一種用于檢測肉品中藥物殘留的方法及其試劑盒的制作方法
【專利摘要】本申請?zhí)峁┮环N用于檢測肉品中藥物殘留的試劑盒，其包括混合型陽離子交換固相萃取柱，所述金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物的萃取液，第一淋洗液、第二淋洗液、洗脫液和復(fù)溶液。本發(fā)明還提供了使用該試劑盒進(jìn)行藥物殘留的檢測方法。本發(fā)明將這三類藥物的前處理方法進(jìn)行了整合，設(shè)計出能同時進(jìn)行金剛烷胺、喹諾酮類、磺胺類藥物殘留檢測的前處理方法試劑盒，本方法試劑盒可以對以上三類藥物同時進(jìn)行前處理。前處理后即可使用常規(guī)技術(shù)進(jìn)行樣品的色譜或質(zhì)譜分析。
【專利說明】—種用于檢測肉品中藥物殘留的方法及其試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物殘留檢測，尤其涉及一種用于檢測肉品中藥物殘留的方法及其試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]目前許多肉品企業(yè)都要進(jìn)行金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物的殘留檢測，樣品的前處理是殘留檢測的重要步驟，也是最消耗時間和試劑的步驟。但是現(xiàn)有肉品中金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物的殘留檢測的前處理只能做單種藥物殘留的前處理，效率低，需要很長的時間進(jìn)行處理，有機(jī)試劑的消耗量大，造成肉品企業(yè)應(yīng)用時成本很高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中的肉品中金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物殘留檢測的前處理只能做單類藥物殘留的前處理的問題，進(jìn)而提出一種對這三類藥物的前處理方法進(jìn)行了整合，設(shè)計出能同時進(jìn)行金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物的殘留檢測的前處理方法的試劑盒。
[0004]本申請?zhí)峁┝艘环N用于檢測肉品中藥物殘留的試劑盒，其包括混合型陽離子交換固相萃取柱，金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物的萃取液，第一淋洗液、第二淋洗液、洗脫液和復(fù)溶液。
[0005]其中，所述試劑盒還包括50mL聚丙烯材質(zhì)可立離心管和IOmL聚丙烯材質(zhì)離心管。
[0006]其中，所述試劑盒還包括過濾器。
[0007]其中，所述過濾器為0.22微米過濾器。
[0008]所述萃取液含有2-5體積％的甲酸、乙酸或三氯乙酸，50-70體積％的甲醇，以及其余體積的水。
[0009]所述第一淋洗液為1-5體積％鹽酸或甲酸的水溶液；
[0010]所述第二淋洗液為色譜級甲醇或乙腈；
[0011]所述洗脫液為50-80體積％氨水的甲醇溶液；
[0012]所述復(fù)溶液為乙酸/甲醇/水溶液，所述乙酸/甲醇/水溶液中的乙酸、甲醇和水體積比1:20:79。
[0013]本發(fā)明還提供了一種用于檢測肉品中藥物殘留的方法，該方法包括以下步驟:
[0014](I)萃取分離
[0015]將樣品放入所述萃取液中振蕩，然后進(jìn)行離心分離，得到上清液；
[0016](2)所述上清液的處理
[0017]所述上清液通過所述混合型陽離子交換固相萃取柱，然后依次使用第一淋洗液和第二淋洗液進(jìn)行淋洗，再使用所述洗脫液進(jìn)行洗脫處理，濃縮后用所述復(fù)溶液進(jìn)行復(fù)溶，得到待檢測的樣品溶液；
[0018](3)檢測分析[0019]所述樣品溶液進(jìn)行色譜分析和/或質(zhì)譜分析。
[0020](4)結(jié)果處理與分析
[0021]其中，所述上清液的具體處理步驟包括:取適量上清液通過混合型陽離子交換固相萃取柱，使用1-5%鹽酸或甲酸的水溶液，色譜級甲醇或乙腈依次淋洗；50-80體積％氨水的甲醇溶液進(jìn)行洗脫處理，收集洗脫液，70°C下旋蒸或氮氣吹干，用所述復(fù)溶液進(jìn)行復(fù)溶。
[0022]其中，所述上清液的處理步驟還包括:使用過濾器對所述樣品溶液進(jìn)行過濾。
[0023]其中，所述樣品溶液進(jìn)行色譜分析的條件為:柱溫:42°C ;樣品室溫度10°C ;進(jìn)樣體積IOyL;流動相A為含0.1% (體積分?jǐn)?shù))甲酸的水，流動相B為乙腈，梯度洗脫；
[0024]所述樣品溶液進(jìn)行質(zhì)譜分析的條件為:離子源:電噴霧電離(ESI+) ；1nSprayvoltage5500V ;溫度 600°C；1n Source Gas60L/h ;氣簾氣 35L/h ;碰撞氣:氮氣，米用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。
[0025]與有關(guān)技術(shù)相比，本發(fā)明實施例的有益效果如下:
[0026](I)本發(fā)明將這三類藥物的前處理方法進(jìn)行了整合，設(shè)計出能同時進(jìn)行金剛烷胺、喹諾酮類、磺胺類藥物殘留檢測的前處理方法試劑盒，本方法試劑盒可以對以上三類藥物同時進(jìn)行前處理；前處理完成后即可使用常規(guī)技術(shù)進(jìn)行樣品的色譜或質(zhì)譜分析。
[0027](2)本方法可以減少3/4有機(jī)試劑的消耗；
[0028](3)本方法采用了優(yōu)化的固相萃取柱填料量和管徑的比值，在保證吸附效果的同時，樣本過柱速度提高I倍；
[0029](4)使殘留檢測的前處理更為方便、高效、標(biāo)準(zhǔn)。
【具體實施方式】
[0030]以下將以實施例的方式對本發(fā)明做出進(jìn)一步的說明。需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互任意組合。
[0031]實施例1 (雞肉中金剛烷胺、氧氟沙星、磺胺嘧啶多殘留檢測)
[0032](I)試劑盒包括:
[0033]50mL離心管為聚丙烯材質(zhì)帶0.5毫升分度刻度的可立離心管，20支；
[0034]IOmL離心管為聚丙烯材質(zhì)帶0.1毫升分度刻度的離心管，20支；
[0035]固相萃取柱:混合型陽離子交換固相萃取柱(填料質(zhì)量為60mg，柱體積為6毫升，無需激活，提取上清液可直接過柱)；
[0036]0.22微米濾器，采用尼龍膜或聚四氟乙烯膜針式濾器；
[0037]提取液:5%體積的甲酸,45%體積的甲醇,其余體積為水，20mL,20支；
[0038]第一淋洗液:3%鹽酸溶液，60mL，I瓶；
[0039]第二淋洗液:色譜級甲醇，60mL，I瓶；
[0040]洗脫液:氨水甲醇溶液，60mL (50/50，V/V)，I瓶；
[0041]復(fù)溶液:乙酸/甲醇/水(1/20/79體積比)溶液，30mL, I瓶；
[0042](2)前處理操作步驟
[0043]取均質(zhì)好的雞肉2克于50mL聚丙烯材質(zhì)離心管中，加入提取液I支，振蕩提取5-10分鐘，3000-4000轉(zhuǎn)離心5_10分鐘獲取上清液；[0044]取上清液IOmL通過混合型陽離子交換固相萃取柱，取2mL第一淋洗液和2mL第二淋洗液依次進(jìn)行淋洗；取3mL洗脫液過柱，并收集洗脫液于IOmL聚丙烯材質(zhì)帶刻度離心管中；70°C下旋蒸或氮氣吹干至小于0.2mL，使用樣品復(fù)溶液復(fù)溶并定容至lmL，得到待檢測的樣品溶液；使用0.22微米濾器過濾樣品溶液，并分裝于進(jìn)樣小瓶中，可供色譜或質(zhì)譜分析。
[0045]實施例2(豬肉中金剛烷胺、諾氟沙星、磺胺甲噁唑多殘留檢測)
[0046](I)試劑盒包括:
[0047]50mL離心管為聚丙烯材質(zhì)帶0.5毫升分度刻度的可立離心管，20支；。
[0048]IOmL離心管為聚丙烯材質(zhì)帶0.1毫升分度刻度的離心管，20支；
[0049]固相萃取柱:混合型陽離子交換固相萃取柱(填料質(zhì)量為60mg，柱體積為6毫升，無需激活，提取上清液可直接過柱)；
[0050]0.22微米濾器，采用尼龍膜或聚四氟乙烯膜針式濾器；
[0051]提取液:2%體積的三氯乙酸，48%體積的甲醇，其余體積為水，20mL，20支；
[0052]第一淋洗液:5%甲酸酸溶液，60mL，I瓶；
[0053]第二淋洗液:色譜級甲醇，60mL，I瓶；
[0054]洗脫液:氨水甲醇溶液，60mL(50/50，V/V)，I瓶；
[0055]復(fù)溶液:乙酸/甲醇/水(1/20/79體積比)溶液，30mL, I瓶；
[0056](2)前處理操作步驟
[0057]取均質(zhì)好的豬肉2克于50mL聚丙烯材質(zhì)離心管中，加入提取液I支，振蕩提取5-10分鐘，3000-4000轉(zhuǎn)離心5_10分鐘獲取上清液；
[0058]取上清液15mL通過混合型陽離子交換固相萃取柱，取3mL第一淋洗液和3mL第二淋洗液依次進(jìn)行淋洗；取5mL洗脫液過柱，并收集洗脫液于IOmL聚丙烯材質(zhì)帶刻度離心管中；70°C下旋蒸或氮氣吹干至小于0.lmL，使用樣品復(fù)溶液復(fù)溶并定容至0.75mL，得到待檢測的樣品溶液；使用0.22微米濾器過濾樣品溶液，并分裝于進(jìn)樣小瓶中，可供色譜或質(zhì)譜分析。
[0059]實施例3(鴨肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星和磺胺二甲嘧啶多殘留檢測)
[0060](I)試劑盒包括:
[0061]50mL離心管為聚丙烯材質(zhì)帶0.5毫升分度刻度的可立離心管，20支；。
[0062]IOmL離心管為聚丙烯材質(zhì)帶0.1毫升分度刻度的離心管，20支；
[0063]固相萃取柱:混合型陽離子交換固相萃取柱(填料質(zhì)量為60mg，柱體積為6毫升，無需激活，提取上清液可直接過柱)；
[0064]0.22微米濾器，采用尼龍膜或聚四氟乙烯膜針式濾器；
[0065]提取液:2%體積的三氯乙酸，48%體積的甲醇，其余體積為水，20mL，20支；
[0066]第一淋洗液:5%甲酸酸溶液，60mL，I瓶；
[0067]第二淋洗液:色譜級甲醇，60mL，I瓶；
[0068]洗脫液:氨水甲醇溶液，60mL(50/50，V/V)，I瓶；
[0069]復(fù)溶液:乙酸/甲醇/水(1/20/79體積比)溶液，30mL, I瓶；
[0070](2)前處理操作步驟
[0071]取均質(zhì)好的鴨肉2克于50mL聚丙烯材質(zhì)離心管中，加入提取液I支，振蕩提取5-10分鐘，3000-4000轉(zhuǎn)離心5_10分鐘獲取上清液；
[0072]取上清液5mL通過混合型陽離子交換固相萃取柱，取ImL第一淋洗液和2mL第二淋洗液依次進(jìn)行淋洗；取5mL洗脫液過柱，并收集洗脫液于IOmL聚丙烯材質(zhì)帶刻度離心管中；70°C下旋蒸或氮氣吹干至小于0.lmL，使用樣品復(fù)溶液復(fù)溶并定容至0.5mL，得到待檢測的樣品溶液；使用0.22微米濾器過濾樣品溶液，并分裝于進(jìn)樣小瓶中，可供色譜或質(zhì)譜分析。
[0073]測試?yán)?br> [0074](I)對實施例1-3的樣品進(jìn)行檢測分析，其檢測分析條件如下:
[0075]液相色譜條件:
[0076]儀器為島津液相色譜，色譜柱:AgilentPoroshelll20EC-C18 (30+50mmX 2.1mm
1.d.，1.7 μ m);柱溫:42°C ;樣品室溫度10°C ;進(jìn)樣體積10 μ L ;流動相A為含0.1 % (體積分?jǐn)?shù))甲酸的水，流動相B為乙腈，梯度洗脫，洗脫程序見表1。
[0077]表1
[0078]
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測肉品中藥物殘留的試劑盒，其特征在于，其包括混合型陽離子交換固相萃取柱，金剛烷胺、喹諾酮類和磺胺類藥物的萃取液，第一淋洗液、第二淋洗液、洗脫液和復(fù)溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括50mL聚丙烯材質(zhì)可立離心管和IOmL聚丙烯材質(zhì)離心管。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括過濾器。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其中，所述過濾器為0.22微米過濾器。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其中，所述萃取液含有2-5體積％的甲酸、乙酸或三氯乙酸，50-70體積％的甲醇，以及其余體積的水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其中，所述第一淋洗液為1-5體積％鹽酸或甲酸的水溶液； 所述第二淋洗液為色譜級甲醇或乙腈； 所述洗脫液為50-80體積％氨水的甲醇溶液； 所述復(fù)溶液為乙酸/甲醇/水溶液，所述乙酸/甲醇/水溶液中的乙酸、甲醇和水體積比 1:20:79o
7.一種用于檢測肉品中藥物殘留的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1-6中任一所述的試劑盒進(jìn)行樣品前處理；該檢測方法包括以下步驟: (1)萃取分離 將樣品放入所述萃取液中振蕩，然后進(jìn)行離心分離，得到上清液； (2)所述上清液的處理 所述上清液通過所述混合型陽離子交換固相萃取柱，然后依次使用第一淋洗液和第二淋洗液進(jìn)行淋洗，再使用所述洗脫液進(jìn)行洗脫處理，濃縮后用所述復(fù)溶液進(jìn)行復(fù)溶，得到待檢測的樣品溶液； (3)檢測分析 所述樣品溶液進(jìn)行色譜分析和/或質(zhì)譜分析。 (4)結(jié)果處理與分析。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述上清液的具體處理步驟包括:取適量上清液通過混合型陽離子交換固相萃取柱，使用1-5%鹽酸或甲酸的水溶液，色譜級甲醇或乙腈依次淋洗；50-80體積％氨水的甲醇溶液進(jìn)行洗脫處理，收集洗脫液，70°C下旋蒸或氮氣吹干，用所述復(fù)溶液進(jìn)行復(fù)溶。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中，所述上清液的處理步驟還包括:使用過濾器對所述樣品溶液進(jìn)行過濾。
10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中，所述樣品溶液進(jìn)行色譜分析的條件為:柱溫:42°C ;樣品室溫度10°C ;進(jìn)樣體積IOyL;流動相A為含0.1% (體積分?jǐn)?shù))甲酸的水，流動相B為乙腈，梯度洗脫； 所述樣品溶液進(jìn)行質(zhì)譜分析的條件為:離子源:電噴霧電離(ESI+) ；1nSprayvoltage5500V ;溫度 600°C；1n Source Gas60L/h ;氣簾氣 35L/h ;碰撞氣:氮氣，米用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。
【文檔編號】G01N30/02GK103983707SQ201410183213
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】王宏衛(wèi), 郭黎明, 饒欽雄, 張寶, 李宗進(jìn) 申請人:北京華都肉雞公司