一種用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其成活方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其成活方法，該培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有15~60g/L蔗糖、0~80mg/LGA3、0~2.0mg/LIAA、0~10mg/L2ip。本發(fā)明用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其成或方法，針對中國野生杜鵑雜交幼胚萌發(fā)率的特點，以大量雜交組合的雜交胚為試驗材料，成功利用組培方法研究創(chuàng)造出適宜野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)，并建立起有效的野生杜鵑雜交胚的成活方法，提高了野生杜鵑雜交胚的萌發(fā)率，具有很好的實用性和較好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【專利說明】一種用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其成活方 法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物繁育【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的 培養(yǎng)基及其成活方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 杜_$ (Rhododendron L.)是杜醇花科杜醇屬植物的總稱，是我國傳統(tǒng)十大名花之 一，被譽為"花中西施"。杜鵑不僅有很高的觀賞價值，還具有很高的藥用、食用價值。全世 界約有960種杜鵑花屬植物，我國野生杜鵑花資源非常豐富，約有杜鵑花542種，是世界杜 鵑花分布中心，但是大多優(yōu)良野生杜鵑仍然隱匿于山間，我國的杜鵑花園藝栽培品種總數(shù) 不到300種，雜交育種研究也遠遠落后于其他國家。中國現(xiàn)有授權(quán)保護的杜鵑花園藝品種 多由芽變選種獲得，僅有少數(shù)是通過雜交育種得來，利用本國資源培育新品種對于中國杜 鵑花品種開發(fā)極為重要。杜鵑遠緣雜交同時存在受精前、后障礙，受精后障礙主要表現(xiàn)為胚 珠停止發(fā)育，種子不能發(fā)芽和后代白化苗等情況。受精后障礙的克服，可通過未成熟種子的 培養(yǎng)來進行胚拯救，提高種子的萌發(fā)率及成苗率。
[0003] Ureshino (URESHINO, K. , I. MIYAJIMA and M. AKABANE. Effectivenes s of three-way crossing for the breeding of yellow-flowered evergreen azalea[J]. Euphytica. 1998, 140 (2) :113 - 118.)等以Anderson為基本培養(yǎng)基對常綠杜鵑和日本 落葉黃花杜鵑的雜交胚進行了胚拯救。Anderson (MICHISHITA AYAN 0, KENJI URESHINO AND IKUO MIYAJIMA. Shortening the period from cr ossing to the seedling stage through ovule culture of interspecific crosses of A zalea(Rhododendron spp.) [J]. Journal of the Japanese Society for Horticultur al Science. 2001, 70(I):54-59)、 WPM(EECKHAUT TOM, ELLENl DE KE YSERjVAN HUYLENBROECK J, et al. Application of embryo rescue after i nterspecific crosses in the genus Rhododendron[J]. Plant Cell Tiss Organ Cult. 2007,89(1):29 - 35.)等培養(yǎng)基在杜鵑雜交胚拯救中也有所應(yīng)用。 但針對杜鵑不同雜交組合，最適培養(yǎng)基類型的研究還鮮見報道，尤其是國內(nèi)有關(guān)杜鵑雜交 胚的組培技術(shù)還未見報道。僅劉燕（劉燕，王濟紅，陳訓(xùn)等.大白杜鵑種子胚組織培養(yǎng)研 究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010, 38 (12) :30-33.)等以1/4MS為基本培養(yǎng)基，對大白花杜鵑 (R. decorum)的種子胚進行了組培配方的探討。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種用于野生杜 鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，對雜交胚進行胚拯救，提高萌發(fā)率。本發(fā)明的另一目的是提 供一種野生杜鵑雜交胚的成活方法。
[0005] 技術(shù)方案：為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0006] -種用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基為WPM，并添加有 15 ?60g/L 蔗糖、O ?80mg/L GA3、0 ?2. Omg/L ΙΑΑ、0 ?lOmg/L 2ip ;其中，GA3、IAA、2ip 三者的濃度不同時為0。
[0007] 所述的GA3濃度為50-80mg/L，所述的IAA濃度為0· 5mg/L，無添加2ip。
[0008] 所述的野生杜鵑雜交胚為映山紅X云錦杜鵑的雜交胚，添加的蔗糖濃度為15g/ L〇
[0009] 所述的野生杜鵑雜交胚為馬銀花X云錦杜鵑雜交胚，添加的蔗糖濃度為30g/L或 60g/L。
[0010] 所述的野生杜鵑雜交胚為馬銀花X云錦杜鵑雜交胚，在WPM中添加有20mg/L GA 3>0. 5mg/L IAA、2mg/L 2ip〇 toon] 一種野生杜鵑雜交胚的成活方法，包括以下步驟：
[0012] 1)以南京地區(qū)的映山紅、錦繡杜鵑和馬銀花為母本，自交的同時，與采自廬山的云 錦杜鵑和采自昆明植物園的映山紅、白花杜醇、窄葉杜鵑和薄皮杜鵑進行雜交授粉；授粉3 個月后，采集的蒴果；
[0013] 2)采集的蒴果，用75 %乙醇消毒30s，無菌水沖洗3遍，再用10% NaClO消毒 15min，無菌水沖洗5遍后剝胚，對雜交幼胚進行培養(yǎng)；
[0014] 3)采用成活培養(yǎng)基對雜交幼胚進行培養(yǎng)，光照12h/d，光照強度16001x，溫度 25±0. 5°C;培養(yǎng)80天后幼胚萌發(fā)；所述的成活培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為WPM，添加8g/L瓊脂， pH 值 5. 0,并額外添加有 15 ?60g/L 鹿糖、0 ?80mg/L GA3、0 ?2. Omg/L ΙΑΑ、0 ?10mg/L 2ip ;其中，GA3、IAA、2ip三者的濃度不同時為0。
[0015] 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基 及其成或方法，針對中國野生杜鵑雜交幼胚萌發(fā)率的特點，以大量雜交組合的雜交胚為試 驗材料，成功利用組培方法研究創(chuàng)造出適宜野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)，并建立起 有效的野生杜鵑雜交胚的成活方法，提高了野生杜鵑雜交胚的萌發(fā)率，具有很好的實用性 和較好的工業(yè)應(yīng)用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1是不同激素濃度對雜交胚萌發(fā)影響的復(fù)合極差圖。

【具體實施方式】
[0017] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0018] 以下實施例中所使用的試驗材料為：2012年3月底或4月初杜鵑花期，以南京地 區(qū)栽培的的映山紅（R. simsii)、錦繡杜醇（R. pulchrum)和馬銀花（R. ovatum)為母本，自交 的同時，與采自廬山的云錦杜胃I (R. fortunei)和采自昆明植物園的映山紅（R. simsii)、白 花杜醇（R. mucronatum)、窄葉杜醇（R. araiophyllum)和薄皮杜醇（R. taronense)進行雜交 授粉。授粉3個月后，采集的蒴果為試驗材料。
[0019] 實施例1
[0020] 米集蒴果，用75%乙醇消毒30s，無菌水沖洗3遍，再用10% NaClO消毒15min，無 菌水沖洗5遍后剝胚，對雜交幼胚進行培養(yǎng)。
[0021] 1)采用MS，1/4MS，WPM，改良的Anderson4種不同培養(yǎng)基對雜交幼胚進行培養(yǎng)， 培養(yǎng)基中含50mg/L GA3,30g/L蔗糖，8g/L瓊脂，pH值調(diào)整為5.0,光照12h/d，光照強度 16001x，溫度25±0. 5°C。培養(yǎng)80天后統(tǒng)計幼胚萌發(fā)率。結(jié)果如表1所示。
[0022] 表1不同組合雜交胚在不同基本培養(yǎng)基上萌發(fā)率的多重比較

【權(quán)利要求】
1?一種用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于：基本培養(yǎng)基為WPM，并 添加有 15?60g/L 蔗糖、O?80 mg/L GA3、0?2.0 mg/L IM、0?10 mg/L 2ip;其中，GA3、IAA、 2ip三者的濃度不同時為0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于：所 述的GA3濃度為50-80mg/L，所述的IAA濃度為0? 5mg/L,無添加2ip。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于： 所述的野生杜鵑雜交胚為映山紅X云錦杜鵑的雜交胚，添加的蔗糖濃度為15 g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于： 所述的野生杜鵑雜交胚為馬銀花X云錦杜鵑雜交胚，添加的蔗糖濃度為30g/L或60g/L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于野生杜鵑雜交胚的成活培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于：所 述的野生杜鵑雜交胚為馬銀花X云錦杜鵑雜交胚，在WPM中添加有20tng/L GA3、0.5mg/L IAA 、2mg/L 2ip。 6?-種野生杜鵑雜交胚的成活方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 以南京地區(qū)的映山紅、錦繡杜鵑和馬銀花為母本，自交的同時，與采自廬山的云錦杜 鵑和采自昆明植物園的映山紅、白花杜鵑、窄葉杜鵑和薄皮杜鵑進行雜交授粉；授粉3個月 后，采集的蒴果； 2) 采集的蒴果，用75%乙醇消毒30s,無菌水沖洗3遍，再用10%NaC10消毒15min,無菌 水沖洗5遍后剝胚，對雜交幼胚進行培養(yǎng)； 3) 采用成活培養(yǎng)基對雜交幼胚進行培養(yǎng)，光照12h/d，光照強度16001x，溫度25 ±〇.5°C ;培養(yǎng)80天后幼胚萌發(fā)；所述的成活培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為WPM,添加Sg/L瓊脂， pH值 5.0,并額外添加有 15~60g/L蔗糖、0~80 mg/L GA3、0?2.0 mg/L IM、(Tl〇 mg/L 2ip; 其中，GA3、IAA、2ip三者的濃度不同時為〇。
【文檔編號】A01H4/00GK104221858SQ201410439111
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】耿興敏, 吳影倩, 王良桂, 徐雁南 申請人:南京林業(yè)大學(xué)