專利名稱：：一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種能同時檢測巨細(xì)胞病毒(CMV)IgG抗體、風(fēng)疹病毒(RV)IgG抗體的聯(lián)合檢測卡。
背景技術(shù)：
：巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)亦稱細(xì)胞包涵體病毒，由于感染的細(xì)胞腫大，并具有巨大的核內(nèi)包涵體，故名。巨細(xì)胞病毒在人群中感染非常廣泛，我國成人感染率達95%以上，通常呈隱性感染，多數(shù)感染者無臨床癥狀，但在一定條件下侵襲多個器官和系統(tǒng)可產(chǎn)生嚴(yán)重疾病。病毒可侵入肺、肝、腎、唾液腺、乳腺其他腺體，以及多核白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，可長期或間隙地自唾液、乳汗血液、尿液、精液、子宮分泌物多處排出病毒。通?？赏ㄟ^口腔，生殖道，胎盤，輸血或器官移植等多途徑傳播。機體的細(xì)胞免疫功能對巨細(xì)胞病毒感染的發(fā)生和發(fā)展起重要作用，細(xì)胞免疫缺陷者，可導(dǎo)致嚴(yán)重的和長期的巨細(xì)胞病毒感染，并使機體的細(xì)胞免疫進一步受到抑制，如殺傷性T細(xì)胞活力下降，自然殺傷性細(xì)胞功能減低等。風(fēng)疹病毒(RubellaVirus,RV)呈不規(guī)則球形，5070毫微米，病毒內(nèi)核為正鏈單股核糖核酸(RNA)與l個核衣殼蛋白(C)，3個囊膜蛋白，對人體均有抗原性。人群通常易感染風(fēng)疹病毒，傳染源為風(fēng)疹病患者，出疹前1周至出疹后5天均有傳染性，孕婦感染可通過垂直傳播，傳給胚胎或胎兒，往往導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎或胎兒畸形，故對風(fēng)疹抗體檢測對優(yōu)生優(yōu)育有著很重要的意義。巨細(xì)胞病毒和風(fēng)疹病毒感染的實驗室診斷常采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、膠體金免疫層析(GICA)等方法。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)具有靈敏度極高的特點，直接檢測病原體基因，不能判定人群抗體水平，且容易出現(xiàn)假陽性。酶聯(lián)免疫吸附法檢測的是抗體，具有靈敏度高、特異性強的特點，常檢測IgM和IgG抗體。但是酶聯(lián)免疫吸附法需要設(shè)備，操作復(fù)雜，耗時較長，價格昂貴，不適用于快速診斷。目前，國內(nèi)不少醫(yī)院的實驗室已將孕婦巨細(xì)胞病毒和風(fēng)疹病毒感染篩查作為常規(guī)項目，可能有些欠成熟。其中多數(shù)實驗室將早孕血清IgM抗體單項指標(biāo)作為孕婦巨細(xì)胞病毒和風(fēng)疹病毒感染的指標(biāo)，僅從方法學(xué)角度即存在問題，因IgM抗體的檢測影響因素較多，主要是易出現(xiàn)假陽性，且抗體產(chǎn)生最早，一經(jīng)感染，快速產(chǎn)生，在感染初期抗感染起作用，但維持時間短，消失快。本專利之所以采取測定巨細(xì)胞病毒IgG抗體的方法，是因為與測定巨細(xì)胞病毒IgM抗體相比，巨細(xì)胞病毒IgG抗體可終身持續(xù)存在，而巨細(xì)胞病毒IgM抗體僅與急性感染有關(guān)，因而孕婦巨細(xì)胞病毒原發(fā)性感染最可靠的診斷方法是妊娠期巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體發(fā)生陽轉(zhuǎn)。同樣，孕婦在妊娠前對風(fēng)疹已存在的免疫力，即已存在的特異性IgG抗體，能夠非常有效地保護妊娠期發(fā)生再次風(fēng)疹病毒的感染。因此，育齡婦女孕前應(yīng)檢查風(fēng)疹病毒抗體，如果是陰性，應(yīng)接種風(fēng)疹病毒減毒疫苗，這樣也就無須進行妊娠期風(fēng)疹感染的監(jiān)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種使用快捷方便、安全、適應(yīng)于臨床的需要且能同時檢測巨細(xì)胞病毒和風(fēng)疹病毒的巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測卡，本發(fā)明還提供了一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測卡的制備方法，通過本制備方法制得的檢測卡具有特異性強和靈敏度高的特點。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，包括卡蓋、卡底和試紙條，試紙條依次設(shè)有檢測樣本區(qū)、金標(biāo)區(qū)、硝酸纖維素膜區(qū)和吸水區(qū)，其特征在于所述硝酸纖維素膜區(qū)依次設(shè)有包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控線、包被巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線和包被風(fēng)疹病毒抗原的檢測線。作為一種優(yōu)化方案所述羊抗鼠IgG的質(zhì)控線由濃度為1.5mg/ml的羊抗鼠IgG溶液在硝酸纖維素膜區(qū)畫制而成，巨細(xì)胞病毒抗原檢測線由濃度為0.lmg/ml的巨細(xì)胞病毒抗原溶液畫制而成，風(fēng)疹病毒抗原檢測線由濃度為0.lmg/ml的風(fēng)疹病毒抗溶液畫制而成。所述羊抗鼠IgG的質(zhì)控線、巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線和風(fēng)疹病毒抗原的檢測線依次被標(biāo)注字母"C"、"T1"和"T2"。作為一種優(yōu)化方案所述檢測樣本區(qū)為玻璃纖維層；所述金標(biāo)區(qū)設(shè)有位于試紙條上表面的膠體金層，膠體金層的上表面設(shè)有保護層；所述吸水區(qū)域設(shè)有吸水紙，吸水紙上設(shè)有安裝標(biāo)志，安裝標(biāo)志與安裝標(biāo)示孔相對應(yīng)。作為一種優(yōu)化方案所述卡蓋上設(shè)有加樣孔、觀測孔和安裝標(biāo)示孔，卡底的內(nèi)部設(shè)有放置試紙條的凹槽；所述試紙條上的檢測加樣區(qū)與卡蓋上的加樣孔相對應(yīng)；試紙條上的金標(biāo)區(qū)和硝酸纖維素區(qū)與卡蓋上的觀測孔相對應(yīng)。—種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，由卡蓋、卡底和試紙條組裝而成，試紙條依次設(shè)有檢測樣本區(qū)、金標(biāo)區(qū)、硝酸纖維素膜區(qū)和吸水區(qū)，其特征在于所述金標(biāo)區(qū)設(shè)有膠體金層，膠體金層由氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液、碳酸鉀溶液和抗人IgG單克隆抗體溶液制備而成。作為一種優(yōu)化方案所述膠體金層的制備過程如下A.取l4X的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.51%檸檬酸三鈉溶液O.8ml，迅速混勻，繼續(xù)煮沸IO分鐘，待溶液顏色由藍經(jīng)紫變酒紅色后冷卻至室溫；B.然后向步驟A中得到的溶液中加入13%的碳酸鉀溶液100y1和lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100iil，得到混合溶液；C.將步驟B中的混合溶液放入離心管中，在_62t:條件下，以12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心50分鐘；D.將步驟C中離心后的溶液棄去上清液，取下層沉淀物備用；E.將步驟D中的沉淀物用稀釋液進行稀釋，稀釋液與離心前混合溶液的體積比為20:i;F.步驟E中稀釋后得到的溶液均勻涂在試紙條玻璃纖維層上。作為一種優(yōu)化方案所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為1%，檸檬酸三鈉溶液的濃度為1%;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為2%。作為一種優(yōu)化方案所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為4%，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.5%;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為3%。作為一種優(yōu)化方案所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為2%，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.8%;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為1%。本發(fā)明通過采用上述方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點1.本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，可以同時檢測標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒IgG抗體、風(fēng)疹病毒IgG抗體，且檢測結(jié)果的總體符合率較高，推廣應(yīng)用前景廣闊。2.本發(fā)明檢測的是IgG抗體，與測定IgM抗體相比，IgG抗體是可以終身攜帶的，而IgM抗體僅與急性感染有關(guān)，準(zhǔn)確率高。3.本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，減少了許多繁瑣的程序，方便、快捷、直觀，檢測結(jié)果的符合率在90X左右，與德國賽潤ELISAclassic巨細(xì)胞病毒IgG、風(fēng)疹病毒IgG檢測試劑所得結(jié)果相比，檢測結(jié)果基本一致，甚至高于德國賽潤ELISA的檢測結(jié)果，但本發(fā)明不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓(xùn)，按說明書即可完成操作，全過程只需30分鐘，降低了使用成本，適合醫(yī)院等基層單位。下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步描述。附圖1為本發(fā)明實施例中卡蓋的結(jié)構(gòu)示意附圖2為本發(fā)明實施例中卡底的結(jié)構(gòu)示意附圖3為本發(fā)明實施例中試紙條的俯視結(jié)構(gòu)示意附圖4為本發(fā)明實施例中試紙條的側(cè)視結(jié)構(gòu)示意圖。圖中l(wèi)-卡蓋；ll-加樣孔；12-觀測孔；13-安裝標(biāo)示孔；2_卡底；21-凹槽；3-試紙條；31-檢測樣本區(qū)；32-金標(biāo)區(qū)；321-膠體金層；322-保護層；33-硝酸纖維素膜區(qū)；331-羊抗鼠的質(zhì)控線；332-巨細(xì)胞病毒抗原檢測線；333-風(fēng)疹病毒抗原的檢測線；34-吸水區(qū)；341-吸水紙；342-安裝標(biāo)志。具體實施例方式實施例1:如圖1和圖2所示，一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，包括卡蓋1、卡底2和試紙條3，卡蓋1上設(shè)有加樣孔11、觀測孔12和安裝標(biāo)示孔13，卡底2的內(nèi)部設(shè)有放置試紙條3的凹槽21。試紙條3上的檢測加樣區(qū)31與卡蓋1上的加樣孔11相對應(yīng)；試紙條3上的金標(biāo)區(qū)32和硝酸纖維素區(qū)33與卡蓋1上的觀測孔12相對應(yīng)。如圖和圖4所示，試紙條3依次設(shè)有檢測樣本區(qū)31、金標(biāo)區(qū)32、硝酸纖維素膜區(qū)33和吸水區(qū)34，檢測樣本區(qū)31為玻璃纖維層；金標(biāo)區(qū)32設(shè)有位于試紙條3上表面的膠體金層321，膠體金層321的上表面設(shè)有保護層322;硝酸纖維素膜區(qū)33依次設(shè)有包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控線331、包被巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線332和包被風(fēng)疹病毒抗原的檢測線333;吸水區(qū)域34設(shè)有吸水紙341，吸水紙341上設(shè)有安裝標(biāo)志342，安裝標(biāo)志342與安裝標(biāo)示孔13相對應(yīng)。羊抗鼠IgG的質(zhì)控線331的濃度為1.5mg/ml，即羊抗鼠IgG的質(zhì)控線331是由濃度為1.5mg/ml的羊抗鼠IgG溶液在試紙條3上畫出，巨細(xì)胞病毒抗原檢測線332的濃度為0.lmg/ml，風(fēng)疹病毒抗原檢測線333的濃度為0.lmg/ml，同樣，巨細(xì)胞病毒抗原檢測線332和風(fēng)疹病毒抗原檢測線333，也是用同樣的方法在試紙條3上畫出。羊抗鼠IgG的質(zhì)控線331、巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線332和風(fēng)疹病毒抗原的檢測線333依次被標(biāo)注字母"C"、"T1"禾口"T2，，。本發(fā)明可以減少許多繁瑣的程序，方便、快捷、直觀，不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓(xùn)，按說明書即可完成操作，全過程只需30分鐘，降低了使用成本，適合醫(yī)院等基層單位?！N巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，由上述的卡蓋1、卡底2和試紙條3組裝而成，試紙條3依次設(shè)有檢測樣本區(qū)31、金標(biāo)區(qū)32、硝酸纖維素膜區(qū)33和吸水區(qū)34，金標(biāo)區(qū)32設(shè)有膠體金層321，膠體金層321由氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液、碳酸鉀溶液和抗人IgG單克隆抗體溶液制備而成。膠體金層321的制備過程如下A.取100ml1%的氯金酸水溶液，加熱至沸騰，加入0.8ml的1%檸檬酸三鈉溶液，迅速混勻，繼續(xù)煮沸10分鐘，待溶液顏色由藍經(jīng)紫變酒紅色后冷卻至室溫；B.然后向步驟A中得到的溶液中加入2%的碳酸鉀溶液100ii1和lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100iil，得到混合溶液；C.將步驟B中的混合溶液放入離心管中，在-62t:條件下，以12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心50分鐘；D.將步驟C中離心后的溶液棄去上清液，取下層沉淀物備用；E.將步驟D中的沉淀物用稀釋液進行稀釋，稀釋液與離心前混合溶液的體積比為20:i;F.步驟E中稀釋后得到的溶液均勻涂在試紙條玻璃纖維層上。使用方法采取靜脈血于干凈未加抗凝劑的容器內(nèi)，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測；將檢測卡放在臺面上，平衡至室溫153(TC，滴加2滴血清80ul于加樣孔11中，1530分鐘內(nèi)觀察檢測結(jié)果。其中，步驟E中的稀釋液是通過下述方法配制而成的，稀釋液的配制取10mM的Tris、0.9X的NaC1、0.05%的PEG、5X的蔗糖、0.1%的NaN3;加入容量瓶，先加入純水，輕搖使之溶解完全；再加入BSA，靜置使之完全溶解，輕搖混勻；以純水定容；用不銹鋼過濾器以0.22um微孔膜做除菌過濾；以HC1將溶液的ffl調(diào)節(jié)為7.4;放置28"備用。結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)a、陰性陰性反應(yīng)后，在標(biāo)注有字母"C"的羊抗鼠的質(zhì)控線331上形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，在標(biāo)注有字母"T1"的巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線332和標(biāo)注有字母"T2"的風(fēng)疹病毒抗原的檢測線333上無反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，表明被測樣品中無巨細(xì)胞病毒抗體，也無風(fēng)疹病毒抗體；b、陽性1、巨細(xì)胞病毒抗體陽性反應(yīng)后，在標(biāo)注有字母"C"的羊抗鼠的質(zhì)控線331上形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，同時在標(biāo)注有字母"T1"的巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線332上形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，表明被測樣品中有巨細(xì)胞病毒抗體；2、風(fēng)疹病毒抗體陽性反應(yīng)后，在標(biāo)注有字母"C"的對照線上形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，同時在標(biāo)注有字母"T2"的風(fēng)疹病毒抗原的檢測線333上形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，表明被測樣品中有風(fēng)疹病毒抗體；3、巨細(xì)胞病毒抗體、風(fēng)疹病毒抗體陽性反應(yīng)后，在標(biāo)注有字母"C"的羊抗鼠的質(zhì)控線331上形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，同時在標(biāo)注有字母"T1"的巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線332和標(biāo)注有字母"T2"的風(fēng)疹病毒抗原的檢測線333上各形成一個紅色沉積反應(yīng)標(biāo)記，表明被測樣品中既有巨細(xì)胞病毒抗體，又有風(fēng)疹病毒抗體；4、反應(yīng)后，在標(biāo)注有字母"C"的羊抗鼠的質(zhì)控線331不顯色，表明本次檢測無效。結(jié)果對比目前普遍使用的較先進的德國賽潤ELISA檢測方法，它對巨細(xì)胞病毒IgG和風(fēng)疹病毒IgG這兩種病毒IgG的陽性和陰性檢測符合率分別是99.0%、99.2%和99.1%、98.9%，比現(xiàn)行的檢測標(biāo)準(zhǔn)要高出很多。用本發(fā)明所述的檢測卡對1000例測試標(biāo)本進行檢測，檢測結(jié)果如表一所示。表一<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>數(shù)據(jù)分析本發(fā)明聯(lián)合檢測卡的陽性符合率為(856+84+41)+(862+86+42)=99%，陰性符合率為9+10=90.0%，通過檢測結(jié)果的對比，本發(fā)明的檢測結(jié)果基本達到德國賽潤ELISA的檢測水平，所以，可以判定本發(fā)明的特異性、靈敏度達到了現(xiàn)行的檢測標(biāo)準(zhǔn)。但與德國賽潤ELISA的檢測方法相比，德國賽潤ELISA的檢測方法反應(yīng)時間較長，需要較好的儀器及與儀器配套的試劑盒，檢測成本比較高；而本發(fā)明所述的聯(lián)合檢測卡操作簡便、觀察直觀、快速、省時，不需特殊設(shè)備，可以作為檢測血清中的巨細(xì)胞病毒IgG和風(fēng)疹病毒IgG的重要方法，具有較好的發(fā)展前景，因此本發(fā)明的聯(lián)合檢測卡從綜合方面看，具有較大的優(yōu)越性。實施例2:—種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，其結(jié)構(gòu)與實施例1的結(jié)構(gòu)相同?！N巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法由上述的卡蓋1、卡底2和試紙條3組裝而成，試紙條3依次設(shè)有檢測樣本區(qū)31、金標(biāo)區(qū)32、硝酸纖維素膜區(qū)33和吸水區(qū)34，金標(biāo)區(qū)32設(shè)有膠體金層321，膠體金層321由氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液、碳酸鉀溶液和抗人IgG單克隆抗體溶液制備而成。膠體金層321的制備過程如下A.取100ml4X的氯金酸水溶液，加熱至沸騰，加入0.8ml0.5%檸檬酸三鈉溶液，迅速混勻，繼續(xù)煮沸10分鐘，待溶液顏色由藍經(jīng)紫變酒紅色后冷卻至室溫；B.然后向步驟A中得到的溶液中加入3%的碳酸鉀溶液100y1和lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100iil，得到混合溶液；C.將步驟B中的混合溶液放入離心管中，在_62t:條件下，以12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心50分鐘；D.將步驟C中離心后的溶液棄去上清液，取下層沉淀物備用；E.將步驟D中的沉淀物用稀釋液進行稀釋，稀釋液與離心前混合溶液的體積比為20:i;F.步驟E中稀釋后得到的溶液均勻涂在試紙條玻璃纖維層上。本實施例中膠體金層的制備方法以及結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)與實施例1相同，不同之處在于，在膠體金層的制備過程中所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為4%，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.5%;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為3%。同樣，用本發(fā)明所述的檢測卡對1000例測試標(biāo)本進行檢測，檢測結(jié)果如表二所示。表二<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>用實施例1同樣的分析方法，檢測的結(jié)果顯示，本實施例所述的本發(fā)明檢測卡同樣具有高靈敏性和高特異性。實施例3:—種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，其結(jié)構(gòu)與實施例1的結(jié)構(gòu)相同?！N巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法由上述的卡蓋1、卡底2和試紙條3組裝而成，試紙條3依次設(shè)有檢測樣本區(qū)31、金標(biāo)區(qū)32、硝酸纖維素膜區(qū)33和吸水區(qū)34，金標(biāo)區(qū)32設(shè)有膠體金層321，膠體金層321由氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液、碳酸鉀溶液和抗人IgG單克隆抗體溶液制備而成。膠體金層321的制備過程如下A.取100ml2X的氯金酸水溶液，加熱至沸騰，加入0.8ml0.8%檸檬酸三鈉溶液，迅速混勻，繼續(xù)煮沸10分鐘，待溶液顏色由藍經(jīng)紫變酒紅色后冷卻至室溫；B.然后向步驟A中得到的溶液中加入1%的碳酸鉀溶液100ii1和lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100iil，得到混合溶液；C.將步驟B中的混合溶液放入離心管中，在_62t:條件下，以12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心50分鐘；D.將步驟C中離心后的溶液棄去上清液，取下層沉淀物備用；E.將步驟D中的沉淀物用稀釋液進行稀釋，稀釋液與離心前混合溶液的體積比為20:i;F.步驟E中稀釋后得到的溶液均勻涂在試紙條玻璃纖維層上。本實施例中膠體金層的制備方法以及結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)與實施例1相同，不同之處在于，在膠體金層的制備過程中所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為2%，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.8%;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為1%。同樣，也用本發(fā)明所述的檢測卡對1000例測試標(biāo)本進行檢測，檢測結(jié)果如表三所示。表三<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>檢測和分析方法與實施例1、實施例2相同，檢測的結(jié)果顯示，本發(fā)明所述檢測卡具有高靈敏性和高特異性。綜上所述，本發(fā)明所述的檢測卡在制備過程中，只要氯金酸水溶液、檸檬酸三鈉溶液、碳酸鉀溶液的濃度在合理的范圍值內(nèi)，本發(fā)明所述的檢測卡便具有較高的靈敏性和特異性，符合檢測標(biāo)準(zhǔn)；此外，由于本發(fā)明自身的結(jié)構(gòu)特點，使本發(fā)明具有操作簡便、觀察直觀、快速、省時，不需特殊設(shè)備等優(yōu)點。權(quán)利要求一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，包括卡蓋(1)、卡底(2)和試紙條(3)，試紙條(3)依次設(shè)有檢測樣本區(qū)(31)、金標(biāo)區(qū)(32)、硝酸纖維素膜區(qū)(33)和吸水區(qū)(34)，其特征在于所述硝酸纖維素膜區(qū)(33)依次設(shè)有包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控線(331)、包被巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線(332)和包被風(fēng)疹病毒抗原的檢測線(333)。2.如權(quán)利要求1所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，其特征在于所述羊抗鼠IgG的質(zhì)控線(331)由濃度為1.5mg/ml的羊抗鼠IgG溶液在硝酸纖維素膜區(qū)畫制而成，巨細(xì)胞病毒抗原檢測線(332)由濃度為0.lmg/ml的巨細(xì)胞病毒抗原溶液畫制而成，風(fēng)疹病毒抗原檢測線(333)由濃度為O.lmg/ml的風(fēng)疹病毒抗原溶液畫制而成。3.如權(quán)利要求2所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，其特征在于所述羊抗鼠IgG的質(zhì)控線(331)、巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線(332)和風(fēng)疹病毒抗原的檢測線(333)依次被標(biāo)注字母"C"、"T1"和"T2"。4.如權(quán)利要求1所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，其特征在于所述檢測樣本區(qū)(31)為玻璃纖維層；所述金標(biāo)區(qū)(32)設(shè)有位于試紙條(3)上表面的膠體金層(321)，膠體金層(321)的上表面設(shè)有保護層(322);所述吸水區(qū)(34)設(shè)有吸水紙(341)，吸水紙(341)上設(shè)有安裝標(biāo)志(342)。5.如權(quán)利要求1所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，其特征在于所述卡蓋(1)上設(shè)有加樣孔(11)、觀測孔(12)和安裝標(biāo)示孔(13)，卡底(2)的內(nèi)部設(shè)有放置試紙條(3)的凹槽(21);所述試紙條(3)上的檢測加樣區(qū)(31)與卡蓋(1)上的加樣孔(11)相對應(yīng)；試紙條(3)上的金標(biāo)區(qū)(32)和硝酸纖維素區(qū)(33)與卡蓋(1)上的觀測孔(12)相對應(yīng)。6.—種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，由卡蓋(D、卡底(2)和試紙條(3)組裝而成，試紙條(3)依次設(shè)有檢測樣本區(qū)(31)、金標(biāo)區(qū)(32)、硝酸纖維素膜區(qū)(33)和吸水區(qū)(34)，其特征在于所述金標(biāo)區(qū)(32)設(shè)有膠體金層(321)，膠體金層(321)由氯金酸溶液、檸檬酸三鈉溶液、碳酸鉀溶液和抗人IgG單克隆抗體溶液制備而成。7.如權(quán)利要求6所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，其特征在于所述膠體金層(321)的制備過程如下A.取14%的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.51%檸檬酸三鈉溶液的0.8ml，迅速混勻，繼續(xù)煮沸10分鐘，待溶液顏色由藍經(jīng)紫變酒紅色后冷卻至室溫；B.然后向步驟A中得到的溶液中加入13%的碳酸鉀溶液100iil和lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100iil，得到混合溶液；C.將步驟B中的混合溶液放入離心管中，在-62t:條件下，以12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心50分鐘；D.將步驟C中離心后的溶液棄去上清液，取下層沉淀物備用；E.將步驟D中的沉淀物用稀釋液進行稀釋，稀釋液與離心前混合溶液的體積比為20:i;F.步驟E中稀釋后得到的溶液均勻涂在試紙條的玻璃纖維層上。8.如權(quán)利要求7所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，其特征在于所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為1%，檸檬酸三鈉溶液的濃度為1%;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為2%。9.如權(quán)利要求7所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，其特征在于所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為4X，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.5X;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為3%。10.如權(quán)利要求7所述的一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡的制備方法，其特征在于所述步驟A中氯金酸水溶液的濃度為2X，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.8X;所述步驟B中碳酸鉀溶液的濃度為1%。全文摘要本發(fā)明公開了一種巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒聯(lián)合檢測試劑檢測卡，包括卡蓋、卡底和試紙條，試紙條依次設(shè)有檢測樣本區(qū)、金標(biāo)區(qū)、硝酸纖維素膜區(qū)和吸水區(qū)，所述硝酸纖維素膜區(qū)依次設(shè)有包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控線、包被巨細(xì)胞病毒抗原的檢測線和包被風(fēng)疹病毒抗原的檢測線，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，可以同時檢測標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒IgG抗體、風(fēng)疹病毒IgG抗體，且檢測結(jié)果的總體符合率較高，推廣應(yīng)用前景廣闊，本發(fā)明檢測的是IgG抗體，與測定IgM抗體相比，IgG抗體是可以終身攜帶的，而IgM抗體僅與急性感染有關(guān)，準(zhǔn)確率高。文檔編號G01N33/577GK101738474SQ20091025565公開日2010年6月16日申請日期2009年12月16日優(yōu)先權(quán)日2009年12月16日發(fā)明者傅愛華,劉善利,來秀芬,楊致亭,范永熙申請人:楊致亭