一種同時(shí)檢測牛奶樣品中的多種磺胺類藥物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種同時(shí)檢測牛奶樣品中的多種磺胺類藥物的方法，屬于乳及乳制品 質(zhì)量安全檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，磺胺類藥物（SAS)殘留的檢測方法很多，理化方法包括薄層色譜法、氣相色 譜法、液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳法和超臨界流體色譜 法等。近年來，隨著免疫分析方法的廣泛應(yīng)用，charm II的放射免疫分析法逐漸發(fā)展起來。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)檢測牛奶樣品中的多種磺胺類藥物的方法。
[0004] 本發(fā)明所采用的技術(shù)解決方案是：
[0005] -種同時(shí)檢測牛奶樣品中的多種磺胺類藥物的方法，步驟包括：
[0006] (1)將牛奶樣品放入塑料離心管中，離心去除上層脂肪層，待用；
[0007] (2)取出Charm試劑盒中的白色藥片放入離心管中，加入去離子水，用漩渦混合器 混合，將白色藥片打碎;將步驟（1)去除脂肪層的牛奶加入離心管中，用漩渦混合器混合均 勻；
[0008] (3)向步驟(2)離心管中加入粉紅色藥片，用漩渦混合器混合，將粉紅色藥片打碎 并混合均勻，然后置于電熱恒溫器中保溫；
[0009] (4)步驟(3)保溫完成后，取出離心管，將其放入離心機(jī)中離心，離心完成后取出， 棄去上層液體，然后將離心管倒置，用棉簽擦去脂肪環(huán)并吸干液體，得到位于離心管下層的 沉淀物；向離心管中加入去離子水，用漩渦混合器將沉淀物打碎并混合均勻；
[0010] (5)步驟(4)完成后，向離心管中加入閃爍液，蓋上蓋子，用漩渦混合器混合均勻， 然后采用液體閃爍計(jì)數(shù)分析儀計(jì)數(shù)，打印檢測結(jié)果。
[0011 ] 步驟(1)中：所述離心轉(zhuǎn)速優(yōu)選為3500_4000r/min，離心時(shí)間優(yōu)選為5_6min。
[0012] 步驟(2)中：所述白色藥片為受體試劑片。白色藥片的用量優(yōu)選為20mg。
[0013] 步驟(3)中：所述粉紅色藥片為示蹤劑，具體優(yōu)選為[Η]標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶，用量 優(yōu)選為20mg。
[0014] 步驟(3)中：保溫溫度優(yōu)選為85±2°C，保溫時(shí)間優(yōu)選為3-5min。
[0015] 步驟(4)中：離心轉(zhuǎn)速優(yōu)選為3000_3400r/min，離心時(shí)間優(yōu)選為2_3min。
[0016] 步驟(5)中：所述閃爍液優(yōu)選為對聯(lián)三苯(TP)，閃爍液的加入量為3-5ml。
[0017] 上述方法還包括磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制步驟:在空白牛奶中分別加入不同濃 度的磺胺類藥物，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的cpm值為縱坐標(biāo)，繪制磺胺類藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線;通 過液體閃爍計(jì)數(shù)分析儀測得的cpm值，及磺胺類藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出牛奶樣品中的磺胺類 藥物的濃度值。
[0018] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：
[0019] 本發(fā)明建立了放射免疫法快速篩選抗生素的方法，可同時(shí)檢測牛奶樣品中的磺胺 甲基啼啶（Sulfamerazine，SM1 )，橫胺二甲基啼啶（Sulfamethazine，SM2)，橫胺甲氧?達(dá)嗪 (Sulfamethoxypyridazine, SMP)，橫胺啼啶（Sulfadiaz ine，SD)，橫胺甲基異噁挫 (Sulfamethoxazole，SMZ)，橫胺間甲氧啼啶（Sulfamonomethoxine，SMM)，橫胺間二甲氧啼 啶（311]^&(1;[11161:1101；[116,30]\0和橫胺喹噁啉（3111€&(1;[11161:1101；[116,3(^)等8種橫胺類藥物，樣 品只需簡單離心便可直接檢測，20min可以完成單份樣品的檢測，該方法方便快速，精密度 和準(zhǔn)確度均能達(dá)到要求。
【附圖說明】
[0020] 圖1為磺胺二甲基嘧啶濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0021 ]本發(fā)明建立了放射免疫法快速篩選抗生素的方法，可同時(shí)檢測牛奶樣品中的磺胺 甲基嘧啶，磺胺二甲基嘧啶，磺胺甲氧噠嗪，磺胺嘧啶，磺胺甲基異噁唑，磺胺間甲氧嘧啶， 磺胺間二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉等8種磺胺類藥物。該方法方便快速，精密度和準(zhǔn)確度均能 達(dá)到要求。
[0022] -種可同時(shí)檢測牛奶樣品中的8種磺胺類藥物的快速篩選方法，包括以下步驟：
[0023] (1)將15-20ml牛奶樣品放入塑料離心管中，離心去除上層脂肪層，待用；離心轉(zhuǎn)速 為3500-4000r/min，離心時(shí)間為5_6min。
[0024] (2)取出Charm試劑盒中的白色藥片，將其放入離心管中，加入去離子水，用漩渦混 合器混合，將白色藥片打碎;將步驟（1)去除脂肪層的部分牛奶加入離心管中，用漩渦混合 器混合均勻。所述白色藥片為受體試劑片，用量20mg。
[0025] (3)向步驟(2)離心管中加入粉紅色藥片，用漩渦混合器混合，將粉紅色藥片打碎 并混合均勻，然后置于電熱恒溫器中保溫，保溫溫度為85±2°C，保溫時(shí)間為3-5min。所述粉 紅色藥片為放置于Charm試劑盒中的示蹤劑，具體為[H]標(biāo)記的磺胺二甲嘧啶，用量為20mg。
[0026] (4)步驟(3)保溫完成后，取出離心管，將其放入離心機(jī)中離心，離心轉(zhuǎn)速為3000-3400r/min，離心時(shí)間為2-3min，離心完成后取出，棄去上層液體，然后將離心管倒置，用棉 簽擦去脂肪環(huán)并吸干液體，得到位于離心管底部的沉淀物。向離心管中加入去離子水，用漩 渦混合器將沉淀物打碎并混合均勻。
[0027] (5)步驟(4)完成后，向離心管中加入3_5ml對聯(lián)三苯，蓋上蓋子，用漩渦混合器混 合均勻，然后采用液體閃爍計(jì)數(shù)分析儀計(jì)數(shù)，打印檢測結(jié)果。
[0028] 上述步驟中還包括磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制步驟:在空白牛奶中分別加入不同 濃度的磺胺類藥物，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的cpm值為縱坐標(biāo)，分別繪制8種磺胺類藥物的標(biāo) 準(zhǔn)曲線。通過液體閃爍計(jì)數(shù)分析儀測得的cpm值，及8種磺胺類藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出牛奶樣 品中的8種磺胺類藥物的濃度值，最后打印出檢測結(jié)果。
[0029] 下面通過相關(guān)試驗(yàn)等來對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0030] (1)磺胺類藥物加標(biāo)試驗(yàn)，以磺胺二甲基嘧啶為代表進(jìn)行說明：取陰性牛奶樣本， 進(jìn)行不同濃度的磺胺二甲基嘧啶加標(biāo)試驗(yàn)。表1示出磺胺二甲基嘧啶添加濃度與cpm值的關(guān) 系。取各個(gè)不同濃度的加標(biāo)樣品平行測試，cpm讀數(shù)平均值加上3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差作為各自相對 應(yīng)篩選水平的控制點(diǎn)。本方法的陽性控制點(diǎn)是通過磺胺二甲基嘧啶加標(biāo)試驗(yàn)來決定的，濃 度為l〇yg/L。確定控制點(diǎn)：6次陽性對照(含磺胺二甲基嘧啶10yg/L)的平均值X (1+24%)= 1292。圖1為磺胺二甲基嘧啶濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。從圖1中可判斷其大約濃度在2~4yg//L之間。由 此可以說明，控制點(diǎn)的濃度與檢測限濃度之間有3倍的范圍，完全可以保證在控制點(diǎn)附近上 下波動的陰性結(jié)果不會出現(xiàn)假陽性。表2示出8種磺胺類藥物的加標(biāo)試驗(yàn)。從表2中可以看 出，8種不同種類的磺胺藥物在lOyg/L的添加水平時(shí)的cpm值與控制點(diǎn)比較，均顯示為陽性， 證明8種磺胺類藥物可以100%被檢出。而當(dāng)添加水平降低到5yg/L時(shí)，磺胺嘧啶、磺胺甲基 嘧啶、磺胺二甲基嘧啶不能被檢測出，說明這3種磺胺藥物的靈敏度低。因此，確定磺胺類藥 物大類篩選的檢測限為l〇yg/L。
[0031 ] (2)放射免疫法試驗(yàn)的精密度和靈敏度:在陰性空白牛奶中分別加入8種磺胺類藥 物，配制成濃度為5yg//L和lOyg/L的牛奶樣品用于檢測。同時(shí)用空白牛奶作陰性對照，檢測 其cpm值及精密度，結(jié)果如表3所示，表3示出8種磺胺藥物混合標(biāo)準(zhǔn)品測定結(jié)果(n = 6)。8種 磺胺類藥物在添加濃度5yg/L時(shí)，變異系數(shù)在1.69 %~11.48 %之間；添加濃度為10yg/L時(shí)， 變異系數(shù)在1.79 %~5.56 %之間。各種磺胺類藥物濃度在lOyg/L時(shí)，6個(gè)平行測試可100 % 被檢測出，說明放射免疫法在精密度和準(zhǔn)確度上能達(dá)到要求