檢測(cè)肼含量的試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及高選擇性檢測(cè)阱含量的試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阱（NH2NH2)作為一個(gè)重要的工業(yè)化學(xué)品，在很多領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，如醫(yī)藥、乳 化劑，染料和紡織，軍事、航空航天、工農(nóng)業(yè)設(shè)及的催化劑、腐蝕抑制劑和農(nóng)藥。阱具有易燃、 易爆的特點(diǎn)，因?yàn)樵诨鸺七M(jìn)系統(tǒng)中作為高能燃料而非常出名。阱具有較強(qiáng)的還原能力，也 應(yīng)用于金屬的防腐蝕。在提取領(lǐng)域，阱也可作為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。在制藥領(lǐng)域，阱作為抗 菌藥物。然而，阱也具有毒理性，隨著阱在各個(gè)領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用，在生產(chǎn)、使用、運(yùn)輸及處 置過(guò)程中很容易引起環(huán)境污染。阱容易被皮膚吸收、口腔吸入，運(yùn)可能導(dǎo)致基因突變和癌 癥。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)阱對(duì)肺、腎臟、肝臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有很嚴(yán)重的破壞性。美國(guó)環(huán)境保護(hù) 署巧PA)提出，阱會(huì)提高曬齒類動(dòng)物的肺癌、鼻炎，W及肝腫瘤的發(fā)病率。阱已被美國(guó)環(huán)保 署和世界衛(wèi)生組織列為人類一個(gè)潛在的致癌物質(zhì)，并且建議較低的闊限值（TLV)l化pb。很 多國(guó)家在飲用水中嚴(yán)格管制阱的濃度，要求在低的微摩爾水平。因此，開(kāi)發(fā)高選擇靈敏檢測(cè) 阱的方法是必要的。
[0003] 用于檢測(cè)阱的傳統(tǒng)分析技術(shù)包括庫(kù)侖滴定法、電位滴定法、比色法、色譜法、電化 學(xué)W及化學(xué)發(fā)光方法。近年來(lái)，巧光法因其具有高的選擇性和靈敏度、操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低、W 及實(shí)時(shí)檢測(cè)的特點(diǎn)，已被廣泛用于各種分析物的檢測(cè)。雖然用于檢測(cè)阱的巧光探針已有所 報(bào)道，但它們大多都是基于單波長(zhǎng)強(qiáng)度下巧光強(qiáng)度的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)定性和定量分析的，運(yùn)樣 的檢測(cè)方法易于受到探針的分布情況、檢測(cè)環(huán)境W及儀器的穩(wěn)定性等因素的影響。然而基 于雙波長(zhǎng)強(qiáng)度比值的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的定性和定量分析能夠有效避免W上因素的干擾。 因此，制備高選擇靈敏分析阱的比率巧光探針是本發(fā)明的創(chuàng)新之處。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本領(lǐng)域急需一種制備簡(jiǎn)單的高選擇阱比率巧光探針，從而能夠有效檢測(cè)阱。為此， 本發(fā)明合成了一類新穎的阱比率巧光探針，其合成簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高、和/或選擇性高，和/或 能夠識(shí)別阱。 陽(yáng)0化]具體而言，本發(fā)明合成了一種阱比率巧光探針，其為4-漠下酸醋糞酷亞胺類化合 物。
[0006] 另一方面，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)樣本中阱含量的試劑盒，其中所述試劑盒含有 本發(fā)明的阱比率巧光探針。本發(fā)明的試劑盒可與阱進(jìn)行作用，產(chǎn)生巧光光譜的變化，從而實(shí) 現(xiàn)對(duì)阱的定性和定量檢測(cè)。
[0007] 具體而言，本發(fā)明的試劑盒中的阱比率巧光探針?lè)謩e與其他分析物進(jìn)行作用均不 能導(dǎo)致巧光光譜的明顯改變，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)阱的選擇性識(shí)別，進(jìn)而可任選地用于排除其他分 析物的存在對(duì)阱的定性和定量測(cè)定的干擾。
[0008] 可選擇地，本發(fā)明的試劑盒中的阱比率巧光探針的穩(wěn)定性好，進(jìn)而能夠長(zhǎng)期保存 使用。
[0009] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的試劑盒中的阱比率巧光探針是高選擇阱比率巧光探針，且合 成簡(jiǎn)單，有利于商業(yè)化的推廣應(yīng)用。
【附圖說(shuō)明】
[0010] 圖1是不同濃度阱（0~100μM)對(duì)探針巧μM)巧光光譜的影響。 1] 圖2是不同分析物巧0μΜ)對(duì)探針巧μΜ)巧光光譜的影響。 陽(yáng)01引圖3是不同分析物巧0μΜ)對(duì)探針巧μΜ)巧光光譜法定量分析阱巧0μΜ)的影 響。 陽(yáng)01引 圖4是探針巧μΜ)對(duì)100μΜ濃度阱響應(yīng)時(shí)間的測(cè)試結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】：
[0014] 本發(fā)明提出了上述高選擇性阱比率巧光探針的合成路線、方法及其光譜性能。
[0015] 本發(fā)明的阱比率巧光探針是一類4-漠下酸醋糞酷亞胺類化合物，其具有W下結(jié) 構(gòu)通式
[0016]
陽(yáng)017] 上式中：Ri，R2,Rs，R"Rs，Re為氨原子，直鏈或支鏈烷基，直鏈或支鏈烷氧基，橫酸 基，醋基，簇基；Ri，Rz，R3,R4,Rs，Re可W相同或不同。
[001引該類阱比率巧光探針的合成路線和方法如下：
[0019]
[0020] 本發(fā)明的高選擇性識(shí)別阱比率巧光探針的顯著特征是能夠高選擇性地識(shí)別阱，和 /或在其他高濃度分析物的存在下能夠準(zhǔn)確對(duì)阱進(jìn)行定性和定量分析。重要的是，本發(fā)明的 阱比率巧光探針還能夠用比率巧光法進(jìn)行定性和定量分析。
[0021] 下面將通過(guò)借助W下實(shí)施例來(lái)更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。W下實(shí)施例僅是說(shuō)明性的， 應(yīng)該明白，本發(fā)明并不受下述實(shí)施例的限制。 陽(yáng)0巧實(shí)施例1
[0023]
[0024] (方案 1)將 4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（166mg， 1.0mmol)、4-二甲氨基R比晚（122mg，1.0mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺（412mg，2.Ommol)溶于 20mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品179mg，產(chǎn)率為43 %。 陽(yáng)0巧](方案。將4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（332mg， 2.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（244mg，2.Ommol)和二環(huán)己基碳二亞胺巧18mg，3.Ommol)溶于 20mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品283mg，產(chǎn)率為68 %。 陽(yáng)0%](方案扣將4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（498mg， 3.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（366mg，3.Ommol)和二環(huán)己基碳二亞胺巧27mg，4. 5mmol)溶于 25mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品338mg，產(chǎn)率為81 %。
[0027](方案 4)將 4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（498mg， 3.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（366mg，3.Ommol)和二環(huán)己基碳二亞胺巧27mg，4. 5mmol)溶于 25mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)1化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品367mg，產(chǎn)率為88 %。 陽(yáng)0巧]1h-NMIU400MHz，CDC!3)δ(*1〇 6) : 1. 04 (S, 9H)，6. 77 化J= 8.OHz, 2H)，7. 29-7. 4 1 (m, 8H)，7. 63 (d,J= 8.OHz, 4H)，7. 72-7. 77 (m, 3H)，7. 94 (d,J= 8.OHz, 1H)，7. 98 (S, 1H); 口C-NMR(100MHz,CDCI3)δ(*l〇 6) : 18. 51，25. 44, 101. 43, 116. 01，119. 70, 120. 61，122. 36, 1 24. 58, 124. 73, 125. 83, 126. 76, 127. 05, 129. 33, 130. 97, 131. 54, 133. 78, 134. 43, 145. 57, 1 52. 62, 158. 56, 162. 43.
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了如下測(cè)試：（a)不同濃度阱（0~100μM)對(duì)探針巧μM)巧 光光譜的影響；插入圖是547nm處巧光強(qiáng)度與452nm處巧光強(qiáng)度的比值與加入的阱濃度之 間的線性關(guān)系。上述測(cè)定是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸鹽緩沖溶液（PBS)，抑值 7. 4的體系中，且所有光譜測(cè)試都是在25°C下阱加入作用15min后測(cè)得的。結(jié)果參見(jiàn)圖1。
[0031] 從圖1可W看出，伴隨著探針溶液中阱濃度的增加，452nm處的巧光發(fā)射峰逐漸降 低，同時(shí)547皿處產(chǎn)生新的發(fā)射峰并逐漸升高，且在0~50μΜ阱濃度范圍內(nèi)和547皿處巧 光強(qiáng)度與452nm處巧光強(qiáng)度的比值成良好的線性關(guān)系。因此，本發(fā)明的探針能較精確地確 定待測(cè)樣本中阱的含量。 陽(yáng)0巧實(shí)施例3 陽(yáng)03引不同分析物（50μM)對(duì)探針巧μM)巧光光譜的影響。分析物包括：乙二胺邸A、 二甲胺DMA、S乙胺TEA、正下胺ηΒΑ、乙酸錠ΑΑ、硫離子S2、氯離子C1、漠離子化、艦離子 I、硫酸根離子S〇42、硫氯酸根離子SCN、谷脫甘膚G甜和阱，它們的濃度均為50μΜ。所有 測(cè)試條件是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸鹽緩沖溶液（PBS)，pH值7. 4的體系中完 成，且所有光譜都是在25°C下分析物加入作用15min后測(cè)得的。移取25μΙ的探針儲(chǔ)備液 (ImM)放進(jìn)5血比色管中，然后加入1.5血乙醇，250μΙlOOmMPBS，再移取25μΙ上述分 析物儲(chǔ)備液（lOmM)加入比色管內(nèi)，然后用超純水定容至5血。搖勻，靜置15min，即可測(cè)定。 結(jié)果如圖2所示。
[0034] 從圖2可W看出，探針對(duì)阱具有很高的選擇性，能夠?qū)Ｒ恍缘睾挖暹M(jìn)行反應(yīng)。其原 因可能是臘首先與漠原子發(fā)生分子間的親核取代反應(yīng)，然后阱上的另外一個(gè)氮原子又發(fā)生 了分子內(nèi)親核取代反應(yīng)胺解掉了醋基導(dǎo)致的。 陽(yáng)0對(duì)實(shí)施例4
[0036] 不同分析物（50μM)對(duì)探針巧μM)巧光光譜法定量分析阱（50μM)的影響。分 析物包括：乙二胺邸Α、二甲胺DMA、Ξ乙胺TEA、正下胺ηΒΑ、乙酸錠ΑΑ、硫離子S2、氯離子 C1、漠離子化、艦離子I、硫酸根離子S〇42、硫氯酸根離子SCN、谷脫甘膚G甜和阱，它們的 濃度均為50μM。所有測(cè)試條件是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸鹽緩沖溶液（PBS)， pH值7. 4的體系中完成，且所有光譜都是在25°C下分析物加入作用15min后測(cè)得的。結(jié)果 如圖3所示。
[0037] 從圖3可W看出，生物體內(nèi)存在的其他常見(jiàn)分析物不會(huì)明顯干擾探針對(duì)阱的定性 與定量檢測(cè)。 陽(yáng)0測(cè) 實(shí)施例5
[0039] 探針巧μM)對(duì)100μΜ濃度阱響應(yīng)時(shí)間的測(cè)試結(jié)果。首先，移取25μL的探針儲(chǔ) 備液（ImM)放進(jìn)5血比色管中，然后加入1.5血乙醇，250μΙlOOmMPBS，再移取50μΙ阱 儲(chǔ)備液（lOmM)加入比色管內(nèi)，然后用超純水定容至5mlV陜速搖勻，計(jì)時(shí)測(cè)定。結(jié)果如圖4 所示。
[0040] 從圖4中可W看出，當(dāng)阱加入探針溶液反應(yīng)后，其巧光光譜即發(fā)生明顯變化，15分 鐘后巧光光譜趨于穩(wěn)定。運(yùn)種巧光光譜變化的快速性與明顯性說(shuō)明此探針完全可W用于阱 的即時(shí)檢測(cè)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于檢測(cè)樣本中阱含量的試劑盒，其中所述的試劑盒含有具有如下結(jié)構(gòu)的化合物：其中：Ri，R2,R3,R4,Rs，Re為獨(dú)立地選自由氨原子、直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈烷氧基、 橫酸基、醋基和徑基組成的組；且其中的Ri，R2,R3,R4,Rs和Re可W相同或不同。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其中的試劑盒含有具有如下結(jié)構(gòu)的化合物：3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中所述的樣本為血液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中所述的試劑盒還包括使用說(shuō)明書(shū)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中所述試劑盒還包括用于檢測(cè)樣本中阱含量的緩 沖劑。6. 權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)中所定義的化合物在制備用于檢測(cè)樣品中阱含量的試劑盒 中的用途。7. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述的樣品為血液。8. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述的試劑盒還包括使用說(shuō)明書(shū)。9. 根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)的用途，其中所述試劑盒還包括用于檢測(cè)樣本中阱含量 的緩沖劑。10. 用于檢測(cè)血液中阱含量的制劑，其包含具有W下結(jié)構(gòu)的化合物：
【專利摘要】本發(fā)明涉及高選擇性檢測(cè)肼含量的試劑盒及其應(yīng)用。這類探針不僅能夠高選擇性地識(shí)別肼而且能夠用熒光法對(duì)肼進(jìn)行靈敏的定量和定性分析。這類探針可以快速對(duì)肼實(shí)現(xiàn)響應(yīng)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)肼的即時(shí)檢測(cè)。這類探針性質(zhì)穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期保存使用。此外，這類探針還能夠使用比率熒光法對(duì)肼進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析，且具有較強(qiáng)的抗干擾能力。這類探針的合成條件相對(duì)溫和，只需一步反應(yīng)，合成簡(jiǎn)單。
【IPC分類】G01N21/64
【公開(kāi)號(hào)】CN105403546
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510755955
【發(fā)明人】葉龍武, 張艷
【申請(qǐng)人】晉江尚京富本環(huán)保科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2015年11月9日