牛奶中黃曲霉毒素m1吸附親和柱檢測(cè)裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種牛奶中黃曲霉毒素Ml吸附親和柱檢測(cè)裝置，屬于檢測(cè)設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]黃曲霉毒素是霉菌毒素中毒性最大、對(duì)人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素，所以對(duì)農(nóng)作物、食物中黃曲霉毒素含量的檢測(cè)就十分重要，常用的檢測(cè)方法有:黃曲霉毒素免疫檢測(cè)方法，如黃曲霉毒素免疫親和層析分離純化與大型儀器聯(lián)用法檢測(cè)技術(shù)、時(shí)間熒光分辨分析方法、競(jìng)爭(zhēng)微球酶聯(lián)免疫分析方法等。
[0003]A.免疫親和層析分離純化與大型儀器聯(lián)用法
[0004]采用免疫親和層析柱對(duì)經(jīng)簡(jiǎn)單提取的樣品溶液過(guò)柱分離純化后，直接采用高效液相色譜儀或熒光分光光度計(jì)儀器進(jìn)行檢測(cè)黃曲霉毒素含量。這類分析方法樣品前處理簡(jiǎn)單，特異性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。但免疫親和層析對(duì)層析柱的技術(shù)要求高，層析過(guò)程復(fù)雜O
[0005]B.免疫親和熒光傳感器檢測(cè)技術(shù)
[0006]為了提高AFBI檢測(cè)的自動(dòng)化程度，美國(guó)學(xué)者carlson等研宄設(shè)計(jì)了一種免疫親和焚光傳感器[Carlson MA, Bargeron CB, Benson RC, etal.An automated, handheldb1sensor for af lactoxin.B1sensor& b1electronics，2000，14:841-848]，通過(guò)向流動(dòng)反應(yīng)池泵入一定量免疫微球懸浮液，去除液體后，泵入提取樣品溶液，洗去非特異性吸附物，再泵入甲醇洗脫黃曲霉毒素，最后用自帶的微型熒光傳感器檢測(cè)，線性范圍在0.1-50ng/go該方法成本高，技術(shù)含量高。
[0007]C.競(jìng)爭(zhēng)微球酶聯(lián)免疫分析技術(shù)
[0008]英國(guó)學(xué)者Garden s.R.[Garden SR，StrachaIl NJC.Novel colorimetricimmunoassay for the detect1n of aflatox1n BI[J].Analytic Chimica.Acta，2001，444:187-191]利用直徑為98微米的微球替代傳統(tǒng)的酶標(biāo)板，將一定量已吸附了黃曲霉毒素與牛血清白蛋白連接物的免疫微球置于反應(yīng)容器中，依照競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)分析方法原理和程序檢測(cè)黃曲霉毒素含量，檢測(cè)限達(dá)0.2ng/mL，全過(guò)程僅需要2.5h。但該方法由于受樣品雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，檢測(cè)限只能達(dá)到4ng/mL，尚需要進(jìn)一步完善。
[0009]免疫分析為基礎(chǔ)的準(zhǔn)確、快速、無(wú)污染、智能化檢測(cè)技術(shù)成為黃曲霉毒素檢測(cè)方法研宄中的熱點(diǎn)，免疫親和技術(shù)與儀器分析聯(lián)用的檢測(cè)方法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的方法，已被國(guó)內(nèi)外農(nóng)產(chǎn)品及食品檢疫部門(mén)接受應(yīng)用。然而，這類方法存在免疫親和微柱純化樣品成本高、樣品處理完全依賴手工操作，檢測(cè)過(guò)程自動(dòng)化和檢測(cè)結(jié)果智能化程度低的問(wèn)題。免疫親和微球純化結(jié)合快速專用檢測(cè)儀器實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素Ml的快速定量檢測(cè)被認(rèn)為是未來(lái)黃曲霉毒素快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的趨勢(shì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型提供了一種牛奶中黃曲霉毒素Ml吸附親和柱檢測(cè)裝置，該檢測(cè)裝置以分離高效、快速及準(zhǔn)確定量和成本低、操作簡(jiǎn)便為研宄目標(biāo)，設(shè)計(jì)研制偶聯(lián)黃曲霉毒素Ml抗體的聚合物微球，并制備成高效吸附親和柱，并與凈化操作裝置及熒光分光光度計(jì)配套使用，達(dá)到快速檢測(cè)黃曲霉毒素Ml的目的。
[0011]本實(shí)用新型解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:一種牛奶中黃曲霉毒素Ml吸附親和柱檢測(cè)裝置由免疫親和微柱、接收瓶和熒光分光光度計(jì)組成，免疫親和微柱其中包括注射器、聚合物微球和玻璃纖維，免疫親和微柱的制備方法為:將玻璃纖維用甲醇和水反復(fù)浸泡數(shù)次，至浸泡液背景熒光值與甲醇背景熒光值相當(dāng)，取少量裝入注射器底部作為濾層材料，再用甲醇將整個(gè)微柱洗2次，然后用純水洗2次，去除雜質(zhì)。用電子天平多次稱取少許聚合物微球載體，移取Iml含有AFMl抗體的清液，將聚合物微球放入其中，震蕩，讓聚合物微球載體與清液內(nèi)的AFMl抗體偶聯(lián)，放入4°C冰箱內(nèi)過(guò)夜。次日，將清液與聚合物微球載體共同注入底部放有玻璃纖維的注射器內(nèi)，上面再放置少許脫脂棉。推動(dòng)注射器將里面壓實(shí)，這樣，載體與抗體便偶聯(lián)完畢。將待檢測(cè)的牛乳樣液注入注射器內(nèi)，推動(dòng)注射器流經(jīng)免疫親和微柱中的聚合物微球部分，里面的毒素被微球上抗體捕獲，然后用試劑將微球上的毒素洗脫進(jìn)行檢測(cè)。洗脫實(shí)驗(yàn)為，用l.0mL甲醇注入注射器中，推動(dòng)注射器，并用接收瓶收集洗脫液，從收集的洗脫液中取0.6mL，用熒光分光光度計(jì)測(cè)熒光值，測(cè)定條件:激發(fā)波長(zhǎng):365nm,發(fā)射波長(zhǎng):440nm,帶寬均為5nm。
[0012]本實(shí)用新型的有益效果是:利用聚合物微球作為親和柱的載體，將免疫活性抗體AFMl通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄅ悸?lián)到載體上。將注射器、玻璃纖維濾層、偶聯(lián)黃曲霉毒素Ml抗體的免疫親和聚合物微球填料進(jìn)行恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，組成親和微柱。能夠使整個(gè)微柱凈化過(guò)程實(shí)現(xiàn)高效、快速的操作，從進(jìn)樣到洗脫達(dá)到污染少，對(duì)操作人員安全的條件。配套熒光光度計(jì)，用于檢測(cè)洗脫液中的AFMl的濃度。
【附圖說(shuō)明】
[0013]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)一步說(shuō)明。
[0014]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015]圖中標(biāo)號(hào):
[0016]1、注射器，2、聚合物微球，3、玻璃纖維，4、接收瓶，5、熒光分光光度計(jì)。
【具體實(shí)施方式】
[0017]一種牛奶中黃曲霉毒素Ml吸附親和柱檢測(cè)裝置由免疫親和微柱、接收瓶4和熒光分光光度計(jì)5組成，免疫親和微柱其中包括注射器1、聚合物微球2和玻璃纖維3，免疫親和微柱的制備方法為將玻璃纖維3用甲醇和水反復(fù)浸泡數(shù)次，至浸泡液背景熒光值與甲醇背景熒光值相當(dāng)，取少量裝入注射器I底部作為濾層材料，再用甲醇將整個(gè)微柱洗2次，然后用純水洗2次，去除雜質(zhì)。用電子天平多次稱取少許聚合物微球2載體，移取Iml含有AFMl抗體的清液，將微球放入其中，震蕩，讓聚合物微球2載體與清液內(nèi)的AFMl抗體偶聯(lián)，放入4°C冰箱內(nèi)過(guò)夜。次日，將清液與聚合物微球載體共同注入底部放有玻璃纖維3的注射器內(nèi)，上面再放置少許脫脂棉。推動(dòng)注射器I將里面壓實(shí)，這樣，載體與抗體便偶聯(lián)完畢。將待檢測(cè)的牛乳樣液注入注射器I內(nèi)，推動(dòng)注射器I流經(jīng)免疫親和微柱中的聚合物微球2部分，里面的毒素被微球上抗體捕獲，然后用試劑將微球上的毒素洗脫進(jìn)行檢測(cè)。洗脫實(shí)驗(yàn)為，用1.0mL甲醇注入注射器I中，推動(dòng)注射器1，并用接收瓶4收集洗脫液，從收集的洗脫液中取0.6mL，用熒光分光光度計(jì)5測(cè)熒光值，測(cè)定條件:激發(fā)波長(zhǎng):365nm，發(fā)射波長(zhǎng):440nm,帶寬均為5nm。
[0018]其主要操作流程為:第I步、抗體與微球的偶聯(lián)，第2步、親和微柱的裝填，第3步注入含黃曲霉毒素Ml的待檢測(cè)牛乳，第4步、洗脫與親和柱內(nèi)微球結(jié)合的毒素，第5步，熒光法檢測(cè)洗脫液中黃曲霉毒素Ml，確定毒素的含量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種牛奶中黃曲霉毒素Ml吸附親和柱檢測(cè)裝置，其特征在于:該檢測(cè)裝置由免疫親和微柱、接收瓶(4)和熒光分光光度計(jì)(5)組成，免疫親和微柱其中包括注射器(I )、聚合物微球(2)和玻璃纖維(3)。
【專利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種牛奶中黃曲霉毒素M1吸附親和柱檢測(cè)裝置，屬于檢測(cè)設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域。該檢測(cè)裝置由免疫親和微柱、接收瓶和熒光分光光度計(jì)組成，免疫親和微柱其中包括注射器、聚合物微球和玻璃纖維，利用聚合物微球作為親和柱的載體，將免疫活性抗體AFM1通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄅ悸?lián)到載體上。將注射器、玻璃纖維濾層、偶聯(lián)黃曲霉毒素M1抗體的免疫親和聚合物微球填料進(jìn)行恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，組成親和微柱。能夠使整個(gè)微柱凈化過(guò)程實(shí)現(xiàn)高效、快速的操作，從進(jìn)樣到洗脫達(dá)到污染少，對(duì)操作人員安全的條件。配套熒光光度計(jì)，用于檢測(cè)洗脫液中的AFM1的濃度。
【IPC分類】G01N33-543, G01N33-558
【公開(kāi)號(hào)】CN204594992
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520242957
【發(fā)明人】張小舟, 裴世春, 岳成娥, 侯玉雙, 佟麗
【申請(qǐng)人】齊齊哈爾大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年4月21日