一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于載藥膠束形態(tài)測定領域，涉及一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法，尤其涉及一種利用CPS圓盤離心式納米粒度分析儀進行的載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法。
【背景技術】
[0002]聚合物膠束是納米范圍內(nèi)的藥物載體，與脂質(zhì)體、納米微球等藥物載體相比，具有如下優(yōu)勢:①大分子膠束具有良好的生物相容性，膠束能夠有效隔離藥物與外部介質(zhì)，削弱副作用較大的藥物對人體的影響；②由于大分子膠束外部有親水部分的保護，其不易與蛋白質(zhì)和吞噬細胞吸附和識別，保證了其在血漿和組織中的停留時間，體內(nèi)循環(huán)時間長，穩(wěn)定性好大分子膠束具有被動靶向性，表面修飾靶向基團后具有主動靶向性粒徑小，狹窄區(qū)能夠富集滲透；⑤便于制備，保存方便。
[0003]膠束粒子的大小影響著其在體內(nèi)的循環(huán)時間、在器官組織中的分布，進入細胞的機理以及細胞攝取動力學等等。例如，尺寸小于200nm的膠束例子比較難被RES系統(tǒng)清楚，而小于5 μπι的可以通過毛細血管，粒徑在10?lOOnm之間的聚合物膠束能夠獲得足夠長的循環(huán)時間，小于200nm的膠束能夠通過脾臟中內(nèi)皮細胞的過濾。因此，對于載藥膠束形態(tài)的粒徑的測定具有非常重要的意義。
[0004]CPS圓盤離心式納米粒度分析儀為圓盤離心式納米粒度分析儀，采用的是差示離心沉降法進行顆粒粒度的測量和分析。CPS圓盤離心式納米粒度分析儀在高速旋轉(zhuǎn)的離心轉(zhuǎn)盤中建立起梯度溶液，之后注入待測樣品，測定樣品的沉降速度，根據(jù)斯多克斯定律(Stokes Law)測定樣品的粒徑。
[0005]但是，利用CPS圓盤離心式納米粒度分析儀測定粒徑時，要求待測樣品大于梯度溶液密度，且具有較大的密度差，這樣才能保證順利發(fā)生沉降，測定出沉降速度。而對于載藥膠束形態(tài)，密度一般較小，采用常規(guī)的CPS圓盤離心式納米粒度分析儀無法獲得其粒徑大小。
[0006]本領域需要開發(fā)一種能夠快速測定載藥膠束形態(tài)粒度的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法，所述方法采用常規(guī)的CPS圓盤離心式納米粒度分析儀，即可讀取載藥膠束形態(tài)粒徑。
[0008]本發(fā)明具體通過如下技術方案實現(xiàn):
[0009]一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法包括如下步驟:
[0010](1)配制氯化銫梯度溶液，所述氯化銫梯度溶液的平均密度為P p;向CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的低密度擴展盤由高濃度向低濃度依次注入氯化銫梯度溶液，建立梯度；
[0011](2)待梯度溶液梯度穩(wěn)定后，將待測載藥膠束溶液從低密度擴展盤邊緣上樣至CPS離心粒度儀，測定待測載藥膠束的沉降速率，獲得載藥膠束的形態(tài)粒徑；
[0012]其中，所述氯化銫梯度溶液的最低密度大于載藥膠束密度。
[0013]本發(fā)明通過改變載藥膠束的上樣位置，獲得了載藥膠束在梯度溶液中的沉降速度，進而得到載藥膠束的形態(tài)粒徑。
[0014]本發(fā)明所述氯化銫梯度溶液的平均密度為1.1?1.5g/mL，例如1.2g/mL、l.3g/mL、1.4g/mL等，優(yōu)選1.25g/mL。平均密度太大，會降低測試粒徑的分辨率；若平均密度太小，則測試時間會太長。
[0015]本發(fā)明所述氯化銫梯度溶液的梯度個數(shù)為7?11，例如8、9、10，優(yōu)選9。
[0016]本發(fā)明所述待測載藥膠束的密度為P s，P p-p 0.lg/mL。0.lg/mL以上的密度差，在高速離心過程中，能夠有效實現(xiàn)載藥膠束的運動軌跡的測定。
[0017]本發(fā)明所述待測載藥膠束溶液的濃度為1.25?100mg/mL，例如1.5mg/mL、8mg/mL、25mg/mL、40mg/mL、530mg/mL、60mg/mL、7Omg/mL、85mg/mL、90mg/mL 等。
[0018]本發(fā)明所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的轉(zhuǎn)速彡20000轉(zhuǎn)/min，例如25000轉(zhuǎn)/min、28000轉(zhuǎn)/min、30000轉(zhuǎn)/min、33000轉(zhuǎn)/min等。轉(zhuǎn)速太小，對于測試小粒徑的膠束來說，會大大增加測試時間。
[0019]本發(fā)明所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的離心時間^ 30min，例如35min、42min、50min、65min等。所述離心時間根據(jù)待測載藥膠束密度和梯度溶液平均密度的差值增大而縮短，此外，加大離心轉(zhuǎn)速，會縮短測試時間。
[0020]本發(fā)明步驟⑵所述上樣量為90?llOyL，例如93yL、96yL、99yL、103yL、108 μ L 等，優(yōu)選 10yLo
[0021]作為優(yōu)選技術方案，本發(fā)明所述一種載藥膠束形態(tài)粒徑的測定方法包括如下步驟:
[0022](I)配制氯化銫梯度溶液，所述氯化銫梯度溶液的平均密度為P 口為1.25g/mL，所述梯度為9層；向CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的低密度擴張盤由高濃度向低濃度依次注入氯化銫梯度溶液，建立梯度；
[0023](2)待梯度溶液梯度穩(wěn)定后，將待測載藥膠束溶液從低密度擴張盤邊緣上樣至CPS圓盤離心式納米粒度分析儀，上樣量為100 μ L，測定待測載藥膠束的沉降速率，獲得載藥膠束的形態(tài)粒徑；所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的轉(zhuǎn)速多20000轉(zhuǎn)/min，所述CPS圓盤離心式納米粒度分析儀的離心時間^ 30min。
[0024]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0025]本發(fā)明采用密度梯度離心法測試載藥膠束的形態(tài)粒徑，通過改變轉(zhuǎn)速和梯度液濃度，克服載藥膠束密度小的缺點，準確測試出載藥膠束的形態(tài)粒徑，檢測下限為5nm，檢測上限為70nm，測定偏差在0.6±0.01%o
【附圖說明】
[0026]圖1是本發(fā)明實施例1提供的DSPE-PEG載藥膠束的粒徑；
[0027]圖2是本發(fā)明實施例2提供的DSPE-PEG載藥膠束的粒徑；
[0028]圖3是本發(fā)明實施例3提供的DSPE-PEG載藥膠束的粒徑。
【具體實施方式】
[0029]為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實施例如下。本領域技術人員應該明了，所述實施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應視為對本發(fā)明的具體限制。
[0030]制備例1
[0031]DSPE