一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒及測定方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒，本發(fā)明試劑盒中，通過將抗體和二抗包被于試紙上，并通過使用熒光顆?；蛘卟噬w粒等信號顆粒為標(biāo)記檢測物，從而可以通過將待測樣本與信號顆粒一次混合后，直接采用層析的方法將糖化血紅蛋白在試紙上分離得到，并進(jìn)一步通過熒光層析讀數(shù)儀或者肉眼直接對照檢測得到樣本中糖化血紅蛋白比例。本發(fā)明試劑盒具有成分結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，檢測便捷，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。同時，本發(fā)明還提供了一種測定糖化血紅蛋白比例的方法，本發(fā)明方法中，通過使用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行檢測，因而具有操作便捷，檢測方法簡單，檢測結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒及測定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及糖化血紅蛋白測定領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒及測定方法
【背景技術(shù)】
[0002]糖化血紅蛋白(即HbAlc)，是人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物。一般臨床上使用糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的百分比作為衡量糖化血紅蛋白含量是否正常的指標(biāo)。糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的百分比可以穩(wěn)定可靠的反應(yīng)出檢測前4個月的平均血糖水平，且這種檢測不會受到抽血時間，是否空腹，是否使用胰島素等因素干擾，是國際上糖尿病監(jiān)控的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，為了得到糖化血紅蛋白的比例，往往需要分別檢測總血紅蛋白和糖化血紅蛋白的含量，再進(jìn)行計算得出糖化血紅蛋白的比例。而目前主要的血紅蛋白檢測方法有:高效液相色譜法、硼酸親和層析法、離子交換層析法、免疫比濁法、酶法。然而，高效液相色譜法、硼酸親和層析法以及離子交換層析需要使用專業(yè)的大型儀器，且儀器價格昂貴，其實際應(yīng)用并不便捷；同時，免疫比濁法需要使用大量抗體，且需要使用大型生化分析儀器才能進(jìn)行檢測，也無法實現(xiàn)小型化，便捷化的檢測；同樣的，酶法也需要使用多種酶配合進(jìn)行反應(yīng)，并經(jīng)過大型生化分析儀儀器進(jìn)行檢測，才能得到最終結(jié)果。
[0004]為了解決無法實現(xiàn)小型化、便捷化測定糖化血紅蛋白比例的問題，現(xiàn)有技術(shù)中也進(jìn)行了一定的嘗試與實驗。例如現(xiàn)有技術(shù)(CN101915849A，【公開日】:2010年12月25日)就公開了一種便捷化測定糖化血紅蛋白的方法，其包括如下步驟:a.將全血樣本與溶血液混合均勻;b.取適量溶血后的樣本加入懸浮在甘氨酸緩沖液中的乳膠;c.經(jīng)預(yù)定時間后再分別加入抗體B試劑及抗體A試劑;d.混合均勻后在單波長光照射條件下，通過特定蛋白分析儀讀取散射值;e.最后根據(jù)散射值從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中讀取糖化血紅蛋白的百分比。
[0005]然而，這種方法仍然存在不便之處，例如其檢測過程中，需要額外加入較大量的抗體A和抗體B試劑，這不僅提高了檢測成本，同時由于需要額外加入抗體試劑，所以也進(jìn)一步帶來了抗體試劑運(yùn)輸和儲存的問題;進(jìn)一步的，單波長光照檢測和蛋白分析儀讀取都需要價格較為昂貴的設(shè)備，其操作也較為繁瑣，需要進(jìn)行大量的培訓(xùn)以保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確，而這也進(jìn)一步提高了檢測的成本和不便捷性。
[0006]有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的第一個目的在于，提供一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒，本發(fā)明試劑盒中，本發(fā)明提供了一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒，本發(fā)明試劑盒中，通過將抗體和二抗包被于試紙上，并通過使用熒光顆粒為標(biāo)記檢測物，從而可以通過將待測樣本與熒光顆粒一次混合后，直接采用層析的方法將糖化血紅蛋白在試紙上分離得到，并進(jìn)一步通過熒光層析讀數(shù)儀直接對照檢測得到樣本中糖化血紅蛋白比例。而這也同時解決了現(xiàn)有技術(shù)中需要多儀器配合使用所帶來的操作不便捷的技術(shù)問題。本發(fā)明試劑盒具有成分結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，檢測便捷，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
[0008]本發(fā)明的第二個目的在于，提供一種測定糖化血紅蛋白比例的方法。本發(fā)明方法中，通過使用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行檢測，因而可以解決現(xiàn)有技術(shù)中方法由于特異性抗體儲存運(yùn)輸以及大量使用所帶來的操作不便捷等技術(shù)問題，也可以解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測需要多儀器配合使用所帶來的操作不方便的技術(shù)問題。本發(fā)明方法具有操作便捷，檢測方法簡單，檢測結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
[0009]為了實現(xiàn)本發(fā)明上述目的，本申請?zhí)夭捎萌缦录夹g(shù)方案:
[0010]—種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒，所述試劑盒包括試劑瓶和試紙。其中，所述試劑瓶中裝有可與血紅蛋白反應(yīng)或可吸附血紅蛋白的熒光顆粒或彩色顆粒;其中，所述試紙由一端起，依次為沖洗區(qū)、樣品區(qū)、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、對照區(qū)以及吸水區(qū)。進(jìn)一步的，所述糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)包被有鼠抗人糖化血紅蛋白抗體，所述檢測區(qū)包被有可與鼠抗人糖化血紅蛋白抗體結(jié)合的二抗，所述對照區(qū)包被有抗血紅蛋白抗體。
[0011]本發(fā)明中，通過使用熒光顆粒為標(biāo)記檢測物，并通過將熒光顆粒與樣本一次混合后，并通過在試紙上將糖化血紅蛋白固定分離，并通過檢測熒光度數(shù)即能夠?qū)崿F(xiàn)糖化血紅蛋白比例的測定，具有檢測方法便捷準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。
[0012]可選的，本發(fā)明中，所述二抗為羊抗鼠抗體。
[0013]可選的，本發(fā)明中，所述熒光顆?；虿噬w粒為具有疏水性表面的聚合物熒光顆粒/彩色微球;或熒光無機(jī)顆粒/彩色微球，也可以是表面具有環(huán)氧基，氯甲基，甲苯磺?；?，醛基等高活性基團(tuán)可以和蛋白進(jìn)行反應(yīng)的熒光/彩色微球。
[0014]可選的，本發(fā)明中，所述試紙包括底板以及與其粘合的硝基纖維素膜，所述硝基纖維素膜的寬度與底板寬度相同；其中，所述沖洗區(qū)、樣品區(qū)、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)以及吸水區(qū)分別設(shè)置有沖洗液加樣墊、防水墊、樣品抗體結(jié)合墊和吸水墊;其中，所述樣品抗體結(jié)合墊包括樣品區(qū)以及糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)，并與所述硝基纖維素膜緊貼，所述樣品抗體結(jié)合墊的寬度分別與沖洗區(qū)、樣品區(qū)以及糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)三個區(qū)域的寬度相同，并覆蓋所述三個區(qū)域;所述吸水墊的寬度與吸水區(qū)寬度相同；其中，所述沖洗液加樣墊和防水墊分別與所述樣本抗體結(jié)合墊緊貼，所述沖洗液加樣墊和防水墊的寬度與沖洗區(qū)相同，且沖洗液加樣墊和防水墊覆蓋沖洗區(qū)；其中，所述鼠抗人糖化血紅蛋白抗體包被于所述樣品抗體結(jié)合墊上。
[0015]本發(fā)明中，通過對所述試紙結(jié)構(gòu)和材料的進(jìn)一步選擇、調(diào)整以及優(yōu)化，從而可以進(jìn)一步提高檢測的效率?？蛇x的，本發(fā)明中，所述底板為硬質(zhì)聚氯乙烯板。
[0016]可選的，本發(fā)明中，所述沖洗液加樣墊和樣品抗體結(jié)合墊為一體式結(jié)構(gòu)。
[0017]可選的，本發(fā)明中，所述樣本抗體結(jié)合墊為玻璃纖維墊。
[0018]本發(fā)明中，通過對樣本抗體結(jié)合墊材料的選擇和優(yōu)化，選擇具有高比表面積能吸附大量抗體的樣本的和玻璃纖維為結(jié)合墊材料，從而可以在實現(xiàn)抗體有效吸附的同時，還不會由于吸附性過好所導(dǎo)致的檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。
[0019]可選的，本發(fā)明中，所述熒光顆粒/彩色顆粒的粒徑為50-500nm;優(yōu)選的，本發(fā)明中，所述熒光顆粒/彩色顆粒的直徑為80-100nm。
[0020]本發(fā)明中，通過對熒光顆粒粒徑的調(diào)整和優(yōu)化，從而使得熒光顆粒在與抗體接觸后，能夠進(jìn)一步通過纖維素膜并進(jìn)行固定和檢測。
[0021]可選的，本發(fā)明中，所述試劑盒還進(jìn)一步包括用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置。
[0022]本發(fā)明中，通過進(jìn)一步在試劑盒中添加微量紅細(xì)胞采集裝置，從而可以實現(xiàn)由壓積紅細(xì)胞采集到糖化血紅蛋白檢測的一體化操作流程，進(jìn)一步便捷了糖化血紅蛋白檢測的整體流程步驟。
[0023]可選的，本發(fā)明中，所述用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置包括:固件，血液去除裝置、多孔粘合層，吸血墊;其中，所述吸血墊設(shè)置在所述固件的一端;所述多孔粘合層通過包裹所述吸血墊以及設(shè)置有吸血墊的端部將所述吸血墊固定于所述固件上；所述血液去除裝置設(shè)置在所述固件上，并與所述固件滑動連接。
[0024]本發(fā)明中，通過設(shè)置吸血墊以及覆蓋其的多孔粘合層，從而可以對吸血墊進(jìn)行位置固定，并直接進(jìn)行血樣的吸取和進(jìn)一步壓積紅細(xì)胞的固定，通過進(jìn)一步設(shè)置血液去除裝置，從而可以在同一裝置上進(jìn)一步實現(xiàn)未固定的多余血液的去除，進(jìn)而實現(xiàn)了壓積紅細(xì)胞提取的一體化裝置操作步驟，使得檢測更加方便快捷。
[0025]同時，本發(fā)明還提供了一種測定糖化血紅蛋白比例的方法，所述方法中使用本發(fā)明所述的試劑盒進(jìn)行檢測。具體的，所述方法包括如下步驟:將壓積紅細(xì)胞置于含溶血劑和熒光顆粒/彩色顆粒的試劑瓶中，并與所述熒光顆粒/彩色顆粒反應(yīng)，然后將反應(yīng)后熒光顆粒/彩色顆粒取出，并置于所述樣品區(qū)，并在所述沖洗區(qū)加入適量沖洗液，使得所述反應(yīng)后熒光顆粒/彩色顆粒能夠隨沖洗液流動并經(jīng)過糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)以及檢測區(qū)或?qū)φ諈^(qū)，然后，對檢測區(qū)進(jìn)行熒光強(qiáng)度或色帶強(qiáng)度檢測，并將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線或標(biāo)準(zhǔn)色卡對照，即可計算出糖化血紅蛋白比例。
[0026]本發(fā)明中，通過將血紅蛋白與熒光顆粒/彩色顆粒反應(yīng)固定，并通過加入沖洗液而帶動反應(yīng)后熒光顆粒/彩色顆粒經(jīng)過糖化血紅蛋白抗體以及二抗或抗血紅蛋白抗體，從而可以通過檢測包被有二抗的檢測區(qū)的熒光強(qiáng)度/色帶強(qiáng)度，即可通過對比標(biāo)準(zhǔn)曲線/標(biāo)準(zhǔn)色卡計算得出糖化血紅蛋白含量，從而可以避免現(xiàn)有技術(shù)中的復(fù)雜操作。同時，本發(fā)明中，通過進(jìn)一步設(shè)置對照檢測區(qū)域，還可以進(jìn)一步通過熒光檢測結(jié)果測試包被于試紙上的抗體是否失活，從而進(jìn)一步保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確定。本發(fā)明方法具有操作簡便，檢測效率高等優(yōu)點(diǎn)。
[0027]進(jìn)一步的，本發(fā)明糖化血紅蛋白比例測定的原理如下:糖化血紅蛋白與非糖化血紅蛋白在熒光顆粒上有相同的吸附能力，當(dāng)具有不同糖化血紅蛋白比例的樣本與信號顆?；旌虾?，能夠形成不同糖化血紅蛋白包被密度的熒光顆粒。當(dāng)加入沖洗液沖洗后，所述熒光顆粒/彩色顆粒會先通過糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)，并與糖化血紅蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)，然后熒光顆粒/彩色顆粒繼續(xù)隨沖洗液經(jīng)過包埋有二抗的檢測區(qū)時，吸附有糖化血紅蛋白的熒光顆粒會固定于檢測區(qū)，而未與糖化血紅蛋白結(jié)合的熒光顆粒/彩色顆粒會進(jìn)一步隨沖洗液達(dá)到對照區(qū)并被固定。進(jìn)一步的，檢測區(qū)的熒光強(qiáng)度會與糖化血紅蛋白的包被密度成正相關(guān)性，通過測定檢測區(qū)的熒光強(qiáng)度數(shù)值，并進(jìn)一步與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值對照，即可得出糖化血紅蛋白比例；或者檢測區(qū)域的色帶強(qiáng)度會與糖化血紅蛋白的包被密度成正相關(guān)性，隨著將色帶與標(biāo)準(zhǔn)色帶對照，即可得出糖化血紅蛋白比例?？蛇x的，本發(fā)明中，所述試劑瓶中還進(jìn)一步含有甘氨酸緩沖液和溶血劑，同時，所述熒光顆粒/彩色顆粒懸浮于所述甘氨酸緩沖溶液和溶血劑中。
[0028]可選的，本發(fā)明中，所述熒光強(qiáng)度檢測是以激發(fā)波長為300?700nm的發(fā)射波長，在350?1000波長范圍內(nèi)進(jìn)行的熒光信號強(qiáng)度檢測。
[0029]可選的，本發(fā)明方法中，溶血后樣本與所述熒光顆粒/彩色顆粒反應(yīng)的時間為0.5-2min0
[0030]本發(fā)明中，通過對反應(yīng)時間的調(diào)整和優(yōu)化，從而可以在實現(xiàn)樣本中血紅蛋白與熒光顆粒/彩色顆粒的充分接觸反應(yīng)，同時還不會由于反應(yīng)時間過長而影響整體的測定效率。
[0031]可選的，本發(fā)明方法中，所述沖洗液是含有能夠提供抗原抗體反應(yīng)環(huán)境的保護(hù)性蛋白以及表面活性劑的緩沖溶液。優(yōu)選的，本發(fā)明中，所述緩沖溶液為含有0.5%BSA和0.1%吐溫20的pH=7.4的磷酸緩沖液。
[0032]本發(fā)明中，通過使用能為抗體抗原反應(yīng)提供良好環(huán)境的緩沖溶液作為沖洗液，從而可以進(jìn)一步提尚檢測的準(zhǔn)確性。
[0033]可選的，本發(fā)明方法中，所述方法還進(jìn)一步包括使用糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置采集積壓紅細(xì)胞的步驟。
[0034]本發(fā)明中，通過進(jìn)一步增加壓積紅細(xì)胞采集步驟，從而可以在一次檢測中實現(xiàn)由壓積紅細(xì)胞提取到糖化血紅蛋白檢測的整體步驟，從而進(jìn)一步簡化了檢測方法，實現(xiàn)了便捷檢測。
[0035]進(jìn)一步的，本發(fā)明中，所述積壓紅細(xì)胞的步驟具體如下:將本發(fā)明中用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置帶有吸血墊的結(jié)構(gòu)部分浸入血樣中進(jìn)行血液吸取;然后，將裝置取出，然后將血液去除裝置通過夾持裝置移動至吸血墊處，并對對吸血墊進(jìn)行擠壓，將多余血樣去除，即得到所采集微量紅細(xì)胞，也就是壓積紅細(xì)胞。然后，將裝置帶有吸血墊的結(jié)構(gòu)部分浸泡于含溶血劑和熒光顆粒的試劑液中，從而將壓積紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放，并進(jìn)行進(jìn)一步的糖化血紅蛋白檢測。
[0036]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0037](I)本發(fā)明中，使用熒光顆粒/彩色顆粒為標(biāo)記檢測物，并能夠通過簡單的熒光數(shù)值讀取以及標(biāo)準(zhǔn)對照即實現(xiàn)糖化血紅蛋白比例的檢測，或者通過簡單的色帶顏色檢測并于標(biāo)準(zhǔn)色卡對照實現(xiàn)糖化血紅蛋白比例的檢測，因此具有成分結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，檢測便捷，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
[0038](2)本發(fā)明中，通過對試紙結(jié)構(gòu)以及材料的進(jìn)一步選擇、調(diào)整與優(yōu)化，從而進(jìn)一步提尚了檢測的準(zhǔn)確性。
[0039](3)本發(fā)明中，通過對混合時間以及沖洗液等測定條件的選擇和優(yōu)化，從而可以在提尚檢測效率的同時，進(jìn)一步提尚檢測的準(zhǔn)確性。
【附圖說明】
[0040]為了更清楚地說明本發(fā)明【具體實施方式】或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對【具體實施方式】或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
[0041]圖1為本發(fā)明所提供用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒中試劑瓶示意圖:
[0042]1-試劑瓶，101-熒光顆?；虿噬w粒；
[0043]圖2為本發(fā)明所提供用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒中試紙的俯視圖:
[0044]2-試紙，201-沖洗區(qū)，202-樣品區(qū)203-糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)，204-檢測區(qū)，205-對照區(qū)，206-吸水區(qū)；
[0045]圖3為本發(fā)明所提供用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒中試紙的側(cè)視圖:
[0046]301-底板，302-硝基纖維素膜，303-沖洗液加樣墊，304-防水墊，305-包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊，306-吸水墊
[0047]圖4為本發(fā)明所提供用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置:
[0048]401 —固件，402—血液去除裝置，403 —多孔粘合層，404—吸血墊。
【具體實施方式】
[0049]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整的描述，基于本發(fā)明中的【具體實施方式】，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所得到的所有其它實施方式，都屬于本發(fā)明所保護(hù)的范圍。
[0050]在本發(fā)明的描述中，需要說明的是，術(shù)語“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“豎直”、“水平”、“內(nèi)”、“外”等指示的方位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本發(fā)明和簡化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、以特定的方位構(gòu)造和操作，因此不能理解為對本發(fā)明的限制。此外，術(shù)語“第一”、“第二”、“第三”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性。
[0051]在本發(fā)明的描述中，需要說明的是，除非另有明確的規(guī)定和限定，術(shù)語“安裝”、“相連”、“連接”應(yīng)做廣義理解，例如，可以是固定連接，也可以是可拆卸連接，或一體地連接;可以是機(jī)械連接，也可以是電連接;可以是直接相連，也可以通過中間媒介間接相連，可以是兩個元件內(nèi)部的連通。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以具體情況理解上述術(shù)語在本發(fā)明中的具體含義。
[0052]實施例1
[0053]請參考圖1和圖2，本發(fā)明用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒包括試劑瓶I和試紙2;
[0054]其中，所述試劑瓶I中裝有溶血劑和可與血紅蛋白反應(yīng)或可吸附血紅蛋白的熒光顆粒101;
[0055]其中所述試紙2由一端起，依次為沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203、檢測區(qū)204、對照區(qū)205以及吸水區(qū)206;
[0056]其中，所述糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203包被有鼠抗人糖化血紅蛋白抗體，所述檢測區(qū)204包被有可與鼠抗人糖化血紅蛋白抗體結(jié)合的二抗，所述對照區(qū)205包被有抗血紅蛋白抗體。
[0057]實施例2
[0058]請參考圖1、圖2以及圖3，本發(fā)明用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒包括試劑瓶I和試紙2;
[0059]其中，所述試劑瓶I中裝有可與血紅蛋白反應(yīng)或可吸附血紅蛋白的彩色顆粒101;
[0060]其中所述試紙2由一端起，依次為沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203、檢測區(qū)204、對照區(qū)205以及吸水區(qū)206;
[0061]其中，所述糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203包被有鼠抗人糖化血紅蛋白抗體，所述檢測區(qū)204包被有可與鼠抗人糖化血紅蛋白抗體結(jié)合的二抗，所述對照區(qū)205包被有抗血紅蛋白抗體；
[0062]進(jìn)一步的，所述試紙2包括底板301以及與其粘合的硝基纖維素膜302，所述硝基纖維素膜302的寬度與底板301的寬度相同；
[0063 ]同時，所述沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203以及吸水區(qū)206分別設(shè)置有的沖洗液加樣墊303、防水墊304、包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣品抗體結(jié)合墊305和吸水墊306 ；
[0064]其中，所述樣本抗體結(jié)合墊305和吸水墊306與所述硝基纖維素膜302緊貼，所述包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305的寬度分別與沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202以及糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203等三個區(qū)域的寬度相同，并覆蓋所述三個區(qū)域;所述吸水墊306的寬度與吸水區(qū)206寬度相同；
[0065]其中，所述沖洗液加樣墊303以及防水墊304分別與所述樣本抗體結(jié)合墊305緊貼，同時沖洗液加樣墊303和防水墊304覆蓋沖洗區(qū)201;所述沖洗液加樣墊303和防水墊304的寬度均與沖洗區(qū)201相同；
[0066]其中，所述鼠抗人糖化血紅蛋白抗體包被于所述包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305上。
[0067]實施例3
[0068]請參考圖1、圖2以及圖3，本發(fā)明用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒包括試劑瓶I和試紙2;
[0069]其中，所述試劑瓶I中裝有熒光顆粒101，所述熒光顆粒101的直徑為80nm，是具有疏水性表面的可吸附血紅蛋白的聚合物熒光顆粒；
[0070]其中所述試紙2由一端起，依次為沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203、檢測區(qū)204、對照區(qū)205以及吸水區(qū)206;
[0071]其中，所述糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203包被有鼠抗人糖化血紅蛋白抗體，所述檢測區(qū)204包被有可與鼠抗人糖化血紅蛋白抗體結(jié)合的二抗，所述對照區(qū)205包被有抗血紅蛋白抗體；
[0072]進(jìn)一步的，所述試紙2包括底板301以及與其粘合的硝基纖維素膜302，所述硝基纖維素膜302的寬度與底板301的寬度相同；
[0073 ]同時，所述沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203以及吸水區(qū)206分別設(shè)置有的沖洗液加樣墊303、防水墊304、樣本抗體結(jié)合墊305和吸水墊306，所述樣本抗體結(jié)合墊305為玻璃纖維墊；
[0074]其中，所述包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305和吸水墊306與所述硝基纖維素膜302緊貼，所述包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305的寬度分別與沖洗區(qū)201、樣品區(qū)202以及糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203等三個區(qū)域的寬度相同，并覆蓋所述三個區(qū)域;所述吸水墊306的寬度與吸水區(qū)206寬度相同；
[0075]其中，所述沖洗液加樣墊303以及防水墊304分別與所述樣本抗體結(jié)合墊305緊貼，同時沖洗液加樣墊303和防水墊304覆蓋沖洗區(qū)201;所述沖洗液加樣墊303和防水墊304的寬度分別與沖洗區(qū)201相同；
[0076]其中，所述鼠抗人糖化血紅蛋白抗體包被于所述包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305上。
[0077]實施例4
[0078]請參考圖4，本發(fā)明用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒還包括用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置，其包括:固件401，血液去除裝置402，多孔粘合層403，吸血墊404;
[0079]其中，所述吸血墊404設(shè)置在所述固件401的一端;所述多孔粘合層403通過包裹所述吸血墊404以及設(shè)置有吸血墊404的端部將所述吸血墊404固定于所述固件401上;所述血液去除裝置402設(shè)置在所述固件401上，并與所述固件401滑動連接。
[0080]實驗例I
[0081]本發(fā)明糖化血紅蛋白比例檢測方法如下:將壓積紅細(xì)胞置于含有溶血劑和熒光顆粒101的試劑瓶I中，使血紅蛋白從血細(xì)胞中釋放并與熒光顆粒101反應(yīng)，在反應(yīng)Imin后，從試劑瓶I中取出含反應(yīng)后熒光顆粒101的液體20ul，并將其置于包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305的樣品區(qū)202上，并在所述沖洗區(qū)201的沖洗液加樣墊303上加入適量含有0.5 %BSA和0.1 %吐溫20的pH= 7.4的磷酸緩沖液的沖洗液，使得所述反應(yīng)后的熒光顆粒101能夠隨沖洗液流動，而防水墊304是為了防止沖洗液從墊子上方直接溢到加樣區(qū)203，從而保證沖洗液的沖洗效果;使熒光顆粒101經(jīng)過包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305的糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203，以及檢測區(qū)204或?qū)φ諈^(qū)205，多余的沖洗液將被吸水區(qū)206的吸水墊306吸附。然后，對檢測區(qū)204進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測，并將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，即可計算出糖化血紅蛋白比例。
[0082]實驗例2
[0083]本發(fā)明糖化血紅蛋白比例檢測方法如下:將壓積紅細(xì)胞置于含有溶血劑和熒光顆粒101的試劑瓶I中，使血紅蛋白從血細(xì)胞中釋放并與熒光顆粒101反應(yīng)，在反應(yīng)Imin后，從試劑瓶I中取出含反應(yīng)后彩色顆粒101的液體20ul，并將其置于包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305的樣品區(qū)202上，并在所述沖洗區(qū)201的沖洗液加樣墊303上加入適量含有0.5 %BSA和0.1 %吐溫20的pH= 7.4的磷酸緩沖液的沖洗液，使得所述反應(yīng)后的彩色顆粒101能夠隨沖洗液流動，而防水墊304是具有防止沖洗液從墊子上方直接溢到加樣區(qū)203的功能，從而保證沖洗液的沖洗效果;使彩色顆粒101經(jīng)過包括樣品區(qū)和糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)的樣本抗體結(jié)合墊305的糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)203，以及檢測區(qū)204或?qū)φ諈^(qū)205，多余的沖洗液將被吸水區(qū)206的吸水墊306吸附。然后，對檢測區(qū)204進(jìn)行色帶強(qiáng)度檢測，并將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)色卡對照，即可計算出糖化血紅蛋白比例。
[0084]實驗例3
[0085]本發(fā)明方法還進(jìn)一步包括使用糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置采集積壓紅細(xì)胞的步驟，所述步驟具體如下:將本發(fā)明實施例4中所述的用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置帶有吸血墊404的結(jié)構(gòu)部分浸入血樣中進(jìn)行血液吸取;然后，將裝置取出，然后將血液去除裝置402通過夾持裝置移動至吸血墊404處，并對對吸血墊404進(jìn)行擠壓，將多余血樣去除，即得到所采集微量紅細(xì)胞，也就是壓積紅細(xì)胞。然后，將裝置帶有吸血墊404的結(jié)構(gòu)部分浸泡于含有溶血劑和熒光顆粒/彩色顆粒的試劑瓶中，并釋放血紅蛋白，然后再按照實驗例I或?qū)嶒灷?的步驟進(jìn)行糖化血紅蛋白檢測。
[0086]本發(fā)明試劑盒中，通過使用熒光顆粒為標(biāo)記檢測物，并將抗體直接包被于試紙表面，從而無需外加抗體，并能夠通過簡單的熒光數(shù)值讀取以及標(biāo)準(zhǔn)對照即實現(xiàn)檢測，并具有成分結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，檢測便捷，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
[0087]盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。
【主權(quán)項】
1.一種用于測定糖化血紅蛋白比例的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括試劑瓶和試紙； 其中，所述試劑瓶中裝有可與血紅蛋白反應(yīng)或可吸附血紅蛋白的熒光顆?；虿噬w粒； 其中，所述試紙由一端起，依次為沖洗區(qū)、樣品區(qū)、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、對照區(qū)以及吸水區(qū)； 其中，所述糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)包被有鼠抗人糖化血紅蛋白抗體，所述檢測區(qū)包被有可與鼠抗人糖化血紅蛋白抗體結(jié)合的二抗，所述對照區(qū)包被有抗血紅蛋白抗體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試紙包括底板以及與其粘合的硝基纖維素膜，所述硝基纖維素膜的寬度與底板寬度相同； 其中，所述沖洗區(qū)、樣品區(qū)、糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)以及吸水區(qū)分別設(shè)置有沖洗液加樣墊、防水墊、樣品抗體結(jié)合墊和吸水墊； 其中，所述樣品抗體結(jié)合墊包括樣品區(qū)以及糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)，并與所述硝基纖維素膜緊貼，所述樣品抗體結(jié)合墊的寬度分別與沖洗區(qū)、樣品區(qū)以及糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)三個區(qū)域的寬度相同，并覆蓋所述三個區(qū)域;所述吸水墊的寬度與吸水區(qū)寬度相同； 其中，所述沖洗液加樣墊和防水墊分別與所述樣本抗體結(jié)合墊緊貼，所述沖洗液加樣墊和防水墊的寬度與沖洗區(qū)相同，且沖洗液加樣墊和防水墊覆蓋沖洗區(qū)； 其中，所述鼠抗人糖化血紅蛋白抗體包被于所述樣品抗體結(jié)合墊上。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述樣本抗體結(jié)合墊為玻璃纖維墊。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光顆粒的粒徑為50-500nm。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還進(jìn)一步包括用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述用于糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置包括:固件，血液去除裝置、多孔粘合層，吸血墊； 其中，所述吸血墊設(shè)置在所述固件的一端;所述多孔粘合層通過包裹所述吸血墊以及設(shè)置有吸血墊的端部將所述吸血墊固定于所述固件上;所述血液去除裝置設(shè)置在所述固件上，并與所述固件滑動連接。7.—種測定糖化血紅蛋白比例的方法，其特征在于，所述方法中使用權(quán)利要求1-6中任一項所述的試劑盒進(jìn)行檢測，所述方法具體包括如下步驟:將壓積紅細(xì)胞置于所述的含溶血劑和熒光顆粒/彩色顆粒的試劑瓶中，使血紅蛋白釋放并與所述熒光顆粒/彩色顆粒反應(yīng)，然后將反應(yīng)后熒光顆粒/彩色顆粒取出，并置于所述樣品區(qū)，并在所述沖洗區(qū)加入適量沖洗液，使得所述反應(yīng)后熒光顆粒/彩色顆粒能夠隨沖洗液流動并經(jīng)過糖化血紅蛋白抗體結(jié)合區(qū)以及檢測區(qū)或?qū)φ諈^(qū)，然后，對檢測區(qū)進(jìn)行熒光強(qiáng)度或色帶顏色檢測，并將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線或標(biāo)準(zhǔn)色卡對照，即可計算出糖化血紅蛋白比例。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，溶血后樣本與所述熒光顆粒/彩色顆粒反應(yīng)的時間為0.5-2min。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述沖洗液是含有能夠提供抗原抗體反應(yīng)環(huán)境的保護(hù)性蛋白以及表面活性劑的緩沖溶液。10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還進(jìn)一步包括使用糖化血紅蛋白檢測的微量紅細(xì)胞采集裝置采集積壓紅細(xì)胞的步驟。
【文檔編號】G01N33/533GK105891519SQ201610511635
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年7月1日
【發(fā)明人】王保丹, 肖江群, 江應(yīng)玲, 鐘乾興
【申請人】安邦（廈門）生物科技有限公司