專利名稱：乙肝病毒前s1抗原檢測(cè)試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物物質(zhì)檢測(cè)分析領(lǐng)域，特別涉及一種乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
乙型病毒性肝炎是嚴(yán)重危害我國(guó)人民身體健康的傳染病。長(zhǎng)期以來(lái)，檢測(cè)乙型肝炎病毒的血清標(biāo)志物主要為乙肝“兩對(duì)半”指標(biāo)。但它不能完全反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制與傳染性情況。由于其檢測(cè)方法的靈敏度、特異性的限制以及HBV為逃避宿主的免疫反應(yīng)常發(fā)生變異，往往導(dǎo)致“兩對(duì)半”檢測(cè)結(jié)果的誤讀。HBV DNA檢測(cè)是HBV復(fù)制最直接的指標(biāo)，但此方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求嚴(yán)格，不易推廣，特別是廣大基層醫(yī)療單位還難以開(kāi)展。HBV 前-SI抗原與乙肝DNA的復(fù)制密切相關(guān)。HBV前SI蛋白的定量檢測(cè)與HBV DNA的檢測(cè)有良好的一致性，是反映HBV復(fù)制活躍的可靠指標(biāo)，可以作為HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的重要標(biāo)志物，適合于各級(jí)醫(yī)院開(kāi)展。檢測(cè)前SI抗原可避免由于病毒變異或其他因素造成的HBeAg假陰性的影響，協(xié)助臨床醫(yī)生對(duì)病情做出正確的判斷，有效地指導(dǎo)臨床抗病毒治療。所以，前SI蛋白已成為臨床檢測(cè)乙型肝炎病毒感染和復(fù)制程度的又一血清標(biāo)志物，可做為臨床上對(duì)乙肝的病毒篩查、病情判斷和抗病毒療效監(jiān)控的重要補(bǔ)充手段。化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)是在酶標(biāo)記和免疫反應(yīng)相結(jié)合的基礎(chǔ)上，引入化學(xué)發(fā)光物為底物，通過(guò)測(cè)定光信號(hào)來(lái)判斷檢測(cè)結(jié)果。其利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體，使其從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)，當(dāng)中間體從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)會(huì)釋放等能級(jí)的光子，對(duì)光子進(jìn)行測(cè)定而進(jìn)行定量分析，該檢測(cè)方法具有很高的靈敏度。現(xiàn)有技術(shù)中雖然有將化學(xué)發(fā)光檢測(cè)應(yīng)用于乙肝病毒檢測(cè)的技術(shù)，但現(xiàn)有技術(shù)中存在產(chǎn)品精度低和穩(wěn)定性差的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例提供一種乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒及其制備方法，本發(fā)明提供的產(chǎn)品檢測(cè)簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定及重復(fù)性好。本發(fā)明提供的乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒，包括乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品、乙肝病毒前SI抗體包被微孔板、酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原抗體的標(biāo)記結(jié)合物、化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液，其特征在于包被濃度為2. 5μ g/
mLo乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品為采用10份正常人的血清混勻后制得，乙肝病毒前Si抗原陽(yáng)性對(duì)照品為臨床乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性血清稀釋后制得。標(biāo)記結(jié)合物為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗乙肝病毒表面抗原抗體，稀釋倍數(shù)為
I 2500。化學(xué)發(fā)光底物液為魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液，包括底物A液和底物B液，其中底物A液包括I. 8g/L的魯米諾和O. 2g/L的對(duì)碘苯酚，底物B液包括O. 5g/L的過(guò)氧化脲。
濃縮洗滌液為30倍濃縮洗滌液，具體為加入濃度為I. 5g/L的吐溫-20和體積比為O. 05%的PC300防腐劑的O. 3M ρΗ7· 4的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明提供的乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒的制備方法包括制備乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品；制備乙肝病毒前SI抗體包被的包被微孔板；制備標(biāo)記結(jié)合物，所述標(biāo)記結(jié)合物為酶標(biāo)記的抗乙肝病毒表面抗原抗體；制備化學(xué)發(fā)光底物液；以及制備濃縮洗滌液； 其中，制備乙肝病毒前SI抗體包被的包被微孔板包括用包被液將乙肝病毒前SI單克隆抗體稀釋成包被濃度為2. 5 μ g/mL，以每孔100μ I加入微孔板，然后置于4°C冰箱48小時(shí)；棄去微孔板中的包被液，然后每孔加入150 μ I的封閉液,置于4°C冰箱封閉24小時(shí)；棄去封閉液后，置于37°C孵育箱8小時(shí)烘干。制備乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品包括采用10份正常人的血清混勻后制得所述乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品；臨床乙肝病毒前Si抗原陽(yáng)性血清稀釋后制得所述乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品。標(biāo)記結(jié)合物為通過(guò)戊二醛二步法制得的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原單克隆抗體的稀釋液，稀釋濃度為I : 2500。 化學(xué)發(fā)光底物液為魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液，包括底物A液和底物B液；底物A液用O. 05M pH8. 6的Tris-HCl緩沖液溶解魯米諾和對(duì)碘苯酚制得，其中魯米諾濃度為I. 8g/L，對(duì)碘苯酚濃度為O. 2g/L ;底物B液用O. 05M pH8. 6的Tris-HCl緩沖液稀釋過(guò)氧化脲制得，其中過(guò)氧化脲的濃度為O. 5g/L。制備濃縮洗滌液包括稱取O. 89克NaH2PO4 · 2H20和5. 56克KH2PO4 · 3H20,加到IOOml水中，然后加入150 μ I吐溫-20和50 μ I PC300。


此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。在附圖中圖I為本發(fā)明乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒的制備方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。在此，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，但并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。實(shí)施例一本實(shí)施例提供一種乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒，包括乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品、乙肝病毒前SI抗體包被微孔板、酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原抗體的標(biāo)記結(jié)合物、化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液，包被濃度為2. 5 μ g/mL。該乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒的使用步驟包括(I)用蒸餾水稀釋洗滌液，混勻后使用；
(2)在包被微孔板上設(shè)陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和待測(cè)樣品孔；(3)陰性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照品，陽(yáng)性 對(duì)照孔中加入陽(yáng)性對(duì)照品，待測(cè)樣品孔中加入樣品，每孔100μ 1，37°C溫育60分鐘。(4)用稀釋后的洗滌液洗微孔板，洗滌5次，然后拍干。(5)在各對(duì)照孔和樣品孔中加入I : 2500稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原單克隆抗，100 μ I/孔，37°C溫育60分鐘。(6)用洗滌液洗微孔板，洗滌5次，然后拍干。(7)在各對(duì)照孔和樣品孔中加入發(fā)光底物A液和B液然后混勻，50 μ I/孔，室溫避光放置5 10分鐘。(8)用化學(xué)發(fā)光分析儀測(cè)量相對(duì)發(fā)光值。其中，陽(yáng)性閾值=陰性對(duì)照相對(duì)發(fā)光值Χ2. I ;當(dāng)待測(cè)樣品的相對(duì)發(fā)光值彡陽(yáng)性閾值時(shí)，判斷為陽(yáng)性；當(dāng)待測(cè)樣品的相對(duì)發(fā)光值<陽(yáng)性閾值時(shí)，判斷為陰性。實(shí)施例二如圖I所示，圖I是本發(fā)明實(shí)施例提供的一種乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒的制備方法流程圖，包括步驟SllO :制備乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品;步驟S120 :制備乙肝病毒前SI抗體包被的包被微孔板；步驟S130 :制備標(biāo)記結(jié)合物，所述標(biāo)記結(jié)合物為酶標(biāo)記的抗乙肝病毒表面抗原抗體；步驟S140 :制備化學(xué)發(fā)光底物液；以及步驟S150 :制備濃縮洗滌液。(一 )乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品的配制陰性對(duì)照品的配制方法是將10份正常人的血清混勻后，60°C水浴滅活I(lǐng)小時(shí)后分裝；陽(yáng)性對(duì)照品的配制方法是將臨床乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性血清適當(dāng)稀釋，混勻后，60°C水浴滅活I(lǐng)小時(shí)后分裝。其中稀釋液含0.05M pH7.4的PBS，50%小牛血清，2%甘油和體積比為O. 1%PC300防腐劑，稀釋的倍數(shù)使陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品的發(fā)光值比值大于10。本實(shí)施例采用人血清配置檢測(cè)用陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品，使得檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確，更可靠。(二)乙肝病毒前SI抗體包被微孔板的制備微孔板為96孔的不透明聚苯乙烯微孔板。配制O. 05M pH9. 6的碳酸鹽緩沖液包被液，配制方法是稱取2. 2克的Na2CO3和I. O克NaHCO3溶于IOOml蒸餾水中，混勻備用。配制O. 05M pH7. 4PBS封閉液，配置方法是稱取O. 3克NaH2PO4 · 2Η20、I. 85克KH2PO4 · 3Η20和I. 8克氯化鈉溶于200ml蒸餾水中，混勻后加入O. 2克牛血清白蛋白和200 μ I PC300，混勻備用。其中PC300為防腐劑，其活性成分主要是2-甲基-4-異噻唑啉_3_酮(MC I)和
5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)。這兩種成分可以抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，可以有效地控制體外診斷試劑中微生物的生長(zhǎng)，是一種理想的可替代硫汞撒、疊氮化鈉和慶大霉素等的生物防腐劑。
包被步驟包括(I)用以上配制的包被液將前SI單抗稀釋成包被濃度為2. 5 μ g/mL，以每孔100 μ I加入微孔板,然后置于4°C冰箱48小時(shí)。(2)棄去微孔板中的包被液，然后每孔加入150 μ I的O. 05Μ pH7. 4PBS封閉液(含1%牛血清白蛋白和體積比為O. 1%的PC300)，置于4°C冰箱封閉24小時(shí)。(3)棄去封閉液后，置于37°C孵育箱8小時(shí)烘干。本申請(qǐng)制備的包被微孔板的產(chǎn)品性能穩(wěn)定，重復(fù)性好。(三)酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原抗體的制備
標(biāo)記用酶是辣根過(guò)氧化物酶，乙肝病毒表面抗原抗體可以是單克隆抗體或者多克隆抗體。以戊二醛二步法進(jìn)行辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記為例說(shuō)明本發(fā)明的酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原抗體的制備。標(biāo)記方法具體包括(I)稱取辣根過(guò)氧化物酶25mg溶于O. 5毫升I. 25%戊二醛溶液中(用O. 1ΜρΗ6. 8PBS配制)，于室溫靜置過(guò)夜。(2)次日，將酶與戊二醛反應(yīng)后的溶液用O. OlM Ph7. 4PBS充分透析。(3)將待標(biāo)記的抗體12. 5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入以上透析好的酶溶液中。(4)用IM PH9. 5碳酸緩沖液O. 25ml，繼續(xù)攪拌3小時(shí)。(5)加O. 2M賴氨酸O. 25ml，混勻后，置室溫2小時(shí)。(6)在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4°C I小時(shí)。(7)以3000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心半小時(shí)，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于O. 5mL的O. 15M PH7. 4的PBS中。(8)將上述溶液裝入透析袋中，用O. 15M PH7. 4的PBS緩沖鹽水透析去除銨離子后，以10，000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，分裝后，冰凍保存。酶標(biāo)記抗體的最佳使用稀釋倍數(shù)是用洗滌液作I : 2500稀釋(100ml濃縮洗滌液的配方是稱取 O. 89 克 NaH2P04 · 2H20 和 5. 56 克 KH2P04 ·3Η20，加到 IOOml 水中，加入 150 μ I吐溫-20和50 μ I PC300，攪勻。使用時(shí)，用蒸餾水作30倍稀釋)。飽和硫酸銨和半飽和硫酸銨的制備包括取800g的硫酸銨加入到IL水中，然后加熱攪拌溶解后，室溫靜置過(guò)夜后，上清液即為飽和硫酸銨。取該上清液400毫升加20毫升IM的鹽酸，再補(bǔ)加380毫升蒸餾水，混勻后即為半飽和硫酸銨。(四)化學(xué)發(fā)光底物液的制備首先配制O. 05M pH8. 6的Tris-HCl緩沖液。配置方法是稱取O. 61克三羥甲基氨基甲烷溶于100毫升蒸餾水中，并加入105微升濃鹽酸，混勻后加入50 μ 1PC300防腐劑，混勻備用。底物液包括底物A液和底物B液。底物A液的配制方法是含I. 8g/L魯米諾和O. 2g/L對(duì)碘苯酚，用以上配制的O. 05M ρΗ8· 6的Tris-HCl緩沖液溶解。底物B液含O. 5g/L的過(guò)氧化脲，用以上配制的O. 05M pH8. 6的Tri s-HCl緩沖液做稀釋液。使用時(shí)A液和B液等量混合后使用，每孔加100 μ I ο如果發(fā)光底物的含量不在合適的范圍之內(nèi)，則發(fā)出的光粒子的量不能維持在恒定平臺(tái)期，會(huì)影響前后檢測(cè)時(shí)間差的重復(fù)性，即造成批間和批內(nèi)實(shí)驗(yàn)的誤差擴(kuò)大。本發(fā)明提供的底物發(fā)光的平臺(tái)期長(zhǎng)，靈敏度高、寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍、光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、分析方法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果穩(wěn)定、誤差小、安全性好及使用期長(zhǎng)等特點(diǎn)，產(chǎn)品臨床性能優(yōu)異。(五)濃縮洗滌液的配制以IOOml 濃縮洗液為例，稱取 O. 89 克 NaH2PO4 · 2H20 和 5. 56 克 KH2PO4 · 3H20,加到IOOml水中，加入150 μ I吐溫-20和50 μ I PC300，攪勻。使用時(shí)，用蒸餾水作30倍稀釋。通過(guò)精密度測(cè)定、穩(wěn)定性試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)顯示本發(fā)明提供的乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒在精密度高、穩(wěn)定性強(qiáng)和臨床檢測(cè)效果優(yōu)異。(一 )精密度測(cè)定批內(nèi)精密度測(cè)定方法是按實(shí)施例一所述使用方法，重復(fù)10孔檢測(cè)I份精密度參考品，測(cè)定并計(jì)算其變異系數(shù)(CV)值。要求其變異系數(shù)< 15%。 批內(nèi)精密度測(cè)定的發(fā)光值檢測(cè)結(jié)果
孑L 號(hào) ~ ~2 ~3 Γ1 ~5 ~6 ~7 ~8 ~9 ~10發(fā)光值 13268 ~15462 ~13354 ~16658 ~13356 ~14589 ~15547 ~12657 ~14475 ~14638計(jì)算測(cè)定結(jié)果得到批內(nèi)精密度CV = (1254/14400) X 100%= 8. 7%;批內(nèi)精密度
符合要求。批間精密度測(cè)定方法是按實(shí)施例一所述使用方法，作10孔平行測(cè)定精密度參考品，重復(fù)3次試驗(yàn)，測(cè)定并計(jì)算其變異系數(shù)(CV)值。要求其變異系數(shù)<20%。批間精密度測(cè)定的發(fā)光值檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒，包括乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前Si抗原陽(yáng)性對(duì)照品、乙肝病毒前SI抗體包被微孔板、酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原抗體的標(biāo)記結(jié)合物、化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液，其特征在于包被濃度為2. g/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品為采用10份正常人的血清混勻后制得，所述乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品為臨床乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性血清稀釋后制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述標(biāo)記結(jié)合物為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗乙肝病毒表面抗原抗體，稀釋倍數(shù)為I : 2500。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述化學(xué)發(fā)光底物液為魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液，所述魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液包括底物A液和底物B液，其中所述底物A液包括I.8g/L的魯米諾和0. 2g/L的對(duì)碘苯酚，所述底物B液包括0. 5g/L的過(guò)氧化脲。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述濃縮洗滌液為30倍濃縮洗滌液，所述30倍濃縮洗滌液為加入濃度為I. 5g/L的吐溫-20和體積比為0. 05% PC300防腐劑的0.3M pH7. 4的磷酸鹽緩沖液。
6.一種乙肝病毒前SI抗原檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于，該方法包括 制備乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品； 制備乙肝病毒前SI抗體包被的包被微孔板； 制備標(biāo)記結(jié)合物，所述標(biāo)記結(jié)合物為酶標(biāo)記的抗乙肝病毒表面抗原抗體； 制備化學(xué)發(fā)光底物液；以及 制備濃縮洗滌液； 其中，制備乙肝病毒前SI抗體包被的包被微孔板包括用包被液將乙肝病毒前SI單克隆抗體稀釋成包被濃度為2. 5 i! g/mL,以每孔100 u I加入微孔板,然后置于4°C冰箱48小時(shí)； 棄去微孔板中的包被液，然后每孔加入150ii I的封閉液,置于4°C冰箱封閉24小時(shí)； 棄去封閉液后，置于37°C孵育箱8小時(shí)烘干。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，制備乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品包括 采用10份正常人的血清混勻后制得所述乙肝病毒前SI抗原陰性對(duì)照品； 臨床乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性血清稀釋后制得所述乙肝病毒前SI抗原陽(yáng)性對(duì)照品。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述標(biāo)記結(jié)合物為通過(guò)戊二醛二步法制得的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗乙肝病毒表面抗原單克隆抗體的稀釋液，稀釋濃度為I 2500。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物液為魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液，所述魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液包括底物A液和底物B液； 所述底物A液用0. 05M pH8. 6的Tris-HCl緩沖液溶解魯米諾和對(duì)碘苯酚制得，其中魯米諾濃度為I. 8g/L，對(duì)碘苯酚濃度為0. 2g/L ； 所述底物B液用0. 05M pH8. 6的Tris-HCl緩沖液稀釋過(guò)氧化脲制得，其中過(guò)氧化脲的濃度為0. 5g/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述制備濃縮洗滌液包括稱取0.89克NaH2PO4 CH 2O 和 5. 56 克 KH2PO4 WH2O,加到 IOOml 水中，然后加入 150 U I 吐溫-20 和 50 U IPC300。
全文摘要
本發(fā)明實(shí)施例提供一種乙肝病毒前S1抗原檢測(cè)試劑盒及其制備方法。所述乙肝病毒前S1抗原檢測(cè)試劑盒包括乙肝病毒前S1抗原陰性對(duì)照品和乙肝病毒前S1抗原陽(yáng)性對(duì)照品、乙肝病毒前S1抗體包被微孔板、酶標(biāo)記的抗乙肝病毒表面抗原抗體的標(biāo)記結(jié)合物、化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液，其中包被濃度為2.5μg/mL。本發(fā)明提供乙肝病毒前S1抗原檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定及重復(fù)性好。
文檔編號(hào)G01N33/535GK102798718SQ20121031676
公開(kāi)日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2012年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月31日
發(fā)明者吳玉水, 戴振賢, 張劍清, 林炳為 申請(qǐng)人:福建省洪誠(chéng)生物藥業(yè)有限公司