專利名稱：一種檢測5-羥甲基脫氧尿苷的化學(xué)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測5-羥甲基脫氧尿苷的化學(xué)方法，屬于熒光探針領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
活細(xì)胞中的脫氧胸苷很容易被紫外線，電離輻射等產(chǎn)生的活性氧所氧化進(jìn)而造成損傷，5-羥甲基脫氧尿苷就是脫氧胸苷氧化損傷的產(chǎn)物。所以一種簡便靈敏的檢測方法對疾病早期診斷以及生命科學(xué)都有重要的意義和應(yīng)用價(jià)值。而熒光探針一直都是一種簡便靈敏的檢測方法，如果能夠通過簡單的熒光檢測即可觀測到核酸水平的突變對檢測脫氧胸苷的氧化損傷具有戰(zhàn)略性意義。當(dāng)今DNA損傷的檢測領(lǐng)域具有一定的成果，也有很多有對脫氧胸苷的氧化損傷成5-羥甲基脫氧尿苷的檢測報(bào)道。已有的一些報(bào)道包含了生物和化學(xué)檢測兩類，但是生物檢測具有其復(fù)雜和代價(jià)高等缺點(diǎn)，化學(xué)方法有的不能做到簡便敏捷，有的則是熒光對比性不強(qiáng)，選擇性不強(qiáng)，亦或者檢測用到的小分子探針不易得到或者是所需量比較大。所以能使熒光從無到有以及小分子探針且普遍容易獲得的方法必然能成為高效敏捷的檢測方法，進(jìn)而成為靈敏高效的檢測脫氧胸苷氧化損傷為5-羥甲基脫氧尿苷的最便捷方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種高效、靈敏、選擇性強(qiáng)的熒光檢測5-羥甲基脫氧尿苷的方法。本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題提出的技術(shù)方案是:一種檢測5-羥甲基脫氧尿苷的化學(xué)方法，包括以下步驟:I)配制5-羥甲基脫氧尿苷的二甲亞砜溶液和疊氮化鈉的三氟乙酸(TFA)溶液，混合上述溶液，混合溶液中5-羥甲基脫氧尿苷與疊氮化鈉的摩爾比為1:490，反應(yīng)后除去三氟乙酸，反應(yīng)時(shí)間> 24小時(shí)，得到疊氮取代的5-羥甲基脫氧尿苷；2)配制7-炔基香豆素(化合物D)的二甲亞砜溶液；3)向步驟I)得到的疊氮取代的5-羥甲基脫氧尿苷中加入水與N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基甲酰胺與水的比例為1:1，再加入步驟2)配制好的7-炔基香豆素的二甲亞砜溶液、五水合硫酸銅和抗壞血酸鈉(sodium ascorbate), 7-炔基香豆素與疊氮化的5_輕甲基脫氧尿苷的摩爾比為1:1，室溫下攪拌16 24小時(shí)后，用熒光儀檢測5-羥甲基脫氧尿苷。該方法的化學(xué)反應(yīng)式如下:
權(quán)利要求
1.一種檢測5-羥甲基脫氧尿苷的化學(xué)方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)配制5-羥甲基脫氧尿苷的二甲亞砜溶液和疊氮化鈉的三氟乙酸溶液，混合上述溶液，混合溶液中5-羥甲基脫氧尿苷與疊氮化鈉的摩爾比為1:490，反應(yīng)后除去三氟乙酸，反應(yīng)時(shí)間> 24小時(shí)，得到疊氮取代的5-羥甲基脫氧尿苷； 2)配制7-炔基香豆素的二甲亞砜溶液； 3)向步驟I)得到的疊氮取代的5-羥甲基脫氧尿苷中加入水與N，N-二甲基甲酰胺，N, N- 二甲基甲酰胺與水的比例為1:1，再加入步驟2)配制好的7-炔基香豆素的二甲亞砜溶液、五水合硫酸銅和抗壞血酸鈉，7-炔基香豆素與疊氮化的5-羥甲基脫氧尿苷的摩爾比為1:1，室溫下攪拌16 24小時(shí)后，用熒光儀檢測5-羥甲基脫氧尿苷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測5-羥甲基脫氧尿苷的化學(xué)方法，即5-羥甲基脫氧尿苷通過一步反應(yīng)變成疊氮化的脫氧尿苷，然后用一個(gè)帶炔基的沒有熒光的探針與它反應(yīng)，反應(yīng)后的物質(zhì)有很強(qiáng)的熒光，從而達(dá)到熒光從無到有的效果，進(jìn)而檢測出脫氧胸苷氧化突變的存在。該方法可以高效、靈敏、選擇性強(qiáng)的檢測5-羥甲基脫氧尿苷。
文檔編號G01N21/76GK103175827SQ201310082540
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月15日
發(fā)明者周翔, 徐小為, 翁小城 申請人:武漢大學(xué)