專利名稱::松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法的制作方法松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法
技術領域:
:本發(fā)明屬于病蟲防治檢疫
技術領域:
,涉及一種松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法。
背景技術:
:松材線蟲是世界公認的松林頭號殺手,是國際性森林檢疫病蟲,松材線蟲通過松墨天牛補充營養(yǎng)的傷口進入木質(zhì)部,寄生在樹脂道中,在大量繁殖的同時移動,逐漸遍及全株,并導致樹脂道薄壁細胞和上皮細胞的破壞和死亡。松樹一旦感染松材線蟲,最快40多天即枯死,松林從發(fā)病到毀滅只需3-5年時間。故松材線蟲又有松林頭號殺手之稱,由于目前國內(nèi)外尚沒有有效的防治方法,因此松材線蟲病又稱“松材癌癥。松材線蟲在我國的傳播、蔓延勢頭,已引起黨中央、國務院領導的高度重視,2002年國務院辦公廳為此專門發(fā)出《關于進一步加強松材線蟲病預防和除治工作的通知》;但是,近十幾年來,松材線蟲在我國的傳播、擴散速度之快,令人擔憂!據(jù)國家林業(yè)局報告,目前松材線蟲病已蔓延至12個省123個縣,造成直接經(jīng)濟損失近30億元,間接經(jīng)濟損失近千億元,嚴重威脅我國5億多畝松林的安全。這種狀況若繼續(xù)發(fā)展,將對我國的生態(tài)安全構成嚴重威脅,后果不堪設想!大量事實證明,染病的松木及其制品(木包裝箱、木托盤等)是傳播松材線蟲的載體;防止松材線蟲遠距離傳播的措施之一,是事半功倍的檢疫工作。我國檢驗檢疫部門、林業(yè)檢疫部門,現(xiàn)行分離松材線蟲的時間,普遍在6-12小時以上,如中國03103072.6所涉及的松材線蟲的分離裝置及檢測方法,雖然能將分離工作得以在2030分鐘之內(nèi)完成,但幾十分鐘的分離檢驗時間太長,檢疫影響了檢驗工作的效率及木材產(chǎn)品和木包裝貨物的通關過卡速度,同時整套設備的價格昂貴而難以普及。由于現(xiàn)有技術分離線蟲的速度慢、時間長,檢疫部門不能快速得出檢驗結(jié)果,使進口貨物不能得到及時處理,影響了貨物的轉(zhuǎn)運和使用,增加了企業(yè)運作的成本,同時由于進口木包裝需長時間停留在口岸等候檢疫結(jié)果,也會為松材線蟲的人為傳播提供機會。因此,探索松材線蟲的快速分離技術,加強檢疫工作,遏制松材線蟲遠距離傳播,十分迫切。
發(fā)明內(nèi)容為了克服現(xiàn)有技術的上述缺點,本發(fā)明提供一種使松材線蟲的分離時間縮短至l-5min內(nèi),具有簡單實用、投資少、檢驗成本低、線蟲的檢出率高和檢疫檢驗工作的效率高的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是一種松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其步驟是第一步是取樣,選取長8-12cm、寬6_8cm、厚2cm、重20_100g的木材樣品一塊,木塊重量最少有20-50克,檢測其水分含量;第二步是制取薄木片,用刀具將木塊劈成0.I-Icm厚的薄木片,薄木片的最佳厚度為0.1-0.3cm;第三步是泡水和沖洗,在常溫下,將薄木片放入容器中,加水蓋過薄木片,在泡水的過程中不斷地進行攪拌和沖洗,時間控制在l-5min內(nèi),然后提取沖洗液;第四步是過濾,將沖洗液倒進兩層線蟲篩進行過濾,兩層線蟲篩的上層篩孔為120-300目、下層篩孔為500目,然后將下層篩底液移至培養(yǎng)皿,下層篩底液占培養(yǎng)皿體積的1/3;第五步是用解剖鏡觀察培養(yǎng)皿中是否有線蟲,當觀察到培養(yǎng)皿中有線蟲時,用移液器將線蟲移到載玻片上,蓋上蓋玻片進行顯微形態(tài)鑒定;當不能對線蟲作出準確鑒定時,則用移液器將線蟲吸入塑料指頭瓶,送專家鑒定。所述木塊在劈成薄木片時,每塊薄木片至少有1/4以上的表面沒有受到刀具的破壞。所述水溫度為25-38°C。本發(fā)明的有益效果是利用本發(fā)明使松材線蟲的分離時間縮短至l-5min,分離速度提高數(shù)百倍,本發(fā)明簡單實用、投資少,其檢驗成本低,不需專用設備,利用現(xiàn)有分離線蟲的工具就能開展工作,提高了線蟲的檢出率和檢疫檢驗工作的效率,大大加快了木材產(chǎn)品的流通和木包裝貨物的通關過卡速度。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進一步說明一種松材線蟲快速分離方法,取長8-12cm、寬6_8cm、厚2cm、重30_100g的木材樣品一塊,用刀具將木塊劈成0.1-0.3cm或0.4-0.6cm厚的薄木片;在常溫下,將薄木片放入容器中,加水蓋過薄木片,最佳水溫度為25-38°C,在泡水過程中進行攪拌和沖洗l-5min;將沖洗液倒進兩層線蟲篩進行過濾,兩層線蟲篩的上層篩孔為120-300目、下層篩孔為500目,然后將下層篩底液移至培養(yǎng)皿中,下層篩底液占培養(yǎng)皿體積的1/3;用解剖鏡觀察是否有線蟲,然后用移液器將線蟲移到載玻片,當觀察到培養(yǎng)皿中有線蟲時,蓋上蓋玻片進行顯微形態(tài)鑒定;若不能作出準確鑒定,用移液器將線蟲吸入塑料指頭瓶,送專家鑒定。通過將木塊劈成薄木片,使寄生在脂道薄壁細胞和上皮細胞的線蟲裸露在薄木片的表面。木塊在劈成薄木片時,每塊薄木片至少有1/4以上的表面沒有受到刀具的破壞,這部分木片表面上的線蟲將保持完整形態(tài)依附或裸露在薄木片的表面,配合用水浸泡、沖洗和攪拌等技術處理,薄木片表面的線蟲將脫落游離水中,達到快速從木片中分離線蟲的效^ο試驗一采用不同厚度木片樣品(0.1-0.3cm與0.4-0.6cm)浸泡洗滌分離線蟲,重復檢驗10個樣品,觀察結(jié)果。試驗二采用不同溫度的水浸泡樣品(5°C、10°C、15°C、20°C、25°C、3(rC),洗滌分離線蟲,重復檢驗3次,觀察結(jié)果。試驗三采用不同時間(5、30、60、180、360、720、1440min)分離線蟲,重復檢驗2次,觀察分離結(jié)果。試驗四對比不同樣品Imin內(nèi)線蟲溢出量。試驗五同一樣品分別用電動鋸切片與人工用柴刀制片,浸泡、洗滌分離線蟲,重復檢驗5次,觀察對比線蟲溢出量。試驗六同種樣品浸泡后分別用不同方法處理(不作技術處理或立即實施攪拌、沖洗處理)lmin,分離線蟲,觀察線蟲溢出量。上述每一樣品均取50g,采用本發(fā)明對300木材樣品進行線蟲分離試驗,試驗結(jié)果表明樣品能在經(jīng)l-5min的技術處理后,分離出線蟲的占99%,對含有松材線蟲的150個木材樣品進行線蟲快速分離試驗,結(jié)果100%的木材樣品都能在經(jīng)l-5min的技術處理后分離出部分線蟲(約占木材樣品線蟲總量的25%以上)。對試驗結(jié)果進行分析1、木片厚度對線蟲溢出量的影響見表1,從表1可以看出,木片厚度影響線蟲的溢出量,0.1-0.3cm木片厚度樣品,比0.4-0.6cm木片厚度樣品線蟲的溢出量多40%以上。表1不同厚度木片線蟲溢出量比較<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2水溫對線蟲溢出量的影響從表2可以看出,水溫對線蟲溢出量的影響甚微,試驗表明,3°C-38°C的水溫都能分離出線蟲。表2不同溫度線蟲溢出量比較<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>3泡水時間長短的影響從表3可以看出,樣品泡水時間長短對線蟲溢出量有影響,線蟲溢出量有隨泡水時間的延長而增加的趨勢。表3不同泡水時間線蟲溢出量比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>4從表4可以看出10個樣品的木片都能在經(jīng)1分鐘的技術處理后分離出線蟲,50克樣品線蟲的溢出量,最多達到150頭,最少有6頭。表4不同木樣Imin內(nèi)線蟲溢出量<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>5制片方法的影響從表5可以看出人工制片樣品分離線蟲數(shù)量比電動鋸切片分離線蟲數(shù)量高3-8倍。表5人工制片與機械制片線蟲溢出量比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>6處理方法的影響從表6中可看出,浸泡后立即實施攪拌、沖洗處理的樣品的Imin的線蟲分離量比不作技術處理的樣品高一倍以上。表6不同處理方法的線蟲溢出量比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>試驗結(jié)論1采用本發(fā)明進行試驗,從進境木包裝中截獲松材線蟲7批次,擬松材線蟲4批,滑刃線蟲多批,首次在國內(nèi)快遞郵件的木包裝中檢出活體松材線蟲,取得顯著的社會效益。2薄片洗滌法操作簡單,利用現(xiàn)有分離線蟲的工具就能開展,而且時間快,能在短時間內(nèi)確定樣品中是否有線蟲,在入境木包裝檢疫中起到了松材線蟲檢疫初篩的作用,同時也適用于林業(yè)部門在野外作松材線蟲的疫情普查及木材調(diào)運檢疫出證時快速確診是否有松材線蟲的方法。3目前檢驗檢疫系統(tǒng)分離木材潛藏線蟲的時間普遍在6-12小時以上。利用薄片洗滌法進行線蟲分離,將原來6-12小時以上的分離時間縮短至l-5min,分離速度比原來提高近300倍以上;與目前處于國內(nèi)領先水平的研究成果(20-30min完成線蟲分離過程,成套線蟲分離設備價格1萬多元)相比,有以下優(yōu)點第一,分離速度提高近20倍;第二,薄片洗滌法簡單實用、投資少,利用現(xiàn)有分離線蟲的設備就能開展工作。4實驗證明,木材水分含量對線蟲的溢出量影響較小,木材含水量從3%-38%都能分離出線蟲;但木材水分含量的高低直接決定分離出來的線蟲狀態(tài),一般的進境木包裝水分含量較低(在15%以下)。因此,較少直接分離到活體線蟲,分離出來的線蟲絕大多數(shù)是沒有活力的蟲態(tài)(死蟲、休眠蟲態(tài));水分含量在25%以上的木材樣品分離出來的線蟲,基本上是活體線蟲。5由于進境木包裝水分含量較低,絕大多數(shù)樣品,采用這種方法分離出來的線蟲基本上是死蟲或休眠蟲態(tài);但是溢出的線蟲形態(tài)完整;可以進行種類鑒定,部分線蟲經(jīng)過短時間(5-lOmin或更長時間)吸收水分后,逐步表現(xiàn)出活力;或?qū)⒛静臉悠防^續(xù)泡水24小時以上,結(jié)果95%以上樣品都能分離到活體線蟲。6從染病松樹上取下的木材樣品,因水分含量高,分離出來的線蟲絕大多數(shù)是活蟲,所以薄片洗滌法也適應于林間的松材線蟲疫情普查。7如果樣品木片厚度為0.1-0.3cm,檢驗樣品重量為30-60克;木片厚度為0.3-0.6cm,則樣品重量應為60-100克。為增加線蟲溢出量可以適當增加木材重量,但木片0.1-0.3cm為最佳厚度。8機制薄木片不適用本發(fā)明。9本發(fā)明適應所有木材及其制品的線蟲分離。權利要求一種松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征在于步驟是第一步是取樣,選取長8-12cm、寬6-8cm、厚2cm、重20-100g的木材樣品一塊,檢測其水分含量;第二步是制取薄木片,用刀具將木塊劈成0.1-1cm厚的薄木片;第三步是泡水和沖洗,將薄木片放入容器中,加水蓋過薄木片,在泡水的過程中不斷地進行攪拌和沖洗,時間控制在1-5min內(nèi),然后提取沖洗液;第四步是過濾,將沖洗液倒進兩層線蟲篩進行過濾,兩層線蟲篩的上層篩孔為120-300目、下層篩孔為500目,然后將下層篩底液移至培養(yǎng)皿中;第五步是用解剖鏡觀察培養(yǎng)皿中是否有線蟲,先用解剖鏡觀察培養(yǎng)皿中是否有線蟲,當觀察到培養(yǎng)皿中有線蟲時,用移液器將線蟲移到載玻片上,蓋上蓋玻片,進行顯微形態(tài)鑒定。2.如權利要求1所述的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征是在第一步中,木塊重量為20-50克。3.如權利要求1所述的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征是在第二步中薄木片的厚度為0.1-0.3cm。4.如權利要求1所述的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征是在第三步中,水溫控制在25-38°C間。5.如權利要求1所述的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征是在第四步中,所述下層篩底液占培養(yǎng)皿體積的1/3。6.如權利要求1所述的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征是在第五步中,當不能對線蟲作出準確鑒定時,用移液器將線蟲吸入塑料指頭瓶中,送專家鑒定。7.如權利要求1或3所述的松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,其特征是所述木塊在劈成薄木片時,每塊薄木片至少有1/4以上的表面沒有受到刀具的破壞。全文摘要本發(fā)明涉及一種松材線蟲快速分離技術的薄片洗滌法,通過取樣制取薄木片,然后進行泡水、沖洗和過濾,最后進行解剖鏡觀察和線蟲的顯微形態(tài)鑒定,作出準確鑒定。利用本發(fā)明使松材線蟲的分離時間縮短至1-5min,分離速度提高數(shù)百倍,本發(fā)明簡單實用、投資少,利用現(xiàn)有分離線蟲的工具就能開展工作,提高了線蟲的檢出率和檢疫檢驗工作的效率,大大加快了木材產(chǎn)品和木包裝貨物的通關過卡速度。文檔編號G01N1/28GK101832889SQ20101016680公開日2010年9月15日申請日期2010年4月30日優(yōu)先權日2010年4月30日發(fā)明者王進福申請人:王進福