豬瘟病毒抗體檢測卡及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測卡，特別是涉及一種用于快速定量檢測豬血清中豬瘟病毒抗體的檢測卡及其制備方法。
【背景技術】
[0002]豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的傳染病之一，具有高傳染性和高致病性的特點，給全世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，被世界衛(wèi)生組織(OIE)列為A類16種傳染病之一，我國也將其列為一類傳染病，是目前發(fā)生最多、危害最大、流行最廣的動特傳染病之一。自從1969年在我國使用兔化弱毒疫苗后，豬瘟的暴發(fā)明顯減少，但80年代以后，由于臨床癥狀不典型的非典型豬瘟成為主要發(fā)病形式，持續(xù)感染普遍存在，疫苗的預防效果明顯下降，造成臨床有大約20%?30%的健康豬群持續(xù)帶毒，從而使豬瘟防制遇到新困難，因此對豬瘟抗體監(jiān)控是防止感染的主要手段。
[0003]疫苗免疫是我國豬瘟防控的主要手段，采集免疫后豬血清，并檢測血清中豬瘟抗體的效價是監(jiān)控豬瘟的主要方法，也就是評價豬瘟疫苗免疫效果、免疫過程和監(jiān)控豬瘟病毒的抵抗能力，也是適時注射疫苗的主要依據(jù)。
[0004]市面上有豬瘟病毒抗體膠體金快速檢測卡，通過對樣品的檢測，即可粗略判斷豬體內(nèi)是豬瘟抗體含量，獸醫(yī)根據(jù)檢測結果判斷是否需要注射豬瘟疫苗。
[0005]同樣市場上也大量使用檢測豬瘟抗體酶標試劑盒，S卩ELISA酶標試劑盒，ELISA試劑盒需要酶標儀、溫育反應條件、洗板條件，操作工作環(huán)境和專業(yè)技術人員，另外檢測樣本還需要復雜的前處理，如采集血液，分離血清等;而快速膠體金雖然檢測方便，不需專業(yè)技術人員和工作環(huán)境，但其檢測的靈敏度低，且只能定性，檢測范圍窄。而本發(fā)明專利的目的就是克服以上兩類試劑盒的各自缺點，通過簡單的操作，實現(xiàn)快速、準確、高靈敏地定量(半定量)分析，實現(xiàn)在養(yǎng)豬現(xiàn)場檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是提供一種豬瘟病毒抗體檢測卡及其制備方法，能完全解決上述現(xiàn)有技術的不足之處。
[0007]本發(fā)明的目的通過下述技術方案來實現(xiàn):
一種豬瘟病毒抗體檢測卡，包括裝配在外殼內(nèi)的檢測卡本體，所述檢測卡本體包括底板，在底板上從左至右依次粘貼樣品墊、標記墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，且樣品墊的右端搭在標記墊的左端上，標記墊的右端搭在硝酸纖維素膜的左端上，吸水紙左端搭在硝酸纖維素膜的右端上，所述標記墊由載體基層和標記物組成，所述硝酸纖維素膜上包被豬瘟抗原為檢測線，包被羊抗雞抗體為質(zhì)控線，在外殼上對應樣品墊開設加樣孔，對應硝酸纖維素膜上的檢測線和質(zhì)控線開設視窗孔。
[0008]進一步，所述標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，且檢測微球為標記有豬瘟抗原的微球，質(zhì)控微球為標記有雞IgY或兔IgG的質(zhì)控微球。
[0009]進一步，所述硝酸纖維素膜上的檢測線和標記墊上采用的豬瘟抗原均為滅活豬瘟病毒抗原、豬瘟疫苗或豬瘟重組結構蛋白E2和E0;所述硝酸纖維素膜上質(zhì)控線采用的羊抗雞抗體為羊抗雞IgY的IgG或者羊抗兔lgG。
[0010]進一步，所述檢測微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的硅膠微球或聚苯乙稀微球。所述檢測微球和質(zhì)控微球的粒徑均為50?500nm。
[0011 ]進一步，所述標記在生物原料上的鑭系熒光微球的鑭系熒光是指鑭系元素Eu、Sm或Tb與β—二酮配基產(chǎn)生的熒光。其發(fā)光效率高、吸收光譜寬、發(fā)射光譜很窄、斯特克斯位移寬，使其熒光光譜分析的靈敏度很高。
[0012]進一步，所述樣品墊為檢測血清或血漿的樣品墊，或者為檢測全血的樣品墊。
[0013]進一步，本檢測卡利用豬血樣品中豬瘟病毒抗體、豬瘟病毒抗原的標記物和硝酸纖維素膜上包被豬瘟病毒抗原通過雙抗原夾心法來檢測豬血樣本中豬瘟病毒抗體。
[0014]進一步，本檢測卡為定量層析檢測卡，它是通過檢測儀檢測層析后檢測卡的檢測線和質(zhì)控線發(fā)出的熒光信號，然后根據(jù)此批檢測卡的IC卡儲存的標準曲線，再由檢測線和質(zhì)控線的熒光信號從標準曲線計算出待測物的濃度。
[0015]—種豬瘟病毒抗體檢測卡的制備方法，其特征在，包括以下步驟:
步驟一，把硝酸纖維素膜粘貼在PVC底板上，并在硝酸纖維素膜上噴涂已稀釋至0.2?0.5mg/ml的羊抗雞IgY的IgG形成質(zhì)控線和已稀釋至0.3?1.0mg/ml的豬痕抗原形成檢測線，烘制后備用；
步驟二，用封閉液封閉硝酸纖維素膜10?30分鐘，用1mM磷酸緩沖液清洗硝酸纖維素膜10?30分鐘，干燥后備用；
步驟三，制備標記有雞IgY的鑭系熒光微球和標記有豬瘟抗原的鑭系熒光微球；
步驟四，把標記有雞IgY和標記有豬瘟抗原的鑭系熒光微球并分別稀釋至濃度0.05?0.4yg/ml和I?8yg/ml，并將其噴涂在載體基層上構成標記墊，烘制后備用；
步驟五，把樣品墊、標記墊、吸水紙依次粘在PVC底板上，組裝成大卡，再用剪切機切割成試紙條，裝配在檢測卡外殼內(nèi)，即得到豬瘟病毒抗體檢測卡。
[0016]名詞解釋:
羊抗雞IgY的IgG:羊抗雞IgY的免疫球蛋白G;
羊抗兔IgG:羊抗兔IgG的免疫球蛋白G;
雞IgY:雞卵黃抗體；
兔IgG:兔免疫球蛋白G;
抗豬RBC:抗豬紅細胞表面蛋白抗體。
[0017]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于:靈敏度高，檢測的批內(nèi)差及批間差小，有較好的重復性，性能穩(wěn)定，既可檢測全血樣本，也可以檢測血清和血漿樣本，與BVDV (牛病毒性腹瀉病毒)、BDV邊界病毒、PRRSV(豬生殖與呼吸綜合征病毒)、PCV豬圓環(huán)病毒、PPV(豬細小病毒)、PRV(豬輪狀病毒)等抗體沒有交叉反應?？蓪崿F(xiàn)豬瘟病毒抗體現(xiàn)場快速檢測，具有較高的實用價值。
【附圖說明】
[0018]圖1是本發(fā)明的結構示意圖；
圖2是圖1中檢測卡本體的結構示意圖；
圖3是圖2的俯視圖；
圖4是豬瘟病毒抗體檢測曲線。
【具體實施方式】
[0019]下面結合具體實施例和附圖對本發(fā)明作進一步的說明。
[0020]如圖1至圖4所示，一種豬瘟病毒抗體檢測卡，包括裝配在外殼10內(nèi)的檢測卡本體，所述檢測卡本體包括PVC底板I，在PVC底板I上從左至右依次粘貼樣品墊2、標記墊3、硝酸纖維素膜4和吸水紙5，且樣品墊2的右端搭在標記墊3的左端上，標記墊3的右端搭在硝酸纖維素膜4的左端上，吸水紙5左端搭在硝酸纖維素膜4的右端上。所述硝酸纖維素膜4上包被豬瘟抗原為檢測線6，包被羊抗雞抗體為質(zhì)控線7。在外殼10上對應樣品墊2開設加樣孔11，對應硝酸纖維素膜4上的檢測線6和質(zhì)控線7開設視窗孔12。
[0021]所述硝酸纖維素膜4上質(zhì)控線7采用的羊抗雞抗體為羊抗雞IgY的IgG或者羊抗兔IgG0
[0022]所述標記墊3由載體基層和標記物組成，標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，且檢測微球為標記有豬瘟抗原的微球，質(zhì)控微球為標記有雞IgY或兔IgG的質(zhì)控微球。所述檢測微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的娃膠微球或聚苯乙稀微球。并且，檢測微球和質(zhì)控微球的粒徑均為50?500nm。
[0023]所述硝酸纖維素膜4上的檢測線6和標記墊3上采用的豬