含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑的高效微流電色譜分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑的高效微流電色譜分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物生長調(diào)節(jié)劑，是用于調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的人工合成化學(xué)物質(zhì)，主要分為植物生長促進(jìn)劑、植物生長延緩劑、植物生長抑制劑，其中2，4a, 7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉-3-烯-1，10- 二羧酸-1，4a-內(nèi)酯屬于赤霉素類生長激素、2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基-2，4-戌二烯酸是一種具有倍半萜結(jié)構(gòu)的植物激素，2，4-二氯苯氧乙酸屬于生長素類似物，在生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛。
[0003]關(guān)于羧酸類植物生長調(diào)節(jié)劑的檢測(cè)，主要為高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，在這些色譜分離方法中，主要基于羧酸類植物生長調(diào)節(jié)劑的極性不同而進(jìn)行的反相色譜分離，采用的流動(dòng)相主要為乙腈和甲酸銨、磷酸鹽或硫酸鹽等強(qiáng)電解質(zhì)進(jìn)行分析，反相色譜中所采用的C18鍵合硅膠表面的高分子聚合物疏水性較強(qiáng)，單一的反相色譜分離作用對(duì)于極性或離子型的羧酸類植物激素保留作用較弱。
[0004]毛細(xì)管電色譜作為一種新興的微分離技術(shù)，兼?zhèn)淞烁邏弘妶?chǎng)驅(qū)動(dòng)和微流液相分配的雙重作用，溶質(zhì)洗脫迀移不僅存在固定相和流動(dòng)相間的分配作用，而且受到電滲流的驅(qū)動(dòng)作用；所采用的毛細(xì)管分離柱固定相結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，通過表面修飾或改變功能填料，作用模式豐富。目前，毛細(xì)管電色譜技術(shù)對(duì)植物生長調(diào)節(jié)劑的分離仍主要停留于傳統(tǒng)毛細(xì)管填料柱表層有機(jī)高聚物的反相色譜分離作用和電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)迀移作用，普通的反相色譜作用對(duì)于極性或離子型的羧酸類植物激素保留較弱，有待改善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑的高效微流電色譜分離方法，簡便地實(shí)現(xiàn)了電滲流、電泳和極性色譜三者的綜合作用，實(shí)現(xiàn)了極性羧酸類植物生長調(diào)節(jié)劑的毛細(xì)管電泳分離及親核基吸附色譜分離。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑的高效微流電色譜分離方法:基于反相毛細(xì)管柱，含親核基的化合物為流動(dòng)相電解質(zhì)，動(dòng)態(tài)修飾反相柱填料，形成親核基極性分離柱，對(duì)柱施加高壓電場(chǎng)和微流液相分析模式，實(shí)現(xiàn)高效分離含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑。
[0007]所述的反相毛細(xì)管柱是十八烷基鍵合硅膠毛細(xì)管填充柱。
[0008]所述的親核基是氯離子，或溴離子，或亞硫酸氫根離子。
[0009]所述的含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑為2，4a，7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉-3-烯-1, 10- 二羧酸-1, 4a-內(nèi)酯、2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基_2，4-戌二烯酸和2，4-二氯苯氧乙酸。
[0010]具體分析條件包括:流動(dòng)相為體積比70:30的乙腈與含親核基的緩沖溶液兩者混合液，分離電壓+8.0kV，液相泵壓力1000 口8；[，泵流速為0.05 mL/min。
[0011]含親核基的緩沖溶液的pH值為5.00，親核基的濃度為3.0 mmol/L。
[0012]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于:
針對(duì)常規(guī)反相色譜分離中分離柱作用較為單一、對(duì)極性物質(zhì)保留能力不足導(dǎo)致分離柱效較差的問題，本發(fā)明基于毛細(xì)管電色譜系統(tǒng)，以普通的十八烷基鍵合硅膠反相色譜柱為分離柱，應(yīng)用帶有負(fù)電荷或孤對(duì)電子、能形成氫鍵或鹵鍵的親核試劑為流動(dòng)相電解質(zhì)，與硅膠骨架的硅醇負(fù)離子和十八烷基長碳鏈發(fā)生吸附作用，在填充柱微粒表面和聚合層缺陷作用位點(diǎn)吸附累積富電子的親核基，在柱動(dòng)態(tài)修飾改性反相柱填料，動(dòng)態(tài)形成表面吸附分布強(qiáng)極性親核基的極性分離柱，實(shí)現(xiàn)了柱填料的改性和作用機(jī)制的改變；結(jié)合在柱施加電荷高壓電場(chǎng)和液相泵輔助壓力，簡便地實(shí)現(xiàn)了電滲流、電泳和極性色譜三者的綜合作用，實(shí)現(xiàn)了極性羧酸類植物生長調(diào)節(jié)劑的毛細(xì)管電泳分離及親核基吸附色譜分離的混合作用。
[0013]與常規(guī)電色譜分離相比，常規(guī)分析中應(yīng)用甲酸銨、碳酸鹽或硫酸鹽等強(qiáng)電解質(zhì)進(jìn)行分析，反相柱表面難以有效形成親核基，整體疏水性仍然較強(qiáng)，只能提供反相色分離作用，對(duì)于極性或離子型的羧酸類植物激素而言保留作用較弱。本發(fā)明方法以含親核基的化合物為電解質(zhì)，通過簡易的動(dòng)態(tài)改性，在柱修飾改性普通的反相色譜柱，提高分離填料表面的極性和離子電荷強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)了極性羧酸型植物生長調(diào)節(jié)劑的親核基色譜吸附分離和毛細(xì)管電泳分離等關(guān)鍵作用，對(duì)于電荷型的2，4-二氯苯氧乙酸等物質(zhì)的保留作用大幅增強(qiáng)，有效地解決了不同電荷分布的極性羧酸型植物生長調(diào)節(jié)劑的高效分離要求。
【附圖說明】
[0014]圖1是以氯化鈉溶液和水為流動(dòng)相下植物生長調(diào)節(jié)劑分離譜圖。
[0015]圖2是分別以甲酸銨、硫酸氫鈉和亞硫酸氫鈉為流動(dòng)相電解質(zhì)時(shí)植物生長調(diào)節(jié)劑分離譜圖。
[0016]圖3是分別以硫酸鈉、碳酸氫鈉和氯化鈉為流動(dòng)相電解質(zhì)時(shí)植物生長調(diào)節(jié)劑分離譜圖。
[0017]圖4是分別以甲酸銨、氯化鈉和亞硫酸氫鈉為流動(dòng)相電解質(zhì)時(shí)植物生長調(diào)節(jié)劑分離譜圖。
[0018]圖中l(wèi)、2，4a，7_三羥基-1-甲基_8_亞甲基赤霉_3_烯-1，10-二羧酸_1，4a_內(nèi)酯；2、2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基_2，4-戌二稀酸；3、2，4- 二氯苯氧乙酸。
【具體實(shí)施方式】
[0019]為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明所述的技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0020]實(shí)施例1:
基于毛細(xì)管電色譜系統(tǒng)，以十八烷基鍵合硅膠毛細(xì)管填充柱進(jìn)行分離，其方法具體為:在毛細(xì)管柱末端施加負(fù)電荷高壓電場(chǎng)和進(jìn)樣端上施加液相泵輔助壓力，進(jìn)樣體積20 uL,以乙腈:氯化鈉溶液=70:30 (v/v)為流動(dòng)相，氯化鈉濃度為3.0 mmol/L，分離電壓+8.0kV,泵輔助壓力1000 psi，流速0.05 mL/min，植物生長調(diào)節(jié)劑洗脫峰依次為:2，4a, 7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉-3-烯-1，10-二羧酸-1，4a-內(nèi)酯(峰I) ； 2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基-2，4-戌二烯酸(峰2); 2，4-二氯苯氧乙酸(峰3)。
[0021]實(shí)施例2:
基于毛細(xì)管電色譜系統(tǒng)，以十八烷基鍵合硅膠毛細(xì)管填充柱進(jìn)行分離，其方法具體為:在毛細(xì)管柱末端施加負(fù)電荷高壓電場(chǎng)和進(jìn)樣端上施加液相泵輔助壓力，進(jìn)樣體積20 uL,分別以乙腈:緩沖溶液=70:30 (v/v)為流動(dòng)相，緩沖溶液中的電解質(zhì)分別為甲酸銨、硫酸氫鈉，亞硫酸氫鈉，濃度均為3.0 mmol/L，分離電壓+8.0kV，泵輔助壓力1000 口8；[，流速0.05mL/min,對(duì)植物生長調(diào)節(jié)劑進(jìn)行毛細(xì)管電色譜分離，以亞硫酸氫鈉為流動(dòng)相的電解質(zhì)時(shí)，洗脫峰依次為:2，4a, 7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉-3-烯-1，10- 二羧酸-1，4a-內(nèi)酯(峰I)； 2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基-2，4-戌二烯酸(峰2) ； 2，4-二氯苯氧乙酸(峰3)。
[0022]實(shí)施例3:
基于毛細(xì)管電色譜系統(tǒng)，以十八烷基鍵合硅膠毛細(xì)管填充柱進(jìn)行分離，其方法具體為:在毛細(xì)管柱末端施加負(fù)電荷高壓電場(chǎng)和進(jìn)樣端上施加液相泵輔助壓力，進(jìn)樣體積20 uL,分別以乙腈:緩沖溶液=70:30 (v/v)為流動(dòng)相，緩沖溶液中的電解質(zhì)分別為硫酸鈉、碳酸氫鈉，氯化鈉，濃度均為3.0 mmol/L，分離電壓+8.0kV，泵輔助壓力1000 ?81，流速0.05 mL/min，對(duì)植物生長調(diào)節(jié)劑進(jìn)行毛細(xì)管電色譜分離，以氯化鈉為流動(dòng)相的電解質(zhì)時(shí)，洗脫峰依次為:2，4a，7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉_3_烯-1，10-二羧酸-1，4a_內(nèi)酯(峰I);2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基_2，4-戌二烯酸(峰2); 2，4-二氯苯氧乙酸(峰3)。
[0023]實(shí)施例4:
基于毛細(xì)管電色譜系統(tǒng)，以十八烷基鍵合硅膠毛細(xì)管填充柱進(jìn)行分離，其方法具體為:在毛細(xì)管柱末端施加負(fù)電荷高壓電場(chǎng)和進(jìn)樣端上施加液相泵輔助壓力，進(jìn)樣體積20μ L，分別以乙腈:緩沖溶液=70:30 (v/v)為流動(dòng)相，緩沖溶液中的電解質(zhì)分別為甲酸銨、溴化鉀中的一種，濃度均為3.0 mmol/L，分離電壓+8.0kV，泵輔助壓力1000 psi，流速
0.05 mL/min,對(duì)植物生長調(diào)節(jié)劑進(jìn)行分離，以溴化鉀為流動(dòng)相的電解質(zhì)時(shí)，洗脫峰依次為:2，4a，7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉-3-烯-1，10-二羧酸-1，4a_內(nèi)酯(峰I); 2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基-2，4-戌二烯酸(峰2); 2，4-二氯苯氧乙酸(峰3)。
[0024]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑的高效微流電色譜分離方法，其特征在于:基于反相毛細(xì)管柱，以含親核基的化合物為流動(dòng)相電解質(zhì)，動(dòng)態(tài)修飾反相柱填料，形成親核基極性分離柱，對(duì)柱施加高壓電場(chǎng)和微流液相分析模式，實(shí)現(xiàn)高效分離含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述的反相毛細(xì)管柱是十八烷基鍵合硅膠毛細(xì)管填充柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述的親核基是氯離子，或溴離子，或亞硫酸氫根離子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述的含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑為2，4a, 7-三羥基-1-甲基-8-亞甲基赤霉_3_烯-1，10- 二羧酸-1, 4a-內(nèi)酯、2-順式，4-反式-5-(1-羥基-4-氧代-2，6，6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基-2，4-戌二烯酸和2,4- 二氯苯氧乙酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:具體分析條件包括:流動(dòng)相為體積比70:30的乙腈與含親核基的緩沖溶液的混合液，分離電壓+8.0kV，液相泵壓力1000 psi，泵流速為 0.05 mL/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于:含親核基的緩沖溶液的pH值為5.00，親核基的濃度為3.0 mmol/Lo
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑的高效微流電色譜分離方法，基于反相毛細(xì)管柱，含親核基的化合物為流動(dòng)相電解質(zhì)，動(dòng)態(tài)修飾反相柱填料，形成親核基極性分離柱，對(duì)柱施加高壓電場(chǎng)和微流液相分析模式，實(shí)現(xiàn)高效分離含羧基植物生長調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明簡便地實(shí)現(xiàn)了電滲流、電泳和極性色譜三者的綜合作用，實(shí)現(xiàn)了極性羧酸類植物生長調(diào)節(jié)劑的毛細(xì)管電泳分離及親核基吸附色譜分離。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104634893
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510053674
【發(fā)明人】林旭聰, 王緒培, 謝增鴻
【申請(qǐng)人】福州大學(xué)
【公開日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2015年2月3日