一種食品及中草藥中二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明專利涉及二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法，具體說(shuō)是一種食品及中草藥中二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]眾所周知，二氧化硫在食品生產(chǎn)加工中具有舉足輕重的作用，常用作漂白劑和防腐劑。但是，受利益驅(qū)使，一些不法商家在食品加工過程中存在嚴(yán)重的二氧化硫?yàn)E用情況。
[0003]人類長(zhǎng)期攝入超標(biāo)的二氧化硫會(huì)對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重傷害，包括強(qiáng)烈的胃腸道刺激、誘發(fā)哮喘等過敏性疾病、破壞體內(nèi)維生素B1、影響鈣磷元素吸收等。因而，我國(guó)食品安全相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)二氧化硫在食品中的使用范圍、限量等均有明確的規(guī)定。
[0004]目前，食品及中草藥中二氧化硫殘留檢測(cè)存在前處理時(shí)間過長(zhǎng)，方法系統(tǒng)誤差不易控制，重現(xiàn)性不好等缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的問題是，提供一種操作簡(jiǎn)單、方法可靠、準(zhǔn)確的通過全自動(dòng)蒸餾裝置和熒光分光光度計(jì)聯(lián)用的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)食品及中草藥中二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種食品及中草藥中二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法，包括以下步驟:
[0007](1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以490nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定亞硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品的濃度依次為0，0.01,0.02,0.03，0.04，0.05,0.1,0.2mM標(biāo)準(zhǔn)溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為520nm處的熒光強(qiáng)度F ;測(cè)定試劑空白溶液在520nm處的熒光強(qiáng)度F。，Δ F = F-F。，以亞硫酸鹽濃度C為X軸，AF為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0008](2)樣品前處理過程:固體樣品用粉碎機(jī)粉粹均勻后稱取5.00-20.00g待用；液體樣品可直接吸取5.00-20.0OmL于全自動(dòng)蒸餾裝置的蒸餾瓶中待用；
[0009](3)蒸餾過程:將試樣放入全自動(dòng)蒸餾裝置的蒸餾瓶中，加入50-100mL的去離子水，吸收管置于堿性吸收液中，向蒸餾瓶中加入一定量的鹽酸，啟動(dòng)自動(dòng)蒸餾裝置，待餾出液至近20-45mL時(shí)停止蒸餾，用弱酸溶液將餾出液調(diào)pH至中性后，用去離子水將餾出液定容至50mL，待用；
[0010](4)測(cè)定:取4mL調(diào)節(jié)pH后的餾出液，加入lmL緩沖溶液，然后加入40 μ L亞硫酸根熒光探針溶液，置于37°C恒溫水浴中反應(yīng)25-35min后用熒光分光光度計(jì)測(cè)定其熒光響應(yīng)值；
[0011]計(jì)算結(jié)果:
[0012]X = ΑΧΟ.05X64X1.25/m(V)
[0013]X-試樣中二氧化硫的含量，單位為g/kg或g/L ；
[0014]A-通過比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出餾出液中亞硫酸根的濃度，單位為mol/L ；
[0015]m-實(shí)驗(yàn)中所取的固體樣品的質(zhì)量，單位為kg ；
[0016]V-實(shí)驗(yàn)中所取的液體樣品的體積，單位為L(zhǎng)。
[0017]所述堿性吸收液為氫氧化鈉或氫氧化鉀的強(qiáng)堿性溶液，濃度為5_20g/L。
[0018]所述鹽酸為濃鹽酸與去離子水體積比1:1稀釋的鹽酸，加入量為5_20mL。
[0019]所述亞硫酸根熒光探針為乙酰丙酸基團(tuán)保護(hù)的熒光素分子。
[0020]所述緩沖溶液為HEPES緩沖溶液，pH范圍為6.5?7.5。
[0021]本發(fā)的有益效果為:引入先進(jìn)的全自動(dòng)蒸餾裝置代替?zhèn)鹘y(tǒng)的玻璃蒸餾裝置，大大提高了檢測(cè)效率，排除了前處理過程中人為因素的干擾，降低了前處理過程中帶來(lái)的系統(tǒng)誤差，提高了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，保證了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。另一方面，本發(fā)明引入了利用熒光探針檢測(cè)亞硫酸根的新技術(shù)，大大降低了干擾物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1為本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為促進(jìn)本領(lǐng)域技術(shù)人員更加清晰直觀的了解本發(fā)明專利，下面結(jié)合應(yīng)用實(shí)例對(duì)本發(fā)明做更詳細(xì)的說(shuō)明。
[0024]本發(fā)明的食品及中草藥中二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法，包括以下步驟:
[0025](1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以490nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定亞硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品的濃度依次為0，0.01,0.02,0.03，0.04，0.05,0.1,0.2mM標(biāo)準(zhǔn)溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為520nm處的熒光強(qiáng)度F ;測(cè)定試劑空白溶液在520nm處的熒光強(qiáng)度F。，Δ F = F-F。，以亞硫酸鹽濃度C為X軸，AF為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0026](2)樣品前處理過程:固體樣品用粉碎機(jī)粉粹均勻后稱取5.00-20.00g待用；液體樣品可直接吸取5.00-20.0OmL于全自動(dòng)蒸餾裝置的蒸餾瓶中待用；
[0027](3)蒸餾過程:將試樣放入全自動(dòng)蒸餾裝置的蒸餾瓶中，加入50-100mL的去離子水，吸收管置于堿性吸收液中，向蒸餾瓶中加入一定量的鹽酸，啟動(dòng)自動(dòng)蒸餾裝置，待餾出液至近20-45mL時(shí)停止蒸餾，用弱酸溶液將餾出液調(diào)pH至中性后，用去離子水將餾出液定容至50mL，待用；
[0028](4)測(cè)定:取4mL調(diào)節(jié)pH后的餾出液，加入lmL緩沖溶液，然后加入40 μ L亞硫酸根熒光探針溶液，置于37°C恒溫水浴中反應(yīng)25-35min后用熒光分光光度計(jì)測(cè)定其熒光響應(yīng)值；
[0029]計(jì)算結(jié)果:
[0030]X = ΑΧ0.05X64X1.25/m(V)
[0031]X-試樣中二氧化硫的含量，單位為g/kg或g/L ；
[0032]A-通過比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出餾出液中亞硫酸根的濃度，單位為mol/L ；
[0033]m-實(shí)驗(yàn)中所取的固體樣品的質(zhì)量，單位為kg ；
[0034]V-實(shí)驗(yàn)中所取的液體樣品的體積，單位為L(zhǎng)。
[0035]所述堿性吸收液為氫氧化鈉或氫氧化鉀的強(qiáng)堿性溶液，濃度為5_20g/L。
[0036]所述鹽酸為濃鹽酸與去離子水體積比1:1稀釋的鹽酸，加入量為5_20mL。
[0037]所述亞硫酸根熒光探針為乙酰丙酸基團(tuán)保護(hù)的熒光素分子。
[0038]所述緩沖溶液為HEPES緩沖溶液，pH范圍為6.5?7.5。
[0039]本發(fā)明利用全自動(dòng)蒸餾系統(tǒng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的玻璃蒸餾裝置，全自動(dòng)蒸餾裝置蒸餾時(shí)間是玻璃蒸餾裝置的1/8-1/10，大大提高了檢測(cè)效率。此外，全自動(dòng)蒸餾裝置蒸餾過程排除了前處理過程中的人為干擾，大大減小了實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)誤差，重現(xiàn)性好。
[0040]熒光探針技術(shù)具有簡(jiǎn)便、靈敏、快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，在食品安全檢測(cè)中體現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。熒光探針技術(shù)具有極好的專一性，可排除其它干擾離子或分子對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，并且通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程可實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣品的定量檢測(cè)。本發(fā)明正是引入了這種檢測(cè)方法，從而大大提高了二氧化硫殘留檢測(cè)的準(zhǔn)確性。目前亞硫酸根熒探針主要應(yīng)用于生物成像及水等基質(zhì)中亞硫酸根的檢測(cè)]，而對(duì)復(fù)雜食品基質(zhì)中亞硫酸根或二氧化硫殘留量的應(yīng)用極少。目前僅有的幾篇應(yīng)用亞硫酸根熒光探針對(duì)食品基質(zhì)中亞硫酸根檢測(cè)的報(bào)道也僅局限于白葡萄酒或白糖等液態(tài)或易轉(zhuǎn)化為液態(tài)的基質(zhì)。在已授權(quán)或已公開的幾篇亞硫酸根熒光探針專利中，其應(yīng)用范圍也僅僅局限于生物成像及水溶液中亞硫酸根的檢測(cè)。本發(fā)明創(chuàng)新性的將全自動(dòng)蒸餾與亞硫酸根熒光探針檢測(cè)聯(lián)用，大大擴(kuò)大了亞硫酸根熒光探針在實(shí)際樣品檢測(cè)中的應(yīng)用范圍。
[0041]實(shí)施例1
[0042]本發(fā)明應(yīng)用于中草藥中二氧化硫殘留量的檢測(cè)，包括以下步驟:
[0043](1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以490nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定亞硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品的濃度依次為0，0.01,0.02,0.03，0.04，0.05,0.1,0.2mM標(biāo)準(zhǔn)溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為520nm處的熒光強(qiáng)度F ;測(cè)定試劑空白溶液在520nm處的熒光強(qiáng)度F。，Δ F = F-F。,以亞硫酸鹽濃度C為X軸，AF為