專利名稱：雌二醇(e2)定量測定試劑盒及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測定血清的試劑盒及其測試方法，尤其是涉及測定血清中雌二醇(E2) 含量的試劑盒及其測試方法。
背景技術(shù)：
雌二醇(E》是一種含芳香化A環(huán)的18碳類固醇激素，分子量為272. 4道爾頓。雌二醇是女性雌激素中生物活性最強(qiáng)的一種留體激素，主要來源于卵巢、黃體和胎盤，少量由腎上腺分泌。男性主要由睪丸產(chǎn)生。血循環(huán)中98%的雌二醇與性激素結(jié)合球蛋白(SHBG) 結(jié)合，少量與白蛋白結(jié)合，只有極少量呈游離態(tài)的雌二醇具有生理活性。雌二醇的作用是通過與相應(yīng)的核受體結(jié)合，在細(xì)胞核水平觸發(fā)相應(yīng)的調(diào)節(jié)反應(yīng)。其生理效應(yīng)主要是促使女性生殖器官的生長發(fā)育、促使第二性征的發(fā)育、對下丘腦-垂體軸的影響等。并對女性月經(jīng)維持、產(chǎn)卵、排卵、受精、妊娠起著重要作用。男性體內(nèi)也有少量雌二醇，如果雌激素與睪酮比例失調(diào)，男性會出現(xiàn)一些特定的癥狀，例如腹型肥胖、乳房發(fā)育、性欲下降和雄激素低下所引發(fā)的其他一些癥狀。一些治療藥物、慢性酒精中毒和一些長期處于亞健康狀態(tài)的情況也常會導(dǎo)致雌二醇水平升高。臨床上雌二醇水平常用于評價(jià)卵巢功能，也可用于診斷女性性早熟和男子女性化乳房發(fā)育。對于臨床常見的無月經(jīng)情況，如更年期、懷孕或其他疾病所致的閉經(jīng)，雌二醇也是很重要的檢查之一。在輔助生殖技術(shù)中，連續(xù)檢測雌二醇用于體外受精前確定卵泡生長情況。此外，還用于監(jiān)測更年期激素替代治療。在孕期篩查方面，雌二醇與母體AFP、hCG和抑制素A共同用于監(jiān)測胎兒畸形的一些疾病，如唐氏綜合征。從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定E2的方法主要有放免法、ELISA法、化學(xué)發(fā)光法等。過去以放免為代表的雌二醇(E》測定試劑盒受方法學(xué)的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴(yán)重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應(yīng)用較多的為酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)和化學(xué)發(fā)光技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)興起于上個(gè)世紀(jì)80年代是繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放免技術(shù)之后發(fā)展起來的新興技術(shù)，由于其高靈敏度、高特異性，同時(shí)方法簡便、快速，標(biāo)記結(jié)合物穩(wěn)定，無放射性同位素?fù)p傷和污染等特點(diǎn)，在近些年得到了飛速發(fā)展。磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術(shù)與酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)相結(jié)合而建立的一種新型免疫檢測方法。傳統(tǒng)ELISA方法， 抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)是在固相(ELISA板反應(yīng)孔)表面進(jìn)行的，而磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測方法，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)也在近似液相的條件下進(jìn)行，因而反應(yīng)快速、徹底。與傳統(tǒng) ELISA相比具有靈敏度高，檢測用時(shí)少的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于提供一種雌二醇(E2)定量測定試劑盒及其檢測方法，采用該試劑盒進(jìn)行E2檢測具有較高的靈敏度和特異性，和更短的獲得檢測結(jié)果的時(shí)間和更簡便的操作方式。本發(fā)明提供了一種雌二醇(E》的定量測定試劑盒，其包含的試劑有E2磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強(qiáng)劑，稀釋液，校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。所述的磁分離試劑含有標(biāo)記有抗E2單克隆抗體的磁性微球。所述的酶反應(yīng)物是含有堿性磷酸酶標(biāo)記的E2抗原。所述的反應(yīng)增強(qiáng)劑是含有Tris的緩沖液。所述稀釋液是含有BSA溶液。所述的校準(zhǔn)品及質(zhì)控品是含有一定量的E2抗原的BSA蛋白溶液。所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和ftx)Clin-300的緩沖液。所述的底物溶液為酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。本發(fā)明雌二醇(E》的定量測定試劑盒的制備方法，包括下述步驟第一步磁分離試劑的制備過程一、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 4. 58g 和 NaC16. 81g 于 IL 容器中，稱取 0. 96g TWEEN-20 于 20ml 容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；2、用移液器將ftOclin-300量取0. 2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中，然后在上述IL容器中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢瑁?、調(diào)節(jié)PH計(jì)測量其PH值，調(diào)PH，控制PH在7. 95-8. 05之間；4、稱取BSA 3g倒入上述IL容器中；5、最后定容至1000ml，用0. 2um濾器過濾；過濾完后貼好標(biāo)簽于2_8°C冷庫貯存。二、磁分離試劑的制備過程1、將1. Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗E2單克隆抗體溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；2、確定辛二酸二琥珀酰亞胺酯的投入量，用移液槍吸取辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min ；3、將步驟2抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min至體積為0. 5ml ；4、取0. 5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取
上清；5、每次加入1. 5ml PH9. 5 0. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟4獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時(shí)；6、加入 0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37V 15 分鐘；7、每次加入1. 5ml PH 7. 2 0. lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，
去上清，重復(fù)操作3次；8、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶，即為0. 05%的E2磁分離試劑； 磁珠保存液配方為0. 1% BSA, 0. 05%吐溫-20，0. 02% NaN3，20%乙醇，4°C保存。9、將步驟9獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1 1的比例混勻，即得本發(fā)明試劑盒中磁分離試劑。第二步酶反應(yīng)物制備過程一、酶反應(yīng)物稀釋液配制操作步驟，配制IL 1、取 Tris 6. 06g、NaCl 13. 0g、Zncl2 0. 05g、Proclin-300 0. 2ml 禾口 MgCl2 0. 05g于燒瓶中，然后在燒瓶中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢瑁乖噭┩耆芙猓?、調(diào) PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 范圍內(nèi)；3、稱取BSA 3g倒入上述燒杯中；4、最后定容至1000ml，用0. 2um濾器過濾即得。二、堿性磷酸酶ALP與E2抗原的偶聯(lián)1、取E2-6-cmo-BSA抗原Img放置于Iml玻璃管中；2、取200ul DMSO溶解抗原使抗原的終濃度到達(dá)5mg/ml，充分混勻；3、按照Imol抗原加入IOmol的辛二酸二琥珀酰亞胺酯的摩爾比例加辛二酸二琥珀酰亞胺酯到步驟2的溶液中，37°C恒溫箱中反應(yīng)1. 5小時(shí)；4、按照3mol抗原加入Imol的ALP的摩爾比往步驟3溶液中添加ALP，然后加入 Iml的PH為7. 4濃度為0. IM的PB緩沖液，置于37度恒溫箱中反應(yīng)3小時(shí)；5、將步驟4的溶液用PD-10柱純化，收集純化液，按照1 3000的體積添加上述步驟一)獲得的酶反應(yīng)物稀釋液，混合均勻，即得酶反應(yīng)物。第三步反應(yīng)增強(qiáng)劑配制步驟，配制IL 1、稱取TRIS1. 56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin-300量取 0. 2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙庹{(diào)PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 之間；3、稱取Mak33 0. 9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾
器過濾ο第四步稀釋液配制步驟，配制IL 1、稱取 NaC19. Og 和 BSA 60g 于 IL 的容器中；2、用移液器將Proclin-300量取0. 5ml加IOml純化水溶解，倒入上述IL的容器中；3、最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾器過濾，貼好標(biāo)簽于2_8°C冷庫貯存， 有效期為12個(gè)月。第五步校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的配制校準(zhǔn)品濃度分別為50,100, 250, 750,1500, 3000pg/ml ；質(zhì)控品濃度分別為100， 1500pg/ml。第六步清洗濃縮液配制步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 12. 54g 和 NaCl 325. 6g 于 IL 容器中；2、稱取5g Tween-20于IOOml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述IL容
器中；3、用移液器將ftOclin-300量取0. 2ml于盛有IOml純化水的燒杯中完全溶解后， 倒入上述IL容器中；
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4、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解?、調(diào)PH，控制其范圍在7. 35-7. 45之間；6、最后定容1000ml，完全溶解后用0. 2um濾器過濾即得。第七步底物溶液配制步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 2.35g、NaCl 6. 41g、Na2SO3 0. 002g 和 Proclin-300 0.2ml 于 IL 燒杯中；2、用量筒量取600ml純化水于IL燒杯中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解，調(diào)PH，控制其范圍在7. 95-8. 05之間；3、加入250ml Lumi-Phos 480后，用0. 2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至 1000ml，混勻后即得。本發(fā)明工作原理本發(fā)明為競爭法化學(xué)發(fā)光免疫分析法與磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的一種檢測方法。在標(biāo)本、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品中加入定量的酶標(biāo)E2抗原、結(jié)合著磁性微粒的E2單克隆抗體及穩(wěn)定增強(qiáng)劑。37°C孵育后，酶標(biāo)E2抗原與標(biāo)本、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品中E2 競爭的與結(jié)合著磁性微粒的E2單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合。在外加磁場中直接沉淀，不需離心即可分離。倒去上清液，清洗沉淀的復(fù)合物，然后加入酶促化學(xué)發(fā)光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)，即可使用發(fā)光儀檢測反應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度。在檢測范圍內(nèi)，反應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度與樣本中的E2濃度成反比。本發(fā)明的主要創(chuàng)新之處在于1、本發(fā)明試劑盒將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合，提供了一種接近均相的反應(yīng)體系，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明試劑盒具有更高的檢測靈敏度和特異性，并達(dá)到了較佳的性能參數(shù)。2、本發(fā)明公開了一種新的專用穩(wěn)定增強(qiáng)劑以及清洗液濃縮液，使得反應(yīng)過程更加穩(wěn)定可靠，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)靈敏有效，在提高產(chǎn)品性能的同時(shí)，并且大大降低了產(chǎn)品成本；3、試劑盒中的磁分離試劑，酶反應(yīng)物，穩(wěn)定增強(qiáng)劑，校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，清洗液濃縮液、稀釋液以及底物溶液均是該反應(yīng)體系下的最優(yōu)配方，給該試劑盒的使用效期及檢測性能提供了有力保障。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、一、磁珠緩沖液配制操作規(guī)程配方見表1，以配制IL為例1、稱取 TRIS 4. 58g 和 NaC16. 81g 于 IL 容器中，稱取 0. 96g TWEEN-20 于 20ml 容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；2、用移液器將Proclin-300量取0. 2ml于少量純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；然后在IL容器中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢?，使試劑完全溶解?、調(diào)節(jié)PH值，測量其PH值；用HCl或NaOH調(diào)PH,測量其PH在7. 95-8. 05之間即符合要求；4、稱取BSA(牛血清白蛋白)3g倒入上述容器中；
5、最后定容至1000ml，測PH值，范圍在7. 95-8. 05之間即符合要求，用0. 2um濾器過濾；過濾完后貼好標(biāo)簽于2-8°C冷庫貯存，磁珠緩沖液有效期為12個(gè)月；磁珠緩沖液表1
試劑IOOOml用量試劑級別TRIS4. 58g分析純NaCl6. 81g分析純TTOEN-200. 96g分析純Proclin-3000. 2ml/加水至加至800ml，溶解混勻PH8. 0+0. 05加水至加至1000mlBSA3. Og驗(yàn)證ra8. 0+0. 050. 2um濾器過濾二、磁分離試劑的制備過程ljfl.Omg DSS (辛二酸二琥珀酰亞胺酯)溶于50ul DMSO中，即濃度為20mg/ml ； 取2mg抗E2單克隆抗體(天健生物制藥(天津)有限公司，濃度為3.63mg/ml)溶于PH 9.5 的0. lmol/LPB緩沖液中至總體積為Iml ；2、計(jì)算DSS的投入量，按照以下公式計(jì)算(抗體質(zhì)量/16000) X 10X 368/CDSS)，其中Cdss指代DSS的物質(zhì)的量濃度mol/L ；3、用移液槍吸取相應(yīng)體積的DSS加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min ；4、將步驟3抗體溶液加入到Centricon-IO濃縮管中然后放入到sigma2_Wk高速冷凍離心機(jī)中在3000g的離心力下濃縮約30min至體積為0. 5ml ；5、取0. 5ml磁珠，磁珠濃度為0. 5g/ml，所述的磁珠直徑在0. 9 μ m之間，加入5ml 反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；6、每次加入1. 5ml PH9. 5 0. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟4獲得的抗體溶液加入到磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時(shí)，保持混勻狀態(tài)；7、加入0. 3ml lmol/L的TRIS溶液37度15分鐘，其中TRIS的加樣量為Img抗體加 0.15mlTRIS；8、每次加入1. 5ml PH 7. 2 0. lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，
去上清，重復(fù)操作3次；
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9、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶，即為0. 05%的E2磁分離試劑； 磁珠保存液配方為0. 1% BSA, 0. 05%吐溫-20，0. 02% NaN3，20%乙醇，4°C保存。10、將步驟9獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1 1的比例混勻；11、貼好標(biāo)簽于2_8°C冷庫貯存，磁分離試劑有效期為12個(gè)月；實(shí)施例2一、酶反應(yīng)物稀釋液配制操作規(guī)程配方見表2，以配制IL為例1、取 Tris 6. 06g、NaCl 13. 0g、Zncl2 0. 05g、Proclin-300 0. 2ml 禾口 MgCl2 0. 05g 于燒瓶中；然后在燒瓶中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢?，使試劑完全溶解?、用HCl或NaOH調(diào)PH，測量使PH在7. 35-7. 45范圍內(nèi)；3、稱取BSA 3g倒入上述容器中；4、最后定容至1000ml，測PH值，范圍在7. 35-7. 45之間即符合要求，用0. 2um濾器過濾；過濾完后，貼好標(biāo)簽于2-8°C冷庫貯存，有效期為12個(gè)月；酶反應(yīng)物稀釋液表權(quán)利要求
1.一種雌二醇E2的定量測定試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含E2磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強(qiáng)劑，稀釋液，E2校準(zhǔn)品、E2質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的E2磁分離試劑含有標(biāo)記有抗E2單克隆抗體的磁性微球；所述的酶反應(yīng)物是含有堿性磷酸酶標(biāo)記的E2抗原；所述的反應(yīng)增強(qiáng)劑是含有Tris的緩沖液；所述稀釋液是含有BSA的溶液；所述的校準(zhǔn)品及質(zhì)控品是含有一定量的E2抗原的BSA溶液；所述清洗液濃縮液是含有TWEEN-20和ftOclin-300的緩沖液；所述的底物溶液為酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。
3.如權(quán)利要求1-2任其一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中各組分按照如下制備方法制得一、磁分離試劑的制備過程一)、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制IL(1)、稱取TRIS 4. 58g 和 NaC16. 81g 于 IL 容器中，稱取 0. 96g TWEEN-20 于 20ml 容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述IL容器中；(2)、用移液器將Proclin-300量取0.2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中，然后在上述IL容器中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢瑁?3)、調(diào)節(jié)PH,控制PH在7.95-8. 05之間；(4)、稱取BSA3g倒入上述IL容器中；(5)、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾即得；二)、磁分離試劑的制備過程(1)、將1. Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗E2單克隆抗體溶于 PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；O)、用移液槍吸取上述辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫 90min ；(3)、將步驟2所得溶液加入到濃縮管中，然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下離心30min濃縮至0. 5ml ；(4)、取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清，然后加入1. 5ml PH9. 50. lmol/L PB，混勻30秒，然后加入步驟3獲得的抗體溶液，混勻后室溫反應(yīng)4小時(shí)；(5)、加入0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37°C 15 分鐘，然后加入 1. 5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒；(6)、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入玻璃瓶；(7)、將步驟6獲得的溶液與上述磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得權(quán)利要求1或2所述試劑盒中的磁分離試劑；二、酶反應(yīng)物的制備過程一)、酶反應(yīng)物稀釋液配制操作步驟，配制IL (1)、取 Tris 6.06g、NaCl 13. Og^Zncl2 0. 05g,Proclin-300 0. 2ml 和 MgCl2 0. 05g 于燒瓶中，然后在燒瓶中加入800ml純化水，充分?jǐn)嚢?，使試劑完全溶解?2)、調(diào)PH,控制PH在7.35-7. 45范圍內(nèi);(3)、稱取BSA3g倒入上述燒杯中；(4)、最后定容至1000ml，用0.2um濾器過濾即得； 二 )、堿性磷酸酶ALP與E2抗原的偶聯(lián)(1)、取E2-6-cmo-BSA 抗原；(2)、取200ulDMSO溶解抗原使抗原的終濃度到達(dá)5mg/ml，充分混勻；(3)、按照Imol抗原加入IOmol的辛二酸二琥珀酰亞胺酯的摩爾比例加辛二酸二琥珀酰亞胺酯到步驟2的溶液中，37°C恒溫箱中反應(yīng)1. 5小時(shí)；、按照3mol抗原加入Imol的ALP的摩爾比往步驟3溶液中添加ALP，然后加入 ImlPH為7. 4濃度為0. IM的PB緩沖液，置于37度恒溫箱中反應(yīng)3小時(shí)；(5)、將步驟4的溶液用PD-IO柱純化，收集純化液，按照1 3000的體積比添加上述步驟一)獲得的酶反應(yīng)物稀釋液，混合均勻，即得酶反應(yīng)物。三、反應(yīng)增強(qiáng)劑的制備過程，配制IL(1)、取TRIS1. 56g 和 NaCl 4. 23g 于 IL 容器中，取 0. 2ml Proclin-300 于 IOml 純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；(2)、取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙猓{(diào)PH在7.35-7. 45之間；(3)、稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾器過濾即得；四、稀釋液的制備過程，配制IL:(1)、稱取NaC19.Og和BSA 60g于IL的容器中；(2)、取0.5ml Proclin-300加IOml純化水溶解，倒入上述IL的容器中；(3)、最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2um濾器過濾即得；五、E2校準(zhǔn)品和E2質(zhì)控品的配制E2校準(zhǔn)品中E2抗原的濃度分別為50，100，250，750，1500, 3000pg/ml ；E2質(zhì)控品中E2 抗原的濃度分別為100，1500pg/ml ；六、清洗液濃縮液的制備過程，配制IL(1)、取TRIS 12. 54g 和 NaCl 325. 6g 于 IL 容器中；(2)、取5gTween-20于IOOml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述IL容器中；(3)、取0.2ml Proclin-300于盛有IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；(4)、取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解?5)、調(diào)PH，控制其范圍在7.35-7. 45之間；(6)、最后定容1000ml，完全溶解后用0.2um濾器過濾即得；七、底物溶液的制備過程，配制IL(1)、取TRIS 2. 35g,NaCl 6. 41g, Na2SO3 0. 002g 和 Proclin-300 0.2ml 于 IL 燒杯中；(2)、取600ml純化水于IL燒杯中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙猓{(diào)PH在7.95-8. 05之間；(3)、加入250mlLumi-Phos 480，用0. 2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至 1000ml，混勻后即得。
4.如權(quán)利要求1-3任其一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的使用方法如下1)、加45μ 1 E2校準(zhǔn)品、Ε2質(zhì)控品、待測標(biāo)本至對應(yīng)試管底部；2)、加60μ 1酶反應(yīng)物至每一試管中；3)、加60μ 1反應(yīng)增強(qiáng)劑至每一試管中；4)、加30μ 1磁分離試劑至每一試管中；5)、用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30s后，置37°C水浴30分鐘；6)、然后放至磁分離器上，確保每支試管都與分離器表面接觸，沉淀2分鐘，倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液；7)、清洗液濃縮液用純化水稀釋20倍后，加200μ 1稀釋后的清洗液至每一試管中，置多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s ；8)、加200μ 1底物溶液至試管中混勻3秒，發(fā)光檢測儀檢測。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述待測標(biāo)本為高值HOOK樣本時(shí)，根據(jù)需要使用稀釋液對標(biāo)本進(jìn)行稀釋。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雌二醇E2的定量測定試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含E2磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強(qiáng)劑，稀釋液，E2校準(zhǔn)品、E2質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。本發(fā)明還公開了該試劑盒的制備方法。本發(fā)明試劑盒將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合，提供了一種接近均相的反應(yīng)體系，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明試劑盒具有更高的檢測靈敏度和特異性，并達(dá)到了較佳的性能參數(shù)，并且大大降低了產(chǎn)品成本。
文檔編號G01N33/74GK102426253SQ20111025793
公開日2012年4月25日 申請日期2011年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月31日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:內(nèi)蒙古科慧生物科技有限責(zé)任公司