專利名稱：一種酪蛋白組分的分離方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酪蛋白組分的分離方法，尤其涉及一種將乳及乳制品中主要成份-α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分分離制取的方法，同時還涉及α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分在食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳中主要成分是水、乳脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖和礦物質(zhì)，其中水占87％、干物質(zhì)占12％(乳中除去水和氣體之外的物質(zhì)稱為干物質(zhì))。在水中溶解著各種可溶性鹽類、乳糖類，同時在水中還分散著兩種膠體系統(tǒng)一種是脂肪球，另一種是酪蛋白膠束(是由蛋白質(zhì)分子和不溶性鹽構(gòu)成的，這種不溶性鹽主要指磷酸鈣絡(luò)合物)。
乳中含有幾百種蛋白質(zhì)，多數(shù)含量較少，蛋白質(zhì)在牛乳中的含量為3.3％～3.5％。根據(jù)蛋白質(zhì)的化學或物理性質(zhì)可將其分為酪蛋白、乳清蛋白。酪蛋白是在20℃的條件下將脫脂乳用酸調(diào)節(jié)其pH值為4.6沉淀的蛋白質(zhì)。大多數(shù)酪蛋白的主要成分是αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白(其含量分別為36％、10％、34％、12％)，這4種酪蛋白的主要區(qū)別在于它們含磷量的多寡....。不同類型酪蛋白的結(jié)構(gòu)具有相似性，能夠自行結(jié)合成聚集體，并進一步形成膠束。酪蛋白富含磷，與鈣結(jié)合使微粒結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在乳中呈現(xiàn)為含鈣、磷酸鹽的絡(luò)合物粒子狀態(tài)。正常乳在分泌時(38℃)，所有的酪蛋白成分以分散的膠粒狀態(tài)存在，膠粒的直徑20～600nm(平均120nm)，以海綿狀結(jié)構(gòu)存在，這有利于蛋白質(zhì)水解酶進入分子的內(nèi)部。酪蛋白膠束是由亞基和亞膠束組成的，它們通常呈橢圓形。這些亞基(直徑為8～12nm)通過磷酸鈣相互連接在一起，它們之間的空隙由水(在乳中稱之為乳漿)填滿；亞膠束(直徑為10～15nm)具有開放式的結(jié)構(gòu)并且每克蛋白質(zhì)至少結(jié)合有1.5g水。不同的膠束所含有的αS-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白也是不均勻一致的。αS-酪蛋白、β-酪蛋白形成的鈣鹽幾乎不溶于水，而κ-酪蛋白易溶，由于κ-酪蛋白主要附著在膠束的表面，其溶解性勝過膠束中另外兩種酪蛋白的溶解性，使得整個酪蛋白膠束能溶解呈膠體。αS1-酪蛋白和β-酪蛋白都不含有半胱氨酸或半胱氨酸殘基，而αS2-酪蛋白和κ-酪蛋白各含有兩個半胱氨酸。酪蛋白含有大量脯氨酸殘基(在αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白上分別為17，10，35，20個脯氨酸殘基)，它們在多肽鍵上分布不均，限制了α-螺旋、β-結(jié)構(gòu)的形成，使酪蛋白有比較開放、松散的結(jié)構(gòu)。
1.α-酪蛋白α-酪蛋白占牛乳總酪蛋白大約一半，是酪蛋白膠粒膠粒中的基本組成部分，主要是αS1-酪蛋白和αS2-酪蛋白兩種形體。
αS1-酪蛋白已經(jīng)被證明有五種變異體A、B、C、D、E。αS1-酪蛋白B-8P有199個氨基酸殘基，相對分子質(zhì)量為23641。微量成分αS1-酪蛋白9P上41號位置是附加的磷酸化絲氨酸殘基。在多肽鍵上有兩個很強的疏水區(qū)(殘基1～14、殘基98～99)和一個高密度電荷極性區(qū)(殘基45～98)，幾乎所有磷酸根集團分布在45～98序列中。脯氨酸分布在疏水區(qū)中，使αS1-酪蛋白被看作開放、松散的多肽鏈結(jié)構(gòu)。在pH值為7時，αS1-酪蛋白每摩爾磷酸酯基團可以結(jié)合8molCa2+。αS1-酪蛋白在含7mmol/LCa2+或2mmol/LNaCl溶液中凝聚沉淀。乳中有一種酪蛋白，其濃度很低，被誤定為λ-酪蛋白，其實它是由胞漿酶水解αS1-酪蛋白而來。
αS2-酪蛋白在堿性尿素凝膠電泳中，αS2-酪蛋白位于αS1-和β-酪蛋白之間。αS2-酪蛋白有四種成分αS2-酪蛋白-13P、αS2-酪蛋白-12P、αS2-酪蛋白-11P和αS2-酪蛋白-10P，它們是按照磷酸根基團數(shù)目命名的(Eigel，et al.1384)。αS2-有四種變異體A、B、C、D，由207個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量為25230。因為αS2-酪蛋白有兩個磷酸絲氨酸殘基簇(Serp-Serp-Serp-Glu-Glu)，而使它對Ca2+結(jié)合能力增強。這種磷酸絲氨酸結(jié)構(gòu)在αS2-和β-酪蛋白分子中只有一個。由于兩個-SH基團的存在，加熱時可形成蛋白質(zhì)復合體，誘發(fā)αS2-酪蛋白參與分子間的交聯(lián)。
2.β-酪蛋白β-酪蛋白由一種主要成分(有七種變異體A1、A2、A3、B、C、D、E)和八種微量成分(主要由蛋白酶水解β-酪蛋白質(zhì)產(chǎn)生)組成。β-酪蛋白-5P(A2)由209個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量為23983。
β-酪蛋白由胞漿酶作用生成的多肽是根據(jù)其主要結(jié)構(gòu)分類的，即β-酪蛋白-1P(f29～209)(y1-酪蛋白)，β-酪蛋白(f106～209)(y2-酪蛋白)和β-酪蛋白(f108～209)(y3-酪蛋白)。
由胞漿酶作用生成的N-末端片斷已經(jīng)過鑒定并重新命名β-酪蛋白-1P(f29～105，107)(即蛋白-胨成分“8慢”)，β-酪蛋白-5P(f1～105，107)(即蛋白-胨成分“5快”)和β-酪蛋白-4P(f1～128)(即蛋白-胨成分“8快”)。大量的脯氨酸殘基限制了α-螺旋及β-折疊結(jié)構(gòu)的形成。大量成群的疏水基和親水基非均勻排列，使β-酪蛋白具有典型去垢劑結(jié)構(gòu)頭部帶負電荷，尾部是不帶電荷的疏水基。
在有Ca2+存在和無Ca2+存在時，β-酪蛋白都具有一定突出的物化性質(zhì)與溫度相關(guān)的相互結(jié)合特性。在無Ca2+的情況下，β-酪蛋白在4℃時只有單體存在，而在室溫下可以形成大的多聚體(20～24個單體)，這種締合與去垢劑膠粒的情況相似，內(nèi)部都有疏水基存在，由包裹著的C-末端區(qū)組成，而外部是親水的N-末端，這樣分子間或分子內(nèi)部的疏水基的相互作用在整個締合過程中都起著重要的作用，而疏水基間的相互作用是隨溫度升高而加強的。按照Walstra和Jenness(1984)的觀點，去掉20個C-末端殘基會破壞β-酪蛋白的締合能力，這表明在β-酪蛋白的生產(chǎn)中可以利用這一特性。每摩爾β-酪蛋白可以結(jié)合5molCa2+，這與其磷酸基合量相一致。
以牛乳為基礎(chǔ)生產(chǎn)的嬰兒配方乳制品是母乳的重要替代物或補充物。然而牛乳和母乳蛋白質(zhì)在許多方面都存在著較大的差異相對于乳清蛋白，牛乳酪蛋白含量高得多，而牛乳中的酪蛋白主要是α-酪蛋白，而在母乳中卻以β-酪蛋白為主；在牛乳中酪蛋白與乳清蛋白的含量比為80∶20，而母乳的為40∶60，在牛乳清蛋白中含有β-乳球蛋白，而母乳中卻沒有。
研究表明，牛乳中α-酪蛋白的大量存在造成酪蛋白膠粒顆粒大，在嬰兒胃中呈堅硬的凝塊，而胃蛋白酶是為胃中的主要消化酶，其作用除水解蛋白質(zhì)之外，還可以凝固乳中的酪蛋白。胎兒在出生前雖然已經(jīng)有胃蛋白酶發(fā)育，但活性極低。研究者認為由于嬰幼兒胃內(nèi)酶的活性較低，蛋白質(zhì)的凝塊可能會影響其消化性。目前市售的嬰兒配方奶粉在蛋白質(zhì)組成上與母乳有較大的差異，不利于嬰幼兒的消化吸收。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種將乳及乳制品中主要成份-α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分分離的方法；本發(fā)明的另一目的是提供由上述方法分離的α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分在生產(chǎn)食品中，尤其是在生產(chǎn)乳制品中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施實現(xiàn)一種酪蛋白組分分離的方法，依次包括以下工藝步驟①將酪蛋白分散于堿性溶液中，離心脫脂、除雜；②在溶液中加入尿素使其濃度為1.0～4.0mol/L，用酸調(diào)節(jié)使溶液pH值至3.0～6.0或先用堿調(diào)節(jié)使溶液pH值至3.0～6.0，離心或過濾使沉淀與清液分離，再向沉淀中加入尿素使其濃度為1.0～4.0mol/L，反應(yīng)15～90分鐘，再調(diào)節(jié)溶液pH值至3.0～6.0；③將溶液離心或過濾得到沉淀和上清液；④將沉淀水洗、干燥得α-酪蛋白組分；⑤將上清液調(diào)pH值至5.5～7.0，再經(jīng)膜過濾，加水洗滌，濃縮干燥得β-酪蛋白組分。
所述酪蛋白為乳及乳制品的酪蛋白。
所述乳為牛乳、羊乳、馬乳；所述乳制品為干酪、干酪素、粗奶酪、奶粉、酸奶。
所述步驟①中先將乳酪蛋白配制成5％濃度的溶液，再用堿調(diào)節(jié)PH值至7.0～12.0，離心脫脂、除雜。
所述步驟①中的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水所述步驟②中的酸為鹽酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、丙酸、磷酸。
酪蛋白組分的應(yīng)用，是將α-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)成人食品中。
酪蛋白組分的應(yīng)用，是將α-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)成人乳制品、肉制品、飲料及糖果、保健食品中。
α-酪蛋白組分也可用作為乳化劑、穩(wěn)定劑應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。
α-酪蛋白組分也可以應(yīng)用在皮革、膠粘劑、造紙、印刷行業(yè)中。
酪蛋白組分的應(yīng)用，是將β-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)嬰幼兒食品中。
酪蛋白組分的應(yīng)用，是將β-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)嬰幼兒乳制品中。
β-酪蛋白組分可以在生產(chǎn)營養(yǎng)品、功能食品、日常食品、生活用品中作原料和添加劑。
β-酪蛋白組分也可以在生產(chǎn)中老年、孕婦、運動員、腸胃患者、臨床營養(yǎng)支持等特殊人群食品中應(yīng)用。
β-酪蛋白組分也可以并用于牙膏、化妝品、洗滌劑等生活用品中。
下面通過實驗對酪蛋白組分分離效果及各酪蛋白組分進行評價1、酪蛋白組分分離效果的評價為了比較原料酪蛋白的蛋白質(zhì)組成及本發(fā)明的分離效果，我們對牛乳酸沉酪蛋白、酪蛋白及酪蛋白分離組分α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分進行了SDS-PAGE電泳、光密度掃描，并用Scion Image軟件對掃描后的圖像進行處理和分析，結(jié)果見圖1從圖中可以看出酪蛋白中蛋白質(zhì)組成與牛乳酸沉酪蛋白基本一致；而從酪蛋白中分離得到α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分與前兩者有較大的差異。對α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分進行光密度掃描分析，計算出酪蛋白產(chǎn)品中α-酪蛋白和β-酪蛋白的相對百分含量如表1所示表1.由干酪素分離獲得的α-酪蛋白和β-酪蛋白的相對百分含量

*得率＝(產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量/酪蛋白中蛋白質(zhì)含量)×100％從表1可以看到，采用本方法分離制取的α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分的純度較高，而且蛋白質(zhì)損失較小，可以將大部分的酪蛋白組分分離出來。
2、酪蛋白分離后各組分的體外消化效果評價為了進一步說明原料酪蛋白的蛋白質(zhì)組成及本發(fā)明分離的α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分在嬰兒胃內(nèi)的凝塊情況，我們分別對牛乳酸沉酪蛋白、酪蛋白分離組分α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分進行了酸凝性試驗，即嬰兒體外消化模擬試驗在乳被攝入兩小時后，嬰兒胃內(nèi)的pH值保持在4～5，而成人胃內(nèi)的PH值則小于2。牛乳酪蛋白在此條件下會產(chǎn)生凝塊，而母乳一般不產(chǎn)生此現(xiàn)象。進行酸凝性試驗結(jié)果顯示在pH4.0的條件下，經(jīng)肉眼觀察，β-酪蛋白組分形成了細小、松軟的絮凝物；而α-酪蛋白組分則形成了顆粒較大、緊密且堅硬的沉淀(見圖2)。這一結(jié)果表明在嬰兒配方奶粉中使用β-酪蛋白組分更適合嬰兒胃的發(fā)育情況，會帶來胃的舒適感；而α-酪蛋白組分不適用于嬰兒配方奶粉的生產(chǎn)。
為了更好的比較α-酪蛋白組分、β-酪蛋白組分及牛乳酸沉酪蛋白在嬰兒體內(nèi)的消化情況，本試驗在體外模擬了嬰兒胃內(nèi)的環(huán)境(37℃，pH4.0)，并測定各酪蛋白組分的體外消化率。各酪蛋白體外消化率曲線如圖3所示由圖3可一看出隨著酶解時間的延長，蛋白質(zhì)的體外消化率在不斷增加。β-酪蛋白組分水解的初始速度和水解120分鐘以后的消化率要好于α-酪蛋白組分和牛乳酸沉酪蛋白，并且牛乳酸沉酪蛋白的消化性要略好于α-酪蛋白組分。即隨著樣品中α-酪蛋白含量的降低，β-酪蛋白含量的增加，樣品的體外消化性得到了提高。這是由于在37℃，pH4.0的條件下，α-酪蛋白組分形成的凝塊比β-酪蛋白組分的更緊密堅硬，因此減少了與胃蛋白酶的結(jié)合。
3、酪蛋白組分分離后乳化性的評價為了比較酪蛋白組分分離后其乳化性的改變，我們做了如下實驗比較其界面特性因為酪蛋白為中性兩性物質(zhì)，有著明顯的疏水區(qū)和親水區(qū)，有較好的乳化性和發(fā)泡性，為了比較α-酪蛋白、β-酪蛋白及酪蛋白的乳化情況，分別取10g的α-酪蛋白、β-酪蛋白及酪蛋白，加入堿液，使其完全溶解，升溫反應(yīng)30min，使得轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的鈉鹽。各量取7ml濃度為0.2mol/Lα-酪蛋白鈉鹽、β-酪蛋白鈉鹽和酪蛋白鈉鹽溶液，向其中均一次性加入7ml油脂，以12000r/min攪拌15min，然后將乳液移至10ml的離心管中，以3500r/min的速度離心20min后，取出離心管，離心管中的乳液從上往下依次將呈現(xiàn)油層、乳液層、水層三個清晰的界面，測出油層體積Vo(ml)，根據(jù)乳化能力＝(7-Vo)×100/7計算可得其乳化液穩(wěn)定性順序為α-酪蛋白鈉鹽＞酪蛋白鈉鹽＞β-酪蛋白鈉鹽，由此可見，α-酪蛋白鈉鹽的乳化性較酪蛋白鈉鹽的乳化性好，將酪蛋白進行組分分離可使酪蛋白的乳化性提高。
縱上所述，本發(fā)明具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明采用分級分離的方法，將乳及乳制品中酪蛋白主要成份-α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分分離制取，可以更好的發(fā)揮其自身的特性，避免其它幾種組分帶來的缺點，使酪蛋白的使用領(lǐng)域增大，實用性增強，使用量較未分離前的少，并且分離后各組分的物化特性及營養(yǎng)價值較未分離前高，有利于各種乳及乳制品的深加工和資源利用，提高產(chǎn)品的附加值。
2、本發(fā)明制取的α-酪蛋白組分和β-酪蛋白組分的純度高、得率高、顏色好、變性程度小、灰分低；專一性好、靶向型強。
3、本發(fā)明的分離工藝操作簡單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為酪蛋白及酪蛋白各組分的SDS-PAGE電泳圖1-牛乳酸沉酪蛋白2-酪蛋白3-α-酪蛋白組分4-β-酪蛋白組分圖2為酪蛋白組分在pH4.0時的酸凝塊3為各酪蛋白體外消化率曲線具體實施方式
實施例一將酪蛋白樣品，配制成5％濃度的溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至12.0，攪拌使酪蛋白完全溶解；在溶液中加入尿素使其濃度為1.0mol/L，再用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.0，離心得到沉淀和上清液；將所得沉淀水洗、噴霧干燥即得α-酪蛋白組分；將上清液調(diào)pH至6.0，用膜過濾，水洗，噴霧干燥即得β-酪蛋白組分。
實施例二將乳酪蛋白配成5％濃度的溶液，分散于pH值為9.0，用乙酸調(diào)節(jié)pH值至4.0，過濾得到沉淀，加入尿素使其濃度為4.0mol/L，調(diào)pH值至4.0，靜置，過濾將所得沉淀水洗，脫水干燥即得α-酪蛋白組分；將上清液調(diào)pH7.0，用膜過濾，水洗，噴霧干燥得β-酪蛋白組分。
實施例三將乳酪蛋白樣品，配制成5％濃度的溶液，用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值為7.0，攪拌使酪蛋白至完全溶解；離心、除雜，得到蛋白液；向蛋白液中加入尿素使其濃度為4.0mol/L，用乳酸調(diào)節(jié)pH值至3.0，靜置、離心得到沉淀和上清液。將所得沉淀進行水洗干燥，得到α-酪蛋白組分；將上清液調(diào)pH5.5，用膜過濾，水洗，得到沉淀干燥即為β-酪蛋白組分。
實施例四在加工肉制品時，加入本發(fā)明分離的α-酪蛋白(一般以0.5-1.0％的比例加入)，制成含α-酪蛋白的肉制品。該肉制品的硬度降低，持油性提高，富有彈性，改善了其質(zhì)地和口感。
實施例五在生產(chǎn)成人奶粉時，加入本發(fā)明分離的α-酪蛋白(一般以0.5-1.0％的比例加入)，采用制備奶粉的常規(guī)工藝制作成α-酪蛋白配方的奶粉。該配方奶粉較普通的奶粉分散性好、更具有營養(yǎng)價值。
實施例六在生產(chǎn)成人飲品時，加入本發(fā)明分離的α-酪蛋白(一般以0.5-1.0％的比例加入)，采用制備飲品的常規(guī)工藝制作成保健飲品。該保健飲品較普通飲品分散性好、營養(yǎng)價值高。
實施例七在加工嬰幼兒奶粉奶粉時，加入本發(fā)明制得的β-酪蛋白(一般以0.5-1.0％的比例加入)，采用制備奶粉的常規(guī)工藝制作成β-酪蛋白配方的嬰幼兒奶粉。β-酪蛋白配方的嬰幼兒奶粉較普通的嬰幼兒奶粉更具有營養(yǎng)價值，分散性好，消化吸收率高于市售奶粉，有利于嬰幼兒食用，其營養(yǎng)更接近母乳。
權(quán)利要求
1.一種酪蛋白組分分離的方法，依次包括以下工藝步驟①將酪蛋白分散于堿性溶液中，離心脫脂、除雜；②在溶液中加入尿素使其濃度為1.0～4.0mol/L，用酸調(diào)節(jié)使溶液pH值至3.0～6.0或先用堿調(diào)節(jié)使溶液pH值至3.0～6.0，離心或過濾使沉淀與清液分離，再向沉淀中加入尿素使其濃度為1.0～4.0mol/L，反應(yīng)15～90分鐘，再調(diào)節(jié)溶液pH值至3.0～6.0；③將溶液離心或過濾得到沉淀和上清液；④將沉淀水洗、干燥得α-酪蛋白組分；⑤將上清液調(diào)pH值至5.5～7.0，再經(jīng)膜過濾，加水洗滌，濃縮干燥得β-酪蛋白組分。
2.如權(quán)利要求1所述的酪蛋白組分分離的方法，其特征在于所述酪蛋白為乳及乳制品的酪蛋白。
3.如權(quán)利要求2所述的酪蛋白組分分離的方法，其特征在于所述乳為牛乳、羊乳、馬乳；所述乳制品為干酪、干酪素、粗奶酪、奶粉、酸奶。
4.如權(quán)利要求1所述的酪蛋白組分分離的方法，其特征在于所述步驟①中先將乳酪蛋白配制成5％濃度的溶液，再用堿調(diào)節(jié)PH值至7.0～12.0，離心脫脂、除雜。
5.如權(quán)利要求1-4所述的酪蛋白組分分離的方法，其特征在于所述步驟①中的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水。
6.如權(quán)利要求1-4所述的酪蛋白組分分離的方法，其特征在于所述步驟②中的酸為鹽酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、丙酸、磷酸。
7.一種酪蛋白組分的應(yīng)用，是將α-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)成人食品中。
8.如權(quán)利要求7所述的酪蛋白組分的應(yīng)用，是將α-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)成人乳制品、肉制品、飲料等中。
9.一種酪蛋白組分的應(yīng)用，是將β-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)嬰幼兒食品中。
10.如權(quán)利要求9所述的酪蛋白組分的應(yīng)用，是將β-酪蛋白組分應(yīng)用在生產(chǎn)嬰幼兒乳制品中。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種采用分級分離的方法將乳及乳制品中的主要成份－α－酪蛋白組分和β－酪蛋白組分分離制取，使α－酪蛋白組分和β－酪蛋白組分可以更好的發(fā)揮其自身的特性，避免其它幾種組分帶來的缺點，使酪蛋白的使用領(lǐng)域增大，實用性增強，使用量較未分離前的少，并有利于各種乳及乳制品的深加工和資源利用，提高產(chǎn)品的附加值。本發(fā)明制取的α－和β－酪蛋白組分其純度高、得率高、顏色好、變性程度小、灰分低，專一性好、靶向型強；同時本發(fā)明工藝簡單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A23L1/305GK1763079SQ20051009624
公開日2006年4月26日 申請日期2005年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月19日
發(fā)明者陸曉民, 郭順堂 申請人:陸曉民