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圖像讀取方法_2

文檔序號(hào):9731872閱讀:來源:國(guó)知局

[0059] 此外,本發(fā)明中優(yōu)選:在判定(d-Ι)工序中的熒光強(qiáng)度是否有效中,當(dāng)熒光強(qiáng)度不 飽和,并且熒光強(qiáng)度比背景值大時(shí),判定為熒光強(qiáng)度有效。
[0060] 根據(jù)如此構(gòu)成的本發(fā)明,由于讀取有意義的值作為熒光強(qiáng)度,因而能夠進(jìn)行適當(dāng) 的圖像讀取。
[0061] 此外,本發(fā)明中優(yōu)選:關(guān)于拍攝條件,預(yù)先準(zhǔn)備多個(gè)拍攝條件,以當(dāng)將該多個(gè)拍攝 條件以受光量順序排列時(shí),各個(gè)拍攝條件下讀取的熒光強(qiáng)度之間不產(chǎn)生間隙的方式,預(yù)先 準(zhǔn)備拍攝條件。
[0062] 根據(jù)如此構(gòu)成的本發(fā)明,能夠讀取的熒光強(qiáng)度值連續(xù),因此對(duì)于各種各樣的試樣, 均能夠進(jìn)行適當(dāng)?shù)膱D像讀取。
[0063] 此外,本發(fā)明中優(yōu)選:關(guān)于拍攝條件,以即使在進(jìn)一步減去背景值后,各個(gè)拍攝條 件下讀取的熒光強(qiáng)度之間也不產(chǎn)生間隙的方式,預(yù)先準(zhǔn)備拍攝條件。
[0064] 根據(jù)如此構(gòu)成的本發(fā)明,即使在減去背景值后,能夠讀取的熒光強(qiáng)度值也連續(xù),因 此對(duì)于各種各樣的試樣,均能夠進(jìn)行適當(dāng)?shù)膱D像讀取。
[0065] 此外,本發(fā)明中優(yōu)選:當(dāng)在(e)工序中,無法設(shè)定接下來的拍攝條件時(shí),不在接著 (e)工序的(f)工序中進(jìn)行拍攝,而在接下來的(d)工序中判定為結(jié)束拍攝。
[0066] 根據(jù)如此構(gòu)成的本發(fā)明,關(guān)于無法設(shè)定合適的拍攝條件的試樣,能夠準(zhǔn)確地結(jié)束 拍攝。
[0067] 此外,本發(fā)明中優(yōu)選:試樣為生物芯片。
[0068] 根據(jù)如此構(gòu)成的本發(fā)明,能夠?qū)z測(cè)時(shí)間高速化、檢測(cè)數(shù)據(jù)容量減少的圖像讀取 方法以生物芯片為對(duì)象來使用。
[0069]發(fā)明效果
[0070] 根據(jù)本發(fā)明,能夠提供如下方法:以規(guī)定的拍攝條件拍攝熒光圖像,基于該拍攝的 熒光圖像所含的各區(qū)域的熒光強(qiáng)度,進(jìn)行拍攝的結(jié)束判定、進(jìn)一步拍攝的拍攝條件的設(shè)定, 從而以涉及各區(qū)域的合適的條件實(shí)現(xiàn)拍攝,并且實(shí)現(xiàn)檢測(cè)時(shí)間的高速化、檢測(cè)數(shù)據(jù)容量的 減少。
【附圖說明】
[0071] 圖1是表示生物芯片的熒光圖像的例子的圖。
[0072] 圖2是表示曝光時(shí)間和來自試樣的熒光強(qiáng)度的關(guān)系的圖表。
[0073]圖3是所拍攝的區(qū)域的熒光圖像的放大圖。
[0074]圖4是存在亮點(diǎn)的區(qū)域的熒光圖像的放大圖。
[0075] 圖5是表示本發(fā)明的圖像讀取方法中第1實(shí)施方式處理的流程圖。
[0076] 圖6是表示本發(fā)明的圖像讀取方法中第2實(shí)施方式處理的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0077] 首先,進(jìn)行本說明書中記載的用語(yǔ)的說明。
[0078]就存在多個(gè)發(fā)出熒光的區(qū)域的試樣而言,作為"存在多個(gè)發(fā)出不同熒光強(qiáng)度的區(qū) 域的試樣"的一個(gè)例子,相當(dāng)于圖1所示的生物芯片的熒光圖像。在生物芯片11中,以二維狀 配置有多個(gè)發(fā)出熒光強(qiáng)度的區(qū)域12,各個(gè)區(qū)域所發(fā)出的熒光由弱至強(qiáng)存在多個(gè)。所配置的 區(qū)域的大小、形狀、個(gè)數(shù)、間距沒有特別限制。
[0079] "生物芯片"是指,在載體上高密度且各自獨(dú)立地固定有大量探針的芯片。關(guān)于生 物芯片,只要在支撐體上固定有探針(例如寡核苷酸探針),就沒有限制。
[0080] 對(duì)于生物芯片,其支撐體的形態(tài)沒有特別限制,可使用平板、棒狀、珠等任意的形 態(tài)。作為支撐體,在使用平板的情況下,在該平板上,能夠以預(yù)定的間隔固定每種規(guī)定的探 針(點(diǎn)樣法等;參照Science 270,467-470( 1995)等)。此外,也能夠在平板上的特定位置,逐 次合成每種規(guī)定的探針(光刻法等;參照Science 251,767-773(1991)等)。
[0081] 作為其他優(yōu)選的支撐體的形態(tài),可舉出使用中空纖維的支撐體。在使用中空纖維 作為支撐體的情況下,可優(yōu)選例示將每種寡核苷酸探針固定于各中空纖維,并將全部中空 纖維集束而固定后,沿纖維的長(zhǎng)度方向反復(fù)切斷而得到的生物芯片。該生物芯片能夠以將 寡核苷酸探針固定于貫通孔基板的類型進(jìn)行說明(參照日本特許第3510882號(hào)公報(bào)等,圖 1)〇
[0082] 向支撐體固定探針的方法沒有特別限制,任何結(jié)合樣式均可。此外,不限于直接固 定于支撐體,例如,也可預(yù)先將支撐體用聚賴氨酸等聚合物進(jìn)行涂覆處理,并將探針固定于 處理后的支撐體。進(jìn)一步,在使用中空纖維等管狀體作為支撐體的情況下,也可使凝膠狀物 保持于管狀體,并使探針固定于該凝膠狀物。
[0083] "熒光圖像"是指,對(duì)試樣照射來自激發(fā)光源的激發(fā)光并用拍攝裝置獲取試樣所發(fā) 出的熒光而得的圖像。能夠用作發(fā)出激發(fā)光的激發(fā)光源的有激光、汞燈、LED等,只要能夠照 射激發(fā)想要觀察的熒光的波長(zhǎng)的光,則任何光源均可。能夠用作拍攝裝置的有CCD照相機(jī)、 CMOS傳感器、PMT等,沒有特別限制。
[0084] 就"拍攝條件"而言,尤其對(duì)于受光量,是決定利用拍攝裝置接收何種程度的試樣 的熒光強(qiáng)度的條件。作為改變受光量的方法,能夠如下實(shí)現(xiàn):改變向樣品照射的激發(fā)光的照 射強(qiáng)度;改變拍攝裝置的設(shè)定。在改變照射強(qiáng)度的情況下,可如下進(jìn)行:直接改變激發(fā)光源 的輸出;通過將ND濾光片等插入激發(fā)光的光路中來改變激發(fā)光對(duì)樣品的照射強(qiáng)度。此外,在 改變拍攝裝置的設(shè)定的情況下,例如,當(dāng)使用CCD照相機(jī)作為拍攝裝置時(shí),可如下進(jìn)行:改變 拍攝的曝光時(shí)間;通過改變?cè)鲆?gain)來改變受光量。由于為了改變條件而使用的每個(gè)激 發(fā)光源、拍攝裝置具有特性,因此事前從使用同一試樣并改變各個(gè)條件而獲取的熒光強(qiáng)度 算出條件與受光量的關(guān)系為佳。
[0085] 例如,在使用16bit的CCD照相機(jī)作為拍攝裝置的情況下,試樣的熒光強(qiáng)度能夠以 圖2所示的曝光時(shí)間與受光量的關(guān)系攝入拍攝裝置。如果以1秒當(dāng)量換算CCD照相機(jī)所讀取 的來自試樣的熒光強(qiáng)度,則曝光時(shí)間1秒能夠讀取1~65535的亮度、0.1秒能夠讀取10~ 655350的亮度、10秒能夠讀取0.1~6553.5的亮度、100秒能夠讀取0.01~655.35的亮度。這 樣的多個(gè)拍攝條件被預(yù)先準(zhǔn)備,關(guān)于設(shè)定的多個(gè)拍攝條件的基準(zhǔn),將這些多個(gè)拍攝條件以 受光量順序(升序或降序)排列時(shí),設(shè)為以1秒當(dāng)量換算的熒光強(qiáng)度產(chǎn)生重疊的條件為佳,即 各個(gè)拍攝條件下讀取的換算后的熒光強(qiáng)度之間不產(chǎn)生間隙為佳。此外,優(yōu)選如下預(yù)先準(zhǔn)備 拍攝條件:即使在減去拍攝的熒光圖像的背景值后,各個(gè)拍攝條件下讀取的熒光強(qiáng)度之間 也不產(chǎn)生間隙。
[0086] 圖3中作為例子示出了某一試樣的規(guī)定區(qū)域的熒光圖像的放大圖。區(qū)域31由二維 狀的像素32構(gòu)成。
[0087] "算出區(qū)域的熒光強(qiáng)度"是指,基于處在區(qū)域的邊界33的內(nèi)側(cè)的各像素32的熒光強(qiáng) 度的值,得到區(qū)域31的熒光強(qiáng)度的值的信息,對(duì)于處在區(qū)域的邊界33的內(nèi)側(cè)的像素32的全 部熒光強(qiáng)度,例如,算出平均值、中間值、最小值、最大值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、CV(變異系數(shù))等代表性 的統(tǒng)計(jì)量。該情況下使用的圖像不僅可以使用剛拍攝后的熒光圖像,也可以使用例如進(jìn)行 了背景校正(減去背景值)、陰影(shading)校正等圖像校正的熒光圖像,使用者適當(dāng)選擇即 可。
[0088] 在以下各實(shí)施方式中,所謂"熒光強(qiáng)度有效"表示在某一拍攝條件下所拍攝的試樣 的熒光強(qiáng)度不飽和。對(duì)于"飽和"的意義將后述。相反,在熒光強(qiáng)度飽和或熒光強(qiáng)度為背景值 以下的情況下,對(duì)于所得的熒光強(qiáng)度的值,被判斷為沒有作為測(cè)定值的意義。在這樣的情況 下,判定為熒光強(qiáng)度無效。予以說明的是,可將熒光強(qiáng)度不飽和并且熒光強(qiáng)度比背景值大作 為焚光強(qiáng)度有效的條件。
[0089] 所謂"飽和",例如,在拍攝裝置使用16bit的CXD照相機(jī)的情況下,作為讀取上限值 的65535相當(dāng)于飽和狀態(tài),但由于設(shè)備的干擾等外因會(huì)導(dǎo)致熒光強(qiáng)度的數(shù)值偏向,因此使用 者只要以例如對(duì)60000以上的情況判斷為飽和的方式設(shè)定任意的值即可。區(qū)域內(nèi)的像素中 即使1像素也存在飽和值,例如對(duì)于平均值也無法算出正的熒光強(qiáng)度,但如果使用中間值, 則只要構(gòu)成區(qū)域內(nèi)的像素中飽和像素、亮點(diǎn)像素和因它們而受到影響的像素的合計(jì)不超過 全部像素的5成,就能夠算出有意義的值,因此相比平均值,優(yōu)選使用中間值作為區(qū)域的代 表值。關(guān)于判斷該區(qū)域的熒光強(qiáng)度是否飽和的像素?cái)?shù),根據(jù)需要,使用者只要設(shè)定任意的值 即可。
[0090] 圖4中示出了與圖3不同的其他區(qū)域的熒光圖像的放大圖。由于在區(qū)域41上載有異 物,因此該異物被激發(fā)而發(fā)出熒光,并作為亮點(diǎn)42而被拍攝。該情況下,由于無法算出區(qū)域 內(nèi)正確的熒光強(qiáng)度,因此必須進(jìn)一步從以受光量更弱的拍攝條件拍攝的熒光圖像算出區(qū)域 的熒光強(qiáng)度。此處,對(duì)于相應(yīng)區(qū)域內(nèi)的全部像素的熒光強(qiáng)度,應(yīng)用公
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