一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，包括底板，樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，硝酸纖維素膜位于底板的中段，金標墊覆蓋在硝酸纖維素膜的端部及對應的底板上，樣品墊由底板的一端向中段延伸，其端部覆蓋在金標墊的端部，吸水墊由底板的另一端向中段延伸，其端部覆蓋在硝酸纖維素膜的另一端部；金標墊端部與吸水墊端部之間外露的硝酸纖維素膜上依次設(shè)有與底板端面平行的檢測線和質(zhì)控線；所述金標墊是在玻璃纖維素膜材料上設(shè)有膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體涂層，臨近金標墊的檢測線上設(shè)有間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白偶聯(lián)物涂層，臨近吸水墊的質(zhì)控線上設(shè)有羊抗鼠多克隆抗體涂層。
【專利說明】一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于膠體金免疫檢測領(lǐng)域，特別是一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，用于水體及尿液中間苯氧基苯甲酸的快速篩選檢測。

【背景技術(shù)】
[0002]間苯氧基苯甲酸是多種常用擬除蟲菊酯農(nóng)藥的共性代謝產(chǎn)物，常被用于人體對擬除蟲菊酯農(nóng)藥混合暴露評估的生物標志物使用，由于間苯氧基苯甲酸比其母體化合物擬除蟲菊酯農(nóng)藥具有更好的穩(wěn)定性和遷移性，故實踐中可以通過檢測水體等環(huán)境樣品中的間苯氧基苯甲酸來反應擬除蟲菊酯農(nóng)藥的殘留狀況。
[0003]目前公開報道的間苯氧基苯甲酸檢測方法，主要包括色譜方法、ELISA檢測和其他生物分析方法。這些方法雖具有較高的檢測靈敏度和選擇性，但是均為實驗室方法，必須借助復雜的儀器設(shè)備進行讀數(shù)和專業(yè)的操作人員。并不適合野外樣品的現(xiàn)場快速抽檢或家庭自測使用。
[0004]免疫層析是出現(xiàn)于80年代初期的一種免疫分析方式，其以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動，并同時使樣品中的待測物與層析材料上的受體發(fā)生高特異、高親和性的免疫反應，層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測帶)，通過酶反應或直接運用可目測的標記物(如膠體金)而得到直觀的實驗現(xiàn)象，而游離標記物則越過檢測帶，達到與結(jié)合標記物自動分離之目的。目前，將免疫層析技術(shù)用于間苯氧基苯甲酸檢測未見報道。
實用新型內(nèi)容
[0005]針對上述問題，提供一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，適合野外樣品快速抽檢或家庭自測使用，檢測結(jié)果溶液顯現(xiàn)，本實用新型的目的是這樣實現(xiàn)的:
[0006]一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，包括底板，樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，其特征在于，硝酸纖維素膜位于底板的中段，金標墊覆蓋在硝酸纖維素膜的端部及對應的底板上，樣品墊由底板的一端向中段延伸，其端部覆蓋在金標墊的端部，吸水墊由底板的另一端向中段延伸，其端部覆蓋在硝酸纖維素膜的另一端部；金標墊端部與吸水墊端部之間外露的硝酸纖維素膜上依次設(shè)有與底板端面平行的檢測線和質(zhì)控線；所述金標墊是在玻璃纖維素膜材料上設(shè)有膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體涂層，臨近金標墊的檢測線上設(shè)有間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白偶聯(lián)物涂層，臨近吸水墊的質(zhì)控線上設(shè)有羊抗鼠多克隆抗體涂層。
[0007]本實用新型中，所述樣品墊為親水材料,其長1.5 cm,寬0.3 cm ;所述金標墊的長
0.8cm,寬0.3cm ;所述硝酸纖維素膜長2.5 cm寬0.3 cm ;所述吸水墊的長1.5cm,寬0.3cm,樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜、吸水墊的各交疊區(qū)域的長度為0.1cm0
[0008]本實用新型中，所述檢測線與質(zhì)控線間的距離為0.6cm。
[0009]本實用新型中，當水體或尿液等樣本中不含間苯氧基苯甲酸，或含有小于試紙最低檢測限的間苯氧基苯甲酸時，樣品中的水分將溶解金標墊上的膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體層，膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體由于毛細作用向上遷移到達檢測線后，與檢測線上包被的間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白偶聯(lián)物結(jié)合，金標抗體在檢測線上不斷沉積，逐漸形成肉眼可見的紅線，過量的膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體沿硝酸纖維素膜繼續(xù)遷移到質(zhì)控線，與包被在質(zhì)控線上的羊抗鼠多克隆抗體結(jié)合，也形成肉眼可見的紅線。此時檢測線的顏色將等于或深于質(zhì)控線，檢測結(jié)果為陰性。
[0010]當水體或尿液等樣本中含有大于等于試紙最低檢測限的間苯氧基苯甲酸時，樣品中的間苯氧基苯甲酸將與膠體金標記的抗體特異性結(jié)合，從而抑制金標抗體與檢測線上的間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白的偶聯(lián)物結(jié)合，樣品中的間苯氧基苯甲酸的含量越高，檢測線的顏色越淺或完全抑制檢測線出現(xiàn)，過量的金標抗體將繼續(xù)遷移到質(zhì)控線，形成肉眼可見的紅線。此時檢測線應為無色或淺于質(zhì)控線，檢測結(jié)果為陽性。
[0011]當質(zhì)控線沒有紅線出現(xiàn)時，無論檢測線是否出現(xiàn)紅線，均判斷為檢測結(jié)果無效。
[0012]本實用新型提供的間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，具有快速靈敏、簡單便攜，可用肉眼直接觀察檢測結(jié)果，無需任何儀器讀數(shù)和專業(yè)化操作等優(yōu)點，適用于水體及尿液中間苯氧基苯甲酸的現(xiàn)場篩查檢測。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1為間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖中，1、樣品墊；2、金標墊；3、硝酸纖維素膜；4、吸水墊；5、檢測線；6、質(zhì)控線；7、底板。

【具體實施方式】
[0015]為了能夠更清楚了解本實用新型的技術(shù)方案，以下結(jié)合附圖與【具體實施方式】對本實用新型作進一步的詳細說明。
[0016]實施例1制備間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙
[0017]間苯氧基苯甲酸、卵清蛋白、羊抗鼠多克隆抗體:均為美國Sigma公司商品化試劑。
[0018]間苯氧基苯甲酸單克隆抗體以及間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白偶聯(lián)物的具體制備過程已在由文孟棠，劉媛，聞帥，張霄，王恒，劉賢金撰寫的名稱為“抗擬出蟲菊酯農(nóng)藥廣譜單克隆抗體的研制及鑒定”的論文在分析化學，2014，42 (9):1245 一 1252上公開發(fā)表。
[0019]膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體按照實驗室按照常規(guī)方法制備。
[0020]由圖1可見，本實用新型包括底板7，樣品墊1、金標墊2、硝酸纖維素膜3和吸水墊4，硝酸纖維素膜3位于底板7的中段，金標墊覆蓋在硝酸纖維素膜3的端部及對應的底板7上，樣品墊I由底板7的一端向中段延伸，其端部覆蓋在金標墊2的端部，吸水墊4由底板7的另一端向中段延伸，其端部覆蓋在硝酸纖維素膜3的另一端部；金標墊2端部與吸水墊4端部之間外露的硝酸纖維素膜3上依次設(shè)有與底板端面平行的檢測線5和質(zhì)控線6。所述金標墊2是在玻璃纖維素膜材料上設(shè)有膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體涂層，臨近金標墊2的檢測線5上設(shè)有間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白偶聯(lián)物涂層，臨近吸水墊4的質(zhì)控線6上設(shè)有羊抗鼠多克隆抗體涂層。
[0021]本實施例中，底板7為不吸水介質(zhì)制成的一整塊固態(tài)平板，可以是PVC膠板，吸水墊4和樣品墊I均為親水材料。
[0022]本實施例中，樣品墊I長1.5 cm，寬0.3 cm。金標墊2長0.8 cm，寬0.3 cm。硝酸纖維素膜3長2.5 cm,寬0.3 cm。吸水墊4長1.5cm,寬0.3 cm。相鄰各墊的交疊長度為0.1 cm。檢測線5和質(zhì)控線6分別與硝酸纖維素膜3端部的距離為1.0 cm和1.6 cm,檢測線5和質(zhì)控線6之間的距離為0.6 cm。
[0023]實施例2
[0024]用含有10%甲醇的PBS溶液配制濃度分別為8、4、2、1、0.5、0.25μ8/ιΛ濃度的間苯氧基苯甲酸溶液，同時設(shè)立含有10%甲醇的PBS溶液作為對照組，向96孔板的微孔中隨機加入不同濃度的間苯氧基苯甲酸溶液和含10%甲醇的PBS溶液，200 μ L/孔，將實施例1制備的間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙的吸水墊端插入微孔，水樣不得接觸金標墊，室溫靜置10分鐘。觀察檢測線和質(zhì)控線顯色結(jié)果。
[0025]結(jié)果判斷標準:
[0026]當質(zhì)控線6和檢測線5均呈現(xiàn)紅線，以及檢測線5顏色等于或深于質(zhì)控線6顏色時，均表示樣品不含間苯氧基苯甲酸，或含有濃度小于膠體金試紙最低檢測限的間苯氧基苯甲酸，判斷結(jié)果為陰性。
[0027]當質(zhì)控線6呈現(xiàn)紅線，以及檢測線5無色或顏色比質(zhì)控線淺時，均表示樣品中含有大于或等于膠體金試紙最低檢測限的間苯氧基苯甲酸，判斷結(jié)果為陽性。
[0028]當質(zhì)控線6無色時，無論檢測線5有無紅線出現(xiàn)，均判斷結(jié)果為無效，說明試紙失效，需要更換試紙重新測試。
[0029]在本實施例中，含有10%甲醇的PBS溶液配制濃度分別為8、4、2、1、0.5μ g/mL濃度的間苯氧基苯甲酸溶液樣品的檢查結(jié)果均為陽性，含有10%甲醇的PBS溶液配制濃度分別為0.25 μ g/mL濃度的間苯氧基苯甲酸溶液樣品和含有10%甲醇的PBS溶液配制濃度對照組樣品的檢查結(jié)果均為陰性。
[0030]以上所述，僅是本實用新型的較佳實施例，并非對本實用新型作任何形式上的限制，在實際應用過程中，可以根據(jù)具體需要，對試紙中各墊的長、寬以及交疊長度等具體數(shù)值作出修改、變化，這些變化均落在本實用新型的保護范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，包括底板，樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，其特征在于，硝酸纖維素膜位于底板的中段，金標墊覆蓋在硝酸纖維素膜的端部及對應的底板上，樣品墊由底板的一端向中段延伸，其端部覆蓋在金標墊的端部，吸水墊由底板的另一端向中段延伸，其端部覆蓋在硝酸纖維素膜的另一端部；金標墊端部與吸水墊端部之間外露的硝酸纖維素膜上依次設(shè)有與底板端面平行的檢測線和質(zhì)控線；所述金標墊是在玻璃纖維素膜材料上設(shè)有膠體金標記的間苯氧基苯甲酸單克隆抗體涂層，臨近金標墊的檢測線上設(shè)有間苯氧基苯甲酸與卵清蛋白偶聯(lián)物涂層，臨近吸水墊的質(zhì)控線上設(shè)有羊抗鼠多克隆抗體涂層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，其特征在于，所述樣品墊為親水材料，其長1.5 Cm,寬0.3 Cm ;所述金標墊的長0.8cm,寬0.3cm ;所述硝酸纖維素膜長2.5 cm寬0.3 cm ;所述吸水墊的長1.5cm,寬0.3cm,樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜、吸水墊的各交疊區(qū)域的長度為0.1cm0
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述間苯氧基苯甲酸免疫膠體金檢測試紙，其特征在于，所述檢測線與質(zhì)控線間的距離為0.6cm。
【文檔編號】G01N33/558GK204228718SQ201420700215
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月20日
【發(fā)明者】劉媛, 胡靜, 林曼曼, 文孟棠, 劉賢金 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學院