專利名稱：預(yù)測物質(zhì)的磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及確定物質(zhì)例如藥物化合物、或者藥物、或者藥物或食品添加劑的ADME-tox性質(zhì)，這些物質(zhì)在下文中在本說明書中有時總體稱為藥物 (dmg)，但不限于藥物。具體而言，本發(fā)明的目的是預(yù)測藥物的磷脂沉積癥 (phospholipidosis)誘導(dǎo)或磷脂原性(phospholipidogenic)特性(在細胞中積累磷 脂)的方法，即預(yù)測藥物誘導(dǎo)的磷脂沉積癥的方法。最有可能導(dǎo)致磷脂沉積癥的化合物是陽離子的和兩親性的，通常稱作 CAD(陽離子兩親性藥物)。目前關(guān)于磷脂沉積癥的基本機理的觀點為這些藥 物與磷脂形成復(fù)合物(complex),從而抑制磷脂降解酶的功能，并且由于削弱的降解以及增強的合成而導(dǎo)致磷脂在溶酶體中的積累。為此，需要評價可能 有用的化合物與脂質(zhì)的結(jié)合的方法。本發(fā)明的目的在于通過評價所加入的物 質(zhì)(通常為藥物)對陰離子表面活性劑(有利地為磷脂)的表面活性性質(zhì)，尤其 是臨界膠束濃度(CMC)的影響來評價所述物質(zhì)與所述陰離子表面活性劑的 相互作用。
背景技術(shù)：
存在若干種測定CMC的技術(shù)，例如熒光分析、光散射、超聲吸收、電 導(dǎo)率、接觸角和表面張力或表面壓力測量法。化合物的疏水性通常通過測量 它們在辛醇/水兩相體系中的分配系數(shù)(logP)來確定。兩親性和去污性通常通 過測量物質(zhì)對水的表面張力的影響來確定。磷脂沉積癥(PLD)是已知的由某些藥物組分和藥物引起的副作用。磷脂 積累在細胞中，例如積累在肺、腎和肝中。磷脂在組織中的大量積累影響組 織正常的生理功能。特別是當(dāng)長期使用藥物時該問題加重，因為較大量的磷 脂可以積累在細胞中。這又可導(dǎo)致慢性、不可逆的磷脂沉積癥和器官衰竭。 對于醫(yī)藥行業(yè)來說這是嚴重而又費錢的問題，尤其是在藥物上市之后該問題 變得明顯因而必須從市場上撤回該藥物的情況下更是如此。目前存在兩種測試藥物是否會引起PLD的常用方法。 一種是使用細胞培養(yǎng)物并使用檢測在細胞中由藥物誘導(dǎo)的變化的方法。除了勞動密集之外， 該方法的缺點還在于這些分析中的再現(xiàn)性、尤其是實驗室之間的再現(xiàn)性傾向 于是差的。同樣地，細胞培養(yǎng)物需要持續(xù)的照顧，并且由于傳代培養(yǎng)中的遺 傳選擇，細胞培養(yǎng)物容易感染、容易受到生長環(huán)境的變化和細胞系的不穩(wěn)定性的影響。另一種方法是使用動物試驗。以上兩種方法都是花錢多的，因此它們僅 可在藥物的后期開發(fā)過程中使用，并且都不適于新的藥物化合物的大規(guī)模篩 選，例如在先導(dǎo)化合物的優(yōu)化中進行的大規(guī)模篩選。因此需要在開發(fā)過程早期揭示可能的PLD誘導(dǎo)特性的試驗，因為開發(fā)新藥物的成本隨著向產(chǎn)品開 發(fā)流水線末端的發(fā)展成指數(shù)級增加。這樣的試驗將在藥物開發(fā)中既省錢又省 時間，因為其可以識別并合理排除可能引起PLD的化合物。而且該信息還 可用于通過合適地調(diào)節(jié)化合物的物理化學(xué)性來改善化合物的化學(xué)性從而減 少其誘導(dǎo)PLD的可能性。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及預(yù)測物質(zhì)呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險的方法，所述方法 包括將所述物質(zhì)加入陰離子表面活性劑中以提供所述物質(zhì)和表面活性劑的 混合物，并通過測定該混合物的臨界膠束濃度(CMC)來確定所述物質(zhì)對所述 陰離子表面活性劑的CMC的影響，與添加所述物質(zhì)之前所述表面活性劑的 CMC相比，所述混合物的CMC的降低表明所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘 導(dǎo)特性的風(fēng)險。根據(jù)本發(fā)明，該方法 一 方面包括可將物質(zhì)和表面活性劑的混合物的 CMC與純表面活性劑的CMC對比，由此與純表面活性劑相比，CMC的降 低表明，所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。根據(jù)一個實施方式， 本發(fā)明還包括可將物質(zhì)和表面活性劑的所述混合物的CMC與物質(zhì)和表面活 性劑的第二混合物(其在表面活性劑中具有不同的物質(zhì)濃度)的CMC對比，由于物質(zhì)在其和表面活性劑的混合物中濃度的升高所導(dǎo)致該混合物的CMC 的降低表明，所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。因此，如果物 質(zhì)在第二混合物中的濃度低于其在所述混合物中的濃度，則與第二混合物的 CMC相比，所述混合物的CMC的降4氐表明，所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥 誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。所述后一可能性當(dāng)然還意味著，由于物質(zhì)在其和表面活性劑的混合物中 濃度的降低所導(dǎo)致的該混合物的CMC的升高表明，所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂 沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法總體上包括如下步驟增加物質(zhì)在陰離子表面 活性劑中的濃度，并通過測定物質(zhì)和表面活性劑的混合物的CMC來確定所 述物質(zhì)對所述陰離子表面活性劑的臨界膠束濃度(CMC)的影響，與增加所述 物質(zhì)在所述表面活性劑中的濃度之前表面活性劑的CMC相比，該混合物的 CMC的降低表明，所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。增加物質(zhì)的濃度包括將該物質(zhì)加入到不含該物質(zhì)的純的表面活性劑中、 以及將該物質(zhì)加入到該物質(zhì)和表面活性劑的混合物中以增加該物質(zhì)在表面 活性劑中的濃度。


在圖1中，顯示了測量的表面壓力兀與無量綱(除以mol/l)濃度的自然對 數(shù)ln(c/M)的關(guān)系圖的兩個實例純的DC8PS( 1,2-二辛?；?s"-丙三氧基-3-[磷 酉吏-L-絲氨酉吏])(1 ，2-dioctanoyl隱sw-glycero隱3-[phospho-L隱serine])(口)、 和慶大審 素:DC8PS = 1:100)。點劃線和箭頭示意性地顯示獲得CMC的原理。圖2顯示CMC與藥物:脂質(zhì)比的關(guān)系曲線的實例。連接線僅用于引導(dǎo)視 線。各符號如下氯氮平(B)、氟哌啶醇(o)、 l-苯基哌嗪(T)、氯丙嗪(羅)、 丙嗪(o)、心得安(羅)、乙胺碘呋酮(鎏)、慶大霉素(O)、和心舒寧(V)。圖3顯示產(chǎn)生對CMC最大影響一半的藥物:脂質(zhì)比111/2與用最高達1:2 的藥物:脂質(zhì)比所得到的CMC最小值的關(guān)系。各符號表示四組中之一的類別 第l組O):沒有引起磷脂沉積癥的可能性；第2組()在培養(yǎng)細胞中導(dǎo)致 磷脂沉積癥，但在動物中具有低的導(dǎo)致磷脂沉積癥的可能性；第3組0): 已知在動物中導(dǎo)致磷脂沉積癥；和第4組(f):已在人類中導(dǎo)致磷脂沉積癥 的物質(zhì)(參見Ploeman, J,R H. T. M.， J. Kelder, T. Hafmans， H. van de Sandt, J. A. van Burgsteden, P. J. M. Salemink， and E. van Esch (2004)， Use of physicochemical calculation of pKa and CLogP to predict phospholipidosis-inducing potential: A case study with structurally related piperazines，五wr. 7b:dc.尸a/Zzo/.;以及Morelli， J. K., M. Buehrle, F. Pognan， L R. Barone， W. Fieles, and P. J. Ciaccio (2006), Validation of an in vitro screen forphospholipidosis using a high-content biology platform. Ce〃所o/. 7b:dco/.)。各縮 寫如下ama:金剛烷胺、amio-乙胺碘呋酮、amit-阿米替林、bus-丁螺 i走酮、clomi =氯丙n米口秦、cloz-氯氮平、clq-氯p查、cpz二氯丙"秦、desi =去 曱丙咪嗪、doxo-阿霉素、gmen-慶大霉素、hp-氟哌啶醇、hyz:羥嗪、 imi =丙咪口秦、kcz =酉同康唾、map =麥普替林、mia =米安色林(mianserin)、 nort =去曱替林、l-php = l匿苯基。底嚷、phx =心舒寧、prom =丙。秦、prop =心 得安、tcyc =四環(huán)素、和thio =曱碌u。達。秦。
具體實施方式
當(dāng)溶液中表面活性劑的濃度增加時，其化學(xué)勢增加?；衔锘蛭镔|(zhì)在溶 液中的化學(xué)勢(Atkins, P. W,， Physical Chemistry,第五版，Oxford University Press, 1997)可視為表示將少量化合物加入到溶液中時體系自由能增加的系 數(shù)。在一些濃度下，體系將達到化學(xué)勢足以形成表面活性劑聚集體(通常為 膠束)的點，并且該濃度下過量的單體將形成聚集體或膠束，而低于該濃度 時則看不到聚集體，由此得名為臨界膠束濃度。在該點之后濃度的進一步增 加將不再顯著增加溶液中單體的濃度，而僅導(dǎo)致膠束數(shù)量的增加。在表面活 性劑和也可為表面活性劑的另 一化合物的混合物中，該混合物的臨界膠束濃 度取決于這兩種化合物之間相互作用的自由能。如果該表面活性劑和該另一 化合物之間的相互作用是有利的，則該混合物的臨界膠束濃度將低于單獨的 表面活性劑的臨界膠束濃度，或者低于其中該化合物濃度較低的混合物的臨 界膠束濃度。因此，藥物對表面活性劑的CMC的影響反映了藥物與表面活性劑之間 的相互作用自由能。這是令人感興趣的，因為已推測藥物與表面活性劑如磷 脂形成緊密的復(fù)合物的傾向會導(dǎo)致磷脂沉積癥。藥物與表面活性劑的相互作 用自由能也說明了這種形成復(fù)合物的趨勢。以上圖示的試驗證明，測量藥物 對表面活性劑的CMC的影響提供了預(yù)測藥物誘導(dǎo)磷脂沉積癥的可能性的良 好方法。然而，在生物膜和細胞中通常遇到的磷脂通常具有長的烷基鏈或酰 基鏈，即它們在其鏈中具有若干碳原子，通常具有14個以上的碳原子。這 種長鏈磷脂的CMC通常在納摩爾范圍內(nèi)或低于納摩爾范圍，因此這對于這 里使用的任何類型的實際測量來說都太小，就更不用說用于高通量篩選研究 了。本發(fā)明因此具有兩個方面使用藥物對表面活性劑CMC的影響來報告該藥物與表面活性劑(活細胞中的磷脂)形成復(fù)合物并引起磷脂沉積癥的趨勢；和使用表面活性劑(有利地為短鏈磷脂)使得這些測量在實驗上是可行的。 根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，評價物質(zhì)呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險 的方法還包括如下步驟測量所述物質(zhì)在表面活性劑中的溶液在空氣-水界況，或者對于所述物質(zhì)在表面活性劑中具有至少 一種濃度和對于純的表面活 性劑的情況，由該表面張力與表面活性劑濃度(例如其自然對數(shù))的函數(shù)來確 定臨界膠束濃度(CMC)根據(jù)本發(fā)明的方法還包括評價物質(zhì):表面活性劑比Rw(其中CMC降低了 由增加物質(zhì):表面活性劑比所得到的CMC最大變化的50%)，并且將得到的 物質(zhì):表面活性劑比111/2與R1/2的預(yù)定邊界限(boundary-limits)對比；和/或評 價所述物質(zhì)在表面活性劑中的最小CMC并將其與最小CMC的預(yù)定邊界限 對比；以及基于所述對比將藥物分類為至少兩個風(fēng)險組(例如指示所述物質(zhì) 誘導(dǎo)磷脂沉積癥的風(fēng)險的組或?qū)λ鑫镔|(zhì)誘導(dǎo)磷脂沉積癥的風(fēng)險進行分類 的組)之一。根據(jù)本發(fā)明，用于確定對CMC的影響的物質(zhì)/表面活性劑摩爾比為0.0 ~ 2.0，優(yōu)選為0.0~ 1.0或者0.0~0.5,即從純的表面活性劑(不含物質(zhì))至最高 達每摩爾的表面活性劑2摩爾的物質(zhì)，通常為最高達每摩爾的表面活性劑0.5 摩爾的物質(zhì)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，用于確定CMC的樣品體積可最高達50 |ul 且表面活性劑的濃度可最高達5mM。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，對于物質(zhì)和表面活性劑之間的至少一個比 值，通過分別測定純表面活性劑的CMC和含有所述物質(zhì)的表面活性劑的 CMC來確定物質(zhì)對CMC的影響。根據(jù)本發(fā)明，與相同的濃度的具有較差的CMC降低效應(yīng)的物質(zhì)相比， 具有較強的CMC降低效應(yīng)的物質(zhì)具有磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險較大，和/ 或與需要較高濃度的物質(zhì)來產(chǎn)生相同降低量的物質(zhì)相比，具有較小的濃度即 足以引起CMC的預(yù)定降低量的物質(zhì)具有磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險也較 大。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，陰離子表面活性劑是在所有鏈中總共含有 最多28個碳原子、優(yōu)選10 28個碳原子，并通常在一個碳鏈中含有4 12個碳原子的磷脂。用于本發(fā)明的典型磷脂為磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰肌醇和磷脂酰肌醇磷酸，和以上物質(zhì)各自的溶血脂質(zhì)(lysolipid)、 過氧化脂質(zhì)、氧化脂質(zhì)、縮醛磷脂和二烷基脂質(zhì)變體，以及具有足夠短的疏 水鏈以具有高于約l|iM的CMC的陰離子磷脂類似物和陰離子表面活性劑， 例如烷基和酰基磷酸酯或磷酸單曱酯等。根據(jù)本發(fā)明，還可使用表面活性劑的混合物。有利地使用藥物與表面活性劑的摩爾比為0~1的物質(zhì)和表面活性劑的 混合物測量表面張力或表面壓力(其為純表面的表面張力-在物質(zhì)的存在下 表面的表面張力)。通常需要至少4-5個點用于可靠地評價R,/2。根據(jù)本發(fā)明，可將藥物溶解在合適的溶劑例如DMSO或醇中?？珊唵斡行У剡M行表面活性(張力或壓力)測量，例如使用多孔板(well plate)進行測量，其中在多孔板的各行和列中具有例如不同的藥物和不同的藥 物濃度。 一種可用于這種表面活性測量的裝置為Kibron Inc.的MultiPi裝置。圖1顯示了使用表面壓力測量確定CMC的實例。 一旦本體濃度達到了 CMC，則表面壓力不再隨著濃度的進一步增加而顯著增加，因為濃度的這種 增加不再增加本體中的單體濃度和化學(xué)勢?；谠撛u價的CMC值，可作出 CMC與藥物:脂質(zhì)比的關(guān)系曲線圖，如圖2所示。根據(jù)本發(fā)明的 一個實施方式，可使用三次插值函數(shù)(cubic interpolation function)來得到其中CMC降低50 %即CMC = V2(p+m)的藥物:表面活性劑比 R1/2,其中p為在純表面活性劑中所得到的CMC,且m為含有藥物的表面活 性劑的最小CMC。參考圖3，根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，將藥物的藥物:脂質(zhì)比R^與限 定藥物誘導(dǎo)磷脂沉積癥的不同風(fēng)險的四個預(yù)定組的R!/2的預(yù)定邊界限對比。 而且可測定藥物的最小CMC并將其與最小CMC的相應(yīng)邊界限對比。所述 四個風(fēng)險組可定義為第l組沒有引起磷脂沉積癥的可能性；第2組具 有低的導(dǎo)致磷脂沉積癥的可能性；第3組已知在動物中導(dǎo)致磷脂沉積癥； 和第4組已知在人類中已導(dǎo)致磷脂沉積癥。邊界限是基于通過常規(guī)方法對 物質(zhì)是否引起磷脂沉積癥而進行的測試。評價所確定的結(jié)果的方法需要一組已知的化合物的磷脂原性可能性的 一些參考數(shù)據(jù)。這些數(shù)據(jù)可例如由細胞或動物實驗得到。使用來自這些參考 數(shù)據(jù)的值可對磷脂沉積癥的風(fēng)險水平進行歸類(assign)，該風(fēng)險水平與最大CMC降低和R!,2的不同的測試參數(shù)值有關(guān)(參見圖3)。基于磷脂原性可能性 已知的化合物所歸屬的風(fēng)險水平可評價未知化合物的磷脂原性可能性。根據(jù)本發(fā)明，如果藥物顯示任選地與高的最小CMC組合的高的R1/2， 則該藥物可分類為具有低的誘導(dǎo)磷脂沉積癥的風(fēng)險的藥物。另一方面，低的 111/2和/或低的最小CMC表明該藥物具有高的誘導(dǎo)磷脂沉積癥的風(fēng)險，這可 從例如圖3明顯看出。測試顯示，化合物與短鏈磷脂形成復(fù)合物的趨勢的直接測量與這些化合 物引起磷脂沉積癥的趨勢良好地相關(guān)，并由此可用于評價未知化合物誘導(dǎo)磷 脂沉積癥的可能性。實施例在實施例中，稱重并溶解適量的藥物粉末以制備62.5 mM的儲液(stock)， 并由該儲液制備12.5 mM和2.5 mM的稀釋液。在DMSO中制備儲液，除了 溶于水但不溶于DMSO的慶大霉素和既不溶于DMSO也不溶于水而必須溶 解在乙醇中的三苯氧胺之外。將磷脂1,2-二辛?；?^-丙三氧基-3-[磷酸丄-絲氨酸](DQPS)溶于氯仿中，其濃度是通過使用高精度微量天平測定重量而 確定的。首先，制備磷脂溶液，將適量的溶于氯仿中的DC8PS轉(zhuǎn)移到新的試管 中并在溫和的氮氣流下蒸發(fā)至干燥。接下來，將含有0.1 mMEDTA的20 mM HEPES緩沖液(pH 7.4)加到該干燥的脂質(zhì)上以產(chǎn)生5 mM的DC8PS濃度，并 劇烈混合樣品，隨后在60。C下溫育30分鐘，劇烈混合，并在60。C下再次溫 育30分鐘。然后使用移液管將各溶液吸移到96孔板中。首先，將175 pl的5 mM DC8PS溶液加入96孔板(其含有8行和12列)的第一列的各孔中。向所有其 它孔中加入105 pil的HEPES緩沖液。接下來，將7 pi的藥物儲液加入到第 一列的孔中。不同的藥物儲液即62.5 mM、 12.5 mM、和2.5mM的藥物儲液 分別提供1:2、 1:10、和l:50的藥物/磷脂摩爾比。在一些情況下，還測得1:1 的摩爾比，而這需要向第一列加入14 |Lll的藥物儲液。所有測量的每個板還含有其中僅加入代替藥物的7plDMSO的一行。因此，各板含有僅具有磷脂 的 一行和具有不同的藥物和/或不同的藥物:磷脂比的七行。使用多通道自動移液管混合第一列各孔中的內(nèi)容物，然后將第 一列中70|Lll的溶液轉(zhuǎn)移到第二列中105W的緩沖液中。接下來，混合第二列各孔中的內(nèi)容物，并將70^il的溶液轉(zhuǎn)移到第三列各孔中105nl的緩沖液中，并且像 這樣一列接一列地繼續(xù)下去直到達到第七列。這在后續(xù)各列之間產(chǎn)生大約 0.4的稀釋因子。這在不同列中產(chǎn)生大約如下的磷脂濃度(列數(shù)示于括號內(nèi)) 5.0mM(1)、 2.0 mM (2)、 0.80 mM (3)、 0.32 mM (4)、 0.128 mM (5)、 51 ,(6)、 20|aM(7)、 8.2,(8)、 3.3|iiM(9)、 1.3拜(10)、 0.52 pM (11)、和0(12)。 于是不同的行含有例如以下組成A行中僅含磷脂、B行中藥物1:磷脂= 1:50、 C行中藥物1:磷脂=1:10、 D行中藥物l:磷脂=1:2、 E行中藥物2:磷 月旨=1:50、 F行中藥物2:磷脂l:10、 G行中藥物2:磷脂=1:2、和H行中藥 物3:磷脂=1:50。用移液管從96孔板各個孔中吸移50 pi的溶液并將其轉(zhuǎn)移到Kibron測 量板上相應(yīng)的孔中，然后讓該分配物穩(wěn)定10~ 15分鐘。此后，使用Kibron Delta-8多通道表面張力計測量各個孔中的表面張力，并通過使用專用軟件 評價達到最小表面張力(最大表面壓力)時的濃度而獲得臨界膠束濃度。
權(quán)利要求
1.預(yù)測物質(zhì)呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險的方法，所述方法包括將所述物質(zhì)加入到陰離子表面活性劑中以提供所述物質(zhì)和表面活性劑的混合物，并通過測定該混合物的臨界膠束濃度(CMC)來確定所述物質(zhì)對所述陰離子表面活性劑的CMC的影響，與添加所述物質(zhì)之前所述表面活性劑的CMC相比，CMC的降低表明所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。
2. 權(quán)利要求1的方法，包括將物質(zhì)和表面活性劑的所述混合物的CMC 與純表面活性劑的CMC對比，與純表面活性劑相比，CMC的降低表明所述 物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險；或者將所述混合物的CMC與由 物質(zhì)和表面活性劑組成的含有不同濃度物質(zhì)的第二混合物的CMC對比，由 該物質(zhì)在該表面活性劑中濃度的升高所導(dǎo)致的CMC的降低表明，所述物質(zhì) 具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。
3. 權(quán)利要求l的方法，進一步包括如下步驟測量所述物質(zhì)在所述表面活性劑中的溶液在空氣-水界面處的表面張力；濃度的情奪況，或者對于所述物質(zhì)在所述表面活性劑中具有至少一種濃度和對于純的表面活性 劑的情況，由該表面張力相對于該表面活性劑濃度的函數(shù)來確定臨界膠束濃度(CMC)。
4. 權(quán)利要求1 ~3中任一項的方法，包括確定當(dāng)CMC降低了由增加物質(zhì):表面活性劑比所得到的CMC最大變化 的50 %時的物質(zhì):表面活性劑比R1/2;將所得的物質(zhì):表面活性劑比R!/2與111/2的預(yù)定邊界限對比；和/或確定 所述物質(zhì)在表面活性劑中的最小CMC并將其與最小CMC的預(yù)定邊界限對 比；和基于所述各對比，將藥物分類為至少兩個風(fēng)險組之一，所述風(fēng)險組例如 指示所述物質(zhì)誘導(dǎo)磷脂沉積癥的風(fēng)險或?qū)λ鑫镔|(zhì)誘導(dǎo)磷脂沉積癥的風(fēng)險 進行分類。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中所述Rw對應(yīng)于當(dāng)CMC的值為CMC=V2(p+m) 時的物質(zhì)/表面活性劑的比，其中p為在純的脂質(zhì)中得到的CMC,且m為對含有該物質(zhì)的表面活性劑所測定的最小CMC 。
6. 權(quán)利要求3的方法，其中所述函數(shù)為繪制的曲線。
7. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述表面活性劑為磷脂。
8. 權(quán)利要求7的方法，其中所述磷脂為磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、 磷脂酸、磷脂酰肌醇或磷脂酰肌醇磷酸，或者前述物質(zhì)的溶血脂質(zhì)、過氧化 脂質(zhì)、氧化脂質(zhì)、縮醛磷脂、或二醚脂質(zhì)(二烷基脂質(zhì))衍生物，磷脂類似物， 或類磷脂陰離子表面活性劑，其中所述磷脂在所有鏈中加起來的碳原子總數(shù) 少于28個。
9. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述物質(zhì)溶解在水溶性溶劑如 DMSO中。
10. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述物質(zhì)為兩親性和/或陽離子性物質(zhì)。
11. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述物質(zhì)為藥物化合物。
12. 權(quán)利要求4的方法，其中使用四個風(fēng)險組來指示所述物質(zhì)誘導(dǎo)磷脂 沉積癥的風(fēng)險。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述四個組定義為第l組沒有引起 磷脂沉積癥的可能性；第2組具有低的導(dǎo)致磷脂沉積癥的可能性；第3組 已知在動物中導(dǎo)致磷脂沉積癥；和第4組已知已在人類中導(dǎo)致磷脂沉積癥。
14. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，包括在最高達2.0,優(yōu)選最高達l.O 的范圍內(nèi)的物質(zhì)/表面活性劑摩爾比下測定CMC。
15. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中用于測定CMC的樣品體積最 高達50 nl且所述表面活性劑的濃度最高達5mM。
16. 前述權(quán)利要求中任一項的方法，包括對于至少一個物質(zhì)/表面活性劑 比值，測定純表面活性劑的CMC以及含有所述物質(zhì)的所述表面活性劑的 CMC。
全文摘要
本發(fā)明涉及預(yù)測物質(zhì)呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險的方法，該方法包括將所述物質(zhì)加入到陰離子表面活性劑中以形成所述物質(zhì)和所述表面活性劑的混合物，并通過測定該混合物的臨界膠束濃度(CMC)來確定所述物質(zhì)對所述陰離子表面活性劑的CMC的影響，與添加所述物質(zhì)之前所述表面活性劑的CMC相比，CMC的降低表明所述物質(zhì)具有呈現(xiàn)磷脂沉積癥誘導(dǎo)特性的風(fēng)險。
文檔編號G01N33/50GK101600964SQ200780050942
公開日2009年12月9日 申請日期2007年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月5日
發(fā)明者帕沃·金納南, 朱哈-馬蒂·阿拉科斯凱拉 申請人:帕沃·金納南