本發(fā)明屬于植物繁育栽培領(lǐng)域，具體涉及一種黑枸杞的組培快繁方法。

背景技術(shù)：

黑果枸杞，茄科、枸杞屬多棘刺灌木，分布于高山沙林、鹽化沙地、河湖沿岸、干河床、荒漠河岸林中，為我國(guó)西部特有的沙漠藥用植物品種。野生的黑果枸杞適應(yīng)性很強(qiáng)，能忍耐38.5攝氏度高溫，耐寒性亦很強(qiáng)，在-25.6攝氏度下無(wú)凍害，耐干旱，在荒漠地仍能生長(zhǎng)。是喜光樹(shù)種，全光照下發(fā)育健壯，在庇蔭下生長(zhǎng)細(xì)弱，花果極少，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，耐鹽堿，耐干旱。

目前黑枸杞雖然已經(jīng)可以人工種植，但仍大多采用種子繁殖和扦插繁殖的常規(guī)方式種植，仍不能滿足市場(chǎng)需求，組織培養(yǎng)是一種高效的無(wú)性繁殖方式，繁殖效率高且成本較低，是解決黑枸杞優(yōu)良無(wú)性系快繁的有效手段。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足或缺陷，提供一種黑枸杞的組培快繁方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種黑枸杞的組培快繁方法，包括以下步驟：

⑴獲取無(wú)菌苗

取黑枸杞種子，在30℃水中浸泡6～10h，取出后于超凈工作臺(tái)上75％酒精處理30s，用質(zhì)量濃度為10％的次氯酸鈉溶液浸泡3～8min，用無(wú)菌水沖洗3～4次，濾紙吸干表面水分，將種子接入DKW+蔗糖15～25g/L+瓊脂4～5g/L培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下培養(yǎng)，生長(zhǎng)出無(wú)菌芽；

⑵誘導(dǎo)培養(yǎng)

將無(wú)菌芽苗接入DKW+0.5～1mg·L^-1KT+0.1～0.3mg·L^-1IBA+10～15g·L^-1蔗糖+3～5g·L^-1瓊脂培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)，生長(zhǎng)出叢生芽；

⑶增殖培養(yǎng)

將叢生芽切成單株芽，接入DKW+0.7～1.2mg·L^-16-BA+0.2～0.3mg·L^-1IBA+10～15g·L^-1蔗糖+瓊脂3～5g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下增殖培養(yǎng)；

⑷生根培養(yǎng)

待單株芽生長(zhǎng)至2～3cm時(shí)，轉(zhuǎn)接至：DKW+0.2～0.3mg·L^-1IBA+0.02～0.03mg·L^-1NAA+10～15g·L^-1蔗糖+瓊脂4～5g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下生根培養(yǎng)；

⑸營(yíng)養(yǎng)培護(hù)

生根培養(yǎng)1月后，置于培養(yǎng)室自然光下打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口練苗5～7天，然后小心取出幼苗，洗凈根部培養(yǎng)基，多菌靈浸根，移入腐葉土∶田園土：蛭石：珍珠巖＝1：1：1：1的基質(zhì)中，緩苗后用1000倍磷酸二氫鉀葉面噴施，每隔10天噴一次，培養(yǎng)50～60天后移入苗圃進(jìn)行養(yǎng)護(hù)管理。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果：采用本發(fā)明制備的黑枸杞苗成活率為95％，繁殖周期短，苗木質(zhì)量好，出苗率高；無(wú)需培育砧木與接穗，極大地減少占地面積，降低人力及管理成本。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作詳細(xì)說(shuō)明，不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何范圍性限制。

實(shí)施例1

取黑枸杞種子，在30℃水中浸泡6h，取出后于超凈工作臺(tái)上75％酒精處理30s，用質(zhì)量濃度為10％的次氯酸鈉溶液浸泡3min，用無(wú)菌水沖洗3次，濾紙吸干表面水分，將種子接入DKW+蔗糖15g/L+瓊脂4g/L培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下培養(yǎng)，生長(zhǎng)出無(wú)菌芽。將無(wú)菌芽苗接入DKW+0.5mg·L^-1KT+0.1mg·L^-1IBA+10g·L^-1蔗糖+3g·L^-1瓊脂培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)，生長(zhǎng)出叢生芽。將叢生芽切成單株芽，接入DKW+0.7mg·L^-16-BA+0.2mg·L^-1IBA+10g·L^-1蔗糖+瓊脂3g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下增殖培養(yǎng)。待單株芽生長(zhǎng)至2cm時(shí)，轉(zhuǎn)接至：DKW+0.2mg·L^-1IBA+0.02mg·L^-1NAA+10～15g·L^-1蔗糖+瓊脂4g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)1月后，置于培養(yǎng)室自然光下打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口練苗5天，然后小心取出幼苗，洗凈根部培養(yǎng)基，多菌靈浸根，移入腐葉土∶田園土：蛭石：珍珠巖＝1：1：1：1的基質(zhì)中，緩苗后用1000倍磷酸二氫鉀葉面噴施，每隔10天噴一次，培養(yǎng)50天后移入苗圃進(jìn)行養(yǎng)護(hù)管理，移栽成活率為98％。

實(shí)施例2

取黑枸杞種子，在30℃水中浸泡10h，取出后于超凈工作臺(tái)上75％酒精處理30s，用質(zhì)量濃度為10％的次氯酸鈉溶液浸泡8min，用無(wú)菌水沖洗4次，濾紙吸干表面水分，將種子接入DKW+蔗糖25g/L+瓊脂5g/L培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下培養(yǎng)，生長(zhǎng)出無(wú)菌芽。將無(wú)菌芽苗接入DKW+1mg·L^-1KT+0.3mg·L^-1IBA+15g·L^-1蔗糖+5g·L^-1瓊脂培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)，生長(zhǎng)出叢生芽。將叢生芽切成單株芽，接入DKW+1.2mg·L^-16-BA+0.3mg·L^-1IBA+15g·L^-1蔗糖+瓊脂5g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下增殖培養(yǎng)。待單株芽生長(zhǎng)至3cm時(shí)，轉(zhuǎn)接至：DKW+0.3mg·L^-1IBA+0.03mg·L^-1NAA+15g·L^-1蔗糖+瓊脂5g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)1月后，置于培養(yǎng)室自然光下打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口練苗7天，然后小心取出幼苗，洗凈根部培養(yǎng)基，多菌靈浸根，移入腐葉土∶田園土：蛭石：珍珠巖＝1：1：1：1的基質(zhì)中，緩苗后用1000倍磷酸二氫鉀葉面噴施，每隔10天噴一次，培養(yǎng)60天后移入苗圃進(jìn)行養(yǎng)護(hù)管理，移栽成活率為95％。

實(shí)施例3

取黑枸杞種子，在30℃水中浸泡8h，取出后于超凈工作臺(tái)上75％酒精處理30s，用質(zhì)量濃度為10％的次氯酸鈉溶液浸泡5min，用無(wú)菌水沖洗4次，濾紙吸干表面水分，將種子接入DKW+蔗糖20g/L+瓊脂4.5g/L培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下培養(yǎng)，生長(zhǎng)出無(wú)菌芽。將無(wú)菌芽苗接入DKW+75mg·L^-1KT+0.2mg·L^-1IBA+12.5g·L^-1蔗糖+4g·L^-1瓊脂培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)，生長(zhǎng)出叢生芽。將叢生芽切成單株芽，接入DKW+1mg·L^-16-BA+0.25mg·L^-1IBA+12.5g·L^-1蔗糖+瓊脂4g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下增殖培養(yǎng)。待單株芽生長(zhǎng)至3cm時(shí)，轉(zhuǎn)接至：DKW+0.25mg·L^-1IBA+0.025mg·L^-1NAA+12.5g·L^-1蔗糖+瓊脂4.5g·L^-1培養(yǎng)基中，在pH5.8、光照2000lx、溫度25℃的條件下生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)1月后，置于培養(yǎng)室自然光下打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口練苗5～7天，然后小心取出幼苗，洗凈根部培養(yǎng)基，多菌靈浸根，移入腐葉土∶田園土：蛭石：珍珠巖＝1：1：1：1的基質(zhì)中，緩苗后用1000倍磷酸二氫鉀葉面噴施，每隔10天噴一次，培養(yǎng)50～60天后移入苗圃進(jìn)行養(yǎng)護(hù)管理，移栽成活率為96％。