯影液，輕輕晃動(dòng)至帶紋出現(xiàn)；定影；固定液中定影5分鐘；5、結(jié)果分析通過(guò)以上檢測(cè)，獲得兩個(gè)品種在26個(gè)位點(diǎn)上的DNA指紋圖譜，進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)品種在三個(gè)引物位點(diǎn)上指紋不同，根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明市場(chǎng)上熱銷(xiāo)雜交品種X不是主推雜交品種中棉所48。下述表1為棉花品種真實(shí)性檢測(cè)核26對(duì)核心引物名單，其引物序列號(hào)按順序依次為1-52。表1棉花品種真實(shí)性檢測(cè)核心引物名單<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例2鑒定某單位正在使用的親本材料A是否為已申請(qǐng)保護(hù)的常規(guī)棉品種中棉所41，鑒定操作流程如下按照實(shí)施例1的步驟，隨機(jī)挑取待測(cè)品種A與對(duì)照品種中棉所41干種子各5粒進(jìn)行DNA制備，PCR擴(kuò)增、電泳檢測(cè)及銀染。結(jié)果分析通過(guò)以上檢測(cè)，獲得兩個(gè)品種在26個(gè)位點(diǎn)上的DNA指紋圖譜，進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)品種在26個(gè)引物位點(diǎn)上指紋完全相同，根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明親本材料A是已申請(qǐng)保護(hù)的常規(guī)棉品種中棉所41。權(quán)利要求一種用于棉花品種真實(shí)性鑒定的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，使用分布于棉花全基因組26條染色體上的一套核心引物對(duì)待測(cè)品種進(jìn)行檢測(cè)，所述核心引物的核苷酸序列如下所示引物名稱(chēng)引物序列(5′→3′)NAU3254上游GCTTTGCTTTGGAATGAGAT；下游TTGGTGCAGATAGCAAGAAANAU2277上游GAACTAGCCACATGATGCAC；下游TTGTTGAGGCATTAGTTTGCNAU1190上游CCATGTCCGTATCCATGTTA；下游TAAGGCAAGATAGGGTCAGGMUCS101上游AGCCTCTCTCTCCTTCAGGC；下游GAGTCATATCGCTTGGGAGCNAU934上游TGCTTTCGTATCCTTTTTCC；下游ATTAGAGAAGCCAGGGAGGTNAU874上游AAATGGCGTGCTTGAAATAC；下游TGTGATGAAGAACCCTCTCANAU1362上游TCTGATTTGCTGATTGGAAA；下游CTTATTCGGACTTGGTTGCTBNL3257上游CAATCTGGGATCAAAAAAACC；下游GGTGAAACATAGCGTGTTGCBNL1317上游AAAAATCAGCCAAATTGGGA；下游CGTCAACAATTGTCCCAAGABNL2960上游TAAGCTCTGGAGGCCAAAAA；下游CCATTTCAATTTCAAGCATACGBNL1231上游TAATAAAAGGGAAAGGAAAGAGTT；下游TATGGCTCTAGAATATTCCCTCGBNL3261上游AAACGGAAACGAAGAAGGGT；下游CCCAAACCTGTCTCACCAACBNL1421上游TGAAGATTTGGAGGCAATTG；下游GAAATCAAGCCTCAATTCGGCIR246上游TTAGGGTTTAGTTGAATGG；下游ATGAACACACGCACGNAU2437上游CTTGGAAAAAGGAAGAGCAG；下游TTAAAAGACCAAAGGCAAGGJESPR292上游GCTTGCAATCTCCTACACC；下游GAATATGTTTCATAGAATGGCNAU1167上游CTGACTTGGACCGAGAACTT；下游AAGAGCCCTGGACAATGATACIR216上游ATCTGAACCATCATCCTC；下游TTCTGATTGGCACTTTCNAU3110上游CCAAGGATATGAACCAAAGG；下游CGTGAACACCATGTCAGTCTBNL3646上游CCCAATACGAGGAGAGCACA；下游TCGAAAATGGGGGAGAGAGBNL3171上游GAAAAATTGAGGAAGGACATACG；下游GGCCACAACCGAATTTACTGBNL4030上游CCTCCCTCACTTAAGGTGCA；下游ATGTTGTAAGGGTGCAAGGCBNL3140上游CACCATTGTGGCAACTGAGT；下游GGAAAAGGGAAAGCCATTGTNAU1125上游AAGAAGCCACTGAAGCAGAG；下游GTAGAACAGCTCCATTGCTGBNL827上游AAGCTCCACGTGCTCAAGTT；下游CTCATGTTGTCGGTGGTGTTCIR170上游TCGGTAAAGATGGGTG；下游ATTGGTGCTGGTTGAG2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，包括提取待測(cè)品種的DNA、使用權(quán)利要求1所述26對(duì)核心引物進(jìn)行SSR-PCR擴(kuò)增、電泳和銀染檢測(cè)步驟。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，所述DNA提取包括以下步驟將去殼棉種粉碎后，加入SDS提取液，漩渦充分后，65°C水浴；加入體積比依次為25241的酚、氯仿和異戊醇的混合液，混勻，離心；取上清，加入濃度為lOmg/mlRNase，水??；抽提后離心取上清，加入異丙醇，待DNA成團(tuán)析出后，用乙醇洗滌DNA沉淀，加入TE或ddH20充分溶解DNA，備用。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，所述DNA提取包括以下步驟將去殼棉種充分粉碎后，加入800μ1SDS提取液，漩渦充分后，65°C水浴30min，間隔IOmin輕搖一次；加入等體積800μ1體積比依次為25241的酚、氯仿和異戊醇的混合液，混勻至不分層，IOOOOrpm離心IOmin；取上清，加入濃度為10mg/ml的1μIRNase，37°C水浴30min；重復(fù)抽提一次后離心取上清，加入0.7倍體積異丙醇，待DNA成團(tuán)析出后，70%乙醇洗滌DNA沉淀2次，加入200μITE或ddH20充分溶解DNA，備用。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，所述SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中20μ1反應(yīng)液中包括1.5mmol/LMgCl2,0.lmmol/LdNTP,1XBuffer,0.3μmol/LSSR引物，IUTaqDNA聚合酶，2μ1DNA模板；反應(yīng)程序?yàn)?5°C預(yù)變性2min，一個(gè)循環(huán)；94°C變性45s，55°C退火45s，72°C延伸2min，共30個(gè)循環(huán)；72°C延伸7min，一個(gè)循環(huán)；4°C保存待用。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，所述電泳步驟中，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，恒功率80W電泳Ih。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA指紋檢測(cè)方法，其特征在于，所述銀染檢測(cè)包括以下步驟用10%乙醇和0.5%冰醋酸組成的固定液固定IOmin；用雙蒸水快速漂洗1次；用0.2%AgNO3溶液染色5min；用雙蒸水快速漂洗1次；用3%NaOH和0.5%甲醛組成的顯影液顯影；用10%無(wú)水乙醇和0.5%冰醋酸組成的固定液定影。全文摘要本發(fā)明涉及一種棉花品種真實(shí)性鑒定的DNA指紋檢測(cè)方法，該方法中采用單粒棉種提取待檢樣品的基因組DNA，省時(shí)省力且簡(jiǎn)單快速的獲得高質(zhì)量DNA。使用26對(duì)SSR核心引物組合進(jìn)行棉種真實(shí)性DNA指紋檢測(cè)，這些核心引物具有多態(tài)性高、穩(wěn)定性與重復(fù)性好的特點(diǎn)，且均勻分布于棉花基因組26條染色體。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確穩(wěn)定，適用于棉花品種真實(shí)性快速檢測(cè)。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101824484SQ20101019936公開(kāi)日2010年9月8日申請(qǐng)日期2010年6月9日優(yōu)先權(quán)日2010年6月9日發(fā)明者馮新愛(ài),匡猛,周大云,楊偉華,王延琴,許紅霞申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所