一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基 及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 胳盤刺（學(xué)名：Alhagi sparsifolia Shap.)屬豆科、落葉草本，主要枝上多刺，葉 長(zhǎng)圓形，花粉紅色，6月開花，8月最盛，每朵花可開放20余天，結(jié)莢果，總狀花序，根系一般 長(zhǎng)達(dá)20米。從沙漠和戈壁深處吸取地下水份和營養(yǎng)，是一種自然生長(zhǎng)的耐旱植物，因?yàn)檫@ 種植物莖上長(zhǎng)著刺狀的很堅(jiān)硬的小綠葉，故叫駱駝刺，是草本植物，是戈壁灘和沙漠中駱駝 唯一能吃的賴以生存的草，故又名駱駝草，主要分布在內(nèi)陸干旱地區(qū)。
[0003] 駱駝刺根系十分發(fā)達(dá)，根系一般長(zhǎng)達(dá)20米，是地表上莖葉半徑的2倍甚至3倍， 這在植物界是極其罕見的。因?yàn)槠涮厥獾纳硖匦?，在分化培養(yǎng)基中如果加入常用生長(zhǎng)素 吲哚乙酸在低濃度無法快速促進(jìn)莖葉分化，在培養(yǎng)基的時(shí)間過長(zhǎng)容易感染細(xì)菌導(dǎo)致培養(yǎng)失 敗，如果加入常用生長(zhǎng)素吲哚乙酸的濃度過高，又抑制了根系的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致組織培養(yǎng)的 駱駝刺根系發(fā)育不全，因此需要組織培養(yǎng)駱駝刺必須解決其快速分化問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基及其 制備方法。
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)： 一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基，所述的分化培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基中加入 如下組份：特制固化劑、紅糖、6-芐氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四環(huán)素、活性炭、植物提取物、 木瓜汁配制而成，在分化培養(yǎng)基中的濃度分別為：特制固化劑15-18g/L、紅糖20-25g/L、 四環(huán)素25-45mg/L、6-芐氨基腺嘌呤2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、植物提取物 60-90mg/L、木瓜汁 60-80g/L、活性炭 3-4g/L。 進(jìn)一步的，所述的特制固化劑：包括海藻酸鈉和紫薯提取物，其制備方法為，將新鮮的 紫薯進(jìn)行壓榨，收集漿汁，然后將漿汁真空干燥獲得凝固的塊狀物，再將塊狀物粉碎至粒徑 150-300目的粉狀，即為紫薯提取物；所述的特制固化劑為海藻酸鈉與紫薯提取物質(zhì)量比 2:3〇
[0006] 更進(jìn)一步的，植物提取物提取于大葉榕氣生根，所述的植物提取物的提取方法為 收集大葉榕氣生根，放入攪拌機(jī)，并按照質(zhì)量體積比1: lkg/L添入乙酸-乙醇水溶液并進(jìn)行 組織破碎，然后將破碎液過300目濾布后收集濾液，再將濾液真空干燥后收集獲得的粉末 即為所述的植物提取物，其中所述的乙酸-乙醇水溶液為質(zhì)量濃度為45%的乙醇和質(zhì)量濃 度為12%的乙酸按照1:2的體積比混合。
[0007] -種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基的制備方法，具體操作為：向1/2MS培養(yǎng) 基中加入特制固化劑、紅糖、6-芐氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四環(huán)素、活性炭；在分化培養(yǎng)基 中的濃度分別為特制固化劑15-18g/L、紅糖20-25g/L、四環(huán)素25-45mg/L、6-芐氨基腺嘌 呤 2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、活性炭 3-4g/L、植物提取物 60-90mg/L，并將其置 于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，滅菌條件為113攝氏度，壓力103. 42kPa，時(shí)長(zhǎng)25-35min，最后再 將木瓜汁加入其中。
[0008] 所述木瓜汁在添加前需要經(jīng)過68°C、時(shí)長(zhǎng)30min的加熱滅菌，加熱后將其溫度急 速冷卻到1-3°C，保持時(shí)長(zhǎng)為5-10min，然后即可按照濃度為60-80g/L添入分化培養(yǎng)基中。
[0009] 以上所述的制備過程均在無菌環(huán)境中操作。
[0010] 本發(fā)明具有如下有益效果： 本發(fā)明針對(duì)駱駝刺特殊的生長(zhǎng)和生理特性，特選海藻酸鈉和紫薯提取物制備的固化 劑。
[0011] 本發(fā)明進(jìn)一步在分化培養(yǎng)基中添加四環(huán)素，在培養(yǎng)過程中，可進(jìn)一步對(duì)外植體的 內(nèi)生菌產(chǎn)生明顯的抑制作用，可減少組培過程中的污染，而且還起到了促進(jìn)腋芽萌發(fā)，縮短 萌動(dòng)時(shí)間的效果。
[0012] 本發(fā)明進(jìn)一步在分化培養(yǎng)基中添加植物提取物，提取于大葉榕氣生根的提取物配 合4-氯-IAA可有效均衡駱駝刺腋芽、根和莖的生長(zhǎng)，而且對(duì)腋芽萌發(fā)和芽體發(fā)育有明顯的 促進(jìn)作用。
[0013] 應(yīng)用本發(fā)明的分化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)駱駝刺，成活率為98-99%，染菌率為 1. 7-2. 1%，培養(yǎng)基褐化程度較MS培養(yǎng)基低12-16%，萌動(dòng)時(shí)間大約縮短了 20-43%。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0015] 實(shí)施例： 本發(fā)明選用的1/2MS培養(yǎng)基成分及其用量(用量是指在1升1/2MS培養(yǎng)基中的用量） 如下表1 :

然后在1/2MS培養(yǎng)基中加入如下組份：特制固化劑、紅糖、6-芐氨基腺嘌呤、 4-氯-IAA、四環(huán)素、活性炭、植物提取物、木瓜汁配制而成，在分化培養(yǎng)基中的濃度分別為： 特制固化劑15_18g/L、紅糖20-25g/L、四環(huán)素25-45mg/L、6-芐氨基腺嘌呤2. 6-2. 8mg/L、 4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、植物提取物60-90mg/L、木瓜汁60-80g/L、活性炭3-4g/L。各組份 添加濃度優(yōu)選為特制固化劑16g/L、紅糖22g/L、四環(huán)素35mg/L、6-芐氨基腺嘌呤2. 7mg/L、 4-氯-IAA 0. 45mg/L、植物提取物75mg/L、木瓜汁70g/L、活性炭4g/L。所述的制備過程均 在無菌環(huán)境中操作。
[0016] 所述的特制固化劑：包括海藻酸鈉和紫薯提取物，其制備方法為，將新鮮的紫 薯進(jìn)行壓榨，收集漿汁，然后將漿汁真空干燥獲得凝固的塊狀物，再將塊狀物粉碎至粒徑 150-300目的粉狀，即為紫薯提取物；所述的特制固化劑為海藻酸鈉與紫薯提取物質(zhì)量比 2:3〇
[0017] 所述的植物提取物提取于大葉榕氣生根，所述的植物提取物的提取方法為收集大 葉榕氣生根，放入攪拌機(jī)，并按照質(zhì)量體積比1: lkg/L添入乙酸-乙醇水溶液并進(jìn)行組織破 碎，然后將破碎液過300目濾布后收集濾液，再將濾液真空干燥后收集獲得的粉末即為所 述的植物提取物，其中所述的乙酸-乙醇水溶液為質(zhì)量濃度為45%的乙醇和質(zhì)量濃度為12% 的乙酸按照1:2的體積比混合。
[0018] 所述木瓜汁在添加前需要經(jīng)過68°C、時(shí)長(zhǎng)30min的加熱滅菌，加熱后將其溫度急 速冷卻到1-3°C，保持時(shí)長(zhǎng)為5-10min，然后即可按照濃度為60-80g/L添入分化培養(yǎng)基中。
[0019] 實(shí)驗(yàn)例： 按照下表2的實(shí)驗(yàn)思路對(duì)本發(fā)明進(jìn)行效果驗(yàn)證，均以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其中按照實(shí) 施例的數(shù)據(jù)要求選擇性的添入如下表的一種或多種物質(zhì)，其中各組IAA添加濃度與實(shí)施例 要就的4-氯-IAA等同。
[0020] 表 2 :

每組選取五十個(gè)外植體進(jìn)行組培實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)萌動(dòng)時(shí)間數(shù)據(jù)，以平均數(shù)制備下表3: 表3 :(單位：天）
經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，植物提取物配合4-氯-IAA可以快速誘導(dǎo)分化，也因?yàn)闀r(shí)間縮短，被感染 少，成活率高，配合木瓜提取物、四環(huán)素等效果更佳。發(fā)明人為了確保準(zhǔn)確又單獨(dú)針將IAA 的不同濃度以及植物提取物配合作用下的不同濃度進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)萌動(dòng)時(shí)間在15-21之 間波動(dòng)，和本發(fā)明相比較，本發(fā)明培養(yǎng)基的萌動(dòng)時(shí)間大約縮短了 20-43%。
[0021] 以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能 因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制，但凡采用等同替換或等效變換的形式所獲得的技 術(shù)方案，均應(yīng)落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基，其特征在于所述的分化培養(yǎng)基為1/2MS 培養(yǎng)基中加入如下組份：特制固化劑、紅糖、6-芐氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四環(huán)素、活性炭、 植物提取物、木瓜汁配制而成，在分化培養(yǎng)基中的濃度分別為：特制固化劑15-18g/L、紅糖 20-25g/L、四環(huán)素 25-45mg/L、6-芐氨基腺嘌呤 2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、植 物提取物60-90mg/L、木瓜汁60-80g/L、活性炭3-4g/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基，其特征在于所述的 特制固化劑：包括海藻酸鈉和紫薯提取物，其制備方法為，將新鮮的紫薯進(jìn)行壓榨，收集漿 汁，然后將漿汁真空干燥獲得凝固的塊狀物，再將塊狀物粉碎至粒徑150-300目的粉狀，即 為紫薯提取物；所述的特制固化劑為海藻酸鈉與紫薯提取物質(zhì)量比2:3。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基，其特征在于植物提 取物提取于大葉榕氣生根，所述的植物提取物的提取方法為收集大葉榕氣生根，放入攪拌 機(jī)，并按照質(zhì)量體積比I: lkg/L添入乙酸-乙醇水溶液并進(jìn)行組織破碎，然后將破碎液過 300目濾布后收集濾液，再將濾液真空干燥后收集獲得的粉末即為所述的植物提取物，其中 所述的乙酸-乙醇水溶液為質(zhì)量濃度為45%的乙醇和質(zhì)量濃度為12%的乙酸按照1:2的體 積比混合。4. 如權(quán)利要求3所述的一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基的制備方法，其特征 在于向1/2MS培養(yǎng)基中加入特制固化劑、紅糖、6-芐氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四環(huán)素、活性 炭；在分化培養(yǎng)基中的濃度分別為特制固化劑15_18g/L、紅糖20-25g/L、四環(huán)素25-45mg/ L、6-芐氨基腺嘌呤2. 6-2. 8mg/L、4-氯-IAA 0? 4-0. 5mg/L、活性炭3-4g/L、植物提取物 60-90mg/L，并將其置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，滅菌條件為113攝氏度，壓力103. 42kPa， 時(shí)長(zhǎng)25-35min，最后再將木瓜汁加入其中。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基的制備方法，其特征 在于所述木瓜汁在添加前需要經(jīng)過68°C、時(shí)長(zhǎng)30min的加熱滅菌，加熱后將其溫度急速冷 卻到1-3°C，保持時(shí)長(zhǎng)為5-10min，然后即可按照濃度為60-80g/L添入分化培養(yǎng)基中。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基的制備方法，其特征 在于：所述的制備過程均在無菌環(huán)境中操作。
【專利摘要】本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種駱駝刺組織培養(yǎng)的快速分化培養(yǎng)基。所述的分化培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基中加入如下組份：特制固化劑、紅糖、6-芐氨基腺嘌呤、4-氯-IAA、四環(huán)素、活性炭、植物提取物、木瓜汁配制而成。本發(fā)明針對(duì)駱駝刺特殊的生長(zhǎng)和生理特性，特選海藻酸鈉和紫薯提取物制備的固化劑，在培養(yǎng)基中添加四環(huán)素，可減少組培過程中的污染，而且還起到了促進(jìn)腋芽萌發(fā)，縮短萌動(dòng)時(shí)間的效果。提取于大葉榕氣生根的提取物配合4-氯-IAA可對(duì)腋芽萌發(fā)和芽體發(fā)育有明顯的促進(jìn)作用。本培養(yǎng)基成活率為98-99%，染菌率為1.7-2.1%，褐化程度較MS培養(yǎng)基低12-16%，萌動(dòng)時(shí)間約縮短了20-43%。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105052739
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510462668
【發(fā)明人】徐偉明
【申請(qǐng)人】徐偉明
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年8月1日