本發(fā)明涉及一種包括草本萃取物的生物刺激素混合物(bio-stimulantcomposition)及其制備方法。
背景技術：
：植物生長同時由內部因素和外部因素決定。內部機制源自植物的基因組成，影響植物生長的程度和時間。這種內部機制由在植物細胞內部、細胞之間或植物本身周圍傳送的各種類型的信號調節(jié)。外部因素與植物周圍的鄰近環(huán)境直接相關。這些外部因素影響植物的生長并且包括水、養(yǎng)料、溫度、光照、肥料、農(nóng)藥、生物刺激素等等。外部環(huán)境能夠通過與土壤中的水和養(yǎng)料供應的有效性相關的兩種最重要的因素對內部機制促進植物生長和發(fā)育的程度施加限制。細胞擴增與水供應直接相關，并任何的不足導致植物矮小。植物的生化過程需要礦物養(yǎng)分。當養(yǎng)分供應不足時，生長就不旺盛，或在情況嚴重時會完全停止生長。植物生長需要的養(yǎng)分包括主要的常量營養(yǎng)元素，如氮(N)、磷(P)和鉀(K)；次要的常量營養(yǎng)元素，如鈣(Ca)、硫(S)和鎂(Mg)；和微量營養(yǎng)元素或微量無機物，如硼(B)、氯(Cl)、錳(Mn)、鐵(Fe)、鋅(Zn)、銅(Cu)、鉬(Mo)和硒(Se)。理想的溫度也是植物生長所必須的。植物生長所需要的溫度范圍根據(jù)物種而定，但大多數(shù)植物在低溫下(即0℃到10℃)生長緩慢，而且有些熱帶植物在冰點以上的低溫下會受到傷害甚至死亡。光照對植物生長也很重要，因為光照驅動光合作用的過程。植物生物刺激素是不同于肥料的一種成分，施用于葉子上或添加在土壤中影響植物生長和(或)新陳代謝。植物生物刺激素一般屬于以下類別物質之一，即含激素的制品、以植物萃取物為基礎的制品、以微量營養(yǎng)元素為基礎的制品、含氨基酸的制品和含腐殖酸的制品，但又不僅僅嚴格局限于這些類別。由于植物生物刺激素能夠提高植物生長速度、增強耐受性、提高光合速率以及增強抗病性，所以商業(yè)化中經(jīng)常被用于作物種植。植物生物刺激素一般被認為通過上調或下調植物激素而發(fā)揮作用。盡管存在很多肥料和植物生物刺激素的商業(yè)化可利益性，但仍然持續(xù)存在對能夠滿足各種需要的改進型制品的需求。因此，用于改善植物生長反應和發(fā)育的新的制品和方法是需要的。錫蘭鴨嘴花(Adhatodazeylanica)，又叫鴨嘴花(Adhatodavasica、MalabarNut、Adulsa、Adhatoda、Vasa、Vasaka、Vasica)屬爵床科，是一種小型常綠灌木，主要生長在印度并且世界各地都有，在印度傳統(tǒng)草醫(yī)學(Ayurveda)中有大量應用。這種草本植物除用于印度草醫(yī)學外，還用于尤那尼醫(yī)學(Unani)中治療各種疾病和失調。鴨嘴花在治療呼吸道疾病的效果非常著名。已知鴨嘴花的葉子對呼吸系統(tǒng)具有刺激作用。鴨嘴花具有抗痙攣和祛痰作用，幾百年來一直被非常成功地用于治療哮喘、慢性支氣管炎和其它呼吸道疾病。對錫蘭鴨嘴花各組成部分的植物化學研究顯示其含有生物堿、植物甾醇、多酚和糖苷等主要類別的化合物。它的主要成分是喹唑啉類生物堿(quinazolinealkaloid)，而鴨嘴花堿(Vasicine)是其主要生物堿。在農(nóng)業(yè)上，錫蘭鴨嘴花樹皮、葉子和花的萃取物還一直被用以殺滅葉子上的紅蜘蛛和卵，在這方面這種植物也顯示了一定的效果。然而，尚未有關于把錫蘭鴨嘴花用作生物刺激素的報告。生物刺激素可以被定義為是一種既非植物養(yǎng)料亦非農(nóng)藥、但對植物健康有積極作用的物質。換言之，生物刺激素是一種少量施用時能促進植物生長和發(fā)育而獲得施用傳統(tǒng)植物養(yǎng)料不能獲得的生長發(fā)育效果的有機材料。辣木(又名辣根樹或鼓槌樹)是一種原生長于印度喜馬拉雅地區(qū)的植物。這種植物屬辣木科，是一種灌木和小型落葉樹，高2.5米至10米。成熟時，果實呈褐色，內有籽10-15粒(Vlahof等人，2002年)。這種植物通常生長在非洲、中東、東南亞、太平洋群島、加勒比群島和南美等地，而且如今在臺灣和中國也廣泛栽種。在印度，辣木的葉子和果實原來被用作蔬菜，根在烹調中被用作辣根的替代品。據(jù)報告，這種植物還含有各種氨基酸、脂肪酸、維生素和養(yǎng)分(Nesamani，1999年)。辣木樹，例如葉子、花、果實和樹皮的成分據(jù)傳被用作治療炎癥、麻痹和高血壓的草藥。而且，許多報告指出，辣木具有很強的人類的抗炎性能(Ezeamuzle等人，1996年)、保肝性能(Pari和Kumar，2002年)、抗高血壓性能(Faizi等人，1995年)和抗癌性能(Murakami等人，1998年)。另外，其種子有很強的凝固和抗微生物性能(Eilert等人，1981年)。辣木籽油具有與橄欖油相當?shù)奈锢硇再|和化學性質，并且含有大量維生素E(Tsaknis等人，1999年)。葉子萃取物被發(fā)現(xiàn)在老鼠中能夠調節(jié)甲狀腺狀態(tài)和膽固醇水平(Tahiliani等人，2000年；Ghasi，2000年)。因此，它可以被用于開發(fā)出一種治療高膽固醇的有用的制劑。對辣木各組成部分的篩選顯示其中存在有各種植物化學物質，主要是類黃酮。在芝麻菜(Erucavesicariasubsp.sativa)中作為促進生長、生物化學和激素含量的生物刺激素的辣木萃取物的用途被詳細記載(Int.J.PlantPhysiol.Biochem.Vol.5(3),pp.42-49，2013年9月)。海草、海藻和海藻衍生制品由于它們含有許多刺激植物生長的化合物，而被作為一種增強劑廣泛應用于農(nóng)業(yè)中。存在于紅藻細胞壁中的半乳聚糖、角叉藻聚糖和瓊脂被認為有助于種子萌發(fā)、生根和保持土壤中的水分。而且，海藻萃取物是存在于金屬蛋白活性部位的常量營養(yǎng)元素(氮、磷、鉀、鈣、硫、鎂等)和微量營養(yǎng)元素(鐵、錳、鈷、銅等)的豐富來源。從錫蘭鴨嘴花萃取物中提取鴨嘴花堿的各種方法在本領域是已知的。根據(jù)一種現(xiàn)有技術過程，鴨嘴花堿可以從錫蘭鴨嘴花的葉子中離析出來，通過用95％的酒精萃取錫蘭鴨嘴花的葉子，用2％的H2SO4水溶液處理濃縮的酒精萃取物，用氨水堿化酸性水溶液并用三氯甲烷萃取，濃縮三氯甲烷提供的萃取物，接著把該萃取物再用2％的H2SO4水溶液溶解，并重復用氨水堿化的過程，然后再用三氯甲烷提取(C.K.Atal.“ChemistryandPharmacologyofVasicine—Anewoxytoxicandabortifacient.”Raj.BandhuInd.Co.,NewDelhi,1980)。這種方法的缺陷在于，使用像H2SO4這樣的強無機酸進行提取造成大量的鴨嘴花堿降解，并且兩次重復這種無機酸處理過程使降解更加嚴重。在另一種現(xiàn)有技術中，鴨嘴花堿通過以下方法從錫蘭鴨嘴花的葉子中離析出來(D.R.Mehta,J.S.NaravaneandR.M.Desai.Vasicinone.ABronchodilatorPrinciplefromAdhatodaVasicaNees(N.O.Acanthaceae)J.Org.chem.28,445-448,1963)。葉子用90％的酒精分餾(reflux)，當溶劑蒸發(fā)后，因此獲得通過熱蒸餾水進行萃取的酒精萃取物并對水合萃取物進行過濾。濾出液用三氯甲烷進行萃取以去除色素，然后用5％的苛性鈉將其堿性化，之后再用三氯甲烷進行萃取。用5％的鹽酸對化合的三氯甲烷萃取物進行萃取，然后用氨水將酸溶液堿性化，之后再用三氯甲烷進行萃取。重復此過程兩次后，把最終的三氯甲烷萃取物濃縮以提供一種粗制總生物堿，其中以鴨嘴花堿鹽酸鹽的形式析出鴨嘴花堿(產(chǎn)量：2克)。這種方法的第一個缺陷在于用熱水對酒精萃取物進行萃取有不利影響，而且還有其它限制，比如：(a)鴨嘴花堿不能從其水溶液中進行定量萃取；(b)熱水萃取會將鴨嘴花堿轉化為它的自動氧化物鴨嘴花堿酮。這種方法的第二個缺陷是使用5％的像鹽酸這樣的無機酸進行萃取有不利影響，而且該過程重復了兩次。使用強無機酸造成大量鴨嘴花堿降解，從而導致鴨嘴花堿的產(chǎn)量比較少。US6676976B2公開了一種從錫蘭鴨嘴花生產(chǎn)鴨嘴花堿的改進的方法，包括步驟如下：在室溫下用酒精萃取物對干的、粉碎的葉子進行萃??；濃縮酒精萃取物獲得濃縮的萃取物；用含水有機酸處理和攪拌萃取物2-24小時；用有機溶劑萃取這種有機溶液；經(jīng)有機層與酸性水溶液層分離；用堿基堿化這種酸性水溶液；用有機溶劑對這種堿化的溶液進行萃取；分離有機層，干燥并過濾，蒸發(fā)有機層以獲得非結晶殘余物；用一種有機溶劑或用多種有機溶劑的混合物處理這種非結晶殘余物以獲得鴨嘴花堿。即使這種方法也存在使用腐蝕酸和析出量少的缺陷。鑒于以上討論，需要一種以有效的方式從錫蘭鴨嘴花植物中提取鴨嘴花堿的方法。同時，還需要探討把含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物用作促進植物生長的生物刺激素，并確定其應用于農(nóng)業(yè)的合適劑型。技術實現(xiàn)要素：根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，提供一種生物刺激素混合物，其包括含有鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和多種賦形劑，其中含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物含量范圍為0.05-50.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述生物刺激素混合物中的賦形劑包括載體、著色劑和粘合劑，并且且上述生物刺激素混合物呈顆粒狀。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述顆粒狀的生物刺激素混合物可替換地包括從辣木萃取物，上述辣木萃取物的含量范圍為0.05-1.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述顆粒狀生物刺激素混合物可替換地包括海藻萃取物，上述海藻萃取物含量為0.01-1.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述載體選自由石英砂、膨潤土及它們的組合物所組成組，其中上述載體的含量范圍為48.50-98.35％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述著色劑含量為0.01-0.40％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述粘合劑選自由蜂蠟、石蠟、植物蠟及它們的組合物所組成的組，并且上述粘合劑的含量范圍為0.05-4.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述賦形劑選自由非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、填充劑、溶劑及它們的組合物所組成的組，上述混合物為葉面施用或滴灌施用的液體的形態(tài)。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述非離子表面活性劑選自由聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇月桂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇三油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯及它們的組合物所組成組，上述非離子表面活性劑的含量范圍為45.00-80.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述穩(wěn)定劑選自由環(huán)氧植物油、乙氧基植物油、氫化植物油及它們的組合物所組成組，上述穩(wěn)定劑的含量為0.00-5.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述填充劑選自由葵花油、芝麻油、蓖麻油及它們的組合物所組成的組，含量為3.00-50.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，上述溶劑選自由丙醇、丁醇、異丙醇、乙醇及它們的組合物所組成的組，并且含量為15.00-25.00％w/w。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，提供一種制備顆粒狀生物刺激素混合物的方法，包括以下步驟：(a)在載體材料涂覆一層粘合劑以獲得第一顆粒狀混合物；(b)將含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和著色劑，和可選的辣木萃取物或海藻萃取物涂覆在第一顆粒狀混合物上并干燥以獲得第二顆粒狀混合物；和(c)在第二顆粒狀混合物涂覆一層粘合劑并干燥以制成顆粒狀生物刺激素混合物。附圖說明圖1是制備錫蘭鴨嘴花初級的萃取物的流程圖。具體實施方式下面討論本發(fā)明的一些有代表性的實施例。本發(fā)明在更廣的方面不限于這些具體細節(jié)和代表性的方法。在本部分結合提供的實施例和方法示出了例子。本發(fā)明根據(jù)其各個方面進行了明確說明，并在本發(fā)明說明書所附的權利要求書中明確提出了權利要求。需要注意的是，在本發(fā)明說明書和所附的權利要求書中，“一(個、件、種…)”、“某(個、件、種…)”和“這(個、件、種…)”、“那(個、件、種…)”所表述的單數(shù)對象亦包括復數(shù)對象，除非上下文中另有明確說明。例如，參考含有“一種化合物”的組合物包括由兩種或兩種以上化合物組成的混合物。還應注意的是，“或”字在含義上一般包括“和/或”，除非文中另有明確說明。具有單位w/v的比率，表示重量(以克計量)與體積(以毫升計量)的比。具有單位v/v的比率，表示體積(以體積的單位計量)之間的比。所有其它比率表示重量(以重量的單位計量)的比。以符號“％w/w”或“％”表示的各種的數(shù)量為總溶液或混合物的重量百分比，除非另有說明。所有引用的參考資料的全部內容收錄于此作為參考。對任何參考資料的引用并非承認對作為在本專利主張發(fā)明之前的現(xiàn)有技術的可用性的確定。本發(fā)明關于其產(chǎn)品和方法的方面詳述如下。本發(fā)明涉及一種包括草本萃取物和多種賦形劑的生物刺激素混合物及其制備方法。生物刺激素混合物可以配制成顆粒狀，包含選自由含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物、辣木萃取物和海藻萃取物所組成的組的萃取物和其它賦形劑，每種萃取物可以單獨使用或組合使用。這里使用的術語“生物刺激素”是指除養(yǎng)料和農(nóng)藥之外的物質和材料，當這種物質和材料施用于植物時，種子或特定制劑中的生長基質能夠通過為植物的生長、發(fā)育和/或應激反應提供潛在益處而改進植物的生理過程。顆粒狀的生物刺激素混合物包括：含量范圍為0.05-50.00％的含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物、含量范圍為0.05-1.00％的辣木萃取物和含量范圍為0.01-1.00％的海藻萃取物。這種顆粒狀生物刺激素混合物還包含親脂粘合劑以將活性物質附著在載體上。上述粘合劑的含量范圍為0.05-4.00％，選自由蜂蠟、石蠟、植物蠟等所組成的組，它們中的每一個可以單獨使用或組合使用。這種顆粒狀生物刺激素混合物進一步包括載體和著色劑。生物刺激素混合物可以作為顆粒劑使用，施用于土壤特別有用。顆粒劑含有分散于載體的生物刺激素，該載體包括石英砂或類似物質，如膨潤土。這種制劑通常以以下方法制備：把生物刺激素混合物溶入合適的溶劑，并將其施加到預制具有合適粒度的顆粒狀載體上。本發(fā)明使用的載體是石英砂或膨潤土，其中載體的含量范圍為48.50-98.35％。這里使用的術語“著色劑”是指添加在混合物中造成顏色改變的物質。著色劑可以是顏料、色素或有色化學品。它們通常被添加到混合物中以使混合物在視覺上對消費者有吸引力。上述著色劑的含量范圍為0.01-0.40％。作為本發(fā)明另一個實施例的生物刺激素混合物可以配制成用于葉面施用或滴灌施用的液體，包括：(a)含有鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物；和(b)至少一種選自由非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、填充劑、溶劑及它們的組合物所組成的組的賦形劑。這種液體生物刺激素混合物含有含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物，含量范圍為0.05-50.00％。草本萃取物中的活性成分當暴露在高溫時易于降解和當暴露在空氣中時易于氧化。在這種情況下，存儲不當或存儲時間過長可以容易地導致液體生物刺激素混合物失效或完全作廢。因此，本發(fā)明的液體生物刺激素混合物含有穩(wěn)定劑，用以防止草本活性成分在存儲中發(fā)生熱降解和氧化。這種液體生物刺激素混合物中穩(wěn)定劑的含量范圍為0.00-5.00％。本發(fā)明使用的穩(wěn)定劑的非限制性例子包括：環(huán)氧植物油、乙氧基植物油、氫化植物油等，它們的每一種可以單獨使用或組合使用。應用于植物葉面施用的一種常用制劑叫做乳油(EC)。乳油產(chǎn)品中的主要惰性成分是乳化劑，即一種類似清潔劑的物質，可以使草本活性成分與水混合。有一種乳化劑叫“表面活性劑”。因此，本發(fā)明的液體生物刺激素包括非離子表面活性劑，這種非離子表面活性劑的含量范圍為45.00-80.00％。本發(fā)明使用的非離子表面活性劑的非限制性例子包括：聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇月桂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇三油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇單棕櫚酸酯等，它們中的每一個可以單獨使用或組合使用。填充劑是一種惰性物質，通常用在混合物中以改善其存儲和搬運特性。因此，上述液體植物刺激素混合物進一步包括農(nóng)用化學上可接受的填充劑，其中該填充劑的含量范圍為3.00-50.00％。本發(fā)明使用的填充劑的非限制性例子包括：葵花油、芝麻油、蓖麻油及它們的組合物。用于滴灌施用的液體形式的生物刺激素混合物包含選自由丙醇、丁醇、異丙醇、乙醇及它們的組合物所組成的組的溶劑，含量范圍為15.00-25.00％，更優(yōu)選為20.00％。本發(fā)明還提供了一種制備含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的方法。該方法包括：(a)粉碎干燥的錫蘭鴨嘴花部分；(b)用合適的溶劑通過冷滲濾對粉碎的錫蘭鴨花進行多重萃??；(c)蒸發(fā)該溶劑以形成濃縮液；(d)干燥該濃縮液以形成初級萃取物；(e)把該初級萃取物與水混合而形成混合物；(f)用乙酸乙酯對該混合物進行多重萃取以提供含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物。錫蘭鴨嘴花中的活性成分鴨嘴花堿包含在該植物的葉子、莖干和花中。在通過冷滲濾進行提取之前，要對該植物進行干燥和粉碎。干燥后用來提取的部位可以是花、莖干、葉子或整體植物。這里使用的術語“冷滲濾”(coldpercolation)是指草藥師采用的一種傳統(tǒng)提取方法。裝置包括懸掛在容器或燒瓶上的錐體或管子。管子或燒瓶的底部具有穿孔的基座，用以盛放粉碎的植物原料。溶劑被灌入管子頂部，然后向下滲濾草本原料，濾出活性物質，之后通過管子的底端進入容器。冷滲濾可使用的合適的溶劑可以是任何能夠從植物原料中提取鴨嘴花堿的溶劑。合適的溶劑選自由甲醇、水、乙酸乙酯和乙醇所組成的組，它們中的每一個可以單獨使用或組合使用。冷滲濾使用的合適的溶劑最好是用甲醇和水以80:20的比例配制的混合物。通過冷滲濾對植物原料進行多重萃取以萃取出鴨嘴花堿。在每次萃取后，通過過濾把溶劑與粉碎的植物原料分離。把來自全部萃取步驟濾出液集中，并通過蒸發(fā)溶劑濃縮以形成濃縮液。將濃縮液優(yōu)選地進行噴霧干燥以獲得初級萃取物。這里使用的術語“噴霧干燥”(spraydried)是指一種通過用熱氣體快速干燥把液體或漿體制成干粉的方法。這是干燥熱敏的草本萃取物的優(yōu)選方法。熱風通常是優(yōu)選的干燥介質。但是，如果草本萃取物含有易燃溶劑，如甲醇、乙醇等，或對通過氧氣氧化敏感的抗氧化劑，則使用熱氮氣作干燥介質。把初級萃取物與水和乙醇混合以形成混合物，用乙酸乙酯對其進行多重萃取。把所有乙酸乙酯萃取物集中并用來制備生物刺激素混合物。在以下非限制性例子中對本發(fā)明進行更具體的描述。這些例子只是作為例證使用，因為本領域的技術人員顯然能夠在本發(fā)明范圍之內做出許多修改和變動。除非另有注明，以下例子中出現(xiàn)的所有部分、百分比和比率均基于重量，例子中使用的所有試劑均從化學制品供應商處獲取或由其提供。海藻萃取物從E.I.DParry(India)Ltd.公司保健食品部獲取。實施例1制備錫蘭鴨嘴花初級萃取物的方法含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花初級萃取物從干燥的植物原料中獲取。獲取這種初級萃取物的方法包括如下步驟，它們通過圖1所示流程圖顯示。把錫蘭鴨嘴花植物原料干燥和粉碎，以備萃取。把粉碎的植物原料放在萃取容器里，并用以甲醇和水按80:20的比例配制的溶劑通過冷滲濾進行萃取。粉碎的植物原料與溶劑的比例為1:5(重量/體積)。把粉碎的植物原料在溶劑中浸泡6-15個小時，然后進行過濾，獲得殘余物和含有含量范圍為(0.10-0.20％w/w)的鴨嘴花堿濾出液(F1)。用以甲醇和水按80:20的比例配制的溶劑通過冷滲濾對殘余物進行萃取，然后過濾，獲得殘余物和含有含量范圍為(0.05-0.10％w/w)的鴨嘴花堿濾出液(F2)。在第二次萃取中植物原料(殘余物)與溶劑的比例為1:4(重量/體積)。再次用以甲醇和水按80:20的比例配制的溶劑通過冷滲濾對殘余物進行萃取，然后過濾，獲得殘余物和含有含量范圍為(0.01-0.05％w/w)的鴨嘴花堿濾出液(F3)。第三次萃取時植物原料(殘余物)與溶劑的比例為1:4(重量/體積)。把濾出液F1、F2和F3集中，并且在65℃和1KgHg的壓力環(huán)境中蒸發(fā)溶劑而濃縮，獲得含有含量范圍為0.50-1.00％w/w的鴨嘴花堿濃縮液。對濃縮液進行噴霧干燥，獲得含有含量范圍為1.00-3.00％w/w的鴨嘴花堿初級萃取物。實施例2從初級萃取物中制備含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的方法把約1-5公斤初級萃取物和2-8升水在萃取容器里充分混合并攪拌均勻。然后，加入2升乙醇和4升乙酸乙酯并且接著強力攪拌該混合物30分鐘至數(shù)小時。將該混合物放置1小時，收集上層的乙酸乙酯。加入1升水與下層混合。然后，往該混合物中加入1升乙醇和4升乙酸乙酯，接著再攪拌30分鐘至數(shù)小時。將混合物放置1小時后，收集上層的乙酸乙酯。用同樣方法第三次萃取下層溶液和收集上層的乙酸乙酯。把三次獲取的乙酸乙酯萃取物集中并濃縮，其中在濃縮的錫蘭鴨嘴花萃取物中的鴨嘴花堿濃度為10,000ppm。實施例3制備辣木萃取物的方法把約1-5公斤辣木干葉粉緩慢加入到3-10升乙醇中，然后用冷板在20-35℃下連續(xù)攪拌。將該混合物放置一小時，然后收集浮在上層的乙醇。同樣，底部殘余物被用乙醇進行三次萃取。把所有乙醇萃取物集中并在真空中50℃下提純，濃縮到300毫升。實施例4-9包括含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物除非另有說明，以下每個數(shù)值的單位為“％w/w”，即重量百分比，相對于混合物的重量。表1展示的生物刺激素混合物為顆粒狀。表1：顆粒狀生物刺激素混合物實施例實施例10-12包括含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和海藻萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物除非另有說明，以下每個數(shù)值的單位為“％w/w”，即重量百分比，相對于混合物的重量。表2展示的生物刺激素混合物為顆粒狀。表2：顆粒狀生物刺激素混合物實施例編號成分1011121錫蘭鴨嘴花萃取物(含鴨嘴花堿)0.051.004.002海藻萃取物0.010.501.003載體98.3496.9093.404著色劑0.100.100.105粘合物/粘合劑1.501.501.50實施例13-17包括含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和辣木萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物除非另有說明，以下每個數(shù)值的單位為“％w/w”，即重量百分比，相對于混合物的重量。表3展示的生物刺激素混合物為顆粒狀。表3：顆粒狀生物刺激素混合物實施例實施例18包括含有含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物的制備。該方法所采用成分的數(shù)量見表1。第一顆粒狀混合物的制備：將載體(顆粒)材料通過10-30篩目(mesh)篩選，如果潮濕度超過0.5％w/w則進行干燥。把所需數(shù)量的石蠟(粘合劑)通過加熱到60℃溶入己烷中。把熱石蠟溶液噴灑到所需數(shù)量的載體(顆粒)上。用熱空氣流干燥顆粒以除去溶劑并在載體上沉積一層粘合劑。第二顆粒狀混合物的制備：把所需數(shù)量的含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物溶入極性溶劑，以便于將含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物涂覆在顆粒上。取所需數(shù)量的綠色染料并將其溶入極性溶劑。將該溶液與含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物溶液混合。把該含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和染料的溶液噴灑到涂覆有石蠟的顆粒(即第一顆粒狀混合物)上并干燥以除去溶劑。最后，用己烷中熱的石蠟和溶液處理第二顆粒狀混合物，并用空氣流干燥以形成顆粒狀生物刺激素混合物。實施例19包括含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物和海藻萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物的制備。該方法所采用成分的數(shù)量見表2。把載體(顆粒)通過10-30篩目(mesh)篩選，如果潮濕度超過0.50％w/w則進行干燥。把所需數(shù)量的石蠟通過加熱到60℃溶入己烷中。把熱石蠟溶液噴灑到所需數(shù)量的載體(顆粒)上。用熱空氣流干燥顆粒以除去溶劑。把所需數(shù)量的含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和海藻萃取物溶入極性溶劑，以便于把含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和海藻萃取物涂覆在顆粒上。取所需數(shù)量的綠色染料，將其溶入極性溶劑。將該溶液與含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和海藻萃取物溶液混合。把該含有含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物、海藻萃取物和染料的溶液噴灑到涂覆有石蠟的顆粒上并干燥以除去溶劑。最后，用己烷中熱的石蠟溶液再次處理顆粒，并用空氣流干燥以形成顆粒狀生物刺激素混合物。實施例20包括含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物和辣木萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物的制備。該方法所采用成分的數(shù)量見表3。把載體(顆粒)通過10-30篩目(mesh)篩選，如果潮濕度超過0.50％w/w則進行干燥。把所需數(shù)量的石蠟加通過熱到60℃溶入己烷中。把熱石蠟溶液噴灑到所需數(shù)量的載體(顆粒)上。用熱空氣流干燥顆粒以除去溶劑。把所需數(shù)量的含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和辣木萃取物溶入極性溶劑，以便于涂覆在顆粒上。取所需數(shù)量的綠色染料，將其溶入極性溶劑。將該溶液與含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物和辣木萃取物溶液混合。把該含有含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物、辣木萃取物和染料的溶液噴灑到涂覆有石蠟的顆粒上并干燥以除去溶劑。最后，用己烷中熱的石蠟和溶液再次處理顆粒，并用空氣流干燥以形成顆粒狀生物刺激素混合物。實施例21-29包括含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的葉面施用液體生物刺激素混合物除非另有說明，以下每個數(shù)值的單位為“％w/w”，即重量百分比，相對于混合物的重量。表4展示的混合物是配制為用于葉面施用的液體生物刺激素混合物。表4：用于葉面施用的液體生物刺激素混合物實施例實施例30-34包含含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的滴灌施用液體生物刺激素混合物除非另有說明，以下每個數(shù)值的單位為“％w/w”，即重量百分比，相對于混合物的重量。表5展示的混合物是配制為用于滴灌施用的液體生物刺激素混合物。表5：用于滴灌施用的液體生物刺激素混合物實施例實施例35包括含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的葉面施用的液體生物刺激素混合物的制備。該方法所采用成分的數(shù)量見表4。取所需數(shù)量的非離子表面活性劑放入混合容器并開始攪拌。取所需數(shù)量的含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物，將其在攪拌的同時緩慢加入到上述非離子表面活性劑。繼續(xù)攪拌兩小時直到含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物完全溶入該表面活性劑。取所需數(shù)量的穩(wěn)定劑緩慢加入該混合容器并繼續(xù)攪拌一小時。最后，往混合容器中加入所需數(shù)量的植物油并攪拌一小時以獲得均質液體。實施例36包括含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的滴灌施用液體生物刺激素混合物的制備。該方法所采用成分的數(shù)量見表5。取所需數(shù)量的非離子表面活性劑放入混合容器并開始攪拌。取所需數(shù)量的含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物，將其在攪拌的同時緩慢加入到該非離子表面活性劑。繼續(xù)攪拌兩小時直到含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物完全溶入該表面活性劑。取所需數(shù)量的溶劑緩慢加入該混合容器并繼續(xù)攪拌一小時。實施例37包括含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物的植物生長促進(PGP)效果/生物刺激素效果/生物功效在一平方米的苗圃中進行了試驗評估，然后通過田間試驗對結果進行了驗證。含有含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物的苗圃試驗(pittrials):a.準備田地：準備幾塊1平方米見方、1.5英尺深的田地，鋪上塑料布以保留水分。然后，給苗圃填上混合有農(nóng)家肥的土壤。在每塊田地的右角設置一個排水口以排出多余的水。b.準備種子：把100克稻種(從市場購得)浸入250毫升水中24小時。將種子清洗并包裹在濕布袋中孕育48小時。不時往布上撒水。48小時后，把發(fā)芽的種子種在塑料盤(12”×16”)上。定時給塑料盤澆水和維護。c.移栽：播種25天后，把幼苗從塑料盤上連根拔出，移栽到田地中，排列成行，間距6×6厘米。定時給苗圃澆水和維護。d.施用：移栽12天后，開始施用顆粒狀生物刺激素。1克樣品與6克沙土混合，然后施予田地，同時澆薄膜滯流水。每塊田地插有注明處理詳情的標牌。隔天澆水，必要時把多余的水排出。e.觀察方法：——移栽45天后觀察植物生長參數(shù)，如株高、分蘗力和根長?！旮撸簻y量株高，單位為厘米并記錄全部數(shù)字。測量時從土壤表面量到最高的圓錐花序的尖端。——分蘗力：記錄每一壟的分蘗數(shù)?！L：把植物連根拔出，測量根長，單位為厘米，記錄全部數(shù)字。測量時從根的尖端量到根與苗的連接處。表6：包括含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物在苗圃試驗中對水稻的植物生長促進(PGP)效果以上結果顯示，本發(fā)明的顆粒狀生物刺激素混合物在苗圃試驗中施予水稻后促進了水稻生長。結果還顯示，錫蘭鴨嘴花萃取物比例為0.5％和1％，相當于鴨嘴花堿濃度為50ppm和100ppm，顆粒狀生物刺激素混合物促進水稻生長效果最佳。表7：包含含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物和海藻萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物在苗圃試驗中對水稻的植物生長促進(PGP)效果表8：含有含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物和辣木萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物在苗圃試驗中對水稻的植物生長促進效果實施例38為驗證苗圃試驗結果開展了田間試驗以確定顆粒狀生物刺激素混合物促進水稻生長、增加水稻產(chǎn)量的最佳成分。試驗選用的水稻品種是ASD16。顆粒狀生物刺激素混合物的田間試驗：該試驗方案施加含鴨嘴花堿的錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物。a.移栽：播種25天后，把幼苗從苗床中連根拔出，移栽到田地，排列成行，間距6×6厘米。按農(nóng)耕慣常做法給試驗田澆水。b.施用：移栽12天后，開始施用顆粒狀生物刺激素。各種生物刺激素混合物的施用量均為4公斤/英畝。顆粒狀生物刺激素混合物與所需數(shù)量的沙土混合在一起施用。c.觀察方法：——觀察植物生長參數(shù)：移栽45天后觀察植物生長參數(shù)，如株高和分蘗力。株高是從土壤表面到最高的圓錐花序尖端的長度，單位為厘米；分蘗力通過計數(shù)一壟的分蘗數(shù)來衡量?！^察產(chǎn)量：谷物產(chǎn)量按每平方米收成計算。對于某種生物刺激素混合物，測出5個地點的每平方米面積的收成，然后算出平均值，繼而根據(jù)這些結果推算出每英畝產(chǎn)量。表9：包含含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的顆粒狀生物刺激素混合物在田間試驗中對水稻的植物生長促進效果在田間試驗中清楚地顯示錫蘭鴨嘴花萃取物比例為0.50％和1.00％(相當于鴨嘴花堿含量分別為50ppm和100ppm)的顆粒狀生物刺激素混合物對植物生長和產(chǎn)量有積極作用。實施例39用于葉面施用的液體生物刺激素混合物的植物生長促進效果/或生物刺激素效果/生物功效用倫納德培養(yǎng)瓶(LeonardJar)進行了試驗評估，然后通過盆栽試驗對結果進行了驗證。葉面施用液體生物刺激素混合物的倫納德培養(yǎng)瓶試驗：a.準備倫納德培養(yǎng)瓶：把500-800毫升的啤酒瓶切成兩半(從瓶身上開始變細的地方切，以提供瓶頸部分和瓶底部分)。試驗最好用茶褐色的瓶子，可以防止光線進入。用繃帶布把瓶頸部分包好。從繃帶布上懸掛8厘米的棉條，并將其放在裝有400毫升試驗溶液(含有或不含化學制品的霍格蘭溶液[Hoaglandsolution])的另一半瓶子上。往倒置的瓶頸里裝入250克篩過的沙土。準備中必須小心，確保從裝有沙土的繃帶布上垂下的棉條接觸霍格蘭溶液。這樣有助于棉條從底部容器中吸取霍格蘭溶液并將其供應給到放置了幼苗和沙土的上部容器中。b.幼苗：研究使用的是苗齡為20天的辣椒幼苗，從育苗公司購得(無病蟲害)。幼苗被移栽到倫納德培養(yǎng)瓶前要澆水。c.移栽幼苗：挑選株高相同、葉子數(shù)量相等的辣椒幼苗(苗齡20天)移栽到倫納德培養(yǎng)瓶。之后，所有工作在露天環(huán)境中進行。保存足夠數(shù)量的樣品，以做每次處理之用。d.噴霧液和噴灑的制備：移栽3天后給幼苗噴灑液體生物刺激素制劑，之后每隔15天噴灑一次。噴灑時，用手動噴霧器把生物刺激素混合物噴到辣椒葉子上，直到噴出的液體從葉子上滾落或滴落下來。e.觀察：第二次噴灑7天后觀察株高、根長和葉子數(shù)量。表10：葉面施用液體生物刺激素混合物在倫納德培養(yǎng)瓶試驗中對辣椒的植物生長促進效果以上結果顯示，本發(fā)明的液體生物刺激素混合物在倫納德培養(yǎng)瓶試驗中對辣椒施加后促進了辣椒生長。結果還顯示，錫蘭鴨嘴花萃取物比例為2％(鴨嘴花堿含量為200ppm)的液體生物刺激素產(chǎn)品促進辣椒植物生長效果最佳。實施例40為驗證倫納德培養(yǎng)瓶試驗結果開展了盆栽試驗以確定液體生物刺激素混合物促進辣椒生長、增加辣椒產(chǎn)量的最佳成分。葉面施用液體生物刺激素混合物盆栽試驗：a.給花盆填土：試驗利用24x24英寸的陶盆進行，里面填入盆栽混合土(紅土、沙土和干牛糞，比例為2:1:1)。b.購買辣椒幼苗：從育苗公司購得苗齡為15天的辣椒幼苗(品種為NS1761)，并移栽到盆中。每天早上給盆栽辣椒植物澆水，并經(jīng)常檢查有無病蟲害。移栽一周后施用化肥(氮磷鉀比例為19:19:19)，用量為每盆10克。c.噴霧液和噴灑的配制：取2毫升錫蘭鴨嘴花萃取物液體制劑倒入1升水中稀釋，制成噴霧液。移栽三天后給辣椒植物實施第一次噴灑，之后每隔15天噴灑一次。噴灑時，用手動噴霧器把噴霧液噴到辣椒葉子上，直到噴出的液體從葉子上滾落或滴落下來。表11：葉面施用液體生物刺激素混合物在盆栽試驗中對辣椒的植物生長促進效果基于盆栽試驗，其證實錫蘭鴨嘴花萃取物比例為2％(鴨嘴花堿含量為200ppm)的液體生物刺激素混合物促進辣椒植物生長、增加辣椒產(chǎn)量的效果最佳。實施例41開展盆栽試驗，確定滴灌施用液體生物刺激素混合物促進西紅柿生長、增加西紅柿產(chǎn)量的最佳成分。滴灌施用液體生物刺激素混合物盆栽試驗：種子萌發(fā)：從市場購得西紅柿種子(品種為Naamdhari501)用于試驗。把購得的種子用椰纖土(cocopeat)播種在托盤(portrays,)上，然后用水濕潤。給萌發(fā)的幼苗澆水，在原托盤上種植20天。30天后把西紅柿苗移栽到陶盆中。準備花盆：試驗利用12x12英寸的陶盆進行，里面填入盆栽混合土(紅土、沙土和干牛糞，比例為2:1:1)，苗齡30天的幼苗從托盤移栽到花盆中。每天早上給盆栽西紅柿植物澆水，并經(jīng)常檢查有無病蟲害。移栽15天后施用氮磷鉀比例為19:19:19的化肥。滴灌施用溶液的配制：移栽20天后，給盆栽植物通過滴灌施用生物刺激素混合物。表12：滴灌施用液體生物刺激素混合物在盆栽試驗中對西紅柿的植物生長促進效果基于上述盆栽試驗，其證實了錫蘭鴨嘴花萃取物比例為0.5％和1％相當于鴨嘴花堿濃度為50ppm和100ppm的液體生物刺激素混合物促進西紅柿植物生長效果最佳。實施例42葉面施用液體生物刺激素混合物的植物毒性：含錫蘭鴨嘴花萃取物(2％，鴨嘴花堿含量為200ppm)的葉面施用液體生物刺激素混合物的植物毒性通過將其噴灑到桑樹上進行評估。取1毫升液體生物刺激素混合物，倒入1升水中稀釋，制成試驗液。用同樣方法配制出含2毫升和4毫升液體生物刺激素混合物的試驗液。試驗參數(shù)是植物毒性癥狀，如枯萎、萎蔫、壞死、脈明、偏上發(fā)育和偏下發(fā)育。試驗方法：挑選長有新枝的桑樹，系上注明處理詳情標牌。用手動噴霧器噴灑試驗液，把桑樹噴濕，同時給未施用試驗液的對照組桑樹噴水。觀察方法：實施噴灑處理后24小時進行觀察記錄，連續(xù)進行7天。觀察枯萎、萎蔫、壞死、脈明、偏上發(fā)育和偏下發(fā)育等參數(shù)(這些參數(shù)的定義見下文)。植物毒性癥狀等級按下表劃分。表13：植物毒性分級表等級植物毒性(％)等級植物毒性(％)0無植物毒性651-6011-10761-70211-20871-80321-30981-90431-401091-100541-50--枯萎：表面焦枯，葉理失色或受損，因高溫而枯黃或焦干。萎蔫：植物凋謝，整體枝、芽或葉低垂。壞死：細胞或組織因受傷或疾病而死亡或壞掉，尤其是在植物體局部。脈明：葉狀物質缺乏，除葉脈外葉綠素和其它葉子成分全無。偏上發(fā)育：由于植物上部過分生長，葉子或其它植物部分向下彎曲。偏下發(fā)育：由于植物下部生長，葉子或其它植物部分向上彎曲。表14：葉面施用液體生物刺激素混合物對桑樹的植物毒性從上述植物毒性結果中，證實了包含含鴨嘴花堿錫蘭鴨嘴花萃取物的液體生物刺激素混合物在所有試驗濃度下對都沒有植物毒性的影響。雖然上述內容對本發(fā)明的生物刺激素混合物的具體實施例進行了示出和描述，但顯而易見的是，本領域技術人員能夠在不背離本發(fā)明實質和范圍的情況下做出各種其它的變動和修改。因此，這種屬于本發(fā)明范圍之內的變動和修改應包含在所附的權利要求書中。當前第1頁1 2 3