免疫學(xué)檢測方法和免疫學(xué)檢測試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種抑制方法和用于抑制非特異性反應(yīng)的試劑（非特異性反應(yīng)抑制 劑）以及使用所述試劑的免疫測定，并且更具體地涉及抑制方法和用于抑制非特異性反應(yīng) 的試劑，其特征在于使用固定在不溶性載體上的抗體片段的免疫測定。
【背景技術(shù)】
[0002] 臨床化學(xué)領(lǐng)域中，用于測量樣本中的分析物的一種通用方法是使用針對分析物 (抗原）的抗體的免疫測定。具體地，使用固定在不溶性載體上的抗體的免疫凝集反應(yīng)法和 免疫色譜法在靈敏性和可用性方面具有優(yōu)點，因此，它們成為用于多種臨床檢查項目的通 用測量方法。
[0003] 由于近來在測量準(zhǔn)確性方面的提高，避免免疫測定中的非特異性反應(yīng)成為體外診 斷試劑研發(fā)中的一個問題。非特異性反應(yīng)是這樣的現(xiàn)象：其中樣品中的某種因子與用作免 疫測定要素的作為試劑的組成成分的抗體反應(yīng)，并且產(chǎn)生假信號，這導(dǎo)致對正確的測量的 干擾。發(fā)現(xiàn)非特異性反應(yīng)的一個引起因素是異好性抗體和類風(fēng)濕因子（RF)。
[0004] 異好性抗體是下述人抗體的總稱，所述抗體表現(xiàn)出針對構(gòu)成免疫測定的主要成 分的動物來源的抗體的反應(yīng)性，并且已知HAMA(人抗小鼠抗體）是代表性的抗體。由于 提議異好性抗體可以在不知不覺的情形下（如飲食，與動物接觸，和施用生物學(xué)藥物） 通過抗原致敏產(chǎn)生，并且在來自未暴露于抗原的人的樣品中的抗體可以表現(xiàn)出異好性 (heterophilicity)，所以其原因目前尚沒有詳細或以統(tǒng)一方式澄清。另一方面，由于類風(fēng) 濕因子在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中出現(xiàn)，并且已知識別免疫球蛋白（抗體）的Fc區(qū)，因此，認 為類風(fēng)濕因子的概念不同于異好性抗體的概念；然而，二者在關(guān)于與動物來源的抗體的反 應(yīng)性方面都具有共同的特征，并且已知二者實際上是人IgG或IgM(所謂的自體抗體），如非 專利文獻1所述。
[0005] 在常規(guī)方法中，通過去除Fc區(qū)域獲得的抗體片段（下文定義），F(xiàn)ab或F (ab' )2， 用作用于體外診斷試劑的抗體，以減少非特異性反應(yīng)，并且所述方法在抑制類風(fēng)濕因子的 作用方面特別有效。另外地，作為成分包含在非專利文獻2和3所述的抗-人IgM單克隆 抗體中的異好性阻斷劑HBR由SCANTIB0DIES商業(yè)化作為抑制非特異性反應(yīng)的添加劑，所述 非特異性反應(yīng)是由于與Fab結(jié)合的異好性抗體導(dǎo)致。還已經(jīng)設(shè)計了其他方法，包括在專利 文獻1中所述的方法，所述方法包括向由與制備用于測量的抗體的物種相同物種的動物制 備的IgM種類天然抗體中加入多克隆抗體；專利文獻2中所述的方法，所述方法包括向類風(fēng) 濕因子的識別區(qū)加入多種動物抗體；和專利文獻3中所述的抑制非特異性反應(yīng)的方法，所 述方法包括使用能夠凝集人IgM的單一種類的抗人IgM單克隆抗體。
[0006] 然而，僅通過常規(guī)對策不能充分抑制非特異性反應(yīng)，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在一些樣本 中，所述對策本身引起非特異性反應(yīng)。
[0007] 引用列表
[0008] 專利文獻
[0009] 專利文獻 I :JP Η11_2878〇1Α
[0010] 專利文獻 2 :JP HO7-Ol28I8A
[0011] 專利文獻 3 :W〇2〇10/〇26758
[0012] 非專利文獻
[0013] 非專利文獻I :Clinical Chemistry (臨床化學(xué)）；第23卷增刊175a_l至 175a-10(1994)
[0014] 非專利文獻 2 〖Advertising Material for Heterophilic Blocking Reagent HBR(NAGASE&CO.，LTD.，1993)
[0015] 非專利文獻 3 :CLIN. CHEM.(臨床化學(xué)）45/7, 942-956(1999)
[0016] 發(fā)明概述
[0017] 技術(shù)問題
[0018] 本發(fā)明涉及一種抑制方法和非特異性反應(yīng)抑制劑以及使用所述抑制劑的免疫測 定，更具體地，本發(fā)明要解決的問題是提供用于抑制非特異性反應(yīng)的方法和試劑，其特征在 于使用固定在不溶性載體上的抗體片段的免疫測定。
[0019] 問題的解決方案
[0020] 作為解決該問題的深入研究的結(jié)果，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在使用其上固定有抗體 片段的不溶性載體的測量方法中，可以在使樣品與其上固定有抗體片段的不溶性載體接 觸之前或同時使表現(xiàn)出不能通過常規(guī)對策使用全長、非片段化的抗體（以下還稱為完整抗 體）抑制非特異性反應(yīng)的樣品與變性的抗體片段接觸而抑制非特異性反應(yīng)，由此完成了本 發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的是涉及使用變性的抗體片段抑制非特異性反應(yīng)的方法。
[0021] 本發(fā)明人已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，即使變性的抗體片段和固定在不溶性載體上的抗 體片段不是來源于相同的全長抗體，只要所述抗體片段是針對分析物抗原的抗體，就發(fā)揮 本發(fā)明目的的非特異性反應(yīng)抑制作用。因此，本發(fā)明的另一個目的是涉及包含變性的抗體 片段的非特異性反應(yīng)抑制劑，并且另一個目的是涉及使用所述抑制劑的免疫測定和免疫測 定劑。
[0022] 具體地，本發(fā)明具有下述方案。
[0023] [1] -種通過使用包含針對分析物抗原的抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段（以下"包含針 對分析物抗原的抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段"簡稱為"抗體片段"）的抗原-抗體反應(yīng)檢測樣品 中的所述分析物抗原的方法，所述方法包括以下步驟：
[0024] a)使樣品與變性的抗體片段接觸；
[0025] b)與步驟a)同時或在步驟a)之后，使所述樣品與固定在不溶性載體上的抗體片 段接觸。
[0026] [2] [1]的檢測方法，其中所述變性的抗體片段識別與所述固定在不溶性載體上的 抗體片段所識別的表位相同或不同的表位。
[0027] [3] [1]或[2]的檢測方法，其中b)中所述的固定在不溶性載體上的抗體片段包含 至少兩種抗體片段，所述至少兩種抗體片段具有彼此不同的抗原結(jié)合區(qū)，并且獨立地固定 在不溶性載體上。
[0028] [4] -種在通過使用抗體片段的抗原-抗體反應(yīng)檢測樣品中的分析物抗原的方法 中抑制非特異性反應(yīng)的方法，所述方法包括以下步驟：
[0029] a)使樣品與變性的抗體片段接觸；
[0030] b)與步驟a)同時或在步驟a)之后，使所述樣品與固定在不溶性載體上的抗體片 段接觸。
[0031] [5] [4]的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中所述變性的抗體片段識別與所述固定在 不溶性載體上的抗體片段識別的表位相同或不同的表位。
[0032] [6] [4]或[5]的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中b)中所述的固定在不溶性載體上 的抗體片段包含至少兩種抗體片段，所述至少兩種抗體片段具有彼此不同的抗原結(jié)合區(qū)， 并且獨立地固定在不溶性載體上。
[0033] [7] [4]至[6]中任一項的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中非特異性反應(yīng)由用于測 量的抗體片段引起。
[0034] [8] [4]至[7]中任一項的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中非特異性反應(yīng)是用包含 全長抗體的用于抑制非特異性反應(yīng)的試劑不能抑制的反應(yīng)。
[0035] [9] [8]的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中所述全長抗體抗體是全長抗人IgG抗體 或抗人IgM抗體或抗人IgA抗體。
[0036] [10] [9]的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中所述全長抗體是由雜交瘤FERM BP-11134產(chǎn)生的單克隆抗體。
[0037] [11] [9]的抑制非特異性反應(yīng)的方法，其中包含全長抗體的用于抑制非特異性反 應(yīng)的試劑是 HBR(SCANTIBODIES)。
[0038] [12] -種用于通過抗原-抗體反應(yīng)檢測樣品中的分析物抗原的試劑，所述試劑包 含：
[0039] 1)不溶性載體，其上固定有針對所述分析物抗原的抗體片段；和
[0040] 2)針對所述分析物抗原的變性的抗體片段。
[0041] [13] [12]的試劑，其中所述變性的抗體片段識別與固定在不溶性載體上的抗體片 段所識別的表位相同或不同的表位。
[0042] [14] [12]或[13]的試劑，其中固定在1)不溶性載體上的抗體片段包含至少兩種 抗體片段，所述至少兩種抗體片段具有彼此不同的抗原結(jié)合區(qū)，并且獨立地固定在不溶性 載體上。
[0043] [15] [12]或[13]的試劑，其還包含：3)包含全長抗體的用于抑制非特異性反應(yīng)的 試劑。
[0044] [16] -種在通過使用抗體片段的抗原-抗體反應(yīng)檢測樣品中的分析物抗原的方 法中抑制非特異性反應(yīng)的試劑，所述抑制非特異性反應(yīng)的試劑包含變性的抗體片段作為活 性成分。
[0045] 發(fā)明的有益效果
[0046] 本發(fā)明避免非特異性反應(yīng)的方法能夠允許抑制通過使用完整抗體的常規(guī)方法不 能抑制的非特異性反應(yīng)。
[0047] 由于抑制了通過已知的抑制劑不能避免的非特異性反應(yīng)，因此，包含本發(fā)明的非 特異性反應(yīng)抑制劑的免疫測定法和免疫測定劑能夠給