本發(fā)明屬于植物繁殖領(lǐng)域，具體涉及一種金線蓮組培苗快速繁殖方法。

背景技術(shù)：
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金線蓮別名金線蘭、金絲草，是蘭科(Orchidaceae)開唇植物花葉蘭屬(Anoectochilus Bl.)多年生珍稀草本植物，我國有23種左右，其中部分種全草民間作藥用,為傳統(tǒng)珍稀名貴中藥材，它在民間使用范圍較廣，多用于治療糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病，素有“藥王”、“金草”、“神藥”、“烏人參”等美稱，被稱為“藥中之王”。多年來，由于其市場需求大而導(dǎo)致人工過度采挖，加上金線蓮自然繁殖率低、生長緩慢，野生的金線蓮資源已非常稀少，瀕臨滅絕，早在1987年國務(wù)院就將金線蓮列為重點(diǎn)保護(hù)的中藥材之一，為國家二級保護(hù)植物。而由于人工種植金線蓮又有較大的難度，目前人工種植的數(shù)量還非常有限。由于原材料量的限制，近年來金線蓮產(chǎn)業(yè)有所萎縮。因此大力發(fā)展人工種植已顯得非常必要和迫切。因為金線蓮在臨床中廣泛應(yīng)用,而且療效極好,具有極高的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，因此市場需求越來越大，而人工種植的金線蓮還遠(yuǎn)不能滿足市場的需求，目前市場價格昂貴，由金線蓮制成的干品目前售價每公斤達(dá)到1萬元，市場金線蓮鮮品價格亦高達(dá)800-1000元/公斤，若每畝能產(chǎn)出300公斤以上鮮品，則畝產(chǎn)值可達(dá)24萬元以上。是目前農(nóng)業(yè)種植業(yè)中效益最高的產(chǎn)業(yè)之一。大力發(fā)展金線蓮的人工種植，不但可以滿足人們對金線蓮的需求，而且還可以因減少對野生資源的依賴而起到保護(hù)野生資源的目的，因此人工種植金線蓮不但有很好的市場前景，而且對野生資源的保護(hù)也有重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種污染率極低，從而有效的降低成本的金線蓮組培苗快速繁殖方法。

本發(fā)明的金線蓮組培苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、選取天湖金線蓮的健康株系，去掉根、葉片和葉鞘，取其莖條，洗凈后切成帶節(jié)莖段，消毒后接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1上，培養(yǎng)溫度為23±2℃，光照強(qiáng)度500～1000lx，光照12h/d，獲得不定芽，所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1每升含花寶1號1～2g，蛋白胨0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，鹽酸硫胺素0.05～0.2mg，鹽酸吡哆醇0.4～0.8mg，煙酸0.4～0.8mg，6-芐基腺嘌呤2.0～5.0mg，萘乙酸0.2～0.5mg，蔗糖15～20g，瓊脂6～7g，pH 5.4-5.6；

B、分切不定芽，將高小于3厘米的叢生芽插植于玻璃培養(yǎng)瓶中的增殖培養(yǎng)基J2上，把高大于3厘米的不定芽單株插植于生根培養(yǎng)基JR上，用瓶塞塞住玻璃培養(yǎng)瓶的瓶口，將含有不定芽的增殖培養(yǎng)基J2和生根培養(yǎng)基JR的玻璃培養(yǎng)瓶橫放于全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，瓶口統(tǒng)一朝一方向，散射光能直接照射不定芽上，培養(yǎng)溫度23-25℃，光照強(qiáng)度1000-3000lx，光照時間10-16h/d下培養(yǎng)，當(dāng)增殖培養(yǎng)基J2在培養(yǎng)下收獲增殖材料不定芽，增殖材料不定芽繼續(xù)接種至新的玻璃培養(yǎng)瓶中的增殖培養(yǎng)基J2上，用瓶塞塞住玻璃培養(yǎng)瓶的瓶口，將含有不定芽的增殖培養(yǎng)基J2的玻璃培養(yǎng)瓶橫放于全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，瓶口統(tǒng)一朝一方向，散射光能直接照射不定芽上，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度23-25℃，光照強(qiáng)度1000-3000lx，光照時間10-16h/d下培養(yǎng)，當(dāng)增殖材料不定芽培養(yǎng)一個繼代周期后進(jìn)行接種轉(zhuǎn)移，高小于3厘米的叢生芽插植于增殖培養(yǎng)基J2中，高大于3厘米的不定芽單株插植于生根培養(yǎng)基JR，如此循環(huán)，生根培養(yǎng)基JR上的不定芽長根后成為完整植株進(jìn)行出瓶移栽；

所述的增殖培養(yǎng)基J2每升含花寶1號2～3g，蛋白胨0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，鹽酸硫胺素0.05～0.2mg，鹽酸吡哆醇0.4～0.8mg，煙酸0.4～0.8mg，6-芐基腺嘌呤2.0～3.0mg，萘乙酸0.2～0.5mg，蔗糖20～30g，瓊脂6～7g，pH 5.4-5.6；

所述的生根培養(yǎng)基JR每升含花寶1號2～3g，蛋白胨0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，鹽酸硫胺素0.05～0.2mg，鹽酸吡哆醇0.4～0.8mg，煙酸0.4～0.8mg，6-芐基腺嘌呤0.2～0.5mg，萘乙酸2～5mg，活性碳500～1000mg，蔗糖20～30g，瓊脂6～7g，pH 5.4-5.6。

優(yōu)選，將步驟A的不定芽轉(zhuǎn)接到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為23±2℃，光照度500～1000lx，光照12h/d，繼代周期為35-40天，繼代培養(yǎng)4-5次后可獲得大量的不定芽作為無性繁殖材料。

所述的步驟A的消毒是將帶節(jié)莖段，先用體積分?jǐn)?shù)75％酒精水溶液浸泡30s，再在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞水溶液中浸泡并搖動5～16min，無菌水沖洗3次后，用無菌紙吸干莖段表面水分，并切去兩端各1～2mm，再接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1。

金線蓮組織培養(yǎng)已有很多的報道，有無菌播種種子繁殖和無性繁殖兩種方式，但因其培養(yǎng)基富含營養(yǎng)加上繼代培養(yǎng)周期偏長，普遍存在金線蓮組培苗生產(chǎn)過程中污染率高于15％，從而導(dǎo)致生產(chǎn)成本高甚至導(dǎo)致停產(chǎn)的問題，本發(fā)明利用廣東從化天湖金線蓮的優(yōu)良株系為外植體進(jìn)行無性克隆快速繁殖種苗，確保種苗保持原有優(yōu)良種性及其藥效，利用培養(yǎng)容器橫放和全自然光的培養(yǎng)方式，可有效解決金線蓮組培快繁中污染率常常高于15％的難題，同時不用熒光燈作為光源，明顯降低了生產(chǎn)成本，經(jīng)濟(jì)效益更加顯著。本發(fā)明的方法具有低成本，種性強(qiáng)，藥效高的特點(diǎn)，提高了金線蓮種苗使用的安全性，對瀕危緊缺金線蓮藥用植物資源再生和持續(xù)利用具有十分重要意義，滿足健康產(chǎn)業(yè)對珍貴中藥材金線蓮的巨大市場需求。

本發(fā)明操作簡便，生產(chǎn)成本低，便于道地金線蓮優(yōu)良株系的無性克隆快速繁殖種苗，確保金線蓮原有的優(yōu)良種性和療效。利用本發(fā)明繁殖金線蓮種苗，有利于保持種源的優(yōu)良種性，促進(jìn)金線蓮生長及藥效的提高，提高道地金線蓮的使用價值和安全性，對瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續(xù)利用具有十分積極的影響。

本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)如下：

1、以原生地的金線蓮優(yōu)良株系為外植體建立其無性繁殖系。

2、將培養(yǎng)容器橫放，污染率控制在0.5％以下，且培養(yǎng)材料受光均勻，培養(yǎng)材料生長健壯劃一，利于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

3、利用全自然光培養(yǎng)室，可顯著降低了生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。

4、實(shí)施本發(fā)明只需有簡單的植物組織培養(yǎng)設(shè)備即可進(jìn)行。

具體實(shí)施方式：

以下實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。

實(shí)施例1：

1.材料：天湖金線蓮(Anoectochilus roxburghii(wall)lindl.‘tianhu’)生長健壯、莖粗、葉片大、葉片網(wǎng)紋清晰且多、抗逆性、抗病蟲害強(qiáng)的健康株系。

2.藥品購買

購買植物組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基成分中的常規(guī)的所有藥品，將藥品儲存于干燥涼爽的室內(nèi)待用。

3.母液配制

根據(jù)培養(yǎng)基配方要求，分門別類按組成成分配制其母液。藥品逐一完全溶解，倒入選定的容量瓶內(nèi)，最后定容。如遇加熱才能溶解情況，需待溶液冷卻后再定容。盛裝母液的試劑瓶，應(yīng)貼明顯標(biāo)簽紙，寫上母液名稱、濃度和配制日期，配制好的母液放置冰箱(2～5℃)備用。

4.培養(yǎng)基配制

根據(jù)培養(yǎng)材料組培苗生產(chǎn)的要求，配制其增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，配制培養(yǎng)基按以下程序添加藥品或母液：糖——無離子水——鐵鹽母液——大量元素母液——微量元素母液——維生素母液——甘氨酸母液——肌醇母液——植物生長調(diào)節(jié)劑母液——瓊脂，調(diào)整pH至5.4-5.6，分別將100毫升的培養(yǎng)基灌裝至每一500毫升的方形玻璃培養(yǎng)容器中，再將培養(yǎng)基立放于一長方體的消毒車上，整體推進(jìn)配套的高壓消毒鍋中于1.06kg/cm2(121℃)條件下滅菌20min。

5.培養(yǎng)基冷卻

當(dāng)培養(yǎng)基滅菌完畢后，于培養(yǎng)基凝固之前把長方體的消毒車立起來，使方形玻璃培養(yǎng)瓶處于橫放、瓶口朝左右方向狀態(tài)進(jìn)行冷卻培養(yǎng)基，培養(yǎng)基凝固于玻璃培養(yǎng)瓶的一邊上后待用。

6.外植體選擇、消毒及誘導(dǎo)不定芽和形成無性繁殖系

于廣東從化天湖金線蓮原生地中(北緯23度37分至23度40分，東經(jīng)113度36分至113度38分)，選取生長健壯、莖粗、葉片大、葉片網(wǎng)紋清晰且多、抗逆性、抗病蟲害強(qiáng)的健康株系，用軟毛刷在流水下將苗株表面小心洗凈，去掉根、葉片和葉鞘，頂部未展開葉片可保留約1cm。用洗衣粉水浸泡，同時輕輕搖動約10min，清水洗凈后拿至超凈工作臺。將處理好的金線蓮莖條切成2cm左右?guī)Ч?jié)莖段，先用體積分?jǐn)?shù)75％酒精水溶液浸泡30s，再在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞水溶液中浸泡并搖動5～16min，無菌水沖洗3次后，用無菌紙吸干莖段表面水分，并切去兩端各1～2mm，再接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為(23±2)℃，光照度500～1000lx，光照12h/d，由此獲得不定芽，不定芽進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1，繼代培養(yǎng)的條件同不定芽誘導(dǎo)，繼代周期為35-40天，同繼代培養(yǎng)4-5次后可獲得大量的不定芽作為無性繁殖材料。

所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1，每升含花寶1號1g，蛋白胨2g，肌醇80mg，甘氨酸2.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.05mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.4mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)5.0mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，蔗糖20g，瓊脂6g，余量為水，pH 5.4，其配置方法是將花寶1號1g，蛋白胨2g，肌醇80mg，甘氨酸2.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.05mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.4mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)5.0mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，蔗糖20g，瓊脂6g加入到少量水中，然后用水定容至1L，調(diào)pH值至5.4，滅菌備用。

7.接種轉(zhuǎn)移

按規(guī)定要求將步驟6的無性繁殖材料(不定芽)逐一細(xì)致觀察，剔除污染材料，用體積分?jǐn)?shù)75％酒精水溶液抹干凈玻璃培養(yǎng)瓶表面，于玻璃培養(yǎng)瓶中裝填增殖培養(yǎng)基J2或生根培養(yǎng)基JR。于超凈工作臺上，按正常的操作分切無性繁殖材料得到培養(yǎng)材料，從側(cè)邊開瓶口中從分切好的培養(yǎng)材料中把高小于3厘米的叢生芽插植于增殖培養(yǎng)基J2中和把高大于3厘米的不定芽單株插植于生根培養(yǎng)基JR中，用瓶塞蓋住瓶口。

所述的增殖培養(yǎng)基J2每升含花寶1號2g，蛋白胨2g，肌醇80mg，甘氨酸2.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.05mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.4mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)3.0mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，蔗糖30g，瓊脂6g，pH 5.6。其配制方法是：將花寶1號2g，蛋白胨2g，肌醇80mg，甘氨酸2.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.05mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.4mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)3.0mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，蔗糖30g，瓊脂6g溶于少量水中，然后用水定容至1L，調(diào)pH至5.6，滅菌備用。

所述的生根培養(yǎng)基JR每升含花寶1號2g，蛋白胨2g，肌醇80mg，甘氨酸2.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.05mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.4mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)0.5mg，萘乙酸(NAA)2mg，活性碳1000mg，蔗糖20g，瓊脂7g，pH 5.4。其配制方法為：將花寶1號2g，蛋白胨2g，肌醇80mg，甘氨酸2.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.05mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.8mg，煙酸0.4mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)0.5mg，萘乙酸(NAA)2mg，活性碳1000mg，蔗糖20g，瓊脂7g溶于少量水中，然后用水定容到1L，調(diào)pH值至5.4，滅菌備用。

8.全自然光照培養(yǎng)室的設(shè)計和培養(yǎng)

使用鋼化玻璃建成透光的培養(yǎng)室，配備遮陽系統(tǒng)、降溫設(shè)備、培養(yǎng)架。遮陽系統(tǒng)包括內(nèi)外遮陽網(wǎng)，通過調(diào)控內(nèi)外遮陽網(wǎng)使培養(yǎng)室內(nèi)頂層培養(yǎng)架的光照強(qiáng)度為3000～5000Lux，頂層往下的第二、三層培養(yǎng)架光照強(qiáng)度為1000～3000Lux，底層即頂層下第四層光照強(qiáng)度100～1000Lux。降溫設(shè)備采用冷暖兩用空調(diào)，可將玻璃培養(yǎng)室的溫度控制在20～25℃。培養(yǎng)架寬為60厘米，高為200厘米，離地面10厘米為第四層，層距60厘米，共四層，培養(yǎng)架長度可根據(jù)培養(yǎng)室的大小而定。

將接種有不定芽的增殖培養(yǎng)基J2和生根培養(yǎng)基JR的玻璃培養(yǎng)瓶橫放于全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，瓶口統(tǒng)一朝一方向，散射光能直接照射培養(yǎng)材料上，避免常規(guī)的立放的培養(yǎng)容器瓶蓋對光的遮擋而影響培養(yǎng)材料對光的吸收；同時由于瓶口的側(cè)開可有效避免培養(yǎng)室中的微粒進(jìn)入培養(yǎng)容器中，污染發(fā)生小于0.5％，遠(yuǎn)低于通常污染率低于5％的要求。放置于培養(yǎng)溫度(23-25)℃，光照強(qiáng)度1000-3000lx，光照時間10-16h/d下培養(yǎng)，當(dāng)增殖培養(yǎng)基J2在培養(yǎng)下收獲增殖材料不定芽，增殖材料不定芽繼續(xù)接種至新的玻璃培養(yǎng)瓶中的增殖培養(yǎng)基J2上，用瓶塞塞住玻璃培養(yǎng)瓶的瓶口，將含有不定芽的增殖培養(yǎng)基J2的玻璃培養(yǎng)瓶橫放于全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，瓶口統(tǒng)一朝一方向，散射光能直接照射不定芽上，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度23-25℃，光照強(qiáng)度1000-3000lx，光照時間10-16h/d下培養(yǎng)，當(dāng)增殖材料不定芽培養(yǎng)一個繼代周期后進(jìn)行接種轉(zhuǎn)移，高小于3厘米的叢生芽插植于增殖培養(yǎng)基J2中，高大于3厘米的不定芽單株插植于生根培養(yǎng)基JR，如此循環(huán)，生根培養(yǎng)基JR上的不定芽長根后成為完整植株進(jìn)行出瓶移栽。

實(shí)施例2：

1.材料：天湖金線蓮(Anoectochilus roxburghii(wall)lindl.‘tianhu’)生長健壯、莖粗、葉片大、葉片網(wǎng)紋清晰且多、抗逆性、抗病蟲害強(qiáng)的健康株系。

2.藥品購買

購買植物組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基成分中的常規(guī)的所有藥品，將藥品儲存于干燥涼爽的室內(nèi)待用。

3.母液配制

根據(jù)培養(yǎng)基配方要求，分門別類按組成成分配制其母液。藥品逐一完全溶解，倒入選定的容量瓶內(nèi)，最后定容。如遇加熱才能溶解情況，需待溶液冷卻后再定容。盛裝母液的試劑瓶，應(yīng)貼明顯標(biāo)簽紙，寫上母液名稱、濃度和配制日期，配制好的母液放置冰箱(2～5℃)備用。

4.培養(yǎng)基配制

根據(jù)培養(yǎng)材料組培苗生產(chǎn)的要求，配制其增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，配制培養(yǎng)基按以下程序添加藥品或母液：糖——無離子水——鐵鹽母液——大量元素母液——微量元素母液——維生素母液——甘氨酸母液——肌醇母液——植物生長調(diào)節(jié)劑母液——瓊脂，調(diào)整pH至5.4-5.6，分別將100毫升的培養(yǎng)基灌裝至每一500毫升的方形玻璃培養(yǎng)容器中，再將培養(yǎng)基立放于一長方體的消毒車上，整體推進(jìn)配套的高壓消毒鍋中于1.06kg/cm2(121℃)條件下滅菌20min。

5.培養(yǎng)基冷卻

當(dāng)培養(yǎng)基滅菌完畢后，于培養(yǎng)基凝固之前把長方體的消毒車立起來，使方形玻璃培養(yǎng)瓶處于橫放、瓶口朝左右方向狀態(tài)進(jìn)行冷卻培養(yǎng)基，培養(yǎng)基凝固于玻璃培養(yǎng)瓶的一邊上后待用。

6.外植體選擇、消毒及誘導(dǎo)不定芽和形成無性繁殖系

于廣東從化天湖金線蓮原生地中(北緯23度37分至23度40分，東經(jīng)113度36分至113度38分)，選取生長健壯、莖粗、葉片大、葉片網(wǎng)紋清晰且多、抗逆性、抗病蟲害強(qiáng)的健康株系，用軟毛刷在流水下將苗株表面小心洗凈，去掉根、葉片和葉鞘，頂部未展開葉片可保留約1cm。用洗衣粉水浸泡，同時輕輕搖動約10min，清水洗凈后拿至超凈工作臺。將處理好的金線蓮莖條切成2cm左右?guī)Ч?jié)莖段，先用體積分?jǐn)?shù)75％酒精水溶液浸泡30s，再在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％升汞中浸泡并搖動5～16min，無菌水沖洗3次后，用無菌紙吸干莖段表面水分，并切去兩端各1～2mm，再接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為(23±2)℃，光照度500～1000lx，光照12h/d，由此獲得不定芽，不定芽進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1，繼代培養(yǎng)的條件同不定芽誘導(dǎo)，繼代周期為35-40天，同繼代培養(yǎng)4-5次后可獲得大量的不定芽作為無性繁殖材料。

所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1每升含花寶1號2g，蛋白胨0.5g，肌醇120mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4mg，煙酸0.8mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)2.0mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，蔗糖15g，瓊脂7g，pH 5.6。其配制方法是將花寶1號2g，蛋白胨0.5g，肌醇120mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4mg，煙酸0.8mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)2.0mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，蔗糖15g，瓊脂7g加入到少量水中，然后用水定容至1L，調(diào)pH值至5.6，滅菌備用。

7.接種轉(zhuǎn)移

按規(guī)定要求將步驟6的無性繁殖材料(不定芽)逐一細(xì)致觀察，剔除污染材料，用體積分?jǐn)?shù)75％酒精水溶液抹干凈玻璃培養(yǎng)瓶表面，于玻璃培養(yǎng)瓶中裝填增殖培養(yǎng)基J2。于超凈工作臺上，按正常的操作分切無性繁殖材料得到培養(yǎng)材料，從側(cè)邊開瓶口中從分切好的培養(yǎng)材料中把高小于3厘米的叢生芽插植于增殖培養(yǎng)基J2中和把高大于3厘米的不定芽單株插植于生根培養(yǎng)基JR。

所述的增殖培養(yǎng)基J2每升含花寶1號3g，蛋白胨0.5g，肌醇120mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4mg，煙酸0.8mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)2.0mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，蔗糖20g，瓊脂7g，pH 5.4。其配制方法是：將花寶1號3g，蛋白胨0.5g，肌醇120mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4mg，煙酸0.8mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)2.0mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，蔗糖20g，瓊脂7g溶于少量水中，然后用水定容至1L，調(diào)pH至5.4，滅菌備用。

所述的生根培養(yǎng)基JR每升含花寶1號3g，蛋白胨0.5g，肌醇120mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4mg，煙酸0.8mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)0.2mg，萘乙酸(NAA)5mg，活性碳500mg，蔗糖30g，瓊脂6g，pH 5.6。其配制方法為：將花寶1號3g，蛋白胨0.5g，肌醇120mg，甘氨酸1.5mg，鹽酸硫胺素(VB1)0.2mg，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4mg，煙酸0.8mg，6-芐基腺嘌呤(6-BA)0.2mg，萘乙酸(NAA)5mg，活性碳500mg，蔗糖30g，瓊脂6g溶于少量水中，然后用水定容到1L，調(diào)pH值至5.6，滅菌備用。

8.全自然光照培養(yǎng)室的設(shè)計和培養(yǎng)

使用鋼化玻璃建成透光的培養(yǎng)室，配備遮陽系統(tǒng)、降溫設(shè)備、培養(yǎng)架。遮陽系統(tǒng)包括內(nèi)外遮陽網(wǎng)，通過調(diào)控內(nèi)外遮陽網(wǎng)使培養(yǎng)室內(nèi)頂層培養(yǎng)架的光照強(qiáng)度為3000～5000Lux，頂層往下的第二、三層培養(yǎng)架光照強(qiáng)度為1000～3000Lux，底層即頂層下第四層光照強(qiáng)度100～1000Lux。降溫設(shè)備采用冷暖兩用空調(diào)，可將玻璃培養(yǎng)室的溫度控制在20～25℃。培養(yǎng)架寬為60厘米，高為200厘米，離地面10厘米為第四層，層距60厘米，共四層，培養(yǎng)架長度可根據(jù)培養(yǎng)室的大小而定。

將接種有不定芽的增殖培養(yǎng)基J2和生根培養(yǎng)基JR的玻璃培養(yǎng)瓶橫放于全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，瓶口統(tǒng)一朝一方向，散射光能直接照射培養(yǎng)材料上，避免常規(guī)的立放的培養(yǎng)容器瓶蓋對光的遮擋而影響培養(yǎng)材料對光的吸收；同時由于瓶口的側(cè)開可有效避免培養(yǎng)室中的微粒進(jìn)入培養(yǎng)容器中，污染發(fā)生小于0.5％，遠(yuǎn)低于通常污染率低于5％的要求。放置于培養(yǎng)溫度(23-25)℃，光照強(qiáng)度1000-3000lx，光照時間10-16h/d下培養(yǎng)，當(dāng)增殖培養(yǎng)基J2在培養(yǎng)下收獲增殖材料不定芽，增殖材料不定芽繼續(xù)接種至新的玻璃培養(yǎng)瓶中的增殖培養(yǎng)基J2上，用瓶塞塞住玻璃培養(yǎng)瓶的瓶口，將含有不定芽的增殖培養(yǎng)基J2的玻璃培養(yǎng)瓶橫放于全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，瓶口統(tǒng)一朝一方向，散射光能直接照射不定芽上，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度23-25℃，光照強(qiáng)度1000-3000lx，光照時間10-16h/d下培養(yǎng)，當(dāng)增殖材料不定芽培養(yǎng)一個繼代周期后進(jìn)行接種轉(zhuǎn)移，高小于3厘米的叢生芽插植于增殖培養(yǎng)基J2中，高大于3厘米的不定芽單株插植于生根培養(yǎng)基JR，如此循環(huán)，生根培養(yǎng)基JR上的不定芽長根后成為完整植株進(jìn)行出瓶移栽。