一種利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用液相法測(cè)定多糖鐵溶出度的方法：取待檢測(cè)樣品，用水稀釋，溶解時(shí)間t，過(guò)濾，向?yàn)V液中加入稀硫酸，加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，然后加入等反應(yīng)量或過(guò)量的乙二胺四乙酸二鈉溶液，反應(yīng)完成后，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算待檢測(cè)樣品中多糖鐵的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t的溶出度。本發(fā)明的利用液相法測(cè)定多糖鐵溶出度的方法，通過(guò)實(shí)際應(yīng)用，該方法分離效果好，測(cè)定準(zhǔn)確，靈敏高，專屬性強(qiáng)、分析簡(jiǎn)便快速，可用于多糖鐵溶出溶液的定量，判定實(shí)際溶出情況，從而對(duì)單批次藥物、不同批次藥物的吸收及藥效的發(fā)揮做出評(píng)價(jià)。
【專利說(shuō)明】—種利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多糖鐵復(fù)合物是一種低分子多糖和鐵的有機(jī)復(fù)合物，是用于治療單純性缺鐵性貧血的藥物。目前，對(duì)判斷化學(xué)藥物療效一致的方法除了生物等效性實(shí)驗(yàn)外，溶出一致性是最科學(xué)合理有效的評(píng)價(jià)手段。目前，尚未有關(guān)于測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，原研藥物國(guó)內(nèi)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)無(wú)溶出質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。因此，研發(fā)一種測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，并制定相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，是非常必要的。鐵的定量以滴定、原子吸收等最為常見(jiàn)，但滴定方法要求待測(cè)溶液濃度非常高，不可能用于溶出度的測(cè)定；而原子吸收儀器昂貴，目前使用率較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的在于彌補(bǔ)技術(shù)空白，提供了一種利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，該方法分離效果好，測(cè)定準(zhǔn)確，靈敏度高，專屬性強(qiáng)、分析簡(jiǎn)便快速，可用于多糖鐵復(fù)合物溶出溶液的定量，判定實(shí)際溶出情況，從而對(duì)單批次藥物、不同批次藥物的吸收及藥效的發(fā)揮做出評(píng)價(jià)。
[0004]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0005]一種利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，如下:取待檢測(cè)樣品，用水稀釋，溶解時(shí)間t，過(guò)濾，向?yàn)V液中加入稀硫酸，置70?100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，然后加入等反應(yīng)量或過(guò)量的乙二胺四乙酸二鈉溶液，反應(yīng)完成后，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算待檢測(cè)樣品中多糖鐵復(fù)合物的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t的溶出度。
[0006]所述“用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算待檢測(cè)樣品中多糖鐵復(fù)合物的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t的溶出度”的具體方式為以下兩種方式之
[0007]( I)以乙二胺四乙酸鐵鈉作為對(duì)照品，進(jìn)行梯度稀釋，然后做同待檢測(cè)樣品同樣的處理，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，制作乙二胺四乙酸鐵鈉濃度-峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到線性回歸方程，然后將待檢測(cè)樣品的峰面積查標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到待檢測(cè)樣品中鐵的濃度或/和含量，或?qū)⒋龣z測(cè)樣品的峰面積套入線性回歸方程，通過(guò)常規(guī)方法計(jì)算得到待檢測(cè)樣品中鐵的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t時(shí)的溶出度。
[0008](2)以乙二胺四乙酸鐵鈉作為對(duì)照品，對(duì)對(duì)照品做同待檢測(cè)樣品同樣的處理，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，通過(guò)常規(guī)方法計(jì)算得到待檢測(cè)樣品中鐵的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t時(shí)的溶出度。
[0009]進(jìn)一步地，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0010]取待檢測(cè)樣品，以水500?IOOOml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘50?100轉(zhuǎn)，30?60分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))0.1ml,置70?100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))0.3?1ml，搖勻，放置3?15min，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10 μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案的為:
[0012]取待檢測(cè)樣品，以水900ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，45分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置90°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液0.5ml，搖勻，放置lOmin，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10 μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案還可以為:
[0014]取待檢測(cè)樣品，以水IOOOml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，30分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液1ml，搖勻，放置5min，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10 μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
[0015]本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案還可以為:
[0016]取待檢測(cè)樣品，以水500ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，60分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液0.5ml，搖勻，放置5min，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10 μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
[0017]以上技術(shù)方案中，所述液相法測(cè)定的色譜條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.15%四丁基氫氧化銨溶液(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))_甲醇為流動(dòng)相，二者體積比為70?90:30?10 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm。
[0018]優(yōu)選的，所述液相法測(cè)定的色譜條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以
0.15%四丁基氫氧化銨溶液-甲醇為流動(dòng)相，二者體積比為87:13 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm。
[0019]其中，所述0.15%四丁基氫氧化銨溶液的pH值為3?4 (用甲酸調(diào))。
[0020]優(yōu)選為:所述的0.15%四丁基氫氧化銨溶液的pH值為3.6 (用甲酸調(diào))。
[0021]本發(fā)明所檢測(cè)的目標(biāo)樣品——多糖鐵復(fù)合物是一種低分子多糖和鐵的有機(jī)復(fù)合物，目前，國(guó)內(nèi)有生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)制劑和原料藥，也有從國(guó)外進(jìn)口的制劑。本發(fā)明的檢測(cè)方法適用于所有的多糖鐵復(fù)合物原料藥和制劑。
[0022]本發(fā)明的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，通過(guò)實(shí)際應(yīng)用，該方法分離效果好，測(cè)定準(zhǔn)確，靈敏高，專屬性強(qiáng)、分析簡(jiǎn)便快速，可用于多糖鐵復(fù)合物溶出溶液的定量，判定實(shí)際溶出情況，從而對(duì)單批次藥物、不同批次藥物的吸收及藥效的發(fā)揮做出評(píng)價(jià)，具有以下特點(diǎn):
[0023]1.本發(fā)明創(chuàng)立了多糖鐵復(fù)合物的溶出度方法，填補(bǔ)了技術(shù)空白。
[0024]2.該方法能客觀反映多糖鐵復(fù)合物的溶出行為，可以簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地測(cè)定多糖鐵復(fù)合物的溶出度及溶出曲線，從而更加科學(xué)合理的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保障科學(xué)用藥。
[0025]3.本發(fā)明的檢測(cè)方法專屬性強(qiáng)，線性關(guān)系好，準(zhǔn)確度，精密度，范圍等均符合要求。
[0026]4.本發(fā)明采用液相方法，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0027]圖1:對(duì)照品溶液峰面積與濃度線性關(guān)系圖。
[0028]圖2:多糖鐵復(fù)合物膠囊溶出曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)例及 實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0030]實(shí)驗(yàn)例I測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
[0031]1.儀器與試劑
[0032](I)儀器:PHARMTEST610半自動(dòng)溶出儀，ANGILENT1260液相色譜儀，SHIMADZUUV-2550紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，METTLERT0LED0XS205電子天平。
[0033](2)試劑:甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。
[0034]按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備供試品溶液、對(duì)照品溶液和空白對(duì)照溶液(空白對(duì)照溶液為精密量取水Iml按供試品溶液制備方法制備)。取上述三種溶液照紫外-可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄IV A)，分別在200~400nm波長(zhǎng)處進(jìn)行吸收曲線測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。供試品溶液、對(duì)照品溶液在256nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而空白對(duì)照溶液在256nm處沒(méi)有吸收。故選擇256nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。
[0035]表1紫外吸收測(cè)定數(shù)據(jù)
【權(quán)利要求】
1.一種利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:取待檢測(cè)樣品，用水稀釋，溶解時(shí)間t，過(guò)濾，向?yàn)V液中加入稀硫酸，加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，然后加入等反應(yīng)量或過(guò)量的乙二胺四乙酸二鈉溶液，反應(yīng)完成后，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算待檢測(cè)樣品中多糖鐵復(fù)合物的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t的溶出度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:所述“用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算待檢測(cè)樣品中多糖鐵復(fù)合物的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t的溶出度”的具體方式為以下兩種方式之一: (1)以乙二胺四乙酸鐵鈉作為對(duì)照品，進(jìn)行梯度稀釋，然后做同待檢測(cè)樣品同樣的處理，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，制作乙二胺四乙酸鐵鈉濃度-峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到線性回歸方程，然后將待檢測(cè)樣品的峰面積查標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到待檢測(cè)樣品中鐵的濃度或/和含量，或?qū)⒋龣z測(cè)樣品的峰面積套入線性回歸方程，通過(guò)常規(guī)方法計(jì)算得到待檢測(cè)樣品中鐵的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t時(shí)的溶出度； (2)以乙二胺四乙酸鐵鈉作為對(duì)照品，對(duì)對(duì)照品做同待檢測(cè)樣品同樣的處理，用液相法測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，通過(guò)常規(guī)方法計(jì)算得到待檢測(cè)樣品中鐵的濃度或/和含量，進(jìn)而得到待檢測(cè)樣品在時(shí)間t時(shí)的溶出度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:取待檢測(cè)樣品，以水500~1000ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘50~100轉(zhuǎn)，30~60分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置70~100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液0.3~1ml，搖勻，放置3~15min，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置100ml量瓶中，`用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10 μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:取待檢測(cè)樣品，以水900ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，45分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置90°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液0.5ml，搖勻，放置lOmin，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置100ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液IOy 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:取待檢測(cè)樣品，以水1000ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，30分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液1ml，搖勻，放置5min，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置100ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液IOy 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:取待檢測(cè)樣品，以水500ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，60分鐘后，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液lml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加熱至顏色變淺，取出，降溫至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液0.5ml，搖勻，放置5min，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取相當(dāng)于鐵的質(zhì)量為15mg的乙二胺四乙酸鐵鈉，置100ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取供試品溶液IOy 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液10μ 1，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~2，4~6任一所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:所述液相法測(cè)定的色譜條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.15%四丁基氫氧化銨溶液-甲醇為流動(dòng)相，二者體積比為70~90:30~10 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:所述液相法測(cè)定的色譜條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.15%四丁基氫氧化銨溶液-甲醇為流動(dòng)相，二者體積比為87:13 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm。
9.如權(quán)利要求7所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:所述0.15%四丁基氫氧化銨溶液的pH值為3~4。
10.如權(quán)利要求8所述的利用液相法測(cè)定多糖鐵復(fù)合物溶出度的方法，其特征在于:所述0.15%四丁基氫氧化銨溶液的pH值為3.6。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103728386SQ201310737061
【公開日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】田紅偉, 姜作玲, 展筱林, 程宏霞, 王冬, 王海清 申請(qǐng)人:青島國(guó)風(fēng)藥業(yè)股份有限公司