一種靈芪加口服液含量的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥復方檢測方法，具體涉及一種靈芪加口服液含量的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 靈芪加口服液，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準中， WS-11254(ZD-1254)-2002中寫明了含量的測定方法為薄層色譜分析方法，其中供試品溶液 的制備方法為：精密量取本品30ml，用氯仿振搖提取2次，每次25ml，棄去氯仿液，水液用 水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄 去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內徑lcm， 長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用30%乙醇50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇 50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖 勻，作為供試品溶液。按相似相溶原理，氯仿是除去雜質；正丁醇是溶解有效成分；D101型 大孔吸附樹脂柱為分離載體，起吸附作用，除去雜質。
[0003]總體來說，現有技術制備供試品實驗步驟中應用氯仿有機試劑，毒性大，費用較 高，步驟繁雜，不利于實驗研宄及藥品生產、檢驗。含量測定方法為薄層色譜分析方法，其精 密度、準確性有待提高。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種解決現有技術的測定靈芪加口服液的方法。
[0005] 本發(fā)明提供的一種靈芪加口服液含量的測定方法，包括以下步驟：色譜條件、對照 品溶液的制備、供試品溶液的制備和檢測。
[0006] 所述測定方法中：
[0007] 色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（30:70)為流動相； 用蒸發(fā)光散射器檢測，理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于3500;
[0008] 對照品溶液的制備：取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含 〇? 5mg的溶液，即得；
[0009] 供試品溶液的制備：精密量取靈芪加口服液25_30ml，用水飽和正丁醇振搖提取3 次，每次25-30ml，合并正丁醇液，用氨試液20-25ml洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水 20-25ml洗滌，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖 勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0010] 測定：精密吸取對照品溶液2 y 1、5 y 1，供試品溶液10 y 1，注入液相色譜儀，測 定，以外標兩點法對數方程計算。
[0011] 優(yōu)選地，所述測定方法包括以下步驟：
[0012] 色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為30:70的乙腈-水 為流動相；用蒸發(fā)光散射器檢測，理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于3500;
[0013] 對照品溶液的制備：取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含 〇? 5mg的溶液，即得；
[0014] 供試品溶液的制備：精密量取靈芪加口服液25ml，用水飽和正丁醇振搖提取3次， 每次30ml，合并正丁醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水20ml洗滌， 分取正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù) 濾液，即得；
[0015] 測定：精密吸取對照品溶液2 y 1、5 y 1，供試品溶液10 y 1，注入液相色譜儀，測 定，以外標兩點法對數方程計算。
[0016] 本發(fā)明提供的檢測方法最終檢測每1ml靈芪加口服液中黃芪甲苷含量不低于 32 ug〇
[0017] 本發(fā)明提供的檢測方法具有以下優(yōu)點：
[0018] 1、供試品制備時采用正丁醇提取有效成分，未用氯仿達到了低毒、綠色實驗的目 的；黃芪甲苷雖分子量較大，但畢竟具苷類性質，必須注意減少損失，萃取及洗滌體積應不 宜過大。
[0019] 2、也有報道，當歸補血口服液中黃芪甲苷的檢測方法，與本發(fā)明非常接近，如 CN200910064944. 4 (公開號為CN101551365A)，但是本發(fā)明使用乙腈-水（30:70)做為流動 相的檢測結果準確度高、相對偏差?。?br>[0020] 供試品溶液的制備中萃取的次數少、洗滌時間短、省時、快捷、通過實驗結果證明 可達到相同結果，得到了同量的有效成分。
[0021] 2、本發(fā)明提供的采用蒸發(fā)光色譜儀檢測此含量的方法，準確度、精密度、耐用性都 符合相應標準，表明方法可行。
【具體實施方式】
[0022] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0023] 實施例1
[0024]1、儀器與試藥
[0025] SEDEX75(法國），黃芪甲苷對照品，來源：中國藥品生物制品檢定所，乙腈：為色譜 純，其余為分析純。
[0026] 2、色譜條件
[0027] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（5 y，150X4. 6mm);以乙腈-水（30:70)為流 動相；用蒸發(fā)光散射器檢測，理論板數按黃芪甲苷峰算應不低于3500。
[0028] 2. 1對照品溶液的制備：取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含 〇? 5mg的溶液，即得。
[0029] 2. 2供試品溶液的制備：
[0030] 精密量取靈芪加口服液25ml，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁 醇液，用氨試液20ml洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水20ml洗滌，分取正丁醇液，蒸干， 殘渣用甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0031] 2. 3測定法：精密吸取對照品溶液2 y 1、5 y 1，供試品溶液10 y 1，注入液相色譜 儀，測定，以外標兩點法對數方程計算。
[0032]3、方法驗證
[0033] 3. 1陰性對照試驗
[0034] 取靈芝15. 0g，刺五加40. 0g，按制法項下制成無黃芪溶液100ml，精密取25ml，按 照供試品溶液制備方法制成陰性對照液，按上述色譜法測定，結果表明靈芪加口服液中其 他成分對黃芪甲苷的測定無干擾。
[0035] 3. 2線性關系考察：精密量取對照品溶液（0. 864mg/ml) 1 y 1、2 y 1、3 y 1、4 y 1、 6 y 1、8 y 1、10 y 1、15 y 1，注入液相色譜儀測定峰面積，以進樣量的對數為縱坐標，以峰面 積的對數為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程lgM = 0. 68591gA-3. 8713, r = 0. 99993,具 體結果見表1。
[0036] 表1黃芪甲苷線性關系試驗結果
[0038] 表1結果顯示：黃芪甲苷在進樣量0.864~12. 96 yg內有良好的線性關系。
[0039] 3. 3儀器精密度試驗：精密量取對照品溶液10 y 1 (0. 432mg/ml)，重復進樣5次測 定峰面積，結果見表2。
[0040] 表2黃芪甲苷精密度試驗結果
[0042]表2結果顯示：RSD = 0. 3% (n = 5)，結果表明，儀器的精密度良好。
[0043] 3. 4重復性試驗：取同一批號樣品6份，分別按樣品含量測定法測定，結果見表3。
[0044]表3黃芪甲苷重復性試驗結果
[0046] 表3結果顯示：RSD=1. 3% (n=6)，結果表明，本發(fā)明提供的檢測方法重復性好。
[0047] 3. 5穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液，隔一定時間進樣1次，連續(xù)進樣6次，測定峰面 積，結果見表4。
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