一種測定兒童血漿中維生素a的方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種測定兒童血漿中維生素A的方法；屬于分析及測量控制技術(shù)領域。
【背景技術(shù)】
[0002]利用維生素A分子中具有共軛多烯醇的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325?328nm的范圍內(nèi)有紫外最大吸收，用于含量測定。樣品處理方法簡便與快速:經(jīng)液液萃取后經(jīng)氮氣蒸發(fā)，能滿足臨床快速測定兒童血漿中維生素A含量需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]取兒童血漿200 μ 1，加入140 μ 1甲醇和異丙醇(ν/ν，8: 2)，渦旋30s后，力口入1000 μ 1正已烷，渦旋lmin，室溫高速離心2min ( 12000 Xg)，取上清液700 μ 1，吹干后甲醇100 μ 1復溶。色譜條件:色譜柱為ΒΕ? C18柱(50 _ X 2.1mm, 1.7 μ m; Waters公司)；流速為0.3ml -min - 1 ;流動相為甲醇一水(90: 10);柱溫為30°C ;進樣量:5μ L;檢測波長為325nm。結(jié)果:血漿中維生素A色譜峰分離良好，無干擾，維生素A曲線為 y = 118296x + 11644，R 2 =0.9997，回收率在 90 — 120%;
其操作步驟如下:
(1)操作流程:首先，選取設備及試劑；其次，樣品測定；最后，得出結(jié)論；(2)設備及試劑選取控制:Waters — ACQUITY — UPLC超高效液相色譜儀(Waters,美國)，Empower數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，Sar - torius BT125D電子天平(德國賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，MULTIFUGEXI R超高速離心機(Thermo，美國)，XW — 80A渦旋混合器，對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100138 — 200603)色譜純(美國Fisher公司)，自制超純水，水機(PU R ELABELGA公司，英國)；②色譜條件:色譜柱為C18柱(50 mmX2.1) ；(3)【具體實施方式】:①儲備液的配制取Vitamin A對照品約5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得濃度約為1000 mg.L — 1的儲備液。②血樣預處理:取血漿200 μ 1，加入140 μ 1甲醇和異丙醇(ν/ν,8: 2)，渦旋30s后，加入lOOOul正已烷，渦旋lmin，室溫高速離心2min(12000Xg)，取上清液700 μ 1，吹干后甲醇100 μ 1復溶，要求不受血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾線性關系和線性范圍:取空白血漿200 μ 1共6份，分別加入不同濃度VitaminA50 μ 1，配成濃度為50,100, 200,400,800,1000 μ g /L溶液，按“3.2血樣預處理”操作，以濃度與峰面積作線性回歸，得標準曲線方程。y = 3739.5x + 3073.5，R 2 = 0.9996，線線性范圍為50?1000 μ g /L; (4)具體實施例:該方法臨床應用檢測了 300例正常兒童血漿，維生素A濃度于臨床相符，測定值在300?802 μ g /L之間。
【主權(quán)項】
1.一種測定兒童血漿中維生素A的方法。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定兒童血漿中維生素A的方法，其特征在于其基于超高效液相色譜(UPLC)。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述，其特征在于色譜柱為BEHC18柱，流速為0.3ml -min-1 ;流動相為甲醇一水(90: 10);柱溫為30°C ;進樣量:5μ 1;檢測波長為325nm。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種測定兒童血漿中維生素A的方法，其主要步驟為取兒童血漿200μl，加入140μl甲醇和異丙醇(v/v，8∶2)，渦旋30s后，加入1000μl正已烷，渦旋1min，室溫高速離心2min(12000×g)，取上清液700μl，吹干后甲醇100μl復溶。色譜條件:色譜柱為BEHC18柱(50mm×2.1mm，1.7μm;Waters公司);流速為0.3ml·min－1;流動相為甲醇－水(90∶10);柱溫為30℃;進樣量:5μl;檢測波長為325nm。結(jié)果:血漿中維生素A色譜峰分離良好，無干擾，維生素A曲線為y=118296x+11644，Ｒ2=0.9997，回收率在90－120%。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105319281
【申請?zhí)枴緾N201410268228
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請人】高龍飛
【公開日】2016年2月10日
【申請日】2014年6月17日