一種監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中hook效應(yīng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于一種監(jiān)測方法，具體地涉及一種監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫 標(biāo)記技術(shù)，將膠體金標(biāo)記的免疫反應(yīng)性物質(zhì)--抗原（或抗體）與樣本中對(duì)應(yīng)的抗體（或 抗原）進(jìn)行反應(yīng)，并在硝酸纖維素膜上進(jìn)行層析，并進(jìn)而與硝酸纖維素膜上包被的另一抗 原（或抗體）結(jié)合而被固定在硝酸纖維素膜上并顯現(xiàn)膠體金顆粒的顏色（T線），以便對(duì)在 該樣本中的指定抗體或抗原進(jìn)行定量分析。
[0003] 有時(shí)在測定含有高濃度分析物的樣品中觀察到?jīng)]有T線顏色發(fā)生或僅發(fā)生輕微 的T線顏色。在高濃度下T線顏色的消失或減少稱作前帶效應(yīng)或"鉤狀效應(yīng)"(Η00Κ效應(yīng)）， 并且與如下事實(shí)相關(guān)：例如在樣品中過量的抗原導(dǎo)致形成小抗體-抗原-復(fù)合物，它們不會(huì) 形成可見的凝集。一般而言，抗原的濃度與抗體的濃度相比越高，則觀察到的信號(hào)越低。當(dāng) 抗原的遞增濃度超過了抗體群識(shí)別和結(jié)合的相對(duì)能力時(shí)，T線灰度會(huì)衰減。這種效應(yīng)是動(dòng) 態(tài)的并且代表了從抗原一抗體凝集物形成到非凝集化形式占優(yōu)勢的較高可能性之間反應(yīng) 平衡的改變。
[0004] 當(dāng)出現(xiàn)HOOK效應(yīng)時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，造成誤診等嚴(yán) 重后果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的方法，能夠快速有 效判斷HOOK效應(yīng)的發(fā)生并及時(shí)更正檢測結(jié)果。
[0006] 本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的方法，使用免疫結(jié)果判讀記錄儀在t5。和 t時(shí)間時(shí)，測定T線灰度值A(chǔ)5。和A，t表示抗原與抗體完全反應(yīng)的時(shí)間；t 5。表示抗原與抗體 反應(yīng)完成50%時(shí)的時(shí)間，當(dāng)A/A5Q< 1. 05時(shí)，判為存在HOOK效應(yīng)，提示需要適當(dāng)稀釋樣本 后再測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；當(dāng)A/A5(]> 1. 05時(shí)，即未出現(xiàn)倒鉤現(xiàn)象。
[0008] 其中免疫結(jié)果判讀記錄儀為（天津中新科炬生物制藥有限公司生產(chǎn)）NS7001或 NS3001〇
[0009] 所述t5。和t是通過如下方法確定的：取一標(biāo)準(zhǔn)待測樣本，使用免疫結(jié)果判讀記錄 儀連續(xù)監(jiān)測該待測樣本的免疫膠體金層析反應(yīng)T線灰度隨時(shí)間變化，待T線灰度不再變化 即確定出完全反應(yīng)的時(shí)間t，T線灰度為完全反應(yīng)的50%的時(shí)間為t 5。。
[0010] 如果是低濃度樣本，T線顏色深度會(huì)緩慢增加，不會(huì)在短時(shí)間內(nèi)達(dá)峰值，t時(shí)T線 的灰度值與t50的灰度值之比大于> 1. 05 ;如果是高濃度樣本但未超過檢測的濃度范圍， 即未出現(xiàn)倒鉤現(xiàn)象，T線t時(shí)的灰度值與t50的灰度值之比也會(huì)大于1. 05。
[0011] 本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：采用本發(fā)明的檢測方法可以快速判斷所有免疫 膠體金實(shí)驗(yàn)中是否出現(xiàn)HOOK效應(yīng)，及時(shí)更正檢測結(jié)果，對(duì)于出現(xiàn)HOOK效應(yīng)的樣本進(jìn)行稀 釋，重新測定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)為最終檢測結(jié)果，如判斷不存在HOOK效應(yīng)，直接報(bào)告檢測 結(jié)果無需再講樣本稀釋重測，可大大提高免疫膠體金檢測效率和準(zhǔn)確率。
【附圖說明】
[0012] 圖1為標(biāo)準(zhǔn)樣本HCG免疫膠體金層析反應(yīng)的T線灰度與時(shí)間的關(guān)系圖；
[0013] 圖2為待測樣本HCG免疫膠體金層析反應(yīng)的T線灰度值與時(shí)間的關(guān)系圖；
[0014] 圖3為標(biāo)準(zhǔn)樣本鐵蛋白免疫膠體金層析反應(yīng)的T線灰度與時(shí)間的關(guān)系圖；
[0015] 圖4為待測樣本鐵蛋白免疫膠體金層析反應(yīng)的T線灰度值與時(shí)間的關(guān)系圖；
【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施例1 :
[0017] 監(jiān)測膠體金免疫層析法測定尿液絨毛膜促性腺激素（HCG)的HOOK效應(yīng)的方法
[0018] (l)t 和 t50 的確定
[0019] 取濃度為5000mIU/mL的HCG標(biāo)準(zhǔn)樣本，采用免疫結(jié)果判讀記錄儀連續(xù)監(jiān)測HCG的 免疫膠體金層析反應(yīng)的T線灰度與時(shí)間的關(guān)系見圖1所示，T線灰度恒定開始值即確定出完 全反應(yīng)時(shí)間t，從圖1可以判斷為10分鐘，而T線為完全反應(yīng)時(shí)濃度的50%的時(shí)間即t50， 從圖1可判斷為2分鐘。
[0020] (2) HOOK效應(yīng)的監(jiān)測方法
[0021] 由此設(shè)置，t為10分鐘，t5。為2分鐘。在2分鐘和10分鐘時(shí)分別測定T線灰度 值，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如圖2所示，HOOK效應(yīng)的判斷結(jié)果見表1。對(duì)于樣本4用水稀釋5倍后重新測 定，結(jié)果乘以5作為最終檢測結(jié)果。
[0022] 表1膠體金免疫層析法測定尿液HCG的HOOK效應(yīng)判斷結(jié)果
[0023]
[0024] 實(shí)施例2 :
[0025] 監(jiān)測膠體金免疫層析法測定血液中鐵蛋白的HOOK效應(yīng)的方法
[0026] (價(jià)和心。的確定
[0027] 取濃度為100ng/ml的鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣本，采用免疫結(jié)果判讀記錄儀連續(xù)監(jiān)測鐵蛋 白的免疫膠體金層析反應(yīng)的T線灰度與時(shí)間的關(guān)系見圖3所示，反應(yīng)產(chǎn)物恒定開始值即 確定出完全反應(yīng)時(shí)間t，從圖3可以判斷為10分鐘，而反應(yīng)產(chǎn)物濃度為完全反應(yīng)時(shí)濃度的 50%的時(shí)間即t5。，從圖3可判斷為3分鐘。
[0028] (2) HOOK效應(yīng)的監(jiān)測方法
[0029] 由此設(shè)置，t為10分鐘，t5。為3分鐘。在10分鐘和3分鐘時(shí)分別測定T線灰度 值，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如圖4所示，HOOK效應(yīng)的判斷結(jié)果見表2。對(duì)于樣本4用水稀釋5倍后重新測 定，結(jié)果乘以5作為最終檢測結(jié)果。
[0030] 表2膠體金免疫層析法測定血液中鐵蛋白的HOOK效應(yīng)判斷結(jié)果
[0031]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的方法，使用免疫結(jié)果判讀記錄儀在15。和t 時(shí)間時(shí)，測定T線灰度值A(chǔ) 5。和A， 當(dāng)A/A5(]< 1. 05時(shí)，判為存在HOOK效應(yīng)，提示需要稀釋樣本后再測，結(jié)果乘以稀釋倍 數(shù)； 當(dāng)A/A5Q> 1. 05時(shí)，即未出現(xiàn)倒鉤現(xiàn)象； t-表示抗原與抗體完全反應(yīng)的時(shí)間； t5。-表示抗原與抗體反應(yīng)完成50%的時(shí)間。2. 如權(quán)利要求1所述的監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的方法，所述免疫結(jié)果判讀記 錄儀為 NS7001 或 NS3001。3. 如權(quán)利要求1所述的監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的方法，所述15。和t是通過 如下方法確定的：取一標(biāo)準(zhǔn)待測樣本，使用免疫結(jié)果判讀記錄儀連續(xù)監(jiān)測該待測樣本的免 疫膠體金層析反應(yīng)T線灰度隨時(shí)間變化，待T線灰度不再變化即確定出完全反應(yīng)的時(shí)間t， T線灰度為完全反應(yīng)的50%的時(shí)間為t 5。。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種監(jiān)測免疫膠體金試驗(yàn)中HOOK效應(yīng)的方法，使用免疫結(jié)果判讀記錄儀在t50和t時(shí)間時(shí)，測定T線灰度值A(chǔ)50和A，當(dāng)A/A50＜1.05時(shí)，判為存在HOOK效應(yīng)，提示需要稀釋樣本后再測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；當(dāng)A/A50＞1.05時(shí)，即未出現(xiàn)倒鉤現(xiàn)象；采用本發(fā)明的監(jiān)測方法可以快速判斷所有免疫膠體金實(shí)驗(yàn)中是否出現(xiàn)HOOK效應(yīng)，及時(shí)更正檢測結(jié)果，對(duì)于出現(xiàn)HOOK效應(yīng)的樣本進(jìn)行稀釋，重新測定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)為最終檢測結(jié)果，如判斷不存在HOOK效應(yīng)，直接報(bào)告檢測結(jié)果無需再講樣本稀釋重測，可大大提高免疫膠體金檢測效率和準(zhǔn)確率。
【IPC分類】G01N33/76, G01N33/558, G01N33/68
【公開號(hào)】CN105044332
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510303846
【發(fā)明人】葉濤
【申請(qǐng)人】天津起跑線生物信息技術(shù)有限公司
【公開日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年6月4日