專利名稱：紫嬌花的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及紫嬌花的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
紫嬌花為百合科蔥屬植物，原產(chǎn)地為南非，屬球根花卉，株高30-50cm，具圓柱形小 鱗莖，成株叢生狀。莖葉均含有韭味，頂部有聚傘狀花序，開(kāi)紫粉色小花，花期長(zhǎng)，是良好的 庭院栽植、盆栽或切花材料。但是，作為國(guó)外引進(jìn)的新品種，紫嬌花引種數(shù)量較少，其分株或 鱗莖種植慢，因此種苗供應(yīng)受到一定的限制，無(wú)法滿足現(xiàn)在市場(chǎng)的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，并提高性狀穩(wěn)定性的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無(wú)菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的小芽和花苞，去除葉片后，用自來(lái)水沖洗l_3h后于超凈工 作臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min,再用無(wú)菌水沖洗4_6次，利用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0. 5-2cm長(zhǎng)的 帶腋芽的節(jié)段和花苞，節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2-4周后，腋芽部位開(kāi)始膨大，出現(xiàn)黃綠色突 起，4-6周后可見(jiàn)芽分生組織，再培養(yǎng)1-3個(gè)月，小的不定芽可以長(zhǎng)到2-3cm，將不定芽切下 轉(zhuǎn)入芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽 生長(zhǎng)迅速且無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮 化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)，15-30天后可以長(zhǎng) 至 3-4cm ；(4)生根培養(yǎng)取3_4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10-20天后幼苗基部分 化出白色的根原基，25-40天后可以長(zhǎng)至3-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20-40天，根系長(zhǎng)至0. 5-lcm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室 內(nèi)開(kāi)瓶煉苗1-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20-40天，即 可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100%。所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+6-BA2. 0-5. 0mg/L+NAA0. 2-0. 5mg/L。
所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的芽的增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的芽的增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAAO. 2mg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過(guò)組培技術(shù)，極大提高了紫嬌花的繁殖速度和苗的整 齊度，并提高了其性狀的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1(1)無(wú)菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的小芽和花苞，去除葉片后，用自來(lái)水沖洗Ih后于超凈工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無(wú)菌 水沖洗4次，利用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0. 5cm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段和花苞，節(jié) 段和花苞接種于包括MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2周后，腋芽部位開(kāi)始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 4周后可見(jiàn)芽分生組織，再培養(yǎng)1個(gè)月，小的不定芽可以長(zhǎng)到2cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括 MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織 較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)， 不定芽迅速伸長(zhǎng)，15天后可以長(zhǎng)至3cm ；(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10 天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后可以長(zhǎng)至3cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20天，根系長(zhǎng)至0. 5cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開(kāi) 瓶煉苗1天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20天，即可移栽室 外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養(yǎng)溫度24°C， 光照 15001x。
實(shí)施例2(1)無(wú)菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的小芽和花苞，去除葉片后，用自來(lái)水沖洗2h后于超凈工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無(wú)菌水 沖洗5次，利用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分后，再切成lcm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段和花苞，節(jié)段和 花苞接種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，腋芽部位開(kāi)始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 5周后可見(jiàn)芽分生組織，再培養(yǎng)2個(gè)月，小的不定芽可以長(zhǎng)到3cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織 較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)， 不定芽迅速伸長(zhǎng)，20天后可以長(zhǎng)至4cm ；(4)生根培養(yǎng)取4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAA0. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，15 天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長(zhǎng)至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長(zhǎng)至lcm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開(kāi)瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化30天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養(yǎng)溫度25°C， 光照 20001x。實(shí)施例3(1)無(wú)菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的小芽和花苞，去除葉片后，用自來(lái)水沖洗3h后于超凈工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，再用無(wú)菌水 沖洗6次，利用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分后，再切成2cm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段和花苞，節(jié)段和 花苞接種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上4周后，腋芽部位開(kāi)始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 6周后可見(jiàn)芽分生組織，再培養(yǎng)2個(gè)月，小的不定芽可以長(zhǎng)到3cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織 較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，
6不定芽迅速伸長(zhǎng)，30天后可以長(zhǎng)至4cm ；(4)生根培養(yǎng)取4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 3mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，20 天后幼苗基部分化出白色的根原基，40天后可以長(zhǎng)至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 94% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)40天，根系長(zhǎng)至Icm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開(kāi)瓶 煉苗4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化40天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為95%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養(yǎng)溫度26°C， 光照 25001x。
權(quán)利要求
紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無(wú)菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的小芽和花苞，去除葉片后，用自來(lái)水沖洗1-3h后于超凈工作臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無(wú)菌水沖洗4-6次，利用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0.5-2cm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段和花苞，節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段和花苞接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2-4周后，腋芽部位開(kāi)始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，4-6周后可見(jiàn)芽分生組織，再培養(yǎng)1-3個(gè)月，小的不定芽可以長(zhǎng)到2-3cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)，15-30天后可以長(zhǎng)至3-4cm；(4)生根培養(yǎng)取3-4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10-20天后幼苗基部分化出白色的根原基，25-40天后可以長(zhǎng)至3-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20-40天，根系長(zhǎng)至0.5-1cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開(kāi)瓶煉苗1-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20-40天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 包括 MS+6-BA2. 0-5. 0mg/L+NAA0. 2-0. 5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 優(yōu)選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽的增殖培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽的增殖培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基包 括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基包 括 MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+NAA0. 2mg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4或6或8所述的紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度24-26°C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及紫嬌花的組織培養(yǎng)方法，包括無(wú)菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大提高了紫嬌花的繁殖速度和苗的整齊度，并提高了其性狀的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101869068SQ20091004997
公開(kāi)日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請(qǐng)人:上海上房園林植物研究所