一種中藥組合物的含量測定方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種中藥組合物的含量測定方法。該方法包括：(a)供試品溶液的制備，(b)對照品溶液的制備，(c)色譜條件：色譜柱為C18反相色譜柱，柱溫：30℃，流動(dòng)相：A為乙腈，B為三氟乙酸溶液，梯度洗脫，流速0.4ml／min，檢測波長：230nm、327nm，(d)測定。該方法專屬性強(qiáng)、操作簡便，可以有效地控制該中藥組合物的質(zhì)量。
【專利說明】一種中藥組合物的含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種中藥組合物的含量測定方法，該方法采用超高效液相色譜法同時(shí)測定綠原酸、芍藥苷的含量。
【背景技術(shù)】
[0002]中醫(yī)藥是中華民族卓越的歷史文化寶庫，是幾千年臨床經(jīng)驗(yàn)所積累的智慧。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國有方劑九萬余首、中成藥五千余種、中藥劑型三十五大類四十三種、藥材一萬兩千八百零七種。中藥是中醫(yī)治病的主要方法，中醫(yī)理論強(qiáng)調(diào)中藥的整體效用，重視多個(gè)化學(xué)成分在藥效上的協(xié)同作用。但目前，中藥的質(zhì)量控制主要參考《中華人民共和國藥典》所擬定的標(biāo)準(zhǔn)。大部分中藥的標(biāo)準(zhǔn)只對單一指標(biāo)成分進(jìn)行定量分析，未能全面反映制劑的質(zhì)量。因此，新藥研究有必要在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立多指標(biāo)含量測定，實(shí)現(xiàn)對多數(shù)成分指標(biāo)的控制，并將對中藥制劑工藝過程的控制直接在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中得到體現(xiàn)。
[0003]CN102688332A(中國專利申請?zhí)?201110073726.4，公布日:2012.09.26)公開了
一種治療感冒的中藥組合物及其制備方法，本專利申請就是針對該中藥組合物進(jìn)行的質(zhì)量控制方法研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種中藥組合物兩種有效成分的含量測定方法。
[0005]該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:
[0006]魚腥草3~8，金銀花3~8，赤芍I~5，薄荷0.5~3，艾葉I~5。
[0007]在質(zhì)量控制方面，本發(fā)明提供的測定方法可同時(shí)測定該中藥組合物的綠原酸、芍藥苷兩種成分的含量，方法簡單、有效、可行。
[0008]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0009]色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn):色譜柱為C18反相色譜柱；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為三氟乙酸溶液，梯度洗脫步驟為:0~2分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為5:95，2~15分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比由5:95漸變?yōu)?9:71 ; 15~20分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比由29:71漸變?yōu)?5:25 ；20~25分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為75:25 ;柱溫25~50°C ;檢測波長為230nm和327nm ;流動(dòng)相流速:0.1~0.5ml / min,理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于20000 ；
[0010]對照品溶液的制備:取綠原酸和芍藥苷對照品適量，加甲醇，即得；
[0011]供試品溶液的制備:取本中藥組合物制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇，密塞，稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得;
[0012]測定方法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液I~?ομ 1，注入超高效液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
[0013]上述測定方法的優(yōu)選方案為:[0014]色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn):色譜柱為C18反相色譜柱；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.02%三氟乙酸溶液，梯度洗脫步驟為:0?2分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為5:95，2?15分鐘，流動(dòng)相乙腈:0.02%三氟乙酸溶液的體積比由5:95漸變?yōu)?9:71 ；15?20分鐘，流動(dòng)相乙腈:0.02%三氟乙酸溶液的體積比由29:71漸變?yōu)?5:25 ；20?25分鐘，流動(dòng)相乙腈:0.02%三氟乙酸溶液的體積比為75:25 ;柱溫30°C ;檢測波長為230nm和327nm ;流動(dòng)相流速:0.4ml / min,理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于20000 ;
[0015]對照品溶液的制備:取綠原酸和芍藥苷對照品適量，加70%甲醇制成每Iml含
0.lmg、0.03mg的溶液，即得；
[0016]供試品溶液的制備:取本中藥組合物制劑，約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，0.22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0017]測定方法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2μ 1，注入超高效液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
[0018]采用本發(fā)明方法測定含量的所述中藥組合物中原料藥的重量比優(yōu)選為:魚腥草5，金銀花5，赤芍3，薄荷1，艾葉2。
[0019]或者魚腥草3，金銀花3，赤芍I，薄荷0.5，艾葉I。
[0020]或者魚腥草7,金銀花6,赤茍4,薄荷2,艾葉4。
[0021]或者魚腥草8，金銀花8，赤芍5，薄荷3，艾葉5。
[0022]或者魚腥草4,金銀花4,赤茍2,薄荷I,艾葉I。
[0023]上述優(yōu)選的中藥組合物采用本方法測定含量均能取得良好的精密度和準(zhǔn)確性。
[0024]為使本發(fā)明含量測定方法得以實(shí)現(xiàn)，本發(fā)明中藥組合物由下列步驟制成:取金銀花加50?70 %乙醇，回流提取I?3次，每次0.5?2小時(shí)，提取液濾過，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮，減壓干燥，粉碎，得浸膏粉I ;魚腥草、艾葉、薄荷，加5?10倍量水，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；藥液放出，另器收集，藥渣與赤芍加5?15倍量水，煎煮，煎液與上述藥液合并，濾過，濾液減壓濃縮得清膏，冷卻至室溫，加乙醇使含醇量達(dá)50?70%，靜置，離心，離心液減壓回收乙醇并濃縮，減壓干燥，粉碎，得浸膏粉II ;揮發(fā)油用環(huán)糊精包合，包合物干燥，粉碎，備用；將浸膏粉Ι、Π混合均勻，加入上述揮發(fā)油包合物，加入中藥制劑中的常規(guī)藥用輔料，采用藥劑學(xué)中常規(guī)的制藥方法，制劑成型，即得。
[0025]本發(fā)明的應(yīng)用中，所述中藥組合物制劑劑型為片劑、口含片、硬膠囊劑、丸劑、顆粒齊U、軟膠囊劑、口服液體制劑、噴霧劑中的一種，為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等，填充劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素納等，潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等，助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等，甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矯味劑包括:甜味劑及各種香精，防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等。
[0026]為證實(shí)本發(fā)明含量測定方法的效果，發(fā)明人進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)選，并對最終確定的測定方法進(jìn)行了科學(xué)的驗(yàn)證，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)如下:[0027]I儀器與材料
[0028]Agilentl290液相色譜儀，DAD紫外檢測器。
[0029]乙腈為色譜純(上海星可生化有限公司)、甲醇為分析純(南京化學(xué)試劑有限公司)、三氟乙酸為色譜純(TEDIA COMPANY)、水為自制超純水、綠原酸對照品(批號(hào):110753-200413，中國食品藥品檢定研究院)、芍藥苷對照品(批號(hào):110736-201035，中國食品藥品檢定研究院，純度:96.5% )、本發(fā)明中藥組合物片劑為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司按照實(shí)施例1制劑的制備方法制得的(批號(hào):120401、120701、120702、120703)。
[0030]2色譜條件的確定
[0031]供試品的制備:取本發(fā)明組合物片劑(批號(hào):120401)0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0032]色譜柱為C18反相色譜柱，進(jìn)樣量2 μ I。
[0033]2.1洗脫程序考察
[0034]流動(dòng)相采用梯度洗脫方式，以乙腈作為流動(dòng)相Α，0.02%三氟乙酸溶液作為流動(dòng)相B，柱溫30°C，流速0.4ml / min,綠原酸檢測波長為327nm，芍藥苷檢測波長為230nm，洗脫程序見表1-1和表1-2，色譜圖見附圖1~2。結(jié)果表明:洗脫程序II分離效果較好。
[0035]表1-1梯度洗脫程序I
【權(quán)利要求】
1.一種中藥組合物中綠原酸、芍藥苷的含量測定方法，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:魚腥草3~8，金銀花3~8，赤芍I~5，薄荷0.5~3，艾葉I~5，其特征在于該方法采用超高效液相色譜法進(jìn)行測定，包括以下步驟: 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn):色譜柱為C18反相色譜柱；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為三氟乙酸溶液，梯度洗脫步驟為:0~2分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為5:95,2~15分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比由5:95漸變?yōu)?9:71 ；15~20分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比由29:71漸變?yōu)?5:25 ；20~25分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為75:25 ;柱溫25~50°C ;檢測波長為230nm和327nm ;流動(dòng)相流速:0.1~0.5ml / min, 理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于20000 ； 對照品溶液的制備:取綠原酸和芍藥苷對照品適量，加甲醇，即得； 供試品溶液的制備:取本中藥組合物制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇，密塞，稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得; 測定方法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液I~10 μ 1，注入超高效液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該方法所述的甲醇為濃度為50~90%的甲醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.02%三氟乙酸溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn):色譜柱為C18反相色譜柱；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.02%三氟乙酸溶液，梯度洗脫步驟為:0~2分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為5:95，2~15分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比由5:95漸變?yōu)?9:71 ；15~20分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比由29:71漸變?yōu)?5:25 ；20~25分鐘，流動(dòng)相乙腈:三氟乙酸溶液的體積比為75:25 ;柱溫30°C ;檢測波長為230nm和327nm ;流動(dòng)相流速:0.4ml / min,理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于20000 ; 對照品溶液的制備:取綠原酸和芍藥苷對照品適量，加70%甲醇制成每Iml含綠原酸0.lmg、芍藥苷0.03mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取本中藥組合物制劑，約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，0.22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定方法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2 μ 1，注入超高效液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:魚腥草5，金銀花5，赤芍3，薄荷1，艾葉2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:魚腥草3，金銀花3，赤芍I，薄荷0.5，艾葉I。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:魚腥草7，金銀花6，赤芍4，薄荷2，艾葉4。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:魚腥草8，金銀花8，赤芍5，薄荷3，艾葉5。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:魚腥草4，金銀花4，赤芍2，薄荷1，艾葉I。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一權(quán)利要求所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物的制備方法為:取金銀花加50~70%乙醇，回流提取I~3次，每次0.5~2小時(shí)，提取液濾過，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮，減壓干燥，粉碎，得浸膏粉I ;魚腥草、艾葉、薄荷，加5~10倍量水，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；藥液放出，另器收集，藥渣與赤芍加5~15倍量水，煎煮，煎液與上述藥液合并，濾過，濾液減壓濃縮得清膏，冷卻至室溫，加乙醇使含醇量達(dá)50~70%，靜置，離心，離心液減壓回收乙醇并濃縮，減壓干燥，粉碎，得浸膏粉II ;揮發(fā)油用環(huán)糊精包合，包合物干燥，粉碎，備用；將浸膏粉1、II混合均勻，加入上述揮發(fā)油包合物，加入中藥制劑中的常規(guī)藥用輔料，采用藥劑學(xué)中常規(guī)的制藥方法，制劑成型，即得。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103675135SQ201310653950
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】蕭偉, 王振中, 畢宇安, 閆明, 吳云, 孫永成, 李芳芳, 韋迎春, 李淼, 徐海娟 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司