利用魚的sod活性檢測水體污染程度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用魚的超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測水體污染程度的方法。本方法通過獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的SOD作為敏感生物標(biāo)記物，實現(xiàn)檢測待測水體的污染。本方法利用魚的SOD作為敏感生物標(biāo)記物，可敏感地監(jiān)測鎘等重金屬污染、菲(Phe)等多環(huán)芳烴污染及多氯聯(lián)苯(PCB)污染的污染程度和危害程度，為水體生態(tài)環(huán)境監(jiān)測、毒理診斷、調(diào)控和防治提供準(zhǔn)確、快速的科學(xué)方法。
【專利說明】
利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及利用生物敏感標(biāo)志物檢測水體污染，更具體地說，本發(fā)明涉及一種利 用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著城鎮(zhèn)化和工農(nóng)業(yè)的迅猛發(fā)展，水體污染日益加劇。水域中的水體污染物也各 有不同，有的為單一污染物，也有多種污染物混合污染。對于未知水域中，不管是單一污染 物的污染，還是多種污染物的污染，怎樣獲悉水體是否被污染，甚至知道其污染程度，并能 直觀判斷該水域的污染對生物的危害已達(dá)到何種程度。對于水體中受到重金屬或菲一種或 兩種污染時，用化學(xué)方法可以定性、定量檢測到污染，但是無法檢測其危害性和危害程度以 及污染程度的準(zhǔn)確性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu) 點。
[0004] 本發(fā)明還有一個目的就是提供一種利用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法， 本方法利用魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物，可敏感地監(jiān)測鎘等重金屬污染的污染程度和危 害程度，還可以敏感檢測菲(Phe)等多環(huán)芳烴污染的污染程度和危害程度，為水體生態(tài)環(huán)境 監(jiān)測、毒理診斷、調(diào)控和防治提供準(zhǔn)確、快速的科學(xué)方法。
[0005] 為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其他優(yōu)點，提供了一種利用魚的S0D活性檢測 水體污染程度的方法。本檢測方法為獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的S0D作為 敏感生物標(biāo)記物。其中，S0D是超氧化物歧化酶的簡寫。
[0006] 優(yōu)選的是，所述魚的S0D活性與水體中重金屬鎘的濃度呈負(fù)相關(guān)。
[0007]優(yōu)選的是，所述魚的S0D活性與水體中菲的濃度呈負(fù)相關(guān)。
[0008]優(yōu)選的是，所述魚的S0D活性與水體中多氯聯(lián)苯的濃度呈負(fù)相關(guān)。
[0009] 優(yōu)選的是，建立魚的S0D活性與污染物濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待檢測水域中 的同種同大小的魚的S0D活性與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，得到待檢測水域中水體污染物濃度。
[0010] 優(yōu)選的是，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為魚的S0D活性與重金屬鎘濃度關(guān)系的曲線，或者魚的 S0D活性與菲濃度關(guān)系的曲線，或者魚的S0D活性與多氯聯(lián)苯濃度關(guān)系的曲線。
[0011]優(yōu)選的是，所述魚的S0D活性測定包括如下步驟：
[0012] 步驟一、待測樣本處理:制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本；
[0013] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本 加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍(lán)顯色劑，分別混勻，靜置，預(yù)熱，用 分光光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的光密 度(0D)，分別記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃 度：
[0014]
[0015]步驟三、在對照管和測定管中各加入試劑盒的同樣量的試劑一、試劑二、試劑三和 試劑四，然后在所述測定管中加入待測樣本Ami，在所述對照管中加入蒸餾水Ami，混合均勻 后置38 °C恒溫水浴35-40分鐘；
[0016]步驟四、在所述對照管和所述測定管中各加入等量的顯色劑，混勻，室溫靜置10分 鐘，于波長550nm處，lcm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零后，分別測所述對照管和測定管0D，分別記 為對照0D值，測定0D值，其中取量為A，然后代入如下公式計算得魚的S0D活性：
[0017]
[0018] 優(yōu)選的是，所述步驟一中全魚勻漿為全魚與濃度0.65%的魚用生理鹽水按質(zhì)量比 為1:9配置，且所述離心分層用冷凍離心機(jī)，11028g，4°C，離心10min。
[0019]優(yōu)選的是，所述步驟二中等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本均為0.05ml，蛋白 標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為〇.563g/L，分別加入考馬斯亮藍(lán)顯色劑的量均為3ml，靜置lOmin;所述步驟 三中分別給對照管和測定管中加入試劑盒的試劑一lml，試劑二0. lml，試劑三0. lml，試劑 四0.1ml，然后混合均勻用漩渦混勻器混合，恒溫水浴36分鐘；所述步驟四中在所述對照管 和所述測定管中各加入考馬斯亮藍(lán)顯色劑2ml。
[0020] 優(yōu)選的是，所述魚為海水青鏘或淡水青鏘。
[0021] 本發(fā)明至少包括以下有益效果:本發(fā)明以水域中魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物，通 過對比S0D活性就可以檢測出水體是否受到污染，不但檢測準(zhǔn)確和敏感，而且直觀反映該水 域的污染對生物的危害程度。特別是魚的S0D活性與水體中重金屬鎘、菲或多氯聯(lián)苯的一種 或一種以上的濃度均呈負(fù)相關(guān)，所以檢測到魚的S0D活性越低，其的水域受污染的程度越 大，并且明示受到重金屬鎘、菲或多氯聯(lián)苯的一種或一種以上的污染。通過建立魚的S0D活 性與重金屬鎘濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，魚的S0D活性與菲濃度關(guān)系的曲線，或者魚的S0D活性 與多氯聯(lián)苯濃度關(guān)系的曲線，可以將待檢測水域中與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線同種同大小的魚的S0D 活性比對，獲得水域中重金屬鎘濃度、菲或多氯聯(lián)苯濃度或綜合污染濃度值，并且能反映出 目前的污染程度對生物是否在安全范圍或受到危害。
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書 能夠據(jù)以實施。
[0023] 實施例1
[0024]本方案利用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物，通過檢測魚的S0D活性，然后比對同類同大小的 魚的S0D活性與某污染物濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以檢測出水體是否受到某污染物的污 染，不但檢測準(zhǔn)確，且敏感度高，而且能直觀反映該水域的某污染物的污染程度及其對生物 的危害程度。
[0025] 實施例2
[0026] 本方案利用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物，根據(jù)魚的S0D活性與水體中重金屬鎘的濃度呈負(fù) 相關(guān)，通過測定魚的S0D活性，然后比對同類同大小的魚的S0D活性與鎘濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲 線，如果檢測樣本魚的S0D活性比正常情況下的同類同大小的魚的S0D活性低，則判斷水域 受到鎘的污染;魚的S0D活性越低，則判斷水域的鎘污染越嚴(yán)重，甚至可判斷是否達(dá)到危害 水體生物的程度。
[0027] 實施例3
[0028] 本方案利用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物，根據(jù)魚的S0D活性與水體中菲(Phe)等多環(huán)芳烴 的濃度呈負(fù)相關(guān)，通過測定魚的S0D活性，然后比對同類同大小的魚的S0D活性與菲濃度關(guān) 系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果檢測樣本魚的S0D活性比正常情況下的同類同大小的魚的S0D活性低， 則判斷水域受到菲的污染;魚的S0D活性越低，則判斷水域的菲污染越嚴(yán)重，甚至可判斷是 否達(dá)到危害水體生物的程度。
[0029] 實施例4
[0030] 本方案利用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物，根據(jù)魚的S0D活性與水體中多氯聯(lián)苯的濃度呈負(fù) 相關(guān)，通過測定魚的S0D活性，然后比對建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的魚同類同大小的魚的S0D活性與多 氯聯(lián)苯濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果檢測樣本魚的S0D活性比正常情況下的同類同大小的魚 的S0D活性低，則判斷水域受到多氯聯(lián)苯的污染;魚的S0D活性越低，則判斷水域的多氯聯(lián)苯 污染越嚴(yán)重，甚至可判斷是否達(dá)到危害水體生物的程度。
[0031] 實施例5
[0032] 本方案利用魚的S0D活性檢測水體污染程度的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的S0D作為敏感生物標(biāo)記物。首先通過實驗建立魚的S0D活性與某污染物濃度 關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待檢測水域中的同種同大小的魚的S0D活性與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對， 得到待檢測水域中某污染物的濃度。
[0033]通過實驗建立魚的S0D活性與重金屬鎘濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：
[0034]本實驗的檢測樣本以海水青鏘為例，分十組，每組3個平行進(jìn)行養(yǎng)魚實驗，實驗結(jié) 束每個平行取3個樣品測定，每組測定3x3 = 9個數(shù)據(jù)，將每組9個數(shù)據(jù)數(shù)理統(tǒng)計后得到每組 魚的S0D活性大小。各組鎘濃度分別為0，80，160，240，320，400，480，560，640，720yg/L，養(yǎng)殖 條件是鹽度30 ± 2，水溫為28 ± 2°C，pH為8.10，溶氧量彡6.10mg/L，光暗比為14h: 10h，各組 實驗操作均相同。每天投喂飼料三次，總投喂量為投喂時魚體濕重的5 %。每天仔細(xì)觀察和 記錄仔稚魚活動、攝食、畸形、死亡等，并跟蹤檢測水體和魚體鎘的變化，7天后隨機(jī)采集魚 樣品，分別稱重，存于_80°C冰箱中（因忙未能即測）用于分子、基因、生理、毒理和生化測定。 測定并經(jīng)數(shù)理統(tǒng)計的各組S0D活性分別是：202.37、187.81、176.16、158.78、148.64、 135.19、118.56、101.38、87.63、78.25U/mgprot。海水青鏘的S0D活性與水體中重金屬鎘的 濃度呈負(fù)相關(guān)，然后根據(jù)實驗結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0035] 通過實驗建立魚的SOD活性與菲(Phe)濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：
[0036] 本實驗的檢測樣本以海水青鏘為例，分五組，每組3個平行進(jìn)行養(yǎng)魚實驗，實驗結(jié) 束每個平行取3尾魚樣品測定，每組測定3x3 = 9個數(shù)據(jù)，將每組9個數(shù)據(jù)數(shù)理統(tǒng)計后得到每 組魚的S0D活性大小。各組菲濃度分別為0、250、500、750、1000yg/L，養(yǎng)殖條件是鹽度30 ± 2， 水溫為28 ± 2°C，pH為8.10，溶氧量彡6.10mg/L，光暗比為14h: 10h，各組實驗操作均相同。每 天三次投喂飼料，總投喂量為投喂時魚體濕重的5%。每天仔細(xì)觀察和記錄仔稚魚活動、攝 食、畸形、死亡等，并跟蹤檢測水體和魚體菲的變化，7天后隨機(jī)采集魚樣品，分別稱重，存 于-80°C冰箱中（暫存待測）用于分子、基因、生理、毒理和生化測定。測定并經(jīng)數(shù)理統(tǒng)計的各 組 S0D 活性分別是：130.486、112.282、101.537、81.514、53.829U/mgprot。海水青鏘的 S0D 活 性與水體中菲(Phe)的濃度呈負(fù)相關(guān)，然后根據(jù)實驗結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0037]通過實驗建立魚的S0D與多氯聯(lián)苯(PCB)濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：
[0038]本實驗的檢測樣本以海水青鏘為例，分六組，每組3個平行進(jìn)行養(yǎng)魚實驗，實驗結(jié) 束每個平行取3尾魚樣品測定，每組測定3x3 = 9個數(shù)據(jù)，將每組9個數(shù)據(jù)數(shù)理統(tǒng)計后得到每 組魚的S0D活性大小。各組多氯聯(lián)苯濃度分別為0、50、100、150、200、250yg/L，養(yǎng)殖條件是鹽 度30 ± 2，水溫為28 ± 2 °C，pH為8.10，溶氧量彡6.10mg/L，光暗比為14h: 10h，各組實驗操作 均相同。每天三次投喂飼料，總投喂量為投喂時魚體濕重的5%。每天仔細(xì)觀察和記錄仔稚 魚活動、攝食、畸形、死亡等，并跟蹤檢測水體和魚體多氯聯(lián)苯的變化，7天后隨機(jī)采集魚樣 品，分別稱重，存于-80°C冰箱中（暫存待測）用于分子、基因、生理、毒理和生化測定。測定并 經(jīng)數(shù)理統(tǒng)計的各組 S0D 活性分別是：9.503、7.760、6.012、4.530、3.349、3.035U/mgprot<^$ 水青鏘的SOD活性與水體中多氯聯(lián)苯(PCB)的濃度呈負(fù)相關(guān)，然后根據(jù)實驗結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線。
[0039]測定待測水域中的海水青鏘的S0D活性的具體步驟如下：
[0040] 步驟一、待測樣本處理:制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本；
[0041] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本 加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍(lán)顯色劑，分別混勻，靜置，預(yù)熱，用 分光光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的0D，分 另IJ記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
[0042]
[0043]步驟三、在對照管和測定管中各加入試劑盒的同樣量的試劑一，試劑二，試劑三和 試劑四，然后在所述測定管中加入待測樣本Ami，在所述對照管中加入蒸餾水Ami，混合均勻 后置38 °C恒溫水浴35分鐘；
[0044]步驟四、在所述對照管和所述測定管中各加入等量的顯色劑，混勻，室溫靜置10分 鐘，于波長550nm處，lcm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零分別測所述對照管和所述測定管0D，分別 記為對照0D值，測定0D值，其中取量為A，然后代入如下公式計算得魚的超氧化物歧化酶活 性：
[0046] 然后將計算得海水青鏘的SOD活性大小與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，不但可以知道水體是否 受到污染，而且從標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以知道水體中鎘濃度或菲濃度的大小或多氯聯(lián)苯濃度大小 或綜合污染的大小，更能知道水體對生物體危害程度。
[0047] 實施例6
[0048]利用實驗可以建立任何水體任何魚種的魚的S0D活性與重金屬鎘濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn) 曲線，或者建立不同種類的魚的S0D活性與菲濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后取待測水域中的魚 做樣本，只要做樣本的魚與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的魚是同類同大小的即可進(jìn)行比對。
[0049] 測定待測水域中的魚的S0D活性具體步驟如下：
[0050] 步驟一、待測樣本處理:取與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線用魚一樣和大小相當(dāng)?shù)聂~制備全魚勻 漿，全魚勻漿為全魚與0.65%濃度的魚用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置，然后用冷凍離心 機(jī)，11028g，4°C，離心10min分層，取上層清液為待測樣本；
[0051]步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本 加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍(lán)顯色劑，分別混勻，靜置，預(yù)熱，用 分光光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的0D，分 另IJ記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
[0052]
[0053] 步驟三、在對照管和測定管中各加入試劑盒的試劑一3ml，試劑二0.3ml，試劑三 0.3ml和試劑四0.3ml，然后在所述測定管中加入待測樣本lml，在所述對照管中加入蒸餾水 lml，混合均勻后置38°C恒溫水浴40分鐘；
[0054] 步驟四、在所述對照管和測定管中各加入等量的顯色劑，混勻，室溫靜置10分鐘， 于波長550nm處，lcm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零后，分別測所述對照管和測定管0D，分別記為 對照0D值，測定0D值，其中取量為1，然后代入如下公式計算得魚的S0D活性：
[0055]
[0056] 將計算得魚的S0D活性大小與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，不但可以知道水體是否受污染，而且 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以知道水體中鎘濃度或菲濃度或多氯聯(lián)苯(PCB)濃度的大小或綜合污染的 大小，更能知道水體對生物體危害程度。
[0057] 實施例7
[0058]利用實驗建立20日齡的淡水青鏘的S0D活性與重金屬鎘濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線以及 S0D活性與菲濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后取待測水域中的魚做樣本，只要取得樣本的魚與建立標(biāo) 準(zhǔn)曲線的魚是同類同大小的即可進(jìn)行比對。
[0059] 取得待測水域中20日齡的淡水青鏘做樣本，然后測定待測水域中的該魚的SOD活 性具體步驟如下：
[0060] 步驟一、待測樣本處理:取與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線用魚一樣和大小相當(dāng)?shù)聂~制備全魚勻 漿，全魚勻漿為全魚與0.65%濃度的魚用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置，然后用冷凍離心 機(jī)，11028g，4°C，離心10min分層，取上層清液為待測樣本；
[0061] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將雙蒸水、濃度為0.563g/L的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 和待測樣本各〇.〇5ml加入1、2、3號管中，并分別向各管加入考馬斯亮藍(lán)顯色劑3ml，分別混 勻，靜置lOmin，預(yù)熱到35°C，預(yù)熱待用分光光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，波長 595nm處，測定1、2、3號管中溶液的0D，分別記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下 公式計算得待測樣本蛋白濃度：
[0062]
[0063] 步驟三、在對照管和測定管中各加入試劑盒的試劑一lml，試劑二0.1ml，試劑三 0. lml和試劑四0. lml，然后在所述測定管中加入待測樣本0.5ml，在所述對照管中加入蒸餾 水0.5ml，用漩渦混勻器混合均勻后，置38°C恒溫水浴36分鐘；
[0064]步驟四、在所述對照管和所述測定管中各加入考馬斯亮藍(lán)顯色劑2ml，混勻，室溫 靜置10分鐘，于波長550nm處，lcm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零分別測所述對照管和所述測定管 0D，分別記為對照0D值，測定0D值，其中取量為0.5，所用試劑盒為南京生物工程研究所生產(chǎn) 的試劑盒，試劑盒中的各個試劑是固定配置好的，然后代入如下公式計算得魚的S0D活性， 計算得魚的S0D活性為100 ? 5U/mgprot:
[0065]
[0066] 將計算得魚的S0D活性，分別與S0D活性與重金屬鎘濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線、S0D活性與菲 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線、S0D活性與多氯聯(lián)苯濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，得到待測水域的鎘污染濃度 為，552yg/L，菲濃度為451yg/L，多氯聯(lián)苯濃度為0yg/L，這樣既可以知道水體已受到污染， 而且從標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以知道水體中鎘濃度、菲或多氯聯(lián)苯濃度的大小，更能知道水體對生 物體危害程度。
[0067] 盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列 應(yīng)用范例，它完全適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地另 行修改他用，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特 定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實施例。
【主權(quán)項】
1. 一種利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，獲取需要檢測的水域 中的魚，并采用所述魚的SOD作為敏感生物標(biāo)記物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述魚的SOD活性與水體中重金屬鎘的濃度呈負(fù)相關(guān)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述魚的SOD活性與水體中菲的濃度呈負(fù)相關(guān)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述魚的SOD活性與水體中多氯聯(lián)苯的濃度呈負(fù)相關(guān)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征 在于，建立魚的SOD活性與污染物濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待檢測水域中的同種同大小 的魚的SOD活性與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，得到待檢測水域中水體污染物濃度。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述標(biāo)準(zhǔn)曲線為魚的SOD活性與重金屬鎘濃度關(guān)系的曲線，或者魚的SOD活性與菲濃度關(guān)系的 曲線，或者魚的SOD活性與多氯聯(lián)苯濃度關(guān)系的曲線。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述魚的SOD活性測定包括如下步驟： 步驟一、待測樣本處理:制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本； 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入 1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍(lán)顯色劑，分別混勻，靜置，預(yù)熱，用分光 光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的光密度，分 另IJ記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：步驟三、在對照管和測定管中各加入試劑盒的同樣量的試劑一，試劑二，試劑三和試劑 四，然后在所述測定管中加入待測樣本Ami，在所述對照管中加入蒸餾水Ami，混合均勻后置 38 °C恒溫水浴35-40分鐘； 步驟四、在所述對照管和所述測定管中各加入等量的顯色劑，混勻，室溫靜置10分鐘， 于波長550nm處，lcm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零后，分別測所述對照管和測定管0D，分別記為 對照0D值，測定0D值，其中取量為A，然后代入如下公式計算得魚的SOD活性：8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述步驟一中全魚勻漿為全魚與濃度0.65%的魚用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置，且所述離 心分層用冷凍離心機(jī)，ll〇28g，4°C，離心10min。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特征在于，所 述步驟^中等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本均為〇 . 〇 5m 1，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 0.563g/L，分別加入考馬斯亮藍(lán)顯色劑的量均為3ml，靜置lOmin;所述步驟三中分別給對照 管和測定管中加入試劑盒的試劑一lml，試劑二0. lml，試劑三0. lml，試劑四0. lml，然后用 漩渦混勻器混合均勻，恒溫水浴36分鐘;所述步驟四中在所述對照管和所述測定管中各加 入考馬斯亮藍(lán)顯色劑2ml。10.根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項所述的利用魚的SOD活性檢測水體污染程度的方法，其特 征在于，所述魚為海水青鏘或淡水青鏘。
【文檔編號】G01N33/18GK106053750SQ201610546713
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月12日
【發(fā)明人】許友卿, 丁兆坤, 劉陽, 李云杰, 劉富娟, 張仁珍
【申請人】廣西大學(xué)