用米曲霉固體發(fā)酵豆柏生產(chǎn)小肽飼料添加劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用米曲霉固體發(fā)酵豆柏生產(chǎn)小肽飼料添加劑的方法。以豆柏、麥麩皮、米糠為發(fā)酵原料，以米曲霉為主，兼有酵母菌、乳酸菌、芽孢菌為有益微生物發(fā)酵菌群，米曲霉、酵母菌、乳酸菌、芽孢菌經(jīng)過一級固體制種、二級液體種子罐擴繁培養(yǎng)。將四種菌的種子液按比例混合，接種到經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸球滅過菌的發(fā)酵原料中，經(jīng)過有氧固體發(fā)酵，得到高含量小肽飼料添加劑。本發(fā)明具有發(fā)酵原料來源廣泛價格低廉易于推廣、生產(chǎn)工藝結(jié)構(gòu)簡單成本低易于操作、生產(chǎn)周期短發(fā)酵產(chǎn)物多產(chǎn)品質(zhì)量好易于應(yīng)用等特點。本產(chǎn)品在海珍品、畜禽養(yǎng)殖中的飼料中添加應(yīng)用，可以防病治病、提局免疫力，提局成活率，提局生長速度，提局品質(zhì);可以改善養(yǎng)殖環(huán)境，凈化水質(zhì)。
【專利說明】用米曲霉固體發(fā)酵豆粕生產(chǎn)小肽飼料添加劑的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵技術(shù)，具體的說是用米曲霉、酵母菌、乳酸菌、芽孢菌固體 發(fā)酵豆柏生產(chǎn)高含量小肽飼料添加劑方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 米曲霉（Aspergillus oryzae)是真菌微生物，在分類學(xué)上是半知菌亞門，絲孢鋼 絲孢目，從梗孢科，曲霉屬，屬于真核生物真菌中的一個常見種。米曲霉能產(chǎn)生蛋白酶、淀粉 酶、糖化酶、纖維素酶和植酸酶。在蛋白酶作用下，可以將原料中不易消化的大分子蛋白質(zhì) 降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸；在淀粉酶作用下，可以將原料中的直鏈、支鏈淀粉降解 為糊精及各種低分子的麥芽糖、葡萄糖；在纖維素酶、植酸酶的作用下，可以將粗纖維、植酸 等難吸收的物質(zhì)降解，提高營養(yǎng)價值、保健功效和消化率。米曲霉在食品、飼料、醬油、釀酒 等發(fā)酵行業(yè)應(yīng)用，已有1〇〇〇多年的安全生產(chǎn)歷史。
[0003] 米曲霉菌的主要特點是：繁殖速度快、代謝產(chǎn)物多、適應(yīng)性強、耐高溫、應(yīng)用范圍 廣、不產(chǎn)黃曲霉毒素。
[0004] 酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)，是真菌微生物，在分類學(xué)上是真菌門、粘菌 亞門、隱球酵母科，細胞形態(tài)為球形或卵球形，直徑5 ΙΟμπι。繁殖方式為無性芽殖。生態(tài)分 布廣泛。能利用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、半乳糖等生成乙醇、甘油、酯類和糖醇等物質(zhì)，可以增 加發(fā)酵料的風(fēng)味。
[0005] 酵母菌具有生長繁殖速度快、耐鹽耐高滲透壓，容易培養(yǎng)、菌體及代謝產(chǎn)物營養(yǎng)豐 富等特點。
[0006] 乳酸菌（Lactobacillus acidophilus)是細菌微生物，在分類學(xué)上是乳酸菌屬，革 蘭氏陽性桿菌，桿的末端呈圓形，乳酸菌的作用是利用葡萄糖產(chǎn)生乳酸，和乙醇作用生成乳 酸乙酯，有濃重的乳酸香味道。由于產(chǎn)生乳酸，降低了發(fā)酵料的pH值，可以促進了酵母菌繁 殖。乳酸菌和酵母菌聯(lián)合作用，發(fā)酵料有特殊的香氣。
[0007] 乳酸菌主要存活在小腸中，能分泌乳酸、乙酸和肽類抗菌素。乳酸菌主要用于調(diào)整 腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖，對致病微生物有拮抗作用。特別是對胃腸功能 失調(diào)和服用抗菌素而引起胃腸功能失調(diào)等癥狀有特效，可以迅速使腸道內(nèi)的菌群恢復(fù)正常 平衡，抑制腐敗菌的增殖，具有很好的營養(yǎng)保健作用。
[0008] 芽孢菌，這里指的是枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)，是細菌微生物，在分類 學(xué)上是芽孢桿菌屬的一種，單個細胞0.7?0.8X2?3微米，革蘭氏陽性菌，無莢膜，周生 鞭毛，能運動。芽孢大，橢圓到柱狀，〇. 6?0. 9X1. 0?1. 5微米，位于菌體中央或稍偏，芽 孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)時，常形成皺醭。
[0009] 枯草芽孢桿菌具有繁殖速度快、耐高溫、耐酸堿、耐擠壓、穩(wěn)定性能好、應(yīng)用范圍廣 等特點，在現(xiàn)代分子遺傳學(xué)的科研探索中常作為模式菌株，在現(xiàn)實的生產(chǎn)實踐中廣泛應(yīng)用 于食品工業(yè)、飼料工業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖、環(huán)境保護和保健醫(yī)藥等諸多方面；在發(fā)酵料的發(fā)酵過程 中，主要分解蛋白質(zhì)作用，將蛋白質(zhì)降解成氨基酸和肽類物質(zhì)。
[0010] 近年來，隨著人們生活質(zhì)量的不斷提高，人們對副食品的要求越來越高，要吃的 好，還要吃的健康，這對飼料行業(yè)提出更高的要求，1、要解決優(yōu)質(zhì)蛋白源緊缺問題；2、要解 決飼料中過量使用抗生素問題；人們出于防病治病、增強免疫功能、提高飼料利用率、促進 生長、提高品質(zhì)、凈化環(huán)境目的，許多科研人員、企業(yè)家紛紛用枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿 菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌對豆柏進行發(fā)酵，生產(chǎn)微生物發(fā)酵小肽。目前在全國范 圍，先后成立20多家發(fā)酵豆柏生產(chǎn)微生物小肽的生物技術(shù)企業(yè)，年產(chǎn)量達到數(shù)十萬噸以 上。
[0011] 國外和國內(nèi)發(fā)酵豆柏，基本上都是采用芽孢菌、酵母菌、乳酸菌等三類菌群發(fā)酵， 而我們在國內(nèi)，首次提出并且實踐用米曲霉、酵母菌、乳酸菌、芽孢菌發(fā)酵豆柏，生產(chǎn)高含量 小肽飼料添加劑。
[0012] 目前，此技術(shù)經(jīng)過我們生產(chǎn)應(yīng)用，其應(yīng)用效果非常好，已在遼寧的沈陽、大連地區(qū)， 河北和河南等地區(qū)廣泛應(yīng)用，獲得了理想的應(yīng)用效果。取得了很好的經(jīng)濟效益，我們已將產(chǎn) 品實現(xiàn)了商品化生產(chǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的在于提供一種用米曲霉固體發(fā)酵豆柏生產(chǎn)小肽飼料添加劑的方法。
[0014] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0015] 本發(fā)明采用的菌種為常規(guī)的米曲霉滬釀3042和常規(guī)的酵母菌、乳酸菌、芽孢菌為 有益微生物發(fā)酵菌群，米曲霉經(jīng)過一級固體制曲、酵母菌、乳酸菌、芽孢菌經(jīng)過一級固體制 種、二級液體種子罐擴繁培養(yǎng)(二級液體種子罐擴繁培養(yǎng)基以玉米漿干粉為主要原料)。將 四種菌的種子液按比例混合，接種到經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸球滅過菌的發(fā)酵原料中，經(jīng)過有氧固體發(fā)酵， 得到高含量小肽飼料添加劑。
[0016] 本發(fā)明具有發(fā)酵原料來源廣泛價格低廉易于推廣、生產(chǎn)工藝結(jié)構(gòu)簡單成本低易于 操作、生產(chǎn)周期短發(fā)酵產(chǎn)物多產(chǎn)品質(zhì)量好易于應(yīng)用等特點。
[0017] 本產(chǎn)品在海珍品、畜禽養(yǎng)殖中的飼料中添加應(yīng)用，可以防病治病、提高免疫力，提 高成活率，提高生長速度，提高品質(zhì)；可以改善養(yǎng)殖環(huán)境，凈化水質(zhì)，是一種綠色的優(yōu)質(zhì)的 飼料添加劑。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點是：1.米曲霉蛋白利用率已達到60. 60%?82. 20%，氨基酸短鏈肽生 成率已達到22. 20%?26. 20%以上。而枯草芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌等菌株蛋白利用率只 是52. 20%?58. 30%，氨基酸短鏈肽生成率是12. 10%?16. 12%以上。
[0019] 2.在微生物發(fā)酵過程中，通過加入米曲霉，采用多種微生物的協(xié)同作戰(zhàn)，通過米曲 霉產(chǎn)生酶系的催化作用，將原料中的大分子有機物逐步分解為簡單物質(zhì)，再經(jīng)過復(fù)雜的物 理化學(xué)和生物化學(xué)的反應(yīng)，形成具有獨特的發(fā)酵料風(fēng)味。
[0020] 3.在產(chǎn)品中含粗蛋白62. 18%以上，產(chǎn)品中含小肽18. 13%以上（小肽分子量為 2000個道爾頓以下的肽段）；產(chǎn)品中含賴氨酸3. 08%、蛋氨酸1. 48%、蘇氨酸1. 46%、谷氨酸 6. 67%。
[0021] 本發(fā)明產(chǎn)品功能是：1.提蛋白飼料利用率，讓動物吃發(fā)酵制品；2.用生物制劑處 理養(yǎng)殖動物的腸胃，調(diào)整菌群平衡，殺滅有害菌，減少抗生素的使用量；3.使用本產(chǎn)品可以 明顯的改善養(yǎng)殖環(huán)境。
[0022] 本產(chǎn)品屬于高蛋白肽類飼料添加劑，可以替代抗生素又有促長作用，此類產(chǎn)品在 國內(nèi)尚屬首次報道和生產(chǎn)，現(xiàn)已引起國內(nèi)外廣泛的關(guān)注。
[0023] 本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡單，產(chǎn)品應(yīng)用效果好。在海珍品、畜禽養(yǎng)殖中的飼料中添加應(yīng) 用，可以防病治病、提商成活率，提商免疫力，提商生長速度，提商品質(zhì)；可以改善養(yǎng)殖生態(tài) 環(huán)境，凈化水質(zhì)，是一種綠色的高效、無毒、無害的優(yōu)質(zhì)的功能性飼料添加劑，具有廣闊的 市場前景。
[0024] 為實現(xiàn)上述目的，具體操作步驟為：
[0025] 1)單菌落分離：
[0026] 將經(jīng)活化的米曲霉斜面菌種，在新配置的米曲霉試管斜面接一環(huán)成熟的孢子，經(jīng) 培養(yǎng)，得到米曲霉單菌落種子。
[0027] 將經(jīng)活化的酵母菌、乳酸菌、芽孢菌斜面菌種，分別在新配置的酵母菌培養(yǎng)基、乳 酸菌培養(yǎng)基、芽孢菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，經(jīng)培養(yǎng)，分別得到酵母菌、乳酸菌、芽孢菌的單 菌落種子。
[0028] 2) -級固體種子培養(yǎng)：
[0029] 將步驟1)中分別得到的米曲霉單菌落種子接種到米曲霉固體培養(yǎng)基中，固體種子 培養(yǎng)瓶為500ml三角瓶，經(jīng)培養(yǎng)，得到米曲霉的一級固體種子；
[0030] 酵母菌單菌落種子、乳酸菌單菌落種子、芽孢菌單菌落種子，分別接種到酵母菌培 養(yǎng)基、乳酸菌培養(yǎng)基、芽孢菌培養(yǎng)基中，固體種子培養(yǎng)瓶為200ml茄形扁瓶，經(jīng)培養(yǎng)，分別得 到酵母菌、乳酸菌、芽孢菌的一級固體種子；
[0031] 3)二級液體種子培養(yǎng)：將步驟2)中分別得到的米曲霉一級固體種子（500ml三角 瓶）接種到二級種子罐液體培養(yǎng)基中。酵母菌、乳酸菌、芽孢菌一級固體種子（茄形扁瓶） 接種到二級種子罐培養(yǎng)基中。種子罐的接種量為：一級固體種子（500ml三角瓶）（茄形扁 瓶）與液體重量比為1瓶：1〇〇公斤，經(jīng)培養(yǎng)，分別得到二級液體種子液。
[0032] 4)米曲霉液體種子液濃度（cfu)彡100億個/ml。
[0033] 5 )酵母菌液體發(fā)酵液濃度（cfu )彡50億個/ml。
[0034] 6 )乳酸菌液體發(fā)酵液濃度（cfu )彡50億個/ml。
[0035] 7)芽孢菌液體發(fā)酵液濃度（cfu)彡100億個/ml。
[0036] 步驟3)所采用的米曲霉種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計為：葡萄糖2. 0?3. 0%、 玉米漿干粉1. 〇?3. 0%、豆柏1. 0?2. 0%、麥麩皮1. 0?2. 0%、米糠1. 0?2. 0%、硫酸銨 0. 1?0. 2%、磷酸氫二鉀0?0. 2%，余量為水。種子罐滅菌條件：滅菌0. 08?0. lOMPa、 115?121°C、18?20min;培養(yǎng)條件：接種量(質(zhì)量）10?20% ;罐壓0· 01?0· lOMpa、風(fēng)量 100:80 ?100:120vvm、轉(zhuǎn)速 100 ?200rpm、溫度 28°C?36°C ;時間 48 ?64h。
[0037] 所采用的酵母菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：酵母菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百 分比計為：葡萄糖2. 0?4. 0%、玉米漿干粉2. 0?4. 0%、硫酸銨0?0. 2%、磷酸氫二鉀0? 0· 2%，余量為水。種子罐滅菌條件：滅菌0· 08?0· 10MPa、115?121°C、18?20min;培養(yǎng) 條件：接種量10?20% ;罐壓0· 01?0· lOMPa、風(fēng)量100:100?100:150vvm、轉(zhuǎn)速180? 220rpm、溫度 28°C?36°C ;時間 48 ?64h。
[0038] 所采用的乳酸菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：乳酸菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百 分比計為：葡萄糖1. 0?2. 0%、玉米漿干粉2. 0?4. 0%、硫酸銨0?0. 2%、磷酸氫二鉀0? 0. 2%，余量為水。種子罐滅菌條件：滅菌0. 08?0. 10MPa、115?121°C、18?20min;培養(yǎng)條 件：接種量 10 ?20% ;罐壓 0· 01 ?0· lOMPa、風(fēng)量 100:0 ?100: lOOvvm、轉(zhuǎn)速 0 ?lOOrpm、 溫度28°C?36°C ;時間48?72h (乳酸菌24小時后為靜置培養(yǎng)，其它時間為通氣培養(yǎng))。
[0039] 所采用的芽孢菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：芽孢菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百 分比計為：葡萄糖0. 5?1. 5%、玉米漿干粉2. 0?4. 0%、硫酸銨0?0. 2%、磷酸氫二鉀0? 0· 2%，余量為水。種子罐滅菌條件：滅菌0· 08?0· 10MPa、115?121°C、18?20min;培 養(yǎng)條件：接種量10?20% ;罐壓0· 01?0· lOMPa、風(fēng)量100:80?100:120vvm、轉(zhuǎn)速100? 200rpm、溫度 28°C?32°C ;時間 48 ?64h。
[0040] 較佳方案如下：
[0041] 所采用的米曲霉種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：米曲霉(液體種曲）種子罐培養(yǎng)基 以重量百分比計為：葡萄糖3. 0%、玉米漿干粉3. 0%、豆柏1. 0%、麥麩子1. 0%、米糠1. 0%、硫 酸銨0. 1%、磷酸氫二鉀0. 1%、余量為水。種子罐滅菌條件：滅菌0. 10MPa、12rC、20min;培 養(yǎng)條件為：接種量20% ;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量100: lOOvvm、轉(zhuǎn)速120rpm、溫度32°C、時間56h。
[0042] 所采用的酵母菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：酵母菌的種子罐培養(yǎng)基以重量 百分比計為：葡萄糖3. 0%、玉米漿干粉3. 0%、硫酸銨0. 1%、磷酸氫二鉀0. 1%，余量為水；種 子罐滅菌條件：滅菌0. 10MPa、121°C、20min;培養(yǎng)條件：接種量20%;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量 100:150vvm、轉(zhuǎn)速 200rpm、溫度 30°C、時間 56h。
[0043] 所采用的乳酸菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：乳酸菌種子罐培養(yǎng)基以重量百 分比計為：葡萄糖1. 5%，玉米漿干粉3. 0%、硫酸銨0. 1%、磷酸氫二鉀0. 1%，余量為水；種 子罐滅菌條件：滅菌0. 10MPa、121°C、20min;培養(yǎng)條件：接種量20% ;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量 100:50VVm、轉(zhuǎn)速50rpm、溫度32°C、時間為64h (乳酸菌24小時后為靜置培養(yǎng)）；
[0044] 所采用的芽孢菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：芽孢菌的種子罐培養(yǎng)基以重量 百分比計為：葡萄糖1. 〇%、玉米漿干粉3. 0%、硫酸銨0. 1%、磷酸氫二鉀0. 1%、余量為水；種 子罐滅菌條件：滅菌0. 10MPa、121°C、20min;培養(yǎng)條件：接種量20%;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量 100:100vvm、轉(zhuǎn)速 150rpm、溫度 30°C、時間 56h。
[0045] 采用血球計數(shù)法測定米曲霉的孢子；。
[0046] 采用平板計數(shù)法測定酵母菌、乳酸菌、芽孢菌的菌數(shù)。

【具體實施方式】
[0047] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。
[0048] 用米曲霉固體發(fā)酵豆柏生產(chǎn)小肽飼料添加劑的方法，可按下列步驟具體操作：
[0049] 實施例1 :
[0050] 米曲霉（Aspergillus oryzae)(產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、纖維素酶和植酸酶） 單菌落純化、一級固體種子培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)、菌數(shù)的檢查及其確定，具體操作步驟 如下：
[0051] 1)單菌落純化與優(yōu)選：將經(jīng)活化米曲霉斜面菌種，接種到新配置米曲霉固體培養(yǎng) 基中，固體種子培養(yǎng)瓶為500ml三角瓶，經(jīng)培養(yǎng)(溫度30°C、時間56h)，得到米曲霉的一級固 體種子；
[0052] 米曲霉單菌落純化用培養(yǎng)基：
[0053] 豆汁1000ml波美5度、硫酸鎂0. 5g、可溶性淀粉20g、磷酸二氫鉀lg、硫酸銨0. 5g、 ?冊.0、瓊脂2(^。
[0054] 米曲霉一級固體種子用培養(yǎng)基：
[0055] 麥麩皮50(^、面粉1(^、葡萄糖1(^、水400?4251111、？!1自然。
[0056] 2)培養(yǎng)：將上步驟1)中得到的米曲霉單菌落種子，用孢子接種到米曲霉一級固體 種子培養(yǎng)基中，固體種子培養(yǎng)瓶為500ml三角瓶，經(jīng)培養(yǎng)(溫度32°C、時間56)，得到米曲霉 一級固體種子；
[0057] 3)二級液體種子培養(yǎng)(選擇培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件試驗）：采取深層發(fā)酵法生產(chǎn)種子 液，將培養(yǎng)好的三角瓶米曲霉一級固體種子，用200mL無菌水洗下孢子，用火焰接種法接入 發(fā)酵罐中，（發(fā)酵罐可以是500立升、1噸、2噸)，裝液量不超過其體積70%，通氣發(fā)酵培養(yǎng)。 培養(yǎng)成熟時，菌液有一種大豆固有香味，顯微鏡下檢查米曲霉菌絲健壯，無雜菌污染，孢子 發(fā)亮且圓大等現(xiàn)象，即可與其他三種菌液混合使用。
[0058] 米曲霉菌的主要特點是：繁殖速度快、代謝產(chǎn)物多、適應(yīng)性強、耐高溫、應(yīng)用范圍 廣、不產(chǎn)黃曲霉毒素。
[0059] 米曲霉二級液體種子培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件試驗
[0060] a、米曲霉二級液體種子養(yǎng)基配方試驗：
[0061] 試驗設(shè)計和試驗結(jié)果如下表1 :
[0062] 表1.米曲霉菌二級液體種子罐培養(yǎng)基配方試驗
[0063]

【權(quán)利要求】
1. 用米曲霉固體發(fā)酵豆柏生產(chǎn)小肽飼料添加劑的方法，其特征在于：以豆柏、麥麩皮、 米糠為發(fā)酵原料；以米曲霉為主，兼有酵母菌、乳酸菌、芽孢菌為有益微生物發(fā)酵菌群，發(fā)酵 原料中各種原料的重量比為；豆柏100?120份：麥麩皮10?20份：米糠10?20份；發(fā) 酵原料與有益微生物發(fā)酵菌群種子液的重量比為；發(fā)酵原料1〇〇?120份：米曲霉30?40 份：酵母菌10?20份：乳酸菌10?20份：芽孢菌10?20份； 固體發(fā)酵在發(fā)酵床上進行通風(fēng)有氧培養(yǎng)，發(fā)酵料的起始相對含水量43. 8%?50. 9%， 起始溫度為20°C?30°C，發(fā)酵過程控制溫度為40°C?60°C，發(fā)酵時間應(yīng)控制在100?120 小時；且使發(fā)酵溫度于40°C以上持續(xù)48小時以上后，通過翻倒、通風(fēng)加氧，可使發(fā)酵料溫度 下降至30°C以下，物理反應(yīng)和生化反應(yīng)結(jié)束，發(fā)酵料有酒香和乳酸味產(chǎn)生，PH值為4. 0? 5. 0,發(fā)酵達到終點； 對發(fā)酵床上發(fā)酵料進行通風(fēng)，降低相對含水量到20?25%，然后傳輸?shù)搅骰采?，?50°C?60°C條件下烘干，烘干到質(zhì)量含水量< 10%，粉碎、過篩。
2. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：按百分含量計，發(fā)酵所得的產(chǎn)品中含粗蛋 白62. 18%以上； 產(chǎn)品中含小肽18. 13%以上（小肽分子量為2000個道爾頓以下的肽段）； 產(chǎn)品中含賴氨酸3. 08%、蛋氨酸1. 48%、蘇氨酸1. 46%、谷氨酸6. 67%。
3. 按照權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于：所述固體發(fā)酵過程中，發(fā)酵料中各種 原料最佳重量比為：豆柏100份：麩皮10份：米糠10份。
4. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述固體發(fā)酵過程中，發(fā)酵原料與微生物 發(fā)酵菌群種子液的最佳重量比為；發(fā)酵原料1〇〇份：米曲霉30份：酵母菌10份：乳酸菌10 份：芽孢菌10份。
5. 按照權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征在于：所述種子液中米曲霉種子液中每毫 升含孢子數(shù)> 100個億；酵母菌、乳酸菌種子液中每毫升含活菌數(shù)> 50個億；芽孢菌種子 液中每毫升含活菌數(shù)> 100個億。
6. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：固體發(fā)酵料在發(fā)酵床上進行通風(fēng)有氧培 養(yǎng)，發(fā)酵料起始含水量為43. 8% (相對含水量），起始溫度為20°C，過程控制溫度為40°C? 60°C，時間控制在100小時；且使發(fā)酵溫度于40°C以上持續(xù)48小時以上后，通過翻倒、通風(fēng) 加氧，可使發(fā)酵料溫度下降至30°C以下，物理反應(yīng)和生化反應(yīng)結(jié)束，發(fā)酵料有酒香和乳酸味 產(chǎn)生，PH值為5.0,發(fā)酵達到終點。 繼續(xù)對發(fā)酵床進行通風(fēng)，降低相對含水量到20?25%，然后傳輸在到流化床上，在 50?60°C條件下烘干，烘干到含水量< 10%，粉碎、過篩。
7. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述米曲霉種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條 件為：米曲霉種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計為：葡萄糖2. 0?3. 0%、玉米漿干粉1. 0? 3. 0%、豆柏1. 0?2. 0%、麥麩子1. 0?2. 0%、米糠1. 0?2. 0%、硫酸銨0· 1?0· 2%、 磷酸氫二鉀〇?〇. 2%，余量為水；種子罐滅菌條件：滅菌0. 08?0. 10MPa、115?121°C、 18?20111丨11;培養(yǎng)條件：接種量（質(zhì)量）10?20% ;罐壓0.01?0.101^^、風(fēng)量100:80? 100 : 120vvm、攪拌轉(zhuǎn)速 100 ?200rpm、溫度 28°C?36°C ;時間 48 ?64h ; 所述酵母菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：酵母菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計 為：葡萄糖2. 0?4. 0 %、玉米漿干粉2. 0?4. 0 %、硫酸銨0?0. 2 %、磷酸氫二鉀0? 0· 2%，余量為水；種子罐滅菌條件：滅菌0· 08?0· 10MPa、115?121°C、18?20min ;培養(yǎng) 條件：接種量10?20%;罐壓0.01?O.lOMPa、風(fēng)量100 : 100?100 : 150vvm、攪拌轉(zhuǎn) 速 180 ?220rpm、溫度 28°C?36°C ;時間 48 ?64h ; 所述乳酸菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：乳酸菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計 為：葡萄糖1. 0?2. 0 %、玉米漿干粉2. 0?4. 0 %、硫酸銨0?0. 2 %、磷酸氫二鉀0? 0· 2%，余量為水；種子罐滅菌條件：滅菌0· 08?0· 10MPa、115?121°C、18?20min ;培養(yǎng) 條件：接種量10?20%;罐壓0.01?O.lOMPa、風(fēng)量100 : 0?100 : lOOvvm、攪拌轉(zhuǎn)速 0?lOOrpm、溫度28°C?36°C ;時間48?72h(乳酸菌24小時后為靜置培養(yǎng)，其它時間為 通氣培養(yǎng)）； 所述芽孢菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：芽孢菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計 為：葡萄糖0. 5?1. 5 %、玉米漿干粉2. 0?4. 0 %、硫酸銨0?0. 2 %、磷酸氫二鉀0? 0· 2%，余量為水。種子罐滅菌條件：滅菌0· 08?0· 10MPa、115?121°C、18?20min ;培養(yǎng) 條件：接種量10?20%;罐壓0. 01?0. lOMPa、風(fēng)量100 : 80?100 : 120vvm、攪拌轉(zhuǎn)速 100 ?200rpm、溫度 28°C?32°C ;時間 48 ?64h。
8. 按照權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述米曲霉種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 為：米曲霉種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計為：葡萄糖3. 0%、玉米漿干粉3. 0%、豆柏1. 0%、 麥麩子1.0%、米糠1.0%、硫酸銨0. 1 %、磷酸氫二鉀0. 1 %、余量為水；種子罐滅菌條件： 滅菌0.1010^、1211：、2〇111丨11;培養(yǎng)條件為：接種量20% ;罐壓0.051^^、風(fēng)量 100:100-111、 攪拌轉(zhuǎn)速120rpm、溫度32°C、時間56h ; 所述酵母菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：酵母菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計 為：葡萄糖3.0%、玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0. 1 %、磷酸氫二鉀0. 1%，余量為水；種子 罐滅菌條件：滅菌〇. l〇MPa、121°C、20min ;培養(yǎng)條件：接種量20% ;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量 100 : 150vvm、攪拌轉(zhuǎn)速 200rpm、溫度 30°C、時間 56h ; 所述乳酸菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：乳酸菌種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計 為：葡萄糖1.5%，玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0. 1%、磷酸氫二鉀0. 1%，余量為水；種子 罐滅菌條件：滅菌〇. l〇MPa、121°C、20min ;培養(yǎng)條件：接種量20% ;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量 100 : 50vvm、攪拌轉(zhuǎn)速50rpm、溫度32°C、時間為64h(乳酸菌24小時后為靜置培養(yǎng)）； 所述芽孢菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為：芽孢菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百分比計 為：葡萄糖1.0%、玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0. 1%、磷酸氫二鉀0. 1%、余量為水；種子 罐滅菌條件：滅菌〇. l〇MPa、121°C、20min ;培養(yǎng)條件：接種量20% ;罐壓0. 05Mpa、風(fēng)量 100 : lOOvvm、攪拌轉(zhuǎn)速 150rpm、溫度 30°C、時間 56h。
9. 按照權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于：本發(fā)明屬規(guī)模化生產(chǎn)，在種子液體培 養(yǎng)中，種子罐可以采用一級發(fā)酵（1噸罐或2噸罐），也可以采用兩級發(fā)酵（10噸罐或20噸 罐），并采用4套分別對應(yīng)米曲霉、酵母菌、乳酸菌和芽孢菌的深層發(fā)酵過程；在原料配料中 采用3?5倉100噸全自動配料方法；在固體發(fā)酵中采用自動式履帶傳輸系統(tǒng)，混料、接菌、 鋪料、發(fā)酵、通風(fēng)、烘干、計量、包裝等過程，全部采用程序化控制，自動化生產(chǎn)。
【文檔編號】A23K1/14GK104206645SQ201310210497
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月30日
【發(fā)明者】薛德林, 劉志國, 李鐵軍, 王曉霞, 李威, 朱穎 申請人:遼寧威蘭生物技術(shù)有限責(zé)任公司