一種同時快速測定紅花中四種亞精胺成分含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥有效成分含量測定技術(shù)領(lǐng)域，具體屬于一種同時快速測定紅花中 四種亞精胺成分含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紅花是菊科紅花屬植物紅花（Carthamus tinctorius L.)的干燥管狀花，花管狹 細，長約1. 5厘米，橙紅色。其原名為紅藍花，別名為紅花櫻子、草紅花、刺紅花、杜紅花、會 紅花等。主要產(chǎn)地為新疆、河南、浙江以及四川等省，其味辛、微苦、性溫、歸心和肝經(jīng)，能活 血通經(jīng)、散瘀止痛、降血壓和降血脂，用于治療經(jīng)閉、痛經(jīng)、心絞痛、高血壓、跌打損傷、冠心 病等。
[0003] 紅花化學成分極具多樣性，至今已從中分離得到包括醌式查爾酮苷類、黃酮類、甾 醇類、生物堿類、木脂素類、有機酸類、烷基二醇類以及多炔類等250多種化學成分。亞精胺 類化合物是指具有H 2N(CH2)3NH(CH2)4NH 2結(jié)構(gòu)單元的多胺類化合物，目前已從紅花中分離鑒 定四種亞精胺類成分：N1, N5, NlO- (Z) -tri-p-coumaroylspermidine (I)、NI, N5- (Z) -NlO-(E) -tri-p-coumaroylspermidine (2)、NI (E) -N5- (Z) -Nl〇- (E) -tri-p-coumaroylspermidi ne (3)、和 NI, N5, Nl〇-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine (4)〇
[0004] 四種亞精胺成分的結(jié)構(gòu)式：
[0005]
[0006] 亞精胺類成分具有抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、抗菌等廣泛的生物活性。從紅花中分 離鑒定亞精胺成分NI, Ν5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (即本專利中的化合 物2)顯示出對5-HT再攝取有很強選擇性抑制活性，具有治療抑郁癥前景。由于亞精胺存 在眾多同分異構(gòu)體，在分析、分離、鑒定上存在許多困難。目前關(guān)于紅花中亞精胺快速分離 制備已有專利報道（中國專利：一種運用高速逆流色譜從紅花中分離制備亞精胺的方法， 【申請?zhí)枴?01310396939.X)。而有關(guān)紅花中亞精胺類成分含量測定方法未見報道，尤其同時 快速測定紅花中四種亞精胺含量的方法未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種同時快速測定紅花中四種亞精胺成分附，陽，附0_ (Z) -tri-p-coumaroyl-spermidine (I)、NI, N5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidi ne (2)、N1 (E) -N5- (Z) -Nl〇- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (3)、和 NI, N5, NlO- (E) -tri-p -coumaroyl-spermidine (4)含量的方法。該方法應穩(wěn)定、可靠、易操作，不僅能完善紅花藥 材質(zhì)量控制的方法，同時還能為亞精胺類物質(zhì)分析提供可靠的檢測方法。
[0008] 本發(fā)明提供的一種同時快速測定紅花中四種亞精胺成分含量的方法，包括如下步 驟：
[0009] 1)稱取紅花藥材粉末（過60目篩）I. 0000g，置于IOOrnl棕色的具塞錐形瓶中，加 入15ml甲醇，稱定重量，超聲處理（超聲頻率40KHz，功率比91%，超聲溫度25°C )10min， 放冷后再次稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻、過濾，得到紅花供試品溶液，再過0.45 μπι 微孔濾膜后待測；
[0010] 2)用Agilent液相色譜儀測定，色譜條件：分析柱為Agilent C18色譜柱 (250mmX4. 6mm，5 μπι)，流動相為有機溶劑/水等度洗脫，洗脫流速為I. 0ml/min，柱溫 30°C，檢測波長210-360nm，進樣體積為10 μ 1 ;
[0011] 3)將四種亞精胺成分所對應的峰面積分別帶入以下公式計算其含量；Y = 40317Χ-51. 630, Y = 35750χ-29. 313, Y = 38854χ-50. 026, Y = 48600χ-67. 042 ;
[0012] 所述的四種亞精胺成分：NI, Ν5, NlO- (Z) -tri-p-coumaroyl-spermidine (I)、NI, N 5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (2)、NI (E) -N5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaro ylspermidine (3)、和 NI, N5, Nl〇- (E) -tri-p-coumaroyl-spermidine (4) 〇
[0013] 所述的有機溶劑為甲醇，洗脫梯度為47%甲醇。
[0014] 所述四種亞精胺成分（1)、（2)、（3)、（4)的檢測波長分別對應為 270nm, 280nm, 290nm, 300nm。
[0015] 本發(fā)明采用HPLC法同時測定紅花中四種亞精胺類有效成分含量，方法可靠易操 作，提供了一種亞精胺含量測定的新方法。該方法在亞精胺的提取、合成、分析、以及相關(guān)藥 物研發(fā)和生產(chǎn)中質(zhì)量控制方面具有應用前景。
【附圖說明】
[0016] 圖1不同波長下紅花中四種亞精胺成分NI, N5, NlO-(Z)-tri-p-coumaroyl-sperm idine(I)、NI, N5-(Z)-NlO-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(2)、NI (E)-N5- (Z)-NlO-(E)-tri-p-coumaroylspermidine (3)、和 NI, N5, Nl〇-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine(4)混 合對照品的HPLC圖。
[0017] 圖2不同波長下紅花藥材的HPLC圖。
【具體實施方式】
[0018] 實施例1 :
[0019] 液相色譜分析條件：分析柱為Agilent C18色譜柱（250mmX4. 6mm, 5 μπι)， 流動相為47 %甲醇/水等度洗脫，洗脫流速為1.0 ml/min，柱溫30 °C，檢測波長為 270nm, 280nm, 290nm, 300nm多波長檢測，進樣體積為10 μ 1。
[0020] 對照品溶液的制備：
[0021] 混合對照品貯備液的配制：分別精密稱取亞精胺類化合物1標準品4. 16mg，亞精 胺類化合物2標準品5. 12mg，亞精胺類化合物3標準品5. 40mg，亞精胺類化合物4標準品 10. 04mg，于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到混合對照品溶液貯備液（各標準 品由本實驗室所制備）。
[0022] 混合對照品溶液的配制：用吸量管分別精密吸取對照品貯備液0. 5ml，0. 8ml，2. O ml，3. Oml，4. Oml，5. Oml分別置于IOml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成不同濃度 的混合對照品溶液，微孔濾膜（0.22 μ m)過濾即得。
[0023] 供試品溶液的制備：
[0024] 精密稱取紅花藥材粉末（過60目篩）1.0 OOOg，置于100mL棕色的具塞錐形瓶 中，精密加入15ml甲醇，稱定重量，超聲處理（超聲頻率40KHz，功率比91%，超聲溫度 25°C ) 10min，放冷后再次稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻、過濾，取所得的紅花供試品溶 液過0. 45 μ m微孔濾膜后即得。
[0025] 分別吸取混合對照品溶液、供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0026] 該方法能夠準確有效的測定紅花中四種亞精胺成分NI, Ν5, N10-(Z)-tri-p_couma royl-spermidine (I)、NI, N5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (2)、NI (E) -N5- (Z )-Nl〇- (E