專利名稱：鈉/鉀離子比檢測方法、系統(tǒng)和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言涉及ー種鈉/鉀離子比檢測方法、系統(tǒng)和試劑盒。
背景技術(shù)：
人體內(nèi)的鈉、鉀離子是維持細(xì)胞生理活動的主要陽離子，是保持機(jī)體的正常滲透壓及酸堿平衡，參與糖及蛋白質(zhì)代謝，保證神經(jīng)肌肉的正常功能所必需，其含量是人體生理活動的重要指標(biāo)。尿液、血清中鈉 、鉀離子的含量水平在臨床上可用了診斷ー些腎臟、心臟等方面的疾病。人體內(nèi)的鈉鉀離子水平處于ー個平衡狀態(tài)，其比的改變對人體健康有著重要影響。對健康而言，監(jiān)測鈉/鉀離子的比例可能比二者単獨(dú)的絕對數(shù)值更重要。在臨床上，通過檢測唾液鈉/鉀離子比，可診斷醛固酮增多癥。此外，美國學(xué)者近日研究證實(shí)24小時(shí)尿鈉/鉀離子比對心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測價(jià)值顯著優(yōu)于單純的尿鈉或尿鉀檢測。由此可見，鈉/鉀離子比的監(jiān)測對預(yù)防心血管疾病具重要意義。現(xiàn)有技術(shù)中測定鈉、鉀離子濃度的方法主要有中子活化法、同位素稀釋質(zhì)譜法、化學(xué)測定法、火焰光度法、離子選擇電極法、酶動力學(xué)法、原子分光光度法等。目前，臨床上經(jīng)常使用的方法是火焰光度法和離子選擇電極法。(I)火焰光度法火焰光度法是ー種發(fā)射光譜分析法，利用火焰中激發(fā)態(tài)原子回降至基態(tài)時(shí)發(fā)射的光譜強(qiáng)度進(jìn)行含量分析，可檢測血清、尿液、腦脊液及胸腹水的Na+和K+，該方法屬于經(jīng)典的標(biāo)準(zhǔn)參考法，優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果準(zhǔn)確可靠，廣為臨床采用。通常采用的定量方法有外標(biāo)準(zhǔn)法和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)法。外標(biāo)準(zhǔn)法一般操作誤差較大，不常采用。內(nèi)標(biāo)法是標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)液采用加進(jìn)相同濃度的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)元素進(jìn)行測定，一般是加入鋰內(nèi)標(biāo)，測定的是鋰/鈉或鉀電流的比值，而不是単獨(dú)鈉或鉀的電流，這樣，可減小燃?xì)夂突鹧鏈囟炔▌拥纫蛩匾鸬恼`差，因而有較好的準(zhǔn)確性。(2)離子選擇電極法(ISE法):在專用儀器上進(jìn)行血清和尿液的鉀、鈉離子測定。因其具有標(biāo)本用量少，快速準(zhǔn)確，操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，是目前所有方法中最為簡便準(zhǔn)確的方法，幾乎有取代其他方法的趨勢。其原理是離子選擇電極是ー種電化學(xué)傳感器，其結(jié)構(gòu)中有一個對特定離子具有選擇性響應(yīng)的敏感膜電極，將離子活度轉(zhuǎn)換成電位信號，在一定范圍內(nèi)，其電位與溶液中特定離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系，通過與已知離子濃度的溶液比較可求得未知溶液的離子活度，按其測定過程又分為直接測定法和間接測定法，目前大部分采用間接測定法，由于間接測定法將待測樣本稀釋后測定，所測離子活度更接近離子濃度。目前主要的電極種類有玻璃膜電極，感應(yīng)材料為玻璃膜；固相電極，由難溶金屬物質(zhì)加壓成型；液態(tài)膜電極，將環(huán)氧樹脂或內(nèi)裝聚氯こ烯作為感應(yīng)膜；纈氨霉素膜制成的K+電極。這些電極都具有一定壽命，使用一段時(shí)間后，電極會老化，且價(jià)格昂貴。(3)化學(xué)測定法目前Na+、K+的化學(xué)測定主要利用復(fù)環(huán)王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，亦稱為冠醚，均為離子載體進(jìn)行測定，由于大環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)有空穴，分子內(nèi)部氧原子有未共用電子對可與金屬離子結(jié)合，根據(jù)空穴大小，可選擇性結(jié)合不同直徑的金屬離子，從而可達(dá)到測出離子濃度的目的。(4)酶法酶法測定鉀的原理是利用鈉依賴的P -半乳糖苷酶催化人工底物ONPG(鄰硝基酚3 -D-吡喃半乳糖苷);分解釋放出有色產(chǎn)物鄰硝基酚，在波長420nm處測吸光度變化。酶法測鉀的原理是利用對丙酮酸激酶的激活作用，后者催化磷酸烯醇式丙酮酸變?yōu)槿樗嵬瑫r(shí)伴有還原型輔酶I的消耗，在波長340nm處測NADH的吸光度下降。酶法的優(yōu)點(diǎn)是不需特殊儀器，缺點(diǎn)是價(jià)格較貴。(5)原子分光光度法也可用于檢測血清中鉀、鈉離子，但操作復(fù)雜，誤差較大，不及火焰光度法簡便?，F(xiàn)有的這些方法都是分別測定鈉、鉀離子濃度，再在測出的數(shù)值基礎(chǔ)上計(jì)算鈉/鉀比。到目前為止，尚沒有直接測定鈉/鉀比的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供ー種利用鳥嘌呤四鏈體(G-四鏈體)熒光能量轉(zhuǎn)移體系檢測鈉/鉀離子比的新方法，以及應(yīng)用該方法配制而成的鈉/鉀離子比檢測試劑盒。利用該試劑盒中的試劑，可利用熒光光譜儀器定量分析液體中鈉/鉀離子比，測定過程不受其他元素的影響，精確度高。本發(fā)明的總體技術(shù)路線為 通過加入帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的能夠形成鳥嘌呤-四鏈體(下文稱G-四鏈體)結(jié)構(gòu)的DNA分子，該DNA分子因溶液中的鈉/鉀離子水平不同而產(chǎn)生不同構(gòu)像，隨之影響DNA分子的熒光標(biāo)記基團(tuán)的能量轉(zhuǎn)移強(qiáng)度，從而反映出鈉/鉀離子的比水平。本發(fā)明的第一方面提供一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的方法，所述方法包括以下步驟(I)用pH6. 2 8. 2的緩沖溶液和水溶性鈉鹽和鉀鹽配制鈉/鉀離子比不同的多個溶液樣本，其中每個所述溶液樣本中含有相同濃度的帶熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的的DNA分子；(2)將所述多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，采用410nm至540nm的激發(fā)波長，檢測波長在第一、ニ波長處的突光強(qiáng)度值，其中所述第一波長在480nm至550nm范圍,所述第ニ波長在55 Inm至700nm范圍；(3)以各個所述溶液樣本的鈉/鉀離子比作為橫坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，以步驟(2)中測得的第一波長處的熒光強(qiáng)度值與第二波長處的熒光強(qiáng)度值的比值為縱坐標(biāo)或橫坐標(biāo)作圖，從而獲得鈉/鉀離子比的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(4)將待測液體樣品中加入所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的能夠形成G-四鏈體的DNA分子并調(diào)節(jié)PH值，以使待測液體樣品中的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的濃度以及pH值與步驟(I)中的溶液樣本一致，從而得到測試溶液；(5)將步驟(4)中獲得的測試溶液置于熒光光譜儀下，采用410nm至540nm的激發(fā)波長，檢測波長在第一、ニ波長處的熒光強(qiáng)度值；(6)利用步驟(5)中測得的中測得的第一波長處的熒光強(qiáng)度值與第二波長處的熒光強(qiáng)度值的比值在步驟(3)中獲得的鈉/鉀離子比標(biāo)準(zhǔn)曲線中找到對應(yīng)的測試溶液的鈉/鉀離子比。本發(fā)明的方法可以方便地用于檢測各種溶液樣品中的鈉/鉀離子比，例如，可以檢測人或動物血液、尿液、唾液或其他體液中的鈉/鉀離子比。根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所述緩沖液選自三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三こ醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、ニ(2—羥こ基)亞氨基三(羥甲基)甲烷-鹽酸緩沖液。根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子中含有下式I的結(jié)構(gòu)GGYGGZGGMGG式I其中Y、Z和M分別代表ー個或多個任意堿基；G代表鳥嘌呤堿基；所述熒光標(biāo)記基團(tuán)連接在所述DNA分子的兩端，并且連接在所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)不同；連接在所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)的組合選自以下熒光標(biāo)記基團(tuán)組合6_羧基熒光素(FAM)和6-羧基四甲基羅丹明(TAMRA)、異硫氰酸熒光素(FITC)和羅丹明(Rhodamine)、3H-吲哚菁染料(Cy3)和3H-吲哚菁染料(Cy5)或者Alexa488和3H-吲哚菁染料(Cy3)。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子條件下能夠形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的堿基序列中優(yōu)選具有“GG”結(jié)構(gòu)。這類DNA分子中的堿基序列的非限定性實(shí)例包括，如 TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TGAGGGTGGGGAGG GTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、GGTTGGTGTGGTTGG、 TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、 GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG 或GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG等堿基序列，但本發(fā)明中的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的堿基序列不受這些列舉所限制。另外，對于本發(fā)明中所使用的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的長度并沒有特殊限制，但是優(yōu)選6 300個堿基的長度，更優(yōu)選1(T100個堿基的長度，最優(yōu)選10^30個堿基的長度。在本發(fā)明的方法中所使用的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子可以從供應(yīng)商處直接購買現(xiàn)有的產(chǎn)品，也可以采用本領(lǐng)域常用的方法來用熒光標(biāo)記基團(tuán)來對DNA分子進(jìn)性標(biāo)記。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要選擇不同的熒光標(biāo)記基團(tuán)組合以及不同的DNA序列。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，其中可以通過使用可溶性鈉、鉀鹽如氯化鉀、溴化鉀、碘化鉀、硫酸鉀、硝酸鉀、氯化鈉、溴化鈉、碘化鈉、硫酸鈉或硝酸鈉等來配制所述多個溶液樣本，各溶液樣本中鈉/鉀離子的比優(yōu)選在0至20的范圍，進(jìn)ー步優(yōu)選在0至10的范圍，更進(jìn)ー步優(yōu)選在I至8的范圍，最優(yōu)選在2至6的范圍。根據(jù)本發(fā)明的方法，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子條件下能夠形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子在溶液樣本中的濃度在0至30 ii mo I/L的范圍，優(yōu)選在0. 05至 10 ii mol/L,進(jìn)一步優(yōu)選在 0.1 至 2 ii mol/Lo本發(fā)明的方法在于，直接給出溶液中鈉/鉀離子的摩爾比，而與溶液中鈉離子和鉀離子的實(shí)際濃度值沒有直接關(guān)系。
本發(fā)明的另一方面提供一種實(shí)施本發(fā)明方法的系統(tǒng)和試劑盒，所述系統(tǒng)包括所述試劑盒和熒光光譜儀；所述試劑盒包括pH6. 2^8. 2的緩沖液、可溶性鈉鹽、鉀鹽、帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子。根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述緩沖液選自三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三こ醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液。根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子中含有下式I的結(jié)構(gòu)GGYGGZGGMGG式I其中Y、Z和M分別代表ー個或多個任意堿基；G代表鳥嘌呤堿基；所述熒光標(biāo)記基團(tuán)連接在所述DNA分子的兩端，并且連接在所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)不同；連接在所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)的組合選自以下熒光標(biāo)記基團(tuán)組合6_羧基熒光素(FAM)和6-羧基四甲基羅丹明(TAMRA)、異硫氰酸熒光素(FITC)和羅丹明(Rhodamine)、3H-吲哚菁染料(Cy3)和3H-吲哚菁染料(Cy5)或者Alexa488和3H-吲哚菁染料(Cy3)。根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的堿基序列中優(yōu)選具有“ GG”結(jié)構(gòu)。這類DNA分子中的堿基序列的非限定性實(shí)例包括，如TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、 GGTTGGTGTGGTTGG、 TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG 或 GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG 等堿基序列，但本發(fā)明中的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的堿基序列不受這些列舉所限制。另外，對于本發(fā)明中所使用的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子的長度并沒有特殊限制，但是優(yōu)選6 300個堿基的長度，更優(yōu)選1(T100個堿基的長度，最優(yōu)選1(T30個堿基的長度。在本發(fā)明的系統(tǒng)和試劑盒中所使用的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子可以從供應(yīng)商處直接購買現(xiàn)有的產(chǎn)品，也可以采用本領(lǐng)域常用的方法來用熒光標(biāo)記基團(tuán)來對DNA分子進(jìn)性標(biāo)記。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要選擇不同的熒光標(biāo)記基團(tuán)組合以及不同的DNA序列。根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述可溶性鈉鹽選自氯化鉀、溴化鉀、碘化鉀、硫酸鉀或硝酸鉀；可溶性鉀鹽選自氯化鈉、溴化鈉、碘化鈉、硫酸鈉或硝酸鈉。本文所述的鈉/鉀離子比為摩爾比。本發(fā)明中所述的熒光標(biāo)記基團(tuán)的分子式如下6-羧基熒光素(FAM)，分子式
權(quán)利要求
1.一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的方法，所述方法包括以下步驟 (1)用PH6.2 8. 2的緩沖溶液和水溶性鈉鹽和鉀鹽配制鈉/鉀比不同的多個溶液樣本，其中每個所述溶液樣本中含有相同濃度的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子； (2)將所述多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，采用410nm至540nm的激發(fā)波長，檢測波長在第一、二波長處的突光強(qiáng)度值，其中所述第一波長在480nm至550nm范圍,所述第二波長在551nm至700nm范圍； (3)以所述溶液樣本的鈉/鉀比作為橫坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，以步驟(2)中測得的第一波長處的熒光強(qiáng)度值與第二波長處的熒光強(qiáng)度值的比值為縱坐標(biāo)或橫坐標(biāo)作圖，從而獲得鈉/鉀離子比的標(biāo)準(zhǔn)曲線； (4)將待測液體樣品中加入所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子，并調(diào)節(jié)樣品的pH值以使待測液體樣品中的帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的能夠形成G-四鏈體的DNA分子的濃度以及pH值與步驟(I)中的溶液樣本一致，從而得到測試溶液； (5)將步驟(4)中獲得的測試溶液置于熒光光譜儀下，采用與步驟(2)相同的激發(fā)波長，檢測波長在所述第一、二波長處的熒光強(qiáng)度值； (6)利用步驟(5)中測得的中測得的第一波長處的熒光強(qiáng)度值與第二波長處的熒光強(qiáng)度值的比值在步驟(3)中獲得的鈉/鉀離子比標(biāo)準(zhǔn)曲線中找到對應(yīng)的測試溶液的鈉/鉀離子濃度比。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子中含有下式I的結(jié)構(gòu)GGYGGZGGMGG 式I 其中式I中的X、Y、Z、和M、N分別代表一個或多個任意堿基而代表鳥嘌呤堿基；所述熒光標(biāo)記基團(tuán)連接在所述DNA分子的兩端，并且所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)不同；連接在所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)的組合選自以下熒光標(biāo)記基團(tuán)的組合6_羧基熒光素和6-羧基四甲基羅丹明、異硫氰酸熒光素和羅丹明、Cy3和Cy5或者Alexa488和Cy3。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子中的堿基序列為TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、T GAGGGTGGGGAGGGT GGGGAA、AGGGAGGGC GC T GGGAGGAGGG、GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、 GGTTGGTGTGGTTGG、 TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG 或 GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述緩沖液選自三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液；所述可溶性鈉鹽選自氯化鉀、溴化鉀、碘化鉀、硫酸鉀或硝酸鉀；可溶性鉀鹽選自氯化鈉、溴化鈉、碘化鈉、硫酸鈉或硝酸鈉。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述溶液樣本中鈉/鉀離子比的范圍優(yōu)選在O至15的范圍；所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子在溶液樣本中的濃度在O. 5至30 μ mo I/L的范圍。
6.一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的試劑盒和系統(tǒng)，所述試劑盒包括pH6. 2^8. 2的緩沖液、可溶性鈉鹽、鉀鹽、帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子；所述系統(tǒng)包括所述試劑盒和熒光光譜儀。
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒和系統(tǒng)，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子中含有下式I的結(jié)構(gòu)GGYGGZGGMGG 式I 其中Y、Z、M分別代表一個或多個任意堿基；G代表鳥嘌呤堿基；所述熒光標(biāo)記基團(tuán)連接在所述DNA分子的兩端，并且所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)不同；連接在所述DNA分子兩端的熒光標(biāo)記基團(tuán)的組合選自以下熒光標(biāo)記基團(tuán)的組合6_羧基熒光素和6-羧基四甲基羅丹明、異硫氰酸熒光素和羅丹明、Cy3和Cy5或者Alexa488和Cy3。
8.如權(quán)利要求6或7所述的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子中的堿基序列為TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、 GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、 GGTTGGTGTGGTTGG、TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG 或 GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。
9.如權(quán)利要求6或7所述的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述緩沖液選自三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液。
10.如權(quán)利要求6或7所述的系統(tǒng)和試劑盒，其中所述可溶性鈉鹽選自氯化鉀、溴化鉀、碘化鉀、硫酸鉀或硝酸鉀；可溶性鉀鹽選自氯化鈉、溴化鈉、碘化鈉、硫酸鈉或硝酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明涉及鈉/鉀離子比檢測方法、系統(tǒng)和試劑盒。本發(fā)明涉及檢測鈉/鉀離子比濃度的方法，包括(1)配制鈉/鉀比不同的多個溶液樣本，(2)將該多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，檢測波長在第一、二波長處的熒光強(qiáng)度值，(3)獲得鈉/鉀離子比的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(4)將待測液體樣品中加入帶有熒光標(biāo)記基團(tuán)的在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結(jié)構(gòu)的DNA分子，并調(diào)節(jié)樣品pH值，從而得到測試溶液；(5)將測試溶液置于熒光光譜儀下，檢測波長在所述第一、二波長處的熒光強(qiáng)度值；(6)利用步驟(5)中測得的中測得的第一波長處的熒光強(qiáng)度值與第二波長處的熒光強(qiáng)度值的比值鈉/鉀離子比標(biāo)準(zhǔn)曲線中找到對應(yīng)的測試溶液的鈉/鉀離子濃度比。
文檔編號G01N21/64GK103048301SQ20121055378
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月18日
發(fā)明者孫紅霞, 唐亞林, 向俊鋒, 楊千帆, 管愛嬌, 劉巖 申請人:中國科學(xué)院化學(xué)研究所