專利名稱：多殘留金標快速檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，涉及快速檢測食品中氨基糖苷類抗生素慶大霉素殘留的試劑盒和方法。
背景技術(shù)：
自2008年以來，乳制品的安全問題在全國乃至全世界造成了巨大的影響，不僅廣大消費者的權(quán)益受到了損害，整個乳制品行業(yè)包括眾多的奶農(nóng)的利益也受到了巨大損害。 乳制品行業(yè)的食品安全問題已經(jīng)嚴重關(guān)系到了我國的國計民生，急需解決。乳制品的安全， 既需要從源頭開始，通過各項規(guī)章制度對質(zhì)量進行層層控制，也需要各種檢測技術(shù)進行層層把關(guān)。由于乳制品生產(chǎn)涉及的原料數(shù)量巨大、來源眾多，因此如何實現(xiàn)對大量原料奶樣品準確快速的篩選，是目前檢測技術(shù)急需突破的難點之一。
另一方面，因抗生素種類的增多以及細菌耐藥性的增強，目前用于奶牛疾病預(yù)防和治療中的藥物種類也大大增多，使得原料奶中的藥物殘留除了常見的β_內(nèi)酰胺類抗生素外，氟喹諾酮類抗生素、氨基糖苷類抗生素的殘留比例也大大增加。這些藥物殘留對人體同樣存在著安全隱患，如氟喹諾酮類藥物在人體內(nèi)的殘留易引起人體神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)， 嚴重時還會誘發(fā)癲癇病，并伴有潛在的催畸作用，氨基糖苷類藥物則均具有耳毒性和腎臟毒性，能損害腦神經(jīng)、耳蝸神經(jīng)，輕者聽力下降，重者永久性耳聾，會對近端腎曲管有損害， 造成血尿、腎功能衰退等，此外，這些藥物的長期服用還易引起細菌耐藥性。因此，在原奶收購環(huán)節(jié)，急需一種可以快速檢測多種抗生素殘留的方法以幫助檢驗機構(gòu)和企業(yè)節(jié)約時間、 降低成本、提高效率。
目前，針對氟喹諾酮和氨基糖苷類抗生素的檢測方法多是酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng) (ELISA)、高效液相色譜(HPLC)或液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)等方法。這些方法作為一種實驗室常規(guī)方法具有準確、靈敏度高、重復(fù)性好等特點，然而，由于存在對設(shè)備、環(huán)境、操作技能等要求，檢測周期較長、價格昂貴，因而其檢測主要集中在大型科研檢測機構(gòu)或大型企業(yè)實驗室里，不適合中小企業(yè)和眾多奶站的大規(guī)模樣本篩選使用。在快速檢測方面，現(xiàn)有的快速檢測方法主要集中β -內(nèi)酰胺類抗生素檢測上，比如UNISENS0R、β -STAR、ROSA、SNAP等，而針對氟喹諾酮和氨基糖苷類抗生素的快速檢測產(chǎn)品則幾乎沒有，并且這些方法均是僅針對一種抗生素進行檢測，由于牛奶抗生素檢測指標較多，單個檢測指標的方法則意味著一個原奶樣本就需要使用多個檢測產(chǎn)品進行多次檢測，既耗費了時間，也浪費了人力、財力。因此急需開發(fā)多指標快速檢測方法以滿足日益增加的檢測需求。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種能夠同時檢測食品中多種抗生素殘留檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用；發(fā)明主要目的在于克服傳統(tǒng)的檢測方法繁瑣，檢測耗時長，在實際工作中應(yīng)用局限性大等缺陷，同時改變了單一項目檢測和多種檢測項目簡單的合并檢測的局面，從而提供一種更加快速、簡捷、性價比高、安全的檢測試劑盒及其檢測方法。
食品中多殘留金標快速檢測試劑盒，所述試劑盒包括檢測條和塑料卡殼，所述檢測條是由樣品墊、金標抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊組成。所述金標抗體結(jié)合墊是由膠體金標記的慶大霉素單克隆抗體、膠體金標記的卡那霉素單克隆抗體和膠體金標記的氟喹諾酮類單克隆抗體組成；所述硝酸纖維素膜中部包被有檢測線和控制線，檢測線設(shè)置有能與金標抗體結(jié)合墊上三種單克隆抗體進行特異性結(jié)合的蛋白偶聯(lián)物，蛋白偶聯(lián)物分別為環(huán)丙沙星-BSA偶聯(lián)物、慶大霉素-BSA偶聯(lián)物、卡那霉素-BSA偶聯(lián)物，控制線設(shè)置有羊抗鼠 IgG單克隆抗體。
所述金標抗體結(jié)合墊上的膠體金標記慶大霉素單克隆抗體由慶大霉素單克隆抗體與25nm的膠體金顆粒結(jié)合在一起；
膠體金標記卡那霉素單克隆抗體由卡那霉素單克隆抗體與25nm的膠體金顆粒結(jié)合在一起；
膠體金標記氟喹諾酮類單克隆抗體由氟喹諾酮類單克隆抗體與60nm的膠體金顆粒結(jié)合在一起。
所述硝酸纖維素膜上檢測線的環(huán)丙沙星-BSA偶聯(lián)物、慶大霉素-BSA偶聯(lián)物、卡那霉素-BSA偶聯(lián)物的包被濃度分別為O. 08,0. 13和O. 15mg/mL，包被量均為I μ L/cm ；
控制線上包被羊抗鼠IgG單克隆抗體，濃度為lmg/mL，包被量為I μ L/cm。
一種多殘留金標快速檢測試劑盒的制備方法闡述如下
I)金標抗體結(jié)合墊的制備
a.空白膠體金的制備
采用檸檬酸鹽還原法制備膠體金顆粒，通過調(diào)節(jié)氯金酸和檸檬酸三鈉加入量制備膠體金顆粒大小為25nm和60nm的膠體金溶液。煉制過程中溶液的顏色會發(fā)生變化，當溶液的顏色不再發(fā)生變化時保持沸騰狀態(tài)IOmin后將燒瓶置于室溫，充分冷卻后，取出反應(yīng)用的轉(zhuǎn)子，膠體金溶液4°C冷藏保存，保質(zhì)期為I個月；
b.金標抗體重懸液的配制
第一步用分析天平稱取Tris O. 605g,加入IL燒杯中。
第二步用分析天平稱取蔗糖25. OOOg,加入以上燒杯中。
第三步500mL量筒量取純水500mL，加入上述燒杯中，使其充分溶解。
第四步于磁力攪拌器上溫和攪拌，使各組份充分溶解、混勻。
第五步將上述液體用4mol HCl調(diào)節(jié)pH值至8. 2±0.1。
第六步用分析天平稱取牛血清白蛋白(BSA) 5. 000g，加入以上燒杯中
第七步再次于磁力攪拌器上溫和攪拌，使BSA充分溶解、混勻。
第八步將上述液體用O. 22 μ m微孔濾膜無菌過濾，過濾后的液體裝入500mL試劑瓶中，貼簽，4 °C備用，保存有效期2個月。
c.膠體金標記抗體的制備
分別取金顆粒大小為25nm或60nm的膠體金溶液IOOmL,在攪拌狀態(tài)下加入0.1M 碳酸鉀150 200 μ L,保持7 10分鐘后,緩慢加入相應(yīng)單克隆抗體進行抗體的金標記， 繼續(xù)攪拌30min后逐滴加入25%的BSA溶液使之終濃度達到0. 4%，持續(xù)攪拌30min，最后離心，吸除上清，用金標抗體重懸液將沉淀金標抗體充分重懸；整個反應(yīng)溫度控制室溫。
慶大霉素單克隆抗體使用25nm的膠體金顆粒溶液進行標記，標記量為3 μ g/mL ；卡那霉素單克隆抗體使用25nm的膠體金顆粒溶液進行，標記量為3 μ g/mL ;氟喹諾酮類單克隆抗體使用60nm的膠體金顆粒溶液進行標記,標記量為5 μ g/mL。
d.金標抗體結(jié)合墊的制備
將重懸好的金標抗體包被于預(yù)先切割好的尺寸為lcm*30cm的玻璃纖維素膜上， 包被量為2mL/30cm，37°C干燥過夜，密封避光干燥處保存；
2)硝酸纖維素膜上T、C線的包被
a.慶大霉素-蛋白偶聯(lián)物的制備
稱取40mg慶大霉素硫酸鹽和IOmgBSA,分別溶解于ImL的蒸餾水中，將BSA溶液逐滴加入到慶大霉素溶液中，室溫下于磁力攪拌器上攪拌2h以上。取120mgEDC -HCl溶于 ImL蒸餾水中，再逐滴加入到上述溶液中，在室溫下繼續(xù)攪拌Ih以上，然后于4°C放置過夜。 用PBS透析3天后，分裝，-20°C貯存。
b.卡那霉素-蛋白偶聯(lián)物制備
稱取卡那霉素硫酸鹽28mg和BSA14mg分別溶于500 μ L蒸懼水中，混合后于磁力攪拌器上攪拌。取76mgEDC. HCl溶于ImL蒸餾水中，再逐滴加入到上述混合溶液中，在室溫下攪拌過夜。用O. OlMPBS透析3次以上，離心分裝，-20°C貯存。
c.環(huán)丙沙星-蛋白偶聯(lián)物的制備稱取20mg環(huán)丙沙星鹽酸鹽、IOmgNHS和12. 5mg EDC · HCl充分溶解于ImL 二甲基甲酰胺(DMF)中，于室溫下攪拌24h，得到環(huán)丙沙星(CPLX)反應(yīng)液。再稱取BSA 50mg，使之充分溶解在3mL PBS (pH值7. 4)中，將CPLX反應(yīng)液逐滴緩慢滴加到該BSA溶液中，并于室溫下攪拌3h，然后用PBS透析3d，每天換2次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)。以 3000r / min離心20min，收集上清，并分裝-20°C貯存。
d. T、C線的包被
調(diào)試好二維噴點平臺，將配制好的三種蛋白偶聯(lián)物通過劃線的方式按順序包被在硝酸纖維素膜上作為檢測線，同時進行羊抗鼠單克隆抗體的包被作為控制線，37° C干燥 2h，密封避光干燥處保存；
硝酸纖維素膜上包被有三條檢測線和一條控制線，三條檢測線中Tl線為環(huán)丙沙星-BSA偶聯(lián)物、T2線為慶大霉素-BSA偶聯(lián)物、T3線為卡那霉素-BSA偶聯(lián)物，其包被濃度分別為O. 08,0. 13和O. 15mg/mL，包被量均為I μ L/cm ;控制線上包被羊抗鼠單克隆抗體，濃度為lmg/mL,包被量為I μ L/cm。
3)試紙條的組裝
將樣品墊、金標抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊按序搭接黏貼在PVC底板上，將貼好的底板在切條機上切割成寬為4mm的試紙條，試紙條固定在塑料卡殼內(nèi)。
應(yīng)用本發(fā)明試劑盒檢測食品中慶大霉素殘留，包括以下步驟
一、牛奶樣本操作
在進行檢測前先完整閱讀使用說明書；
脫脂取l-2mL奶樣于離心管中，2000 X g (相當于5000rpm),離心IOmin,去除上層脂肪部分；
吸取脫脂奶樣100 μ L于試管中，再加入100 μ L樣品稀釋液，混勻。
用塑料滴管吸取待測溶液，垂直滴加4滴于檢測卡的加樣孔中，加樣同時開始計時；
10-15分鐘即可進行結(jié)果判讀，30分鐘后結(jié)果無效。
二、結(jié)果判斷
讀取結(jié)果時，檢測卡應(yīng)如圖所示擺放方式置于觀察者的正面。請勿從檢測卡側(cè)面或倒置檢測卡進行結(jié)果觀察。(Tl線檢測氟喹諾酮類、T2線檢測慶大霉素、T3線檢測卡那霉素)
陰性T線(檢測線，靠近加樣孔一端)和C線(對照線，最上端)均顯色，判斷為陰性，表示牛奶樣品中氨基糖苷類藥物和氟喹諾酮類藥物濃度低于說明書中規(guī)定的最低殘留檢測限。
陽性C線顯色，只要出現(xiàn)T線不顯色的結(jié)果，判斷相對應(yīng)檢測藥物的殘留量超過說明書規(guī)定的檢測限，判定為陽性；
無效C線未顯色，表明不正確的操作過程或檢測條已失效。在此情況下，應(yīng)再次仔細閱讀說明書，并用新的檢測條重新測試。如問題仍然存在，應(yīng)停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。
三、特異性
本產(chǎn)品與鏈霉素、新霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、氯霉素和磺胺類等其他藥物的交叉反應(yīng)率〈O. 1%。
四、儲存及有效期
本產(chǎn)品應(yīng)在室溫下、陰涼避光干燥處保存，切勿冷凍，有效期12個月。批號及生產(chǎn)日期見包裝盒。
本發(fā)明試劑盒的技術(shù)原理如下
根據(jù)抗原抗體反應(yīng)原理，進行抗體膠體金的有效標記，同時在硝酸纖維素膜上依次劃制環(huán)丙沙星、慶大霉素和卡那霉素-蛋白偶聯(lián)物，偶聯(lián)物與樣本中的氟喹諾酮類、卡那霉素以及慶大霉素殘留物共同競爭膠體金標記氟喹諾酮類、慶大霉素和卡那霉素單克隆抗體形成有效的競爭抵制反應(yīng)作為檢測線，羊抗鼠抗體作為控制線。在層析過程中陽性樣本中的目標物與金標結(jié)合墊上金標復(fù)合物進行結(jié)合，當層析到檢測線時，游離的金標抗體與與檢測線上蛋白偶聯(lián)物相結(jié)合，同時由于抗原抗體的反應(yīng)為可逆反應(yīng)，蛋白偶聯(lián)物還競爭已與目標物結(jié)合的金標抗體從而被檢測線捕獲顯色，樣本中目標物越多檢測線顯色就越淺，當樣本中的目標物達到一定濃度時，檢測線由于捕獲不到金標抗體不再顯色；多余的金標復(fù)合物繼續(xù)層析，達到控制線時與包被有羊抗鼠抗體的控制線捕獲顯色。
有益效果
該試劑盒是將小分子獸藥氨基糖苷類藥物中最常見的慶大霉素、卡那霉素和氟喹諾酮類通過膠體金免疫層析技術(shù)實現(xiàn)對乳制品中多種殘留物質(zhì)的快速檢測，主要通過對樣本進行簡單的前處理，在IOmin內(nèi)即可實現(xiàn)多種殘留物質(zhì)的殘留檢測。該試劑盒具有以下特點
I.前處理簡單只需二步就可實現(xiàn)對乳制品的檢測，一離心、二倍比稀釋；
2.檢測時間短在10_20min內(nèi)即可實現(xiàn)對氟喹諾酮類、慶大霉素和卡那霉素的殘留檢測；
3.檢測成本低相對于儀器、ELISA以及各個檢測項目的單獨操作檢測，多殘留檢測的所需檢測費用更低；
4.適用范圍廣由于試劑盒對操作環(huán)境要求不高同時無昂貴儀器要求，可用于實驗室和野外以及現(xiàn)場的檢測；
5.人員要求低由于在整個檢測過程中需用的儀器及試劑較少，對實驗人員的專業(yè)要求不高，整個操作過程簡單，檢測結(jié)果肉眼就能進行判讀；
6.安全性較高試劑盒內(nèi)無任何有毒有害物質(zhì)。
本發(fā)明所研究的多殘留金標快速檢測試劑盒，實現(xiàn)了對乳制品中多種抗生素的殘留檢測，其檢測時間短，檢測成本低，檢測范圍廣；檢測靈敏度符合國家和歐盟標準。因此， 它符合國家對食品安全與出入境檢驗檢疫中檢測技術(shù)的發(fā)展要求，有利于提高食品安全與出入境檢驗檢疫工作的效率與準確率，有利于保證食品安全與進出口貿(mào)易，從而在公共安全領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。


圖1 :試劑盒檢測過程示意圖
圖2:檢測結(jié)果判定方法；
圖3:實際結(jié)果的判定；
圖4:實際結(jié)果的判定
圖5:試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖·具體實施方式
以下對本發(fā)明做進一步的的具體實施說明
實施例I試劑盒的靈敏度實驗
一、檢測樣本
隨機抽取20份經(jīng)《農(nóng)業(yè)部1163號公告_7_2009動物性食品中慶大霉素殘留檢測高效液相色譜法》方法、《GB/T 22969-2008奶粉和牛奶中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》方法和《GB/T 21312-2007動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》方法檢測過不含有這類物質(zhì)的陰樣進行靈敏度檢測實驗。
二、污染樣本的制備
1.標準品溶液的配制
分別配制慶大霉素和卡那霉素混合標準溶液，終濃度為慶大霉素10 μ g/mL、卡那霉素10 μ g/mL ;分別配制8種氟喹諾酮類藥物的標準溶液，如恩諾沙星、達氟沙星、環(huán)丙沙星等，溶液的濃度均為5 μ g/mL。
2.樣品添加
取20份陰性奶樣，每份奶樣分為4組一組作為空白對照；一組按照ImL奶樣 +5 μ L準溶液進行添加；一組按照ImL奶樣+10 μ L標準溶液進行添加；一組按照ImL奶樣 +15 μ L標準溶液進行添加。每組每份奶樣制備體積為7mL。按此方法配制成的奶樣，其中所含氨基糖苷類各藥物依次為慶大霉素和卡那霉素0、0. 050,0. 100和O. 150 μ g/mL, 8種氟喹諾酮類藥物的含量分別為0,0. 025,0. 050和O. 075 μ g/mL。
三、靈敏度實驗
取上述制備好的80份污染奶樣，分別使用三個不同批號的多殘留金標快速檢測試劑盒進行檢測，每份奶樣重復(fù)檢測3次，檢測方法依據(jù)試劑盒說明書。以95%出現(xiàn)陽性結(jié)果的最低濃度作為試劑盒的檢測靈敏度。
20份奶樣不同濃度添加樣本的檢測結(jié)果見表I、表2和表3。結(jié)果表明，慶大霉素和卡那霉素的檢測靈敏度為O. 100 μ g/mL，8種氟喹諾酮類藥物的檢測靈敏度為O. 050 μ g/mLo
表I多殘留金標快速檢測試劑盒檢測慶大霉素殘留的檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種多殘留金標快速檢測試劑盒，所述試劑盒包括檢測條和塑料卡殼，所述檢測條由樣品墊、金標抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊組成；其特征在于所述金標抗體結(jié)合墊是由膠體金標記的慶大霉素單克隆抗體、膠體金標記的卡那霉素單克隆抗體和膠體金標記的氟喹諾酮類單克隆抗體組成；所述硝酸纖維素膜中部包被有檢測線和控制線，檢測線設(shè)置有能與金標抗體結(jié)合墊上三種單克隆抗體進行特異性結(jié)合的蛋白偶聯(lián)物，蛋白偶聯(lián)物分別為環(huán)丙沙星-BSA偶聯(lián)物、慶大霉素-BSA偶聯(lián)物、卡那霉素-BSA偶聯(lián)物，控制線設(shè)置有羊抗鼠IgG單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種多殘留金標快速檢測試劑盒，所述金標抗體結(jié)合墊上的膠體金標記的慶大霉素單克隆抗體由慶大霉素單克隆抗體與25nm的膠體金顆粒結(jié)合組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種多殘留金標快速檢測試劑盒，所述膠體金標記的卡那霉素單克隆抗體由卡那霉素單克隆抗體與25nm的膠體金顆粒結(jié)合組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種多殘留金標快速檢測試劑盒，所述膠體金標記的氟喹諾酮類單克隆抗體由氟喹諾酮類單克隆抗體與60nm的膠體金顆粒結(jié)合組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種多殘留金標快速檢測試劑盒，所述硝酸纖維素膜上檢測線 環(huán)丙沙星-BSA偶聯(lián)物、慶大霉素-BSA偶聯(lián)物、卡那霉素-BSA偶聯(lián)物的包被濃度分別為0.08,0. 13 和 0. 15mg/mL，包被量均為 I u L/cm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種多殘留金標快速檢測試劑盒，所述控制線上包被羊抗鼠IgG單克隆抗體,濃度為lmg/mL,包被量為Iy L/cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種多殘留金標快速檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟 1)金標抗體結(jié)合墊的制備 a.空白股體金的制備 采用檸檬酸鹽還原法制備膠體金顆粒，通過調(diào)節(jié)氯金酸和檸檬酸三鈉加入量制備顆粒大小為25nm和60nm的膠體金溶液； b.金標抗體重懸液的配制； c.膠體金標記抗體的制備 分別取金顆粒大小為25nm或60nm的膠體金溶液IOOmL,在攪拌狀態(tài)下加入0. IM碳酸鉀150 200 u L,保持7 10分鐘后,緩慢加入相應(yīng)單克隆抗體進行抗體的金標記,繼續(xù)攪拌30min后逐滴加入25%的BSA溶液使之終濃度達到0. 4%，持續(xù)攪拌30min，最后離心，吸除上清，用金標抗體重懸液將沉淀金標抗體充分重懸；整個反應(yīng)溫度控制室溫； 慶大霉素單克隆抗體使用25nm的膠體金顆粒進行標記，標記量為3 y g/mL ;卡那霉素單克隆抗體使用25nm的膠體金顆粒進行，標記量為3 y g/mL ;氟喹諾酮類單克隆抗體使用60nm的膠體金顆粒進行標記,標記量為5 u g/mL ； d.金標抗體結(jié)合墊的制備 將重懸好的金標抗體包被于預(yù)先切割好的尺寸為lcm*30cm的玻璃纖維素膜上，包被量為2mL/30cm，37°C干燥過夜，密封避光干燥處保存； 2)硝酸纖維素膜上T、C線的包被 a.慶大霉素-蛋白偶聯(lián)物的制備稱取40mg慶大霉素硫酸鹽和IOmgBSA,分別溶解于ImL的蒸餾水中，將BSA溶液逐滴加入到慶大霉素溶液中，室溫下于磁力攪拌器上攪拌2h以上；取120mg EDC HCl溶于ImL蒸餾水中，再逐滴加入到上述溶液中，在室溫下繼續(xù)攪拌Ih以上，然后于4°C放置過夜；用PBS透析3天后，分裝，-20°C貯存； b.卡那霉素-蛋白偶聯(lián)物制備 稱取卡那霉素硫酸鹽28mg和BSA14mg分別溶于500ul蒸懼水中，混合后于磁力攪拌器上攪拌。取76mgEDC HCl溶于ImL蒸餾水中，再逐滴加入到上述混合溶液中，在室溫下攪拌過夜。用0. OlMPBS透析3次以上，離心分裝，-20°C貯存； c.環(huán)丙沙星-蛋白偶聯(lián)物的制備 稱取20mg環(huán)丙沙星鹽酸鹽、IOmgNHS和12. 5mgEDC HCl充分溶解于ImLDMF中，于室溫下攪拌24h，得到CPLX反應(yīng)液。再稱取BSA 50mg，使之充分溶解在3mL PBS，pH值7. 4，將CPLX反應(yīng)液逐滴緩慢滴加到該BSA溶液中，并于室溫下攪拌3h，然后用PBS透析3d，每天換2次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)。以3000r / min離心20min,收集上清,并分裝-20°C貯存； d.T、C線的包被 調(diào)試好二維噴點平臺，將配制好的三種蛋白偶聯(lián)物通過劃線的方式按順序包被在硝酸纖維素膜上作為檢測線，同時進行羊抗鼠單克隆抗體的包被作為控制線，37°C干燥2h，密封避光干燥處保存； 硝酸纖維素膜上包被有三條檢測線和一條控制線，三條檢測線為環(huán)丙沙星-BSA偶聯(lián)物、慶大霉素-BSA偶聯(lián)物、卡那霉素-BSA偶聯(lián)物，其包被濃度分別為0. 08,0. 13和0. 15mg/mL,包被量均為I ii L/cm ;控制線上包被羊抗鼠單克隆抗體,濃度為lmg/mL,包被量為I y L/cm ； 3)試紙條的組裝 將樣品墊、金標抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊按序搭接黏貼在PVC底板上，將貼好的底板在切條機上切割成寬為4_的試紙條,試紙條固定在塑料卡殼內(nèi)。
8.如權(quán)利要求1-6任一所述的多殘留金標快速檢測試劑盒在食品檢測中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了多殘留金標快速檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用，屬于免疫學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明試劑盒主要包括多殘留金標快速檢測卡，所述檢測卡包括檢測條和塑料卡殼，所述檢測條是由樣品墊、金標抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊組成；所述金標結(jié)合墊是由膠體金標記的慶大霉素單克隆抗體、膠體金標記的卡那霉素單克隆抗體和膠體金標記的氟喹諾酮類單克隆抗體組成；所述硝酸纖維素膜中部包被有檢測線和控制線，檢測線設(shè)置蛋白偶聯(lián)物，控制線是羊抗鼠IgG單克隆抗體。本發(fā)明為快速檢測試劑盒，僅需通過簡單的前處理就能實現(xiàn)多種殘留物質(zhì)的同時檢測，整個操作過程簡單、攜帶方便、結(jié)果判定快速、準確，適用于現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本的定性篩查。
文檔編號G01N33/577GK102980980SQ20121042774
公開日2013年3月20日 申請日期2012年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月30日
發(fā)明者唐慧林, 何艷玲, 于重楠, 劉敏, 王麗麗, 王麗哲, 趙瑜 申請人:北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司