專利名稱：用于生化分析儀定量檢測尿碘的試劑及尿碘檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用檢測試劑及檢測方法，特別是一種用于生化分析儀定量檢測尿碘的試劑及尿碘檢測方法。
背景技術(shù)：
尿碘水平是評價人群碘攝入狀況的重要指標(biāo)，已被國內(nèi)外廣泛采用。當(dāng)前，碘缺乏和碘過量已成為人們同等關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。尿碘檢測已成為指導(dǎo)人群科學(xué)補(bǔ)碘的重要依據(jù)。尿碘檢測是一項復(fù)雜的超微量分析技術(shù)。目前，能夠較準(zhǔn)確測定尿碘且被國內(nèi)外采用的方法有如下三種(1).等離子色譜質(zhì)譜法(ICP-MS)，以下簡稱方法(1)。該方法使用等離子色譜儀， 在近10000°C的高溫下將尿樣中的碘離子氣化。根據(jù)離子的荷質(zhì)比不同，通過離子色譜檢測器檢測碘的含量。美國疾病預(yù)防控制中心及歐洲部分國家采用此方法。此方法準(zhǔn)確度高， 但儀器昂貴，約160萬元人民幣/臺，不適合發(fā)展中國家廣泛采用。(2).砷鈰催化分光光度法，以下簡稱方法O)。該方法根據(jù)碘催化砷鈰氧化還原反應(yīng)的原理，使用分光光度計動態(tài)測定試液中剩余的高價態(tài)鈰的含量來間接測定碘。我國及世界上大多數(shù)國家采用此方法，是我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法(WS/T 107-2006)。但該方法消解過程需要使用恒溫消解儀，反應(yīng)過程需要使用超級恒溫水浴箱，測定過程需要使用分光光度計，且操作時為了使每個樣品的反應(yīng)時間一致，需要準(zhǔn)確間隔30秒加一次試劑，測定時也同樣需要準(zhǔn)確間隔30秒用分光光度計測定一次，若錯漏一次，則前功盡棄。因此，步驟繁瑣，人為負(fù)擔(dān)重，檢測時間長，檢測60份尿樣需時4-5小時，試劑用量大，特別是劇毒化學(xué)品砷的用量大(是本發(fā)明砷的用量的20倍)，對人體會造成傷害。(3).砷鈰催化計時測定法，以下簡稱方法(3)。該方法是本發(fā)明人劉列鈞的已授權(quán)發(fā)明專利(專利號01133682. X)。該方法通過在常溫下使用強(qiáng)氧化劑消解尿樣，根據(jù)碘催化砷鈰氧化還原反應(yīng)的原理，使用指示劑指示反應(yīng)終點，用秒表記取反應(yīng)時間，根據(jù)反應(yīng)時間來計算尿碘含量。該方法對于醫(yī)院(特別是大型醫(yī)院)開展尿碘檢測項目，因操作步驟全是手工操作，檢測時間較長，且需用肉眼判斷反應(yīng)終點，實驗結(jié)果的客觀性不強(qiáng)，故大多數(shù)醫(yī)院還不愿接受。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能簡捷快速準(zhǔn)確檢測出尿中碘含量的用于生化分析儀定量檢測尿碘的試劑及尿碘檢測方法。本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來完成本發(fā)明所用的檢測試劑盛裝于試劑盒內(nèi)，其試劑由以下主要試劑成分組成(1)消解液-過硫酸銨溶液，濃度范圍為0. 3-2. 0mol/Lo(2)試劑Rl-亞砷酸或三氧化二砷溶液，其中砷濃度范圍為0. 01-0. lmol/L。
(3)試劑硫酸鈰銨或硫酸鈰溶液，其中鈰濃度范圍為0. 001-0. lmol/L。(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘化鉀(鈉)或碘酸鉀(鈉)溶液，碘含量為0-500 μ g/ L0所述主要試劑成分及含量的優(yōu)選值為(1) ·消解液-過硫酸銨溶液{c [ (NH4) 2S208] = 1. 3mol/L}；(2) ·試劑 R1-亞砷酸溶液[c (H3AsO3) = 0. 037mol/L]；(3) ·試劑 R2-硫酸鈰銨溶液[c (Ce4+) = 0. 0076mol/L]；(4).系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘酸鉀溶液，碘含量分別為0，50，100，200，300，400μβ/
L0運用本發(fā)明的檢測試劑進(jìn)行尿碘檢測的方法，其主要步驟為1.選用上述檢測試劑；2.消解；準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各50-500 μ 1于試管中，各加100-1000 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中100-110°c消解1小時；將消解完畢的樣品冷卻至室溫；3.設(shè)置生化分析儀測定參數(shù)，3. 1波長單波長，在400_600nm范圍內(nèi)選定一種波長；3. 2樣品、試劑量消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品5-200 μ L，試劑R1 10-300 μ L， 試劑& 10-250 μ L，在各自的用量范圍內(nèi)選定一種用量；3. 3反應(yīng)溫度在30_40°C范圍內(nèi)選定一種溫度；3. 4分析方法終點法或速率法；3. 4. 1 一點終點法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，測定加入試劑&后反應(yīng)3-20min范圍內(nèi)選定的時間點的光密度值；3. 4. 2兩點速率法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，連續(xù)測定加入試劑民后在3-15min 范圍內(nèi)選定的時間段的光密度值變化率；3. 5校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對數(shù)模式(l0git-l0g4p)或樣條函數(shù) (spline)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線；3. 6反應(yīng)方向負(fù)反應(yīng)；4.測定，將消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品、試劑R1、試劑&分別放置于生化分析儀相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)位、樣品位和試劑位中，按步驟“3”所述設(shè)置的生化分析儀測定參數(shù)，啟動儀器進(jìn)行自動測定。所述檢測方法中的樣品、試劑用量及生化分析儀測定參數(shù)的優(yōu)選值為(1)消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各300 μ 1于試管中，各加600 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中于100°c消解1小時；(2)設(shè)置生化分析儀測定參數(shù)，(2. 1)波長:405nm ；(2. 2)樣品、試劑量消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品各25 μ L，試劑R1 120 μ L，試齊[J& 36μ L ；
(2. 3)反應(yīng)溫度:37°C ；(2. 4)分析方法兩點速率法，加入試劑R1反應(yīng)Ο-aiiin，連續(xù)測定加入試劑&后 3min時間段內(nèi)的光密度值的變化率；(2. 5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對數(shù)模式(l0git-l0g4p)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。本發(fā)明的原理使用過硫酸銨消解尿樣，分解尿樣中干擾碘測定的物質(zhì)，利用碘催化砷鈰反應(yīng)的原理，碘含量越高反應(yīng)速度越快，試液中剩余的黃色鈰G+)離子越少。使用生化分析儀在規(guī)定的反應(yīng)時間后測定試液中剩余的鈰G+)的光密度值(一點終點法)或在規(guī)定的時間段連續(xù)監(jiān)測試液的光密度值的變化(兩點速率法)，根據(jù)光密度值或光密度值變化率與碘含量成定量關(guān)系，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算尿碘濃度。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的消解尿樣使用控溫烤箱，樣品消化后再不需要任何中間步驟，直接使用生化分析儀自動測定，人工操作只有加樣消化一步，其余操作步驟全由儀器完成(包括給出測定結(jié)果)。本發(fā)明與背景技術(shù)中的方法( 相比，使用的儀器和操作步驟完全不同，本發(fā)明的自動化程度高，人為誤差小，試劑用量少，檢測時間短，60份樣品僅需1小時10分鐘。 其創(chuàng)新點在于通過調(diào)整主要反應(yīng)試劑砷鈰的比例，加之輔助試劑的作用，使碘的催化反應(yīng)速度按照生化分析儀固有的反應(yīng)曲線方程進(jìn)行，創(chuàng)建了砷鈰催化反應(yīng)與生化分析儀測定程序的良好接口，實現(xiàn)了利用生化分析儀能自動快速檢測尿碘的目的。本發(fā)明與背景技術(shù)中的方法C3)相比，除使用的化學(xué)反應(yīng)原理相同外，其他各方面都不相同或類似。本發(fā)明主要是針對醫(yī)院開展尿碘檢測項目而研制的，原因是生化分析儀是醫(yī)院常規(guī)使用的儀器，用于臨床其他多種生化指標(biāo)的檢測，普及程度高。本發(fā)明使用生化分析儀來檢測尿碘，拓展了該儀器的檢測項目，特別適合已備有生化分析儀的醫(yī)療單位使用，滿足了臨床檢測要求快速出結(jié)果和檢測自動化的需求，具有廣泛的應(yīng)用前景。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但實施例不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。1.試劑組成，(1)消解液過硫酸銨溶液{c [(NH4)2S2O8] = 1. 3mol/L}；(2)試劑 R1 亞砷酸溶液[c (H3AsO3) = 0. 037mol/L]；(3)試劑 & 硫酸鈰銨溶液[C(Ce4+) = 0. 0076mol/L]；(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液碘酸鉀溶液，碘含量分別為0，50，100，200，300,400 μ g/L。2.消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各300 μ 1于試管中，各加600 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中100°c消解1小時；消解時電熱干燥箱頂部的通風(fēng)口應(yīng)敞開，不開鼓風(fēng)機(jī)；將消解完畢的樣品冷卻至室溫；3.使用日立7180型全自動生化分析儀，設(shè)置如下測定參數(shù)，(1)波長:405nm ；(2)樣品、試劑量經(jīng)消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品各25 μ L，試劑R1 120 μ L，試齊[J& 36μ L ；(3)反應(yīng)溫度37°C ；(4)分析方法兩點速率法，加入試劑R1反應(yīng)2min，連續(xù)測定加入試劑&后^iin 時間段內(nèi)(設(shè)置的起點和終點分別為第7點和第20點)的光密度值變化率；(5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對數(shù)模式(logit-log4p)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.測定，將消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品、試劑R1、試劑&分別放置于日立7180型全自動生化分析儀的標(biāo)準(zhǔn)位、樣品位和試劑位中，啟動儀器進(jìn)行測定。測定的樣品是3份國家一級尿碘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(已知碘含量的凍干尿樣)和1份使用國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法(背景方法 2)定值的內(nèi)質(zhì)控尿樣，樣品來自中國疾病預(yù)防控制中心國家碘缺乏病參照實驗室(北京)， 分別是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09108j (簡稱“j”，碘含量68士9 μ g/L)、GBW09109f (簡稱“f ”，碘含量 138 士 10 μ g/L)、GBW091101 (簡稱“ 1”，碘含量206 士 10 μ g/L)和內(nèi)質(zhì)控樣(簡稱“內(nèi)”，碘含量170士 10μ g/L)。本發(fā)明方法的測定結(jié)果表明，樣品的測定值均在給定值的不確定度范圍內(nèi)，且與給定值之間的相對誤差[(測定值-給定值)/給定值χ 100%]的絕對值遠(yuǎn)小于 10%，符合分析方法對準(zhǔn)確度的要求，說明本方法是一個準(zhǔn)確的檢測尿碘的方法。見表1。表1生化分析儀測定的系列碘標(biāo)準(zhǔn)、樣品的光密度值變化率(-Δ A/t)及碘含量 (μ g/L)
權(quán)利要求
1.一種用于生化分析儀定量檢測尿碘的試劑，其特征在于檢測試劑盛裝于試劑盒內(nèi)，其試劑由以下主要試劑成分組成(1)消解液-過硫酸銨溶液，濃度范圍為0.3-2. Omol/L ；(2)試劑R1-亞砷酸或三氧化二砷溶液，其中砷濃度范圍為0.01-0. lmol/L ；(3)試劑&-硫酸鈰銨或硫酸鈰溶液，其中鈰濃度范圍為0.001-0. lmol/L ；(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘化鉀(鈉)或碘酸鉀(鈉)溶液，碘含量為0-500μ g/L。
2.如權(quán)利要求1所述的用于生化分析儀定量檢測尿碘的試劑，其特征在于所述主要試劑成分及含量的優(yōu)選值為(1)消解液-過硫酸銨溶液{c[(NH4)2S2OJ = I- 3mol/L}；(2)試劑R1-亞砷酸溶液[c (H3AsO3) = 0. 037mol/L]；(3)試劑硫酸鈰銨溶液[C(Ce4+) = 0. 0076mol/L]；(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘酸鉀溶液，碘含量分別為0，50，100，200，300,400μ g/L。
3.一種用于生化分析儀定量檢測尿碘的檢測方法，其特征在于檢測方法的主要步驟為(1)選用上述檢測試劑；(2)消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各20-500 μ 1于試管中，各加100-1000 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中100-110°C消解1小時；將消解完畢的樣品取出，冷卻至室溫；(3)設(shè)置生化分析儀測定參數(shù)，(3. 1)波長單波長，在400-600nm范圍內(nèi)選定一種波長；(3. 2)樣品、試劑量取消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品5-200 μ L，試劑Ii1 10-300 μ L， 試劑& 10-250 μ L，在各自的用量范圍內(nèi)選定一種用量； (3. 3)反應(yīng)溫度在30-40°C范圍內(nèi)選定一種溫度； (3. 4)分析方法終點法或速率法；(3. 4. 1) 一點終點法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，測定加入試劑&后反應(yīng)3-20min范圍內(nèi)選定的時間點的光密度值；(3. 4. 2)兩點速率法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，連續(xù)測定加入試劑&后在3-15min范圍內(nèi)選定的時間段內(nèi)的光密度值變化率；(3. 5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對數(shù)模式(l0git-l0g4p)或樣條函數(shù) (spline)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線；(3.6)反應(yīng)方向負(fù)反應(yīng)；(4)測定，將消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品、試劑隊、試劑&分別放置于生化分析儀相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)位、樣品位和試劑位中，按步驟C3)所述設(shè)置的生化分析儀測定參數(shù)，啟動儀器進(jìn)行測定。
4.如權(quán)利要求3所述的用于生化分析儀定量檢測尿碘的檢測方法，其特征在于所述檢測方法中的樣品、試劑用量及生化分析儀測定參數(shù)的優(yōu)選值為(1)消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各300μ 1于試管中，各加600μ 1消解液，置于電熱干燥箱中于100°C消解1小時；(2)設(shè)置生化分析儀測定參數(shù)， (2. 1)波長:405nm ；(2.2)樣品、試劑量消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品各25yL，試劑R1 120yL，試劑& 36μ L ；(2. 3)反應(yīng)溫度37°C ；(2. 4)分析方法兩點速率法，加入試劑R1反應(yīng)0-2min，連續(xù)測定加入試劑&后^iin 時間段內(nèi)的光密度值的變化率；(2. 5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對數(shù)模式(l0git-l0g4p)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于生化分析儀定量檢測尿碘的試劑及尿碘檢測方法。該試劑由以下主要試劑成分組成消解液-過硫酸銨溶液；試劑R1-亞砷酸或三氧化二砷溶液；試劑R2-硫酸鈰銨或硫酸鈰溶液；碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘化鉀(鈉)或碘酸鉀(鈉)溶液。該檢測方法的主要步驟為選用上述檢測試劑；消解尿樣；設(shè)置生化分析儀參數(shù)；用生化分析儀測定。本發(fā)明的檢測方法自動化程度高，人為誤差小，試劑用量少，檢測時間短。使用生化分析儀來檢測尿碘，拓展了該儀器的檢測項目，特別適合已備有生化分析儀的醫(yī)療單位使用，滿足了臨床檢測要求快速出結(jié)果和檢測自動化的需求。
文檔編號G01N33/52GK102495203SQ201110354278
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月10日
發(fā)明者劉列鈞 申請人:武漢眾生生化技術(shù)有限公司