專利名稱：一種葛仙米藻種的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微型藻類，更具體涉及葛仙米藻種的制備方法。
背景技術(shù)：
念珠藻是屬于藍藻門Cyanophyta藍藻綱Cyanophyceae段殖藻目Hormogonales念珠藻科Nostocaceae的一類分布地域廣、生態(tài)環(huán)境復(fù)雜、形態(tài)結(jié)構(gòu)多樣的藻類類群，其植物體膠狀或革狀，成熟植物體有球形、葉狀、絲狀、泡狀等多種形狀，中空或?qū)嵭模瑺I漂浮或著生生長。其原植體由許多直徑數(shù)微米的纖細藻絲集結(jié)成群體，群體形狀因“種”而異，如發(fā)菜(Nostoc flageliformeKütz.)、地木耳(Nostoc commune)、葛仙米(Nostoc sphaeroides)在新鮮狀態(tài)下分別呈頭發(fā)狀、扁平耳狀或小球狀，干燥后程度不等地有所縮變，均具有豐富的營養(yǎng)價值，在《本草綱目》、《本草綱目拾遺》、《陜西中草藥》、《梧州府志》、《全國中草藥匯編》等醫(yī)書中已有記載。念珠藻不僅在自然界普遍發(fā)生，而且自古以來都是我國民間的傳統(tǒng)食物；其中葛仙米，學(xué)名擬球狀念珠藻，具有食療、保健、滋補等功效，營養(yǎng)價值高，是典型的高蛋白、低脂肪、低熱值的綠色保健食品；同時又具有藥性，常食用能清熱解毒，涼血明目，促進新陳代謝；葛仙米的天然生產(chǎn)狀況已經(jīng)衰落，需求和生產(chǎn)產(chǎn)量的矛盾不可回避。隨著人類活動的加劇、旅游業(yè)的發(fā)展、以及過度的采集給生態(tài)和環(huán)境造成的破壞，使得自然資源日趨萎縮，葛仙米的現(xiàn)天然年產(chǎn)量不足一噸，由于其生長地逐漸縮小，產(chǎn)量在日趨減少。葛仙米在國內(nèi)外市場很受歡迎，而現(xiàn)有的產(chǎn)量遠遠滿足不了需求，有必要人工養(yǎng)殖葛仙米，以提高其產(chǎn)量，滿足人們物質(zhì)生活水平提高的需求。
中國專利文獻一種培養(yǎng)葛仙米的方法，申請?zhí)?9120005.5。該發(fā)明是一種培養(yǎng)葛仙米的方法，具體藻種制備中采用的方法是用氨芐青霉素除菌，然后純培養(yǎng)并誘導(dǎo)藻殖段，最后對藻殖段進行培養(yǎng)，獲得藻種。該方法操作復(fù)雜，需抗生素進行無菌純化，藻種制備周期長，形成藻絲的數(shù)量相對較少，難以適應(yīng)大規(guī)模培養(yǎng)藻種的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葛仙米藻種的制備方法，該方法通過選取藻種、清洗殺菌、勻漿、接種培養(yǎng)，得到大量的葛仙米藻種，本發(fā)明操作簡單，效率高，周期短，適合葛仙米規(guī)大規(guī)模培養(yǎng)藻種的需要。
為了達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種葛仙米藻種的制備方法按下列步驟順序進行1、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；2、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；3、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；在培養(yǎng)液中加入其重量0.8-1.5％的瓊脂，在滅菌鍋滅菌10-20分鐘，成固體培養(yǎng)基；
4、將絲狀藻漿接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，培養(yǎng)8-20天；5、然后再接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)10-15天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；6、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
一種葛仙米藻種的制備方法按下列步驟順序進行1、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；2、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；3、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；
4、將接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)15-25天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；5、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(1)操作過程簡單，(2)不需要抗生素進行無菌純化，(3)藻種制備周期短，(4)種藻群體全部轉(zhuǎn)化為藻絲，因此形成的藻種數(shù)量多，適合大規(guī)模藻種制備的需要。
具體實施例方式一種葛仙米藻種的制備方法按下列步驟順序進行1、采集種藻種藻的獲得有兩種方式，(1)野生葛仙米群體，(2)人工培養(yǎng)的葛仙米群體；對于野生的葛仙米，如果采集時間距制種時間在2天以上，可先將其晾干，長期保存，在制種之前用培養(yǎng)液充分浸泡使其復(fù)水成球狀；對于人工培養(yǎng)的葛仙米群體，可在制種前采集，采集時最好處于葛仙米群體生長的對數(shù)期，選用表面光澤好、顏色墨黑、生長速度快、群體韌性好的藻體。
2、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次。
3、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿。
4、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；在培養(yǎng)液中加入其重量0.8-1.5％的瓊脂，在滅菌鍋滅菌10-20分鐘，成固體培養(yǎng)基。
5、將絲狀藻漿接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，培養(yǎng)8-20天。
6、然后再接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)10-15天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種。
或者將步驟5和6合并為將絲狀藻漿直接接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)15-25天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種。
7、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
權(quán)利要求
1.一種葛仙米藻種的制備方法，其特征在于，該方法按下列步驟順序進行(1)、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；(2)、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；(3)、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；在培養(yǎng)液中加入其重量0.8-1.5％的瓊脂，在滅菌鍋滅菌10-20分鐘，成固體培養(yǎng)基；(4)、將絲狀藻漿接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，培養(yǎng)8-20天；(5)、然后再接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)10-15天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；(6)、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葛仙米藻種的制備方法，其特征在于，該方法按下列步驟順序進行(1)、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；(2)、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；(3)、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；(4)、將接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)15-25天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；(5)、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葛仙米藻種的制備方法，該方法通過選取藻種、清洗殺菌、勻漿、接種培養(yǎng)，得到大量的葛仙米藻種。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點操作簡單、不需要抗生素進行無菌純化、藻種制備周期短、效率高、因此形成的藻種數(shù)量多，適合大規(guī)模藻種制備的需要。
文檔編號C12N1/12GK1544611SQ200310111369
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月11日
發(fā)明者鄧中洋, 胡征宇, 胡強 申請人:中國科學(xué)院水生生物研究所