專利名稱：：血液學(xué)線性對照組合物、體系和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種線性基準(zhǔn)對照組合物和一種線性對照體系，該體系能夠驗(yàn)證血液學(xué)分析儀在延伸的濃度范圍內(nèi)對白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板的可報(bào)告的測定范圍和測量的線性。
背景技術(shù)：
：在臨床血液病學(xué)上，質(zhì)量對照一直是必需和常規(guī)的程序。多種類型的血細(xì)胞計(jì)數(shù)中的精確性部分地取決于足夠的對照物產(chǎn)品的應(yīng)用和使用該對照物產(chǎn)品的方法。隨著目前有許多型號的設(shè)備可用于顆粒計(jì)數(shù)，通過利用對照物產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量對照是必需的，因?yàn)閮x器故障的可能性總是存在的。保持用于自動(dòng)顆粒計(jì)數(shù)設(shè)備的質(zhì)量對照程序的傳統(tǒng)方法一直包括提供新鮮的人類血液作為全血標(biāo)準(zhǔn)。然而，該新鮮血液僅可用一天，因此，人們已開發(fā)出多種具有較長產(chǎn)物使用壽命的被制備的對照物產(chǎn)品。在對照物產(chǎn)品中通常使用的顆粒類似于或者近似于準(zhǔn)備經(jīng)受分析的顆?；蚣?xì)胞類型。因此，這些顆粒經(jīng)常被稱作類似顆粒。應(yīng)篩選或者設(shè)計(jì)這些類似顆粒，從而使它們具有類似于儀器中的待分析顆?；蚣?xì)胞的某些特征。例舉的特征包括在大小、體積、表面特征、粒度性能、光散射性能和熒光性能方面的相似性。目前有多種商品化的基準(zhǔn)對照物產(chǎn)品可以使用，這些基準(zhǔn)對照物產(chǎn)品使用不同的經(jīng)處理的或者被固定的人或動(dòng)物血細(xì)胞作為人類血細(xì)胞的類似物。美國專利No.5,512,485(Young等)公開了一種血液學(xué)對照物，其包含數(shù)種由經(jīng)處理的和被固定的動(dòng)物有核血細(xì)胞制成的白細(xì)胞類似物。這些白細(xì)胞類似物被設(shè)計(jì)成具有類似于白細(xì)胞亞群的特性?？缮虡I(yè)購買的血液學(xué)對照物還可以含有紅細(xì)胞、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞和有核紅細(xì)胞成分，并且它們中有許多由細(xì)胞類似物制成。此外，某些無核的紅細(xì)胞，比如人類、火雞和6鯊魚紅細(xì)胞，已經(jīng)被用于制備用于血液學(xué)基準(zhǔn)對照物的白細(xì)胞亞種群類似物，如美國專利No.4,704,364(Carver等)所述的那些。對照物產(chǎn)品已被用于來確定儀器是否具有如廠商的說明書所述的適當(dāng)?shù)墓δ堋＿@些對照物產(chǎn)品可以被分成兩種類型。第一種類型是綜合的對照物，其含有一個(gè)以上類型的細(xì)胞組分例如紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板成分。第一種類型對照物產(chǎn)品的商品例子包括貝克曼考爾特公司的COULTER化@細(xì)胞對照物和Streck實(shí)驗(yàn)室公司的Para12@細(xì)胞對照物。這些產(chǎn)品典型地被構(gòu)造成三個(gè)水平，即，正常、異常高和異常低，其通常模擬看來正常但臨床異常的血液樣品。然而，這些綜合的對照物不能被用于測試并檢驗(yàn)用于血液分析儀各種測量的全部可報(bào)告范圍，因?yàn)閱蝹€(gè)組分的濃度不夠高或者不夠低。已知增大組分的濃度會(huì)由于在綜合的對照物產(chǎn)品中的細(xì)胞顆粒的聚集而產(chǎn)生一些問題。因此，人們已經(jīng)開發(fā)出第二種類型的對照物產(chǎn)品，這是為測試在血液分析儀上進(jìn)行的各種測量的可報(bào)告范圍并且確定報(bào)告參數(shù)的線性而專門設(shè)計(jì)的。第二種類型的對照物產(chǎn)品典型地以在特定儀器整個(gè)可報(bào)告的范圍內(nèi)的不同濃度而含有單一血細(xì)胞組分，比如僅含白細(xì)胞類似物或者僅含血小板類似物。以這種方式，可以在某種程度上避免與含有一種以上類型的血細(xì)胞組分的綜合的對照物有關(guān)的問題。第二種類型的對照物產(chǎn)品的例子包括Streck實(shí)驗(yàn)室公司的CVA產(chǎn)品和R&D系統(tǒng)CBC-Line線性試劑盒。然而，現(xiàn)有的第二種類型對照物產(chǎn)品具有各種缺陷。首先，使用單組分線性對照物用于確定數(shù)種血液學(xué)參數(shù)測量的線性是費(fèi)時(shí)的和勞動(dòng)力密集的。目前，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、以及血紅蛋白濃度是最頻繁地需進(jìn)行測量值線性的確認(rèn)的可報(bào)告的參數(shù)。典型地，對于各個(gè)可報(bào)告的參數(shù)，要求5至8個(gè)具有各種濃度的對照組合物用于測試整個(gè)可報(bào)告的范圍。因此，現(xiàn)有的線性對照物試劑盒含有基本數(shù)量的對照物小瓶，例如，超過20個(gè)對照物小瓶，以用于如上所述四個(gè)參數(shù)的線性測定。通常，需要花費(fèi)一個(gè)小時(shí)以上用于測試線性對照物試劑盒中所有的對照物小瓶。其次，高濃度的單個(gè)血細(xì)胞組分仍然趨向于聚集或者凝結(jié)一起，造成產(chǎn)品使用困難。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)高濃度的白細(xì)胞類似物尤其會(huì)發(fā)生聚集。在使用這些對照物產(chǎn)品之前，需要?jiǎng)×覕噭?dòng)以便分散細(xì)胞顆粒。這很費(fèi)時(shí)，典型地，在儀器上被使用之前要花費(fèi)數(shù)分鐘來混合并澄清WBC對照物以便進(jìn)行測試。另外，劇烈攪動(dòng)可能對對照組合物中的細(xì)胞組分有害，于是現(xiàn)有的線性對照物試劑盒對于不同的細(xì)胞成分通常需要不同的混合程序。例如，在R&D系統(tǒng)CBC-Line線性試劑盒中，要求WBC&PLT對照物的各個(gè)試管渦旋混合2分鐘，然后澄清10分鐘以允許微泡消散，并且在儀器上使用之前立即快速地倒置8至10次；同時(shí)RBC對照物被要求在沒有渦旋混合或者機(jī)械混合的情況下通過在手掌之間人工轉(zhuǎn)動(dòng)試管而進(jìn)行混合。再次，一些第二種類型的對照物產(chǎn)品被作為單組分濃縮物提供，其需要操作者進(jìn)行人工稀釋。這不但需要在儀器測試之前進(jìn)一步花費(fèi)時(shí)間來制備對照組合物，而且也會(huì)給測量帶來額外的誤差。該情況下，參考值由操作者基于稀釋而建立，其不受對照物產(chǎn)品的生產(chǎn)廠商的控制。因此，強(qiáng)烈需要可解決一個(gè)或多個(gè)這些問題的改進(jìn)的線性對照組合物和改進(jìn)的線性對照體系。
發(fā)明內(nèi)容在一個(gè)方面，本發(fā)明的目的在于提供一種線性對照組合物，其包含濃度大于120x103個(gè)類似物/微升、優(yōu)選大于150><103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物；預(yù)定濃度的穩(wěn)定化紅細(xì)胞；以及懸浮介質(zhì)；其中，通過輕輕混合，穩(wěn)定化紅細(xì)胞促進(jìn)了白細(xì)胞類似物在懸浮介質(zhì)中的單分散。優(yōu)選在線性對照組合物中，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度至少是1.5x106個(gè)細(xì)胞/微升。該線性對照組合物可以包含血小板類似物，任選地進(jìn)一步包含有核紅細(xì)胞類似物、網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物、或其組合物。在另一方面，本發(fā)明的目的在于提供一種線性對照體系，其包含一系列線性對照組合物，其中每一個(gè)線性對照組合物都包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物、濃度范圍為0.1x106至9><106個(gè)細(xì)胞/微升的穩(wěn)定化紅細(xì)胞、以及懸浮液介質(zhì)；其中，在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度從0.2x103個(gè)類似物/微升增加到800><103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升，而穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度是至少1.5x106個(gè)細(xì)胞/微升，并且其中，通過輕輕混合，穩(wěn)定化紅細(xì)胞促進(jìn)了白細(xì)胞類似物在懸浮介質(zhì)中的單分散。在該線性對照體系中，每一個(gè)對照組合物都被包含在不需要人工稀釋的預(yù)包裝的小瓶中。該線性對照體系還包含含有懸浮介質(zhì)、但不含細(xì)胞顆粒的介質(zhì)小瓶，用于建立其線性待被評估的測量背景。任選地，線性對照體系可以進(jìn)一步包括一種以上單組分小瓶，該小瓶含有選自下組的單一組分血小板類似物、穩(wěn)定化紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物和有核紅細(xì)胞類似物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的在于提供一種方法，用于確定在延伸的白細(xì)胞濃度范圍內(nèi)血液分析儀的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性。該方法包括下述步驟(a)提供一系列線性對照組合物；每一個(gè)對照組合物都包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物、8預(yù)定濃度的穩(wěn)定化紅細(xì)胞和懸浮介質(zhì)；在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度增加的范圍為0.2x103至800x103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120><103個(gè)類似物/微升；(b)輕輕混合對照組合物以便在懸浮介質(zhì)中分散白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞；(c)在血液分析儀上分析每一個(gè)對照組合物，并且得到每一個(gè)對照組合物的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的報(bào)告值；以及(d)使用對照組合物的報(bào)告值和測定參數(shù)來確定在血液分析儀的延伸范圍內(nèi)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性。在又一個(gè)方面，本發(fā)明的目的在于提供一種方法，用于確定在延伸的細(xì)胞濃度范圍內(nèi)血液分析儀的紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板計(jì)數(shù)的線性。該方法包括下述步驟(a)提供一系列對照組合物；每一個(gè)對照組合物都包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物、濃度范圍為約O.lx106至約9><106個(gè)細(xì)胞/微升的穩(wěn)定化紅細(xì)胞、濃度為高達(dá)7,000x103個(gè)類似物/微升的血小板類似物、以及懸浮介質(zhì)；在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度增加的范圍為0.2x103至800x103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升；至少五個(gè)對照組合物具有白細(xì)胞計(jì)數(shù)的測定參數(shù)，并且至少五個(gè)對照組合物具有紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度的測定參數(shù)，并且至少五個(gè)對照組合物具有血小板計(jì)數(shù)的測定參數(shù)；(b)輕輕混合對照組合物，以便在懸浮介質(zhì)中分散類似物和細(xì)胞；(c)在血液分析儀上分析每一個(gè)對照組合物，并且得到每一個(gè)對照組合物的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、以及血小板計(jì)數(shù)的報(bào)告值；以及(d)使用對照組合物的報(bào)告值和測定參數(shù)來確定血液分析儀的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、以及血小板計(jì)數(shù)的線性。輕輕混合對照組合物以便在懸浮介質(zhì)中分散類似物這一過程的混合時(shí)間少于90秒、優(yōu)選少于50秒。在輕輕混合后，所有對照組合物直接在血液分析儀上使用，無需人工稀釋。該方法使用少于14個(gè)、優(yōu)選少于12個(gè)對照組合物，用于確定紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板計(jì)數(shù)的線性。通過下述內(nèi)容的描述，結(jié)合顯示本發(fā)明的具體實(shí)施方式的附圖，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。9圖1顯示了有代表性的示意圖，其顯示了通過使用本發(fā)明的線性對照體系而得到的血液分析儀的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性測定結(jié)果。圖2顯示了有代表性的示意圖，其顯示了通過使用本發(fā)明的線性對照體系而得到的血液分析儀的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性測定結(jié)果。圖3顯示了有代表性的示意圖，其顯示了通過使用本發(fā)明的線性對照體系而得到的血液分析儀的血小板計(jì)數(shù)的線性測定結(jié)果。圖4顯示了有代表性的示意圖，其顯示了通過使用本發(fā)明的線性對照體系而得到的血液分析儀的血紅蛋白測量的線性測定結(jié)果。具體實(shí)施例方式在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種線性基準(zhǔn)對照組合物，其在懸浮介質(zhì)中包含白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞，其中，通過輕輕混合，穩(wěn)定化紅細(xì)胞促進(jìn)了白細(xì)胞類似物在懸浮介質(zhì)中的單分散。優(yōu)選線性對照組合物還包含血小板類似物。任選地，線性對照組合物可以進(jìn)一步包含網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物、有核紅細(xì)胞類似物、或其組合物。在一種實(shí)施方式中，線性基準(zhǔn)對照組合物包含的白細(xì)胞類似物的濃度大于120"03個(gè)類似物/微升(pL)，并且優(yōu)選大于150><103個(gè)類似物微升。根據(jù)血液分析儀的測定范圍選擇白細(xì)胞類似物的濃度。在血液分析儀上，以"03個(gè)/微升為單位報(bào)告血液樣品中的白細(xì)胞濃度(WBC)，該單位通常也被稱作白細(xì)胞計(jì)數(shù)。為了評估濃度超過100x103個(gè)/^L的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性，線性對照組合物可以含有120x103少于800x103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物。制備在線性對照組合物中使用的白細(xì)胞類似物的工藝已經(jīng)在美國專利No.4,704,364(Carver等)和美國專利No.5,512,485(Young等)中進(jìn)行了詳細(xì)描述，現(xiàn)將其全部內(nèi)容并入本文以引為參考。更特別地，Carver等介紹的單核細(xì)胞類似物和Young等介紹的淋巴細(xì)胞類似物尤其適合于本發(fā)明。在下文描述的實(shí)施例中進(jìn)一步提供制備合適的白細(xì)胞類似物的工藝。在另一種實(shí)施方式中，線性基準(zhǔn)對照組合物包含兩種以上不同類型的白細(xì)胞類似物，每一類型代表單獨(dú)的白細(xì)胞亞群，總的白細(xì)胞類似物濃度大于120><103個(gè)類似物/微升、并且優(yōu)選大于150x103個(gè)類似物/微升。更具體地講，該白細(xì)胞類似物可以包含一種以上白細(xì)胞亞群的類似物，例如，兩種、三種、四種或五種白細(xì)胞亞群類似物，以便模擬白細(xì)胞亞群而用于差異分析。白細(xì)胞類似物的合適例子包括被穩(wěn)定化和固定的哺乳動(dòng)物白細(xì)胞、以及經(jīng)處理的和/或固定的人類和動(dòng)物紅細(xì)胞，這已為本
技術(shù)領(lǐng)域：
所熟知。在一種實(shí)施方式中，白細(xì)胞類似物可以由經(jīng)處理的鳥類和人類紅細(xì)胞制成，用于使用阻抗測量的計(jì)數(shù)和差異分析，這在美國專利No.4,704,364中被公開，在此將其全部內(nèi)容引入本文以供參考。在另一個(gè)實(shí)施方式中，白細(xì)胞類似物可以由經(jīng)處理的鵝或鍔魚紅細(xì)胞制成，用于使用阻抗測量和光散射測量組合的差異分析，如同在美國專利No.5,320,964和5,512,485中公開的那樣，在此將其全部內(nèi)容引入本文以供參考。在另一種實(shí)施方式中，該白細(xì)胞類似物可以由被固定的哺乳動(dòng)物白細(xì)胞制成。在白細(xì)胞類似物的制備期間，在裂解全血中的紅細(xì)胞之前固定哺乳動(dòng)物白細(xì)胞。任選地，可以通過在制備白細(xì)胞類似物的工藝期間與脂蛋白相接觸而進(jìn)一步地處理哺乳動(dòng)物白細(xì)胞和紅細(xì)胞。與脂蛋白的接觸可以發(fā)生在固定白細(xì)胞或紅細(xì)胞之前；還可以發(fā)生在固定之后以及在懸浮介質(zhì)中保存期間，這在美國專利No.5,320,964、5,512,485、6,406,915、6,403,377、6,399,388、6,221,668和6,200,500中被公開，現(xiàn)將其全部內(nèi)容引入本發(fā)明作為參考。如上所述，線性對照組合物包含穩(wěn)定化紅細(xì)胞。在線性對照組合物中，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度范圍為約O.lx106至9x106個(gè)細(xì)胞/微升。穩(wěn)定化紅細(xì)胞可以是穩(wěn)定化的人或動(dòng)物紅細(xì)胞，優(yōu)選是穩(wěn)定化的人類紅細(xì)胞。制備穩(wěn)定化紅細(xì)胞的工藝已經(jīng)在美國專利No.4,299,726和4,358,394中進(jìn)行了詳細(xì)描述，在此將其全部內(nèi)容引入本文以供參考。在下文描述的實(shí)施例中進(jìn)一步提供制備合適的穩(wěn)定化紅細(xì)胞的工藝。線性對照組合物中的穩(wěn)定化紅細(xì)胞用于數(shù)種目的。首先，穩(wěn)定化紅細(xì)胞可促進(jìn)或者有助于白細(xì)胞類似物的分散。如前所述，白細(xì)胞類似物濃度超過100><103個(gè)類似物/微升的現(xiàn)有商品線性對照物經(jīng)常具有大量的類似物聚集體，這要求在血液分析儀上使用產(chǎn)品之前進(jìn)行劇烈的混合和額外的快速倒置。這些混合步驟可能很費(fèi)時(shí)，并且可能對線性對照組合物中的一種以上組分有害，這可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)存在基本含量的穩(wěn)定化紅細(xì)胞時(shí)，以實(shí)質(zhì)上高濃度比如數(shù)十萬存在于線性對照組合物中的白細(xì)胞類似物，不會(huì)形成大量的聚集體；可以用與混合所含細(xì)胞顆粒的濃度相當(dāng)于正常血液樣品中的細(xì)胞顆粒濃度的那些基準(zhǔn)對照物同樣的方式，通過輕輕混合包裝在對照物小瓶中的即時(shí)的線性對照組合物(instantlinearitycontrolcomposition)而將白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞單分散。雖然這種效果的機(jī)制尚不完全明了，但人們相信這樣的效果至少部分地歸因11于如下事實(shí)當(dāng)存在大量的穩(wěn)定化紅細(xì)胞、典型地比白細(xì)胞類似物高幾倍的穩(wěn)定化紅細(xì)胞時(shí)，穩(wěn)定化紅細(xì)胞可有效地抑制白細(xì)胞類似物因存放期間對照組合物中的這些細(xì)胞顆粒沉淀而堆積或粘在一起。在此使用的術(shù)語"輕輕混合"包括手動(dòng)地旋轉(zhuǎn)和/或倒置含有對照組合物的容器比如試管或小瓶、或者用機(jī)械方法比如在滾筒上慢慢地旋轉(zhuǎn)容器。緩慢的機(jī)械轉(zhuǎn)動(dòng)經(jīng)常在臨床實(shí)驗(yàn)中使用，用于典型地以約4rpm至約10rpm的速度來混合在Vacutaine產(chǎn)試管中收集的人類外周血液樣品?；旌媳景l(fā)明的線性對照組合物的轉(zhuǎn)速相當(dāng)于混合人類外周血液樣品的速度。此外，在此使用的術(shù)語"輕輕混合"不包括機(jī)械攪拌或渦旋混合。本發(fā)明的線性對照組合物的混合時(shí)間少于90秒。典型地，混合時(shí)間少于50秒，并且優(yōu)選少于40秒。通常，下述實(shí)施例7中描述的人工混合程序中，用于單個(gè)對照物小瓶的混合時(shí)間是約20至30秒。混合時(shí)間定義為對于下述處理所需要的時(shí)間在血液分析儀上使用之前，輕輕混合包含在容器比如對照物小瓶中的對照組合物以便實(shí)現(xiàn)組合物中類似物和/或細(xì)胞的單分散。在此使用的術(shù)語"單分散"意思指顆粒被單個(gè)地分散，在兩個(gè)顆粒之間不發(fā)生聚集。已知?jiǎng)×覕噭?dòng)趨向于對線性對照組合物中包含的一種以上組分有害，并且可能會(huì)不利地影響血液分析儀上的組分的測量。通過如上所述在較短的時(shí)間周期內(nèi)輕輕混合對照物小瓶，完全避免渦旋混合或其他的劇烈的混合模式，可以將本發(fā)明的線性對照組合物單分散在懸浮介質(zhì)中。這是本發(fā)明相比本
技術(shù)領(lǐng)域：
現(xiàn)有線性對照物產(chǎn)品的主要優(yōu)點(diǎn)。其次，穩(wěn)定化紅細(xì)胞摻入線性對照組合物中能夠使線性對照組合物具有包含白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞的綜合的基準(zhǔn)對照組合物，以使得各組分的單獨(dú)設(shè)置對于檢驗(yàn)血液分析儀的可報(bào)告的白細(xì)胞和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍而言是不必要的。應(yīng)理解，穩(wěn)定化紅細(xì)胞摻入線性對照組合物中進(jìn)一步能夠驗(yàn)證可報(bào)告的血紅蛋白濃度范圍和血紅蛋白測量的線性。在血液分析儀上，血液樣品中的紅細(xì)胞濃度(RBC)典型地以><106個(gè)/微升的單位被報(bào)告，該單位通常也被稱作紅細(xì)胞計(jì)數(shù)；并且血紅蛋白濃度(Hgb)以克/分升(g/dl)的單位被報(bào)告。另外，在血液分析儀上的白細(xì)胞測量中，血液樣品中的紅細(xì)胞被細(xì)胞溶解劑溶解，并且殘留的白細(xì)胞被儀器計(jì)數(shù)或區(qū)分?？深A(yù)期地，在即時(shí)的線性對照組合物中，穩(wěn)定化的紅細(xì)胞以與人血液樣品中的穩(wěn)定化紅細(xì)胞相當(dāng)?shù)臐舛却嬖谶M(jìn)一步使得能夠在血液分析儀上評估反應(yīng)條件，所述反應(yīng)條件包括細(xì)胞溶解劑的質(zhì)量、反應(yīng)時(shí)間、溫度、以及混合等。這會(huì)提供額外的信息，該信息不能通過使用不包含紅細(xì)胞的對照組合物得到。典型地，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度隨著白細(xì)胞類似物濃度的提高而提高。雖然在線性對照組合物中單個(gè)組分的顆粒濃度非常高，但在線性對照組合物中的穩(wěn)定化紅細(xì)胞濃度被相應(yīng)地降低，從而避免極高的總顆粒濃度。例如，如前所述，線性對照組合物可以任選地包括血小板類似物。當(dāng)白細(xì)胞類似物被增加、典型地大于120x103個(gè)類似物/微升，并且血小板類似物被增加、典型地大于lx106個(gè)類似物/微升時(shí)，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度可以被相應(yīng)地降低，從而避免過高的總顆粒濃度。然而，當(dāng)白細(xì)胞類似物濃度大于120x103個(gè)類似物/微升時(shí)，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度是至少1.5xl()S個(gè)細(xì)胞/微升、優(yōu)選大于2><106個(gè)細(xì)胞/微升，從而有助于白細(xì)胞類似物的分散。任選地，線性對照組合物進(jìn)一步包括血小板類似物。在線性對照組合物中血小板類似物的濃度可以是從0直至7x106個(gè)血小板/微升。血小板類似物可以是穩(wěn)定化的人或動(dòng)物血小板，或者可以由其他細(xì)胞類型制得。一個(gè)合適的例子是使用經(jīng)處理的山羊紅血球作為血小板類似物，如同在美國專利No.4,264,470、4,389,490和4,405,719中公開的那樣，現(xiàn)將其全部內(nèi)容并入本文以引為參考。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，血小板類似物的濃度隨著白細(xì)胞類似物的濃度提高而提高。然而，預(yù)期血小板類似物的濃度可能會(huì)隨著白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度增加而降低，以便在線性對照組合物中避免過高的總顆粒計(jì)數(shù)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，線性對照組合物還包含用于分析網(wǎng)織紅細(xì)胞的網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物。該網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物可以通過使用本
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的方法，例如，在美國專利No.6,399,388、6,403,377和6,406,915中所描述的方法而制備，在此將其全部內(nèi)容引入本文以供參考。類似于血小板類似物的濃度，網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物的濃度優(yōu)選隨著白細(xì)胞類似物的濃度的提高而提高，但是還可以隨著線性對照組合物中其他組分的濃度的增加而減小，從而避免線性對照組合物中過高的總顆粒計(jì)數(shù)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，線性對照組合物還包含用于有核紅細(xì)胞分析的有核紅細(xì)胞類似物。該有核紅細(xì)胞類似物可以通過使用本
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的方法而制得。制造有核紅細(xì)胞的有代表性的方法在美國專利No.5,858,790;5,648,225、5,879,900、6,187,590;6,200,500;6,221,668;6,406,915;6,406,915;6,448,085;6,653,137;6,723,563;以及專利申請公開No.US2003/0104631中得到描述，在此將其全部內(nèi)容引入本文以供參考。類似于血小板類似物和網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物的濃度，有核紅細(xì)胞類似物的濃度優(yōu)選隨著白細(xì)胞類似物濃度的提高而提高，但是還可以隨著線性對照組合物中其他組分濃度的增加13而減小，從而避免線性對照組合物中過高的總顆粒計(jì)數(shù)。懸浮介質(zhì)的一個(gè)合適例子包括磷酸鹽緩沖鹽水溶液，并且任選地包括血漿物質(zhì)的水溶液。按照此處的限定，血漿物質(zhì)的水溶液包括血清物質(zhì)的水溶液、血清物質(zhì)與血漿蛋白質(zhì)的組合的水溶液、及其混合物的水溶液。按照此處的進(jìn)一步限定，血漿蛋白質(zhì)包括血漿中所含的一種或多種蛋白質(zhì)。優(yōu)選這樣的血漿蛋白質(zhì)包括白蛋白、脂蛋白、球蛋白、纖維蛋白原、及其混合物。這些介質(zhì)將含有其他已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的成分，以使其具有長期穩(wěn)定性。實(shí)施例4提供了該懸浮介質(zhì)的兩種樣品配方。其他合適的介質(zhì)例子大多在美國專利No.4,213,876、4，299，726、4,358,394、3,873，467、4,704，364、5,320,964、5,512,485和6，569，682中進(jìn)行了描述，在此將其全部內(nèi)容引入本文以供參考。實(shí)施例和2提供了制備用于本發(fā)明的線性對照組合物的白細(xì)胞類似物的示例性的工藝。在實(shí)施例1中，當(dāng)如同美國專利No.4,704,364(Carver等)中描述的那樣通過阻抗測量時(shí)，白細(xì)胞類似物是單核細(xì)胞類似物。在實(shí)施例2中，當(dāng)如同美國專利No.5,320,964(Young等)中描述的那樣通過VCS測量法測量時(shí)，白細(xì)胞類似物是淋巴細(xì)胞類似物。實(shí)施例3提供了一種制備在線性對照組合物中使用的血小板類似物的示例性的工藝。另外，實(shí)施例5提供了一種制備可以在線性對照組合物中使用的穩(wěn)定化紅細(xì)胞的示例性工藝。研究發(fā)現(xiàn)，含有如上所述的高濃度的白細(xì)胞類似物、穩(wěn)定化紅細(xì)胞和任選的血小板類似物的本發(fā)明的線性對照組合物兼具開口小瓶穩(wěn)定性和密閉小瓶穩(wěn)定性，所述穩(wěn)定性基本上與具有相當(dāng)于正常人血液樣品的細(xì)胞顆粒濃度的現(xiàn)有基準(zhǔn)對照物的穩(wěn)定性相當(dāng)。更具體地講，含有濃度大于120x103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物的即時(shí)的線性對照組合物具有在2~8。C下儲(chǔ)藏時(shí)超過120天的封閉小瓶穩(wěn)定性(closedvialstability)，并且具有在2~8°C下儲(chǔ)存時(shí)超過30天的開口小瓶穩(wěn)定性(openvialstability)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種線性對照體系，其包含一系列如上所述的線性對照組合物，其中在該系列中，白細(xì)胞類似物的濃度從0.2><103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升，并且穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度范圍為0.1x106至9x106個(gè)細(xì)胞/微升。在該線性對照體系中，至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)對照組合物含有濃度大于120x103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物。每一個(gè)線性對照組合物都被預(yù)先包裝在容器比如試管或小瓶中。在一個(gè)實(shí)施方式中，線性對照體系包含14個(gè)以下、優(yōu)選12個(gè)以下、并且更優(yōu)選10個(gè)以下一系列如上所述預(yù)先包裝的線性對照組合物，其足以用于確定紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板計(jì)數(shù)的線性?？深A(yù)期地，在血液分析儀上測試數(shù)個(gè)可報(bào)告參數(shù)的線性對于操作者而言可能較費(fèi)時(shí)，并且減少了使用儀器用于真正的血液樣品診斷分析的可利用的時(shí)間。因此，該線性對照體系優(yōu)選包括最小數(shù)量的需要被測試來檢驗(yàn)儀器的可報(bào)告范圍和測量的線性的線性對照組合物。另外，優(yōu)選各個(gè)線性對照組合物綜合了最大數(shù)量的需要被測量用于線性分析的組分。然而，預(yù)期線性對照體系可以任選地包括一種以上預(yù)先包裝在一個(gè)以上小瓶內(nèi)的單組分對照組合物，并且對應(yīng)于這些單組分的一個(gè)以上參數(shù)的線性可以通過使用這些額外的單組分組合物而被確定。該額外的單組分對照組合物可以進(jìn)一步提供線性分析的適應(yīng)性，如表1所示和如下進(jìn)一步所述。在表1中顯示了本發(fā)明的線性對照體系的例子。左邊第一欄顯示了線性對照體系內(nèi)特定對照組合物的水平。其余的欄顯示了在該系列線性對照組合物中各組分的制作目標(biāo)濃度。各組分的濃度以在血液分析儀上報(bào)告的相同單位用它們的對應(yīng)的可報(bào)告參數(shù)表示。更具體地講，白細(xì)胞類似物的濃度以xl(^個(gè)/微升為單位表示為WBC;穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度以x106個(gè)/微升為單位表示為RBC;血小板類似物的濃度以x103個(gè)/微升為單位表示為Plt，并且血紅蛋白濃度以g/dl為單位表示為Hgb。如表1所示，在該示例性的實(shí)施方式中，線性對照體系包含一系列的11個(gè)線性對照組合物，更具體地說，從水平l直至水平ll。任選地，包括水平O，其不包含任何細(xì)胞顆粒。水平O被用于評估或者建立測量背景?？深A(yù)期地，雖然徹底的清洗循環(huán)是在通過血液分析儀分析包括血液樣品、校正品或基準(zhǔn)對照物在內(nèi)的各個(gè)樣本之后進(jìn)行，但在液體計(jì)數(shù)體系中總有許多殘余的顆粒存在。這通常被稱作"遺留"，其是特定參數(shù)測量中的背景。取決于使用的試劑和液體系統(tǒng)設(shè)計(jì)，該背景在不同的血液分析儀上是不同的，并且對于不同的測量參數(shù)是不同的。為了客戶方便，表1中顯示的線性對照體系包括標(biāo)記為水平0的介質(zhì)小瓶，其典型地含有在水平1至11中使用的懸浮介質(zhì)。應(yīng)當(dāng)理解，不包含細(xì)胞顆粒的其他水溶液也可以用于相同的目的，例如，過濾的鹽水。首先運(yùn)行水平O來評估其線性將被確定的測量背景。如果任何測量的背景超過期望的極限，則在開始線性測試之前不得不進(jìn)行清潔或其他維護(hù)操作。表l線性對照體系的構(gòu)造實(shí)施例水平組分WBC(x10V)RBC(x10V)Hgb(g/dl)Pit(xioV)000010.80.802.23621.71.765.064330.03.009.0300470.05.8019.5700580.06.4020.0770690.08.0024.0n/a7185.0(4.00)n/an/a18508290.0(3.20)n/an/a23509375.0(3.00)n/an/a275010475.0(4.60)n/an/a011000475012*0000僅為介質(zhì)任選地，也包括水平12，其僅含有懸浮介質(zhì)，并且僅僅被用于在分析體系中的對照組合物之后來清潔該體系。與水平O相類似，不包含細(xì)胞顆粒的其他水溶液也可以用于相同的目的。在表1中顯示的線性對照體系中，從水平1至水平10的線性對照組合物是綜合的對照組合物，它們中的每一個(gè)都含有兩到三個(gè)組分。水平ll是單一組分對照組合物，其在血液分析儀上單獨(dú)使用，用于評估血小板測量的上限。如表1所示，白細(xì)胞類似物濃度從水平1至水平10連續(xù)地提高。從水平7到10，白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升。可預(yù)期地，線性對照體系中穩(wěn)定化紅細(xì)胞的作用可以被分為兩部分。第一部分是從水平1至水平6，其中穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度連續(xù)地增加。在該部分，穩(wěn)定化紅細(xì)胞主要被用于確定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性和血紅蛋白濃度的測量的線性，雖然它們也有助于白細(xì)胞類似物的分散。如表所示，測量的范圍分別對于RBC為0至8x106個(gè)4^，而對于Hgb為0至24g/dl。第二部分是從水平7至水平10。在該部分，穩(wěn)定化紅細(xì)胞僅僅被用于幫助白細(xì)胞類似物的分散。如表所示，在水平7至水平10中的穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度與在水平3至水平6中的穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度重復(fù)或者重疊，并且為在此論述的目的，它們僅被顯示在括號中。在線性對照體系的測定表格上，未提供用于水平7至水平10的RBC和Hgb的測定參數(shù)(n/a)。類似地，水平6可以任選地包含血小板類似物，但是如表l所示，未提16供血小板測定參數(shù)。應(yīng)注意，表1中顯示的濃度僅僅用于示例性目的并且代表制備目標(biāo)。線性對照組合物中各組分的濃度典型地具有制備公差范圍。測定參數(shù)被指定給各個(gè)批次的對照組合物，這在下文中將進(jìn)行更祥細(xì)的描述。線性對照體系可以被構(gòu)造成包含單個(gè)線性對照組合物的不同組合。線性對照體系的另一個(gè)實(shí)施例如表2所示。類似于表1中顯示的第一個(gè)實(shí)施例，水平0是介質(zhì)小瓶，其不包含任何細(xì)胞顆粒，并且被用于建立測量背景。水平10用于在分析線性對照體系中的其他水平之后來清潔該系統(tǒng)。類似地，n/a是指未提供測定參數(shù)。在表2中顯示的線性對照體系中，從水平1至水平9的線性對照組合物全部是綜合化的對照組合物，每一個(gè)都含有兩到三個(gè)組分。在該體系中，水平7至水平9含有濃度大于120x103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物。在水平7至水平10中，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度大于2x106個(gè)細(xì)胞/微升。表2線性對照體系的另一個(gè)構(gòu)造實(shí)施例<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*:僅為介質(zhì)可預(yù)期地，取決于待測試的儀器的測定范圍，在線性對照體系中線性對照組合物的數(shù)量可以改變。例如，對于能夠測量高達(dá)200x1()S個(gè)白細(xì)胞/)LiL的血液分析儀，線性對照體系可以含有一個(gè)或兩個(gè)具有濃度大于120x103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物的線性對照組合物。然而，對于能夠測量高達(dá)500xl()S個(gè)白細(xì)胞/nL的血液分析儀，線性對照體系可以含有超過兩個(gè)的具有濃度大于120x103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物的線性對照組合物。表1和2中顯示的線性對照體系可以作為對照物試劑盒被提供。然而，線性對照體系還可以以一種以上的試劑盒而被提供，用于測試儀器的整個(gè)范圍。例如，線性對照體系可以包含一個(gè)線性對照組合物試劑盒，用于測試并檢驗(yàn)可報(bào)告參數(shù)的正常的血液濃度范圍；并且包含另一個(gè)線性對照組合物試劑盒，用于測試并且檢驗(yàn)在儀器上測量的異常血液樣品的濃度范圍內(nèi)的可報(bào)告的參數(shù)。該線性對照體系還可以被構(gòu)造成僅測試儀器的延伸的工作范圍。例如，線性對照體系可以僅包含表2中的水平7至水平9，用于確定超過100x103個(gè)/^的延伸的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性。實(shí)施例6提供了一種制備線性對照體系的示例性工藝。如其所示，在所有單個(gè)的線性對照組合物被制備并且被包裝入對照物小瓶之后，對照物小瓶被標(biāo)記以顯示它們在線性對照體系中的水平。然后，測定參數(shù)被指定給各個(gè)水平處的線性對照組合物。在此使用的術(shù)語"測定參數(shù)"包括測定值和目標(biāo)范圍。典型地，測定數(shù)值作為具有誤差范圍的單一數(shù)量被提供；并且目標(biāo)范圍作為可接受的上下限被提供。例如，對于表2顯示的線性對照體系中的水平8中的WBC測定參數(shù)可以或者是測定值290±21.6，或者是具有上限311.60和下限268.4的目標(biāo)范圍。本
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的用于血液學(xué)對照物的測定值指定的標(biāo)準(zhǔn)程序被用于線性對照體系。對于各批產(chǎn)品，可報(bào)告參數(shù)的測定值是在一個(gè)以上指定的被校準(zhǔn)的血液分析儀上一個(gè)對照組合物的多次測試的平均數(shù)，該多次測試典型地大于10次。誤差范圍對應(yīng)于特定的可報(bào)告參數(shù)在測試的濃度處的變化系數(shù)(CV)。注意，取決于濃度和儀器，CV會(huì)改變。對于各個(gè)批次的線性對照組合物產(chǎn)品，通過使用平均值和CV來確定各個(gè)水平的目標(biāo)范圍。應(yīng)當(dāng)理解，測定參數(shù)可以被指定用于特定的目標(biāo)血液分析儀，例如，用于CoulterLH750血液分析儀，其是高端產(chǎn)品，并且具有比中等分析儀和低端分析儀更高的精度和精確度。該情況下，對于可報(bào)告參數(shù)比如WBC和RBC的CV相對較小。然而，通常各個(gè)血液分析儀制造商要生產(chǎn)各種型號的血液分析儀，從用于醫(yī)院的高處理量產(chǎn)品到用于醫(yī)生辦公室的低端產(chǎn)品，并且所有這些儀器均需要定期的可報(bào)告參數(shù)的線性評估。為滿足這樣一種需要，測定參數(shù)還可以被指定用于不同的血液分析儀組。在該情形下，測定值的誤差范圍較大，并且目標(biāo)范圍較寬，因?yàn)樵谶@些不同的儀器中的最高CV將起主導(dǎo)作用。另外，由于相同的原因，測量背景的可接受的極限典型地更高。表3提供了一種本發(fā)明的線性對照體系的實(shí)施例測定表格。該示例性的實(shí)施方式中指定的目標(biāo)范圍(顯示為預(yù)期結(jié)果)可以被用于確定貝克曼考爾特公司(富勒敦市，18加利福尼亞)制造的數(shù)種血液分析儀的線性。如表所示，本實(shí)施方式的線性對照體系包含從水平1到水平9的9個(gè)線性對照組合物，并且還包括水平0的介質(zhì)小瓶。表3線性對照體系的測定表格實(shí)施例水平預(yù)期結(jié)果(上限和下限)WBC(xIOV)RBC(x10Vl)Hgb(g/dl)pit(xioVi)00.0-0.40.00-0.030.0-0.40-510.4-1.20.56-0.941.7-2.526-4621.1-2.11.54-1.944.3-5.349-81325.4-37.42.69-3.399.1-10.5245-375463.4-79.45.41-6.2117.2-20.2532-852572.7-96.75.96-6.9619.2-22.6606-9566n/a7.52-8.3222.7-26.5n/a7170.1-215.9n/an/a1451-22138288.0-331.2n/an/a1794-27749346.6-420.8n/an/a2033-3389應(yīng)注意，在水平0中，這些可報(bào)告參數(shù)中的每一個(gè)的上限都反映了在所有其線性可以通過使用線性對照體系而被測試的儀器中所觀察到的最高的可接受的背景。然而，典型地高端產(chǎn)品具有比表中所示水平0的上限實(shí)質(zhì)上更低的背景。例如，對于WBC背景可以小于0.1x1()S個(gè)/nL，并且對于RBC可以小于0.01x106個(gè)/|^。因此，對于具有更低背景的血液分析儀，在水平l的對照組合物中，白細(xì)胞類似物、穩(wěn)定化紅細(xì)胞和血小板類似物的濃度可以被延伸至可報(bào)告范圍的極低端。例如，對于白細(xì)胞類似物為0.2x103個(gè)類似物/微升，并且對于穩(wěn)定化紅細(xì)胞為0.1x106個(gè)細(xì)胞/微升。注意，在極低端處的測量的線性對于典型地具有非常低的顆粒計(jì)數(shù)的臨床體液樣本的分析而言是很重要的。如表3所示和此前用表1中顯示的實(shí)施方式所述，不是所有的線性對照組合物都具有用于四個(gè)可報(bào)告參數(shù)(WBC、RBC、Hgb和Plt)中的每一個(gè)的測定參數(shù)。然而，為了確保足夠數(shù)量的線性對照組合物被用于確定各個(gè)可報(bào)告參數(shù)的線性，在線性對照體系中，對于白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)有至少5個(gè)、優(yōu)選至少6個(gè)線性對照組合物具有指定的測定參數(shù)；對于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)和血紅蛋白濃度(Hgb)有至少5個(gè)、優(yōu)選至少6個(gè)線性對照組合物具有指定的測定參數(shù)；并且對于血小板計(jì)數(shù)(Pit)有至少5個(gè)、優(yōu)選至少6個(gè)線性對照組合物具有指定的測定參數(shù)。除如上所述測定表格之外，任選地，有線性刻度的坐標(biāo)圖紙還可以被裝入對照物試劑盒中，用于客戶繪制報(bào)告值和測定參數(shù)，以確定一個(gè)以上測量的線性。19在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種檢驗(yàn)可報(bào)告的測定范圍和在血液分析儀上整個(gè)延伸的濃度范圍內(nèi)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性的方法，該方法使用含有不同白細(xì)胞濃度的多個(gè)即時(shí)線性對照組合物(instantlinearitycontrolcomposition)。更具體地講，該方法使用一系列線性對照組合物，各個(gè)線性對照組合物包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物、預(yù)定濃度的穩(wěn)定化紅細(xì)胞和懸浮介質(zhì)，其中，在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度從0.2><103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升；并且在至少一個(gè)、優(yōu)選兩個(gè)以上對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升。當(dāng)白細(xì)胞類似物的濃度超過120x103個(gè)類似物/微升時(shí)，穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度是至少1.5x106個(gè)細(xì)胞/微升、并且優(yōu)選大于2x106個(gè)細(xì)胞/微升。測量異常樣本中高濃度的白細(xì)胞的方法己經(jīng)在美國專利No.6,744,245中被描述，在此將其全部內(nèi)容并入本文以作為參考。如美國專利No.6，744，245所揭示的那樣，使用該方法，通過使用非聚焦流光圈的DC阻抗測量，可線性地測量濃度高達(dá)500x1()S個(gè)4iL的白細(xì)胞濃度(WBC)。通過使用聚焦流動(dòng)池(focusedflowcell),計(jì)數(shù)的上限可以進(jìn)一步地被實(shí)質(zhì)上延伸。當(dāng)實(shí)踐本發(fā)明的方法時(shí)，按如上祥細(xì)描述的那樣，將線性對照組合物輕輕混合，以便在預(yù)先包裝的對照物小瓶內(nèi)在懸浮介質(zhì)中分散白細(xì)胞類似物。如前所述，對于混合一個(gè)對照物小瓶，本發(fā)明的線性對照組合物的混合時(shí)間少于90秒。典型地，混合時(shí)間少于50秒，并且優(yōu)選少于40秒。通常，下述實(shí)施例7中描述的人工混合程序中，用于單個(gè)對照物小瓶的混合時(shí)間是約20至30秒。因此，用于混合含有少于14個(gè)單獨(dú)線性對照組合物的線性對照體系中所有對照物小瓶的總時(shí)間典型地少于15分鐘。不需要人工稀釋線性對照組合物，并且不采用渦旋混合或其他劇烈的混合用于對照組合物中類似物和細(xì)胞的單分散。如果在線性對照體系中的所有水平處的報(bào)告值的平均值是在制造商提供的目標(biāo)范圍內(nèi)、或者測定值誤差范圍內(nèi)，那么儀器的白細(xì)胞計(jì)數(shù)被認(rèn)為在制造商的說明書范圍內(nèi)是線性的和可操作的。該報(bào)告值通常也稱作恢復(fù)值(recoveredvalue)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可預(yù)期的是，本發(fā)明的線性對照體系還可以被用于檢驗(yàn)儀器的白細(xì)胞計(jì)數(shù)精確度和偏差。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供使用本發(fā)明的線性對照體系的方法，用于檢驗(yàn)血液分析儀上的可報(bào)告的測定范圍并確定數(shù)個(gè)可報(bào)告參數(shù)測量的線性。在一個(gè)實(shí)施方式中，提供一種方法，用于通過使用本發(fā)明的線性對照體系來確定在整個(gè)延伸的濃度范圍內(nèi)白細(xì)胞和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性，其中，在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度從0.2x103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)、優(yōu)選兩個(gè)以上對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120><103個(gè)類似物/微升。穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度范圍為約0.1x106至9x106個(gè)細(xì)胞/微升。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種方法，用于通過使用本發(fā)明的線性對照體系來確定在整個(gè)延伸的濃度范圍內(nèi)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、以及血小板計(jì)數(shù)的線性。除了以上剛剛描述的高濃度的白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞之外，在本實(shí)施方式中，至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)線性對照組合物包含濃度大于1,400x103個(gè)類似物/微升的血小板類似物。更具體地說，該方法包括如下步驟(a)提供一系列對照組合物，每一個(gè)對照組合物都包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類^(物、濃度范圍為約O.lx106至約9><106個(gè)細(xì)胞/微升的穩(wěn)定化紅細(xì)胞、濃度為高達(dá)7,000x103個(gè)類似物/微升的血小板類似物、以及懸浮介質(zhì)；在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度增從0.2x103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升；至少5個(gè)對照組合物具有白細(xì)胞計(jì)數(shù)的測定參數(shù)，并且至少5個(gè)對照組合物具有紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度的測定參數(shù)，并且至少5個(gè)對照組合物具有血小板計(jì)數(shù)的測定參數(shù)；(b)輕輕地混合對照組合物，以便在懸浮介質(zhì)中分散類似物和細(xì)胞；(c)在血液分析儀上分析每一個(gè)對照組合物，并且得到每一個(gè)對照組合物的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、以及血小板計(jì)數(shù)的報(bào)告數(shù)值；以及(d)使用對照組合物的報(bào)告值和測定參數(shù)來確定血液分析儀的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、以及血小板計(jì)數(shù)的線性。該方法還包括確定血紅蛋白濃度測量線性的步驟，其中，在步驟(c)中，所述分析進(jìn)一步包括測量每一個(gè)對照組合物中的血紅蛋白濃度；以及隨后通過使用血紅蛋白濃度的報(bào)告值和用于對照組合物中血紅蛋白濃度的測定參數(shù)來確定血紅蛋白測量的線性。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，通過使用一個(gè)以上等分的對照組合物，可以在自動(dòng)化血液分析儀上進(jìn)行線性對照組合物中組分的測量，典型地以與血液樣品分析相同的方式進(jìn)行。例如，但并非用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，可參考CoulterGEN'STM或者LH750型血液分析儀(貝克曼考爾特公司，富勒敦市，加利福尼亞)。在這些自動(dòng)化血液分析儀的每一個(gè)中，數(shù)個(gè)等分血樣或基準(zhǔn)對照物被獨(dú)立地處理并且以不同的分析模式并行地被分析，用于測量不同的血細(xì)胞亞群。更具體地講，用血液稀釋劑稀釋第一等分血樣從而形成第一樣品混合物，并且通過DC阻抗測量法來測量紅細(xì)胞和血小板以得到紅細(xì)胞參數(shù)和血小板參數(shù)，包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)和許多其他的參數(shù)。同時(shí)，將第二等分血液樣品與血液稀釋劑和第一細(xì)胞溶解劑混合，從而形成第二樣品混合物。通過DC阻抗測量和在預(yù)定波長處的分光光度測定來測量第二樣品混合物，從而得到白細(xì)胞計(jì)數(shù)，將白細(xì)胞區(qū)分成三個(gè)亞群并且區(qū)分有核紅細(xì)胞，并且得到血紅蛋白濃度。將第三等分血樣與第二細(xì)胞溶解劑混合，隨后再與穩(wěn)定化試劑混合，從而形成第三樣品混合物。將第三樣品混合物供至聚焦流動(dòng)池(focusedflowcell)，并且通過VCS檢測方法進(jìn)行測量，以便將白細(xì)胞區(qū)分為五個(gè)亞群，并且區(qū)分有核紅血球。另外，將第四等分血樣暴露于網(wǎng)織紅細(xì)胞試劑體系從而形成第四混合物，通過VCS檢測方法進(jìn)行測量來分析網(wǎng)織紅細(xì)胞。在此使用的術(shù)語"VCS測量法或VCS檢測方法"，指的是一種三維測定技術(shù)，其測量直流(DC)和射頻(RF)阻抗、以及當(dāng)血細(xì)胞經(jīng)過流動(dòng)池時(shí)的光散射信號。該VCS檢測方法已經(jīng)在美國專利No.5,125,737中進(jìn)行了詳細(xì)描述，在此將其全部內(nèi)容并入本文以作為參考。實(shí)施例7提供了一種使用線性對照體系用于確定白血細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)、以及血紅蛋白測量的線性的示例性工藝。如其所示，在臨床實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)使用多年的用于處理含有相當(dāng)于正常血液樣品中細(xì)胞顆粒濃度的細(xì)胞顆粒的基準(zhǔn)對照物的程序之后，用手將對照物小瓶混合。通過使用該程序，在數(shù)十秒內(nèi)用手輕輕地混合對照物小瓶，而無需任何劇烈的混合。另外，在儀器上直接地使用所有水平的對照組合物，無需操作者進(jìn)一步稀釋。在得到用于各個(gè)水平的線性對照體系的WBC、RBC、Hgb和Pit的報(bào)告值之后、以及得到用于這四個(gè)參數(shù)中的每一個(gè)的報(bào)告值的平均值后，這些可報(bào)告參數(shù)中的每一個(gè)的測量的線性可以如實(shí)施例7中所述圖示地確定；或者可以參考測定表格中提供的目標(biāo)范圍數(shù)字化地確定。如果在線性對照體系中所有水平處的報(bào)告值的平均值在制造商提供的目標(biāo)范圍內(nèi)、或者測定值誤差范圍內(nèi)，那么儀器上特定血細(xì)胞群體的計(jì)數(shù)被認(rèn)為在制造商的說明書范圍內(nèi)是線性的和可操作的。如實(shí)施例6中所示，為了方便客戶，具有線性刻度的坐標(biāo)圖紙可以與測定表格一起在對照物試劑盒中被提供。操作者可以簡單地在坐標(biāo)圖紙上繪制測定表格中提供的用于各個(gè)可利用水平的可報(bào)告參數(shù)比如WBC的目標(biāo)范圍，并且繪制各個(gè)對應(yīng)水平的報(bào)告值的平均值。如果所有水平的平均值都落入目標(biāo)范圍內(nèi)，則該結(jié)果表明在測試的血液分析儀上的白細(xì)胞計(jì)數(shù)是線性的?？蛇x地，可以進(jìn)行線性回歸分析或者其他統(tǒng)計(jì)分析來評估這四個(gè)參數(shù)中每一個(gè)的測量的線性。另外，通過確定在測試濃度范圍內(nèi)是否有任何趨勢，可以進(jìn)一步評估計(jì)數(shù)的線性。圖1-4顯示了一組有代表性的示意圖，它們顯示了通過使用本發(fā)明的線性對照體系和實(shí)施例7中描述的程序獲得的CoulterLH750型血液分析儀的白血細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)、以及血紅蛋白測量的線性測定結(jié)果。在又一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種方法，用于通過使用本發(fā)明的線性對照體系來確定在整個(gè)延伸的濃度范圍內(nèi)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞以及有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性、以及血紅蛋白濃度測量的線性。在本實(shí)施方式中，線性對照組合物還包括網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物和有核紅細(xì)胞類似物，其濃度范圍相當(dāng)于在臨床異常的血液樣品中所觀察的濃度范圍。使用VCS測量法來測量網(wǎng)織紅細(xì)胞的方法已經(jīng)在美國專利No.5,492,833、5,616,501和6,060,322中得到全面的描述，現(xiàn)將其全部內(nèi)容并入本文以引為參考。測量血液樣品中的有核紅血球的方法已經(jīng)在美國專利No.5，874，310、5,917,584、6,410,330、6,472,215、6,673,618、7,008,792和7,208,319中得到全面的描述，現(xiàn)將其全部內(nèi)容并入本文以引為參考。應(yīng)理解，本發(fā)明不局限于被用于上述提供的方法，并且其可以被用于已為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的其它測量方法，包括用于采用阻抗、射頻、光散射、軸向光損失、以及熒光測量中一種以上的測量法。顯然，可以要求進(jìn)行有限的實(shí)驗(yàn)來優(yōu)化本發(fā)明以用于其它測量方法。下述實(shí)施例用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明的保護(hù)范圍通過權(quán)利要求書予以限定。應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)本公開，可以使用多種其它組分和比例。實(shí)施例l由鵝紅細(xì)胞制成的白細(xì)胞類似物下面是關(guān)于優(yōu)選的試劑和推薦的特定加工步驟的一個(gè)實(shí)施例，用于處理鵝紅細(xì)胞以得到用于線性對照組合物的白細(xì)胞類似物。應(yīng)理解，所述配方和程序僅是示例性的，并且根據(jù)本發(fā)明的公開，可以使用其他的成分、比例和程序。23(1)用于采集全血的抗凝血?jiǎng)┛梢园凑毡绢I(lǐng)域的技術(shù)人員確定的合適的量來使用一種或多種下述抗凝血?jiǎng)?a)標(biāo)準(zhǔn)ACD(酸性檸檬酸鹽-葡萄糖)(b)標(biāo)準(zhǔn)CPD(檸檬酸根磷酸鹽-葡萄糖)(c)EDTA二鈉(乙二胺四乙酸鹽)，2mg/ml血液。(2)鵝紅血球洗滌和稀釋溶液鵝紅血球洗漆和稀釋溶液(GEWDS)組分含量(g/L)磷酸二氫鈉1.31g磷酸二鈉10.35g氯化鈉2.50g氯化鉀0.3g用蒸餾水補(bǔ)水至1升pH大約7.3滲透壓度為200mOsm/kgH20(3)用于固定細(xì)胞的洗漆和再懸浮溶液用于固定細(xì)胞的新鮮血液洗滌溶液以及洗滌和再懸浮溶液(WRS)組分含量(g/L)磷酸二氫鈉0.2g七水磷酸二鈉2.0g疊氮化鈉0.1g氯化鈉9.4g用蒸餾水補(bǔ)水至1升pH大約7.4滲透壓度為315至345mOsm/kgH20(4)白細(xì)胞類似物制備程序1.室溫下，將鵝的新鮮全血在700RCF下離心10分鐘。在不干擾濃縮紅細(xì)胞的情況下，小心地除去上清液和血沉棕黃層。2.通過使用離心法，用4至10體積的GEWDS洗漆鵝紅細(xì)胞兩次。3.用GEWDS稀釋濃縮紅細(xì)胞，并且量出2mL樣本用于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和平均細(xì)胞體積的測定，其值分別是大約0.33x1()6個(gè)L和155fl。4.通過將商品的25%戊二醛產(chǎn)品加至GEWDS，制備戊二醛濃度為約1.0至10.0%的戊二醛固定試劑。優(yōu)選戊二醛濃度是5%。5.將1體積的戊二醛固定試劑加至9體積來自步驟(3)的洗滌后的紅細(xì)胞懸浮液，并且徹底混合約3到4分鐘。轉(zhuǎn)移至密封的容器，慢慢滾動(dòng)20至28小時(shí)。6.被固定的紅細(xì)胞在約400RCF下離心5分鐘。除去上清液，并且用WRS洗滌若干次，得到白細(xì)胞類似物。7.對于線性對照組合物，在合適的儲(chǔ)藏溶液或者實(shí)施例4中的懸浮介質(zhì)中再懸浮洗滌后的被固定的紅細(xì)胞，并且考慮到額外體積的穩(wěn)定化紅細(xì)胞，將白細(xì)胞類似物的濃度調(diào)節(jié)至期望的濃度。實(shí)施例2由鳥類紅細(xì)胞制成的白細(xì)胞類似物下面是關(guān)于優(yōu)選的試劑和推薦的特定加工步驟的一個(gè)具體實(shí)施例，用于處理鵝紅細(xì)胞以得到標(biāo)準(zhǔn)大小的淋巴細(xì)胞類似物。使用該方法制造的白細(xì)胞類似物可以被用作采用VCS測量法的淋巴細(xì)胞類似物，并且它們被用作用于本發(fā)明的線性對照組合物的白細(xì)胞類似物。應(yīng)當(dāng)理解，該配方和程序僅是示例性的，并且根據(jù)本發(fā)明的公開，可以使用其他的成分、比例和程序。淋巴細(xì)胞低滲溶液組分磷酸二氫鈉七水磷酸二鈉用蒸餾水補(bǔ)充至1升pH大約7.8滲透壓度15至25mOsm/kgH20白細(xì)胞類似物制備程序1.選擇平均細(xì)胞體積范圍為約140至約170fl的鵝紅細(xì)胞。用實(shí)施例1中描述的磷酸鹽緩沖鹽水溶液(PBS)洗滌濃縮鵝紅細(xì)胞。2.加入1.0至5.0毫克膽固醇直至細(xì)胞計(jì)數(shù)為2x106個(gè)/微升，并且在室溫下保溫2至6小時(shí)。3.通過將商品的25%戊二醛產(chǎn)品加至冷卻的淋巴細(xì)胞低滲溶液，制備戊二醛濃度為約0.1至0.8%的戊二醛固定試劑。優(yōu)選溫度是2。C至8。C。優(yōu)選戊二醛的濃度是大約0.35%。含量(g/L)0.2g2.0g254.將洗滌后的紅細(xì)胞以1:35的稀釋度加至被測數(shù)量的步驟3中所得的固定試劑。轉(zhuǎn)移至密封的容器，在2°C至8°C下慢慢滾動(dòng)18至24小時(shí)。計(jì)算出血紅蛋白含量的下降為大約60wt%。5.除去上清液，用PBS洗滌細(xì)胞若干次，然后懸浮在合適的儲(chǔ)藏溶液或者實(shí)施例4的懸浮介質(zhì)中，得到白細(xì)胞類似物。6.對于線性對照組合物，在實(shí)施例4的懸浮介質(zhì)中懸浮洗滌后的被固定的紅細(xì)胞，并且考慮到額外體積的穩(wěn)定化紅細(xì)胞，將白細(xì)胞類似物的濃度調(diào)節(jié)至期望的濃度。實(shí)施例3制造血小板類似物的方法血小板類似物制備程序1.獲取新鮮的MCV為12至16fl的山羊全血。2.用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌紅細(xì)胞，以便除去不希望有的細(xì)胞組分比如白細(xì)胞、血小板、血漿、以及血漿蛋白。3.洗漆后的山羊紅細(xì)胞以已知的細(xì)胞計(jì)數(shù)懸浮于實(shí)施例4的懸浮介質(zhì)2中。實(shí)施例4懸浮介質(zhì)的示例性配方制備下述懸浮介質(zhì)，并且用于本發(fā)明的線性對照組合物。懸浮液介質(zhì)1組分范圍優(yōu)選的范圍(g/L)(g/L)黃嘌呤化合物1-102-7一磷酸腺苷0.1-1.00.2-0.8次黃嘌呤核苷0.1-1.00.2-0.8pH調(diào)節(jié)劑足以達(dá)到pH5.8-6,8pH6.0-6.5滲透性調(diào)節(jié)劑足以達(dá)到200-400mOsm250-350防腐劑有效量2.0-6.0用去離子水補(bǔ)充至1升26懸浮介質(zhì)2組分優(yōu)選的范圍(g/L或mL/L)對羥苯甲酸丙酯0.3至1.0g對羥基苯甲酸甲酯0.5至1.0g鹽酸普魯卡因0.1至0.5g脫氧膽酸0.1至0.9g乳糖10.0至50.0g放線菌酮0.1至0.6g去水檸檬酸鈉3.0至8.0g檸檬酸一水化物0.3至0.9g磷酸二氫鈉一水化物0.8至2.5mg鹽酸非那根0.1至1.0g甲磺酸粘菌素鈉0.2至0.9g青霉素G鈉0.5x1()6至3x106個(gè)單位硫酸卡那霉素0.2至0.8g硫酸新霉素0.2至1.0g5'-AMP0.4至1.0g腺嘌呤0.2至0.8g次黃嘌呤核苷0.4至1.0g硫酸雙氫鏈霉素0.2至1.0g鹽酸四環(huán)素0.2至1.0g30%牛白蛋白100至350mL用去離子水補(bǔ)充至1升實(shí)施例5制造穩(wěn)定化紅細(xì)胞的方法制備工序l:1.將人全血或動(dòng)物全血進(jìn)行第一次離心，得到濃縮紅細(xì)胞。2.然后將濃縮紅細(xì)胞懸浮于如下所示的預(yù)處理稀釋劑中。在預(yù)處理稀釋劑中紅細(xì)胞的預(yù)處理優(yōu)選在22。C至27。C下處理48小時(shí)的時(shí)間期間而完成。該工序減小了細(xì)胞體積，并且在將細(xì)胞暴露于懸浮介質(zhì)之前穩(wěn)定細(xì)胞和粒徑分布寬度。3.在預(yù)處理以后，細(xì)胞懸液可以在4。C至6。C下儲(chǔ)藏直至準(zhǔn)備將其與懸浮介質(zhì)混合。4.在此時(shí)，通過離心將預(yù)處理的紅細(xì)胞與稀釋劑分離，并且將其與實(shí)施例4的懸浮介質(zhì)2混合。優(yōu)選的預(yù)處理稀釋劑配方顯示如下。預(yù)處理稀釋劑組分實(shí)施例優(yōu)選的范圍乳糖90.0g/L25-100g/L疊氮化鈉1.5g/L0.5-4.0g/L檸檬酸鈉二水化物5.0g/L2.5-5.0g/L檸檬酸一水化物0.1g/L0.05-0.2g/L非離子型表面活性劑(PluronicF68)1.0g/L0,25-1.5g/L用去離子水補(bǔ)水至1升350mOsm/kg350-360mOsm/kgpH大約6.9pH范圍6.5-7.5制備工序2:1.將人全血或動(dòng)物全血進(jìn)行第一次離心，得到濃縮紅細(xì)胞。2.用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌濃縮紅細(xì)胞。3.將洗滌后的紅細(xì)胞懸浮于實(shí)施例4的懸浮介質(zhì)2中。實(shí)施例6線性對照體系的制備制備工序1.提供預(yù)定體積的實(shí)施例4中的懸浮介質(zhì)1或2。2.將預(yù)定量的穩(wěn)定化人紅細(xì)胞加入該懸浮介質(zhì)。采用實(shí)施例5中顯示的制備工序2處理穩(wěn)定化的人紅細(xì)胞。3.在含有穩(wěn)定化的人紅細(xì)胞的懸浮介質(zhì)中加入預(yù)定量的血小板類似物。該血小板類似物按照實(shí)施例3中描述的方法由穩(wěn)定化山羊紅細(xì)胞制成。4.將預(yù)定量的按照實(shí)施例1中描述的方法由被固定的鵝紅細(xì)胞制成的白細(xì)胞類似物加入含有穩(wěn)定化的人紅細(xì)胞和血小板類似物的懸浮介質(zhì)中。5.任選地，將預(yù)定量的網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物、預(yù)定量的核血細(xì)胞類似物、或者上述兩者加入含有穩(wěn)定化的人紅細(xì)胞、血小板類似物、以及白細(xì)胞類似物的懸浮介質(zhì)中。6.輕輕混合形成的線性對照組合物，將線性對照組合物裝入對照物小瓶，并且在封閉的對照物小瓶中冷藏儲(chǔ)存。7.使用預(yù)定量的各組分的不同組合，重復(fù)步驟1至6，從而形成一系列線性對照組合物，其中至少一個(gè)線性對照組合物所含的白細(xì)胞類似物濃度大于120x103個(gè)類似物/微升。該系列線性對照組合物形成了線性對照體系。288.通過使用用于校正品和血液學(xué)對照物的測定值指定的標(biāo)準(zhǔn)程序，為至少5個(gè)線性對照組合物指定白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)的測定值或者目標(biāo)范圍；為至少5個(gè)線性對照組合物指定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)和血紅蛋白濃度(Hgb)的測定值或者目標(biāo)范圍；并且為至少5個(gè)線性對照組合物指定血小板計(jì)數(shù)(Pit)的測定值或者目標(biāo)范圍。當(dāng)目標(biāo)范圍被指定時(shí)，目標(biāo)血液分析儀在不同的顆粒濃度處的變化系數(shù)(CV)被用于指定線性對照組合物的目標(biāo)范圍的上限和下限。9.用它們在線性對照體系中的對應(yīng)水平的指示標(biāo)記對照物小瓶，將一系列線性對照組合物包裝入試劑盒，并且提供用于線性對照體系的分析表格。10.任選地，將坐標(biāo)圖紙封裝入各個(gè)試劑盒，用于客戶繪制報(bào)告值和測定參數(shù)以便進(jìn)行線性分析。實(shí)施例7通過使用線性對照體系來確定白細(xì)胞、紅細(xì)胞以及血小板計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度測量的線性。在CoulterLH750血液分析儀(貝克曼考爾特公司制造，富勒敦市，加利福尼亞)上使用由實(shí)施例6得到的線性對照體系，來確定白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)的線性以及該儀器上血紅蛋白濃度測量的線性。該CoulterLH750血液分析儀安裝有RBC槽，其采用了三個(gè)非聚焦流動(dòng)光圈和DC阻抗檢測器，用于測量紅細(xì)胞；WBC槽，采用了三個(gè)非聚焦流動(dòng)光圈和DC阻抗檢測器，用于測量白細(xì)胞數(shù)；以及聚焦流動(dòng)池和VCS檢測系統(tǒng)，用于白細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞和具核紅細(xì)胞的差異分析。在血液分析儀上測量基準(zhǔn)對照物或血液樣品的方法如下所述。樣本(血液或線性基準(zhǔn)對照組合物)被血液分析儀吸出。在RBC池中，用等滲血液稀釋劑--LH700系列稀釋劑以6250:1的稀釋比來稀釋1.6pL的第一等分樣本，從而形成第一樣品混合物。用真空源使第一樣品混合物經(jīng)由三個(gè)光圈被抽出。當(dāng)血細(xì)胞穿過光圈時(shí)，通過DC阻抗檢測器測量每個(gè)血細(xì)胞，以得到紅細(xì)胞和血小板參數(shù)。在WBC池中，用6mL的LH700系列稀釋劑稀釋28pL的第二等分樣本，然后與111^第一細(xì)胞溶解劑—1^^3@111￡^!"混合，從而形成第二樣品混合物。用真空源使第二樣品混合物經(jīng)由三個(gè)光圈被抽出，并且進(jìn)行測量，以得到白細(xì)胞數(shù)，將白細(xì)胞區(qū)分為三個(gè)亞群并分析具核紅細(xì)胞。該測量在約18。C至約28。C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。分析了由測量第二等分試樣而得到的數(shù)據(jù)，從而報(bào)告白細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度。使第三等分血樣與第二細(xì)胞溶解劑體系起反應(yīng)，并且通過VCS檢測體系進(jìn)行測量，從而取得白細(xì)胞的區(qū)分和具核紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)。另外，將第四等分樣本暴露于網(wǎng)織紅細(xì)胞試劑體系，并且通過vcs檢測體系進(jìn)行測量，從而得到網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)。所有上述試劑皆為貝克曼考爾特公司的產(chǎn)品。為確定白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)以及血紅蛋白濃度測量的線性，進(jìn)行如下步驟(1)從冰箱中取出包裝的線性對照體系的對照物小瓶，并且在室溫下放置15分鐘以便變暖。(2)在對照物小瓶變暖之后，用手按如下方法混合對照物小瓶a.在手掌之間垂直地慢慢滾動(dòng)對照物小瓶8次。b.然后，將對照物小瓶倒置，并且再在手掌之間慢慢地滾動(dòng)8次。c.隨后，將對照物小瓶輕輕地倒置8次。(3)目視檢査對照物小瓶的內(nèi)含物，至完全重懸浮。如有必要，重復(fù)步驟2a至2c，直到內(nèi)容物被均勻地懸浮。(4)進(jìn)行血液分析儀的啟動(dòng)，記錄啟動(dòng)時(shí)報(bào)告的背景計(jì)數(shù)。(5)在血液分析儀上從水平0起以連續(xù)順序分析線性對照體系的所有水平。在分析儀上，各個(gè)水平的線性對照體系最少分析三次。重復(fù)該具有非數(shù)字報(bào)告的標(biāo)志性操作。來自最少三次分析的報(bào)告值被用于計(jì)算報(bào)告值的平均值。(6)對于線性對照體系的各個(gè)水平，記錄WBC、RBC、Hgb和Pit的報(bào)告值。對于這四個(gè)參數(shù)中的每一個(gè)，計(jì)算報(bào)告值的平均值。(7)對于在測定表格上提供的各個(gè)可利用的水平，在具有線性刻度的坐標(biāo)圖紙上繪制WBC的目標(biāo)范圍，并且繪制各個(gè)對應(yīng)水平的報(bào)告值的平均值。如果所有水平的平均值都落入目標(biāo)范圍內(nèi)，則該結(jié)果表明在測試的血液分析儀上的WBC測量是線性的。通過在坐標(biāo)圖紙上畫出一條直線來連接所有報(bào)告值的平均值，可以容易地進(jìn)行目測檢驗(yàn)。通過確定測試濃度范圍內(nèi)是否有任何趨勢，可以進(jìn)一步評估WBC測量的線性。(8)對于RBC、Hgb和Plt，重復(fù)步驟(7)來評估在測試的血液分析儀上RBC、Hgb和Plt的測量的線性?？蛇x地，可以進(jìn)行線性回歸分析或者其他統(tǒng)計(jì)分析來評估這四個(gè)參數(shù)中每一個(gè)的測量的線性。圖1-4顯示了一組有代表性的示意圖，它們顯示了通過使用如上所述的即時(shí)的線性對照體系和程序，CoulterLH750型血液分析儀上白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)、以及血紅蛋白濃度測量的線性測定結(jié)果。使用四個(gè)參數(shù)中每一個(gè)的報(bào)告值和測定值的平均值，通過線性回歸分析得到了相關(guān)曲線。注意，在該特定的實(shí)施例中，在血液分析儀分析之前，含有大于5,000><103個(gè)血小板類似物/微升的線性對照組合物被稀釋，因?yàn)檠“孱愃莆锏臐舛瘸^了儀器測定范圍的極限。以上對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)描述，但不應(yīng)將這些內(nèi)容看作是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，而是其優(yōu)選實(shí)施方式的實(shí)施例。然而，顯而易見，在本發(fā)明精神和保護(hù)范圍內(nèi)可以作出多種改進(jìn)和變化，如同在上述說明書中以及附后的權(quán)利要求的描述，并且它們在法律意義上講是等價(jià)的。在本文引用的所有專利及其他公開文獻(xiàn)并入本文以供參考。權(quán)利要求1.一種線性對照組合物，其包括a)濃度大于120×103個(gè)類似物/微升的白細(xì)胞類似物；b)預(yù)定濃度的穩(wěn)定化紅細(xì)胞；以及c)懸浮介質(zhì)；其中，通過輕輕混合，所述穩(wěn)定化紅細(xì)胞可促進(jìn)所述白細(xì)胞類似物在所述懸浮介質(zhì)中的單分散。2.如權(quán)利要求1所述的線性對照組合物，其特征在于，所述穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度是至少1.5x106個(gè)細(xì)胞/微升。3.如權(quán)利要求2所述的線性對照組合物，其特征在于，所述線性對照組合物還包括血小板類似物。4.如權(quán)利要求3所述的線性對照組合物，其特征在于，所述線性對照組合物還包括有核紅細(xì)胞類似物、網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物、或其組合物。5.如權(quán)利要求2所述的線性對照組合物，其特征在于，所述懸浮介質(zhì)含有脂蛋白。6.—種包含一系列線性對照組合物的線性對照體系，所述線性對照組合物中的每一個(gè)都包含a)預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物；b)濃度范圍為O.lx106至9><106個(gè)細(xì)胞/微升的穩(wěn)定化紅細(xì)胞；以及c)懸浮介質(zhì)；并且其中，在所述系列對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度從0.2><103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升，在至少一個(gè)所述系列對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升；并且其中，通過輕輕混合，所述穩(wěn)定化紅細(xì)胞可促進(jìn)所述白細(xì)胞類似物在所述懸浮介質(zhì)中的單分散。7.如權(quán)利要求6所述的線性對照體系，其特征在于，當(dāng)所述白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升時(shí)，所述穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度是至少1.5x106個(gè)細(xì)胞/微升。8.如權(quán)利要求7所述的線性對照體系，其特征在于，在至少兩個(gè)所述系列對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升。9.如權(quán)利要求8所述的線性對照體系，其特征在于，在至少一個(gè)所述系列對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度大于200x103個(gè)類似物/微升。10.如權(quán)利要求7所述的線性對照體系，其特征在于，所述線性對照組合物中的每一個(gè)還包含血小板類似物。11.如權(quán)利要求10所述的線性對照體系，其特征在于，所述線性對照組合物中的每一個(gè)還包含有核紅細(xì)胞類似物、網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物、或其組合物。12.如權(quán)利要求7所述的線性對照體系，其特征在于，所述懸浮介質(zhì)含有脂蛋白。13.如權(quán)利要求6所述的線性對照體系，其特征在于，每一個(gè)所述對照組合物都被包含在不需要人工稀釋的預(yù)包裝的小瓶中。14.如權(quán)利要求6所述的線性對照體系，其特征在于，所述線性對照體系還包括含有所述懸浮介質(zhì)、但不含所述細(xì)胞顆粒的介質(zhì)小瓶，用于為待確定的線性建立測量的背景。15.如權(quán)利要求14所述的線性對照體系，其特征在于，所述線性對照體系包含14個(gè)以下的所述線性對照組合物。16.如權(quán)利要求14所述的線性對照體系，其特征在于，所述線性對照體系還包括一個(gè)以上的單組分小瓶，所述小瓶含有選自下組的單一組分血小板類似物、穩(wěn)定化紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞類似物和有核紅細(xì)胞類似物。17.—種確定血液分析儀在擴(kuò)大的白細(xì)胞濃度范圍內(nèi)的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性的方法，包括下述步驟(a)提供一系列線性對照組合物；每一個(gè)所述對照組合物都包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物、預(yù)定濃度的穩(wěn)定化紅細(xì)胞和懸浮介質(zhì)；在所述系列對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度從0.2x103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)所述對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升；(b)輕輕混合所述對照組合物以便在所述懸浮介質(zhì)中分散所述白細(xì)胞類似物和所述穩(wěn)定化紅細(xì)胞；(C)在血液分析儀上分析每一個(gè)所述對照組合物，并且得到每一個(gè)所述對照組合物的所述白細(xì)胞計(jì)數(shù)的報(bào)告值；以及(d)使用所述對照組合物的所述報(bào)告值和測定參數(shù)來確定所述血液分析儀的所述白細(xì)胞計(jì)數(shù)的線性。18.如權(quán)利要求17所述的線性對照體系，其特征在于，當(dāng)所述白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升時(shí)，所述穩(wěn)定化紅細(xì)胞的濃度是至少1.5x106個(gè)細(xì)胞/微升。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述輕輕混合所述對照組合物以便在所述懸浮介質(zhì)中分散所述類似物的混合時(shí)間少于90秒。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，每一個(gè)所述對照組合物都被包含在預(yù)包裝的小瓶中，并且在所述輕輕混合以后在所述血液分析儀上直接使用，而無需人工稀釋。21.如權(quán)利要求20所述的線性對照體系，其特征在于，所述方法使用至少兩個(gè)所含白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升的所述對照組合物。22.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述方法進(jìn)一步包括測定不含細(xì)胞顆粒的水溶液，以便建立所述白細(xì)胞計(jì)數(shù)的背景。23.—種確定血液分析儀在擴(kuò)大的細(xì)胞濃度范圍內(nèi)的紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板計(jì)數(shù)的線性的方法，包括下述步驟(a)提供一系列對照組合物;每一個(gè)所述對照組合物都包含預(yù)定濃度的白細(xì)胞類似物、濃度范圍為約0.1x106至約9x106個(gè)細(xì)胞/微升的穩(wěn)定化紅細(xì)胞、濃度最高至7,000x103個(gè)類似物/微升的血小板類似物、以及懸浮介質(zhì)；在所述系列對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度從0.2x103個(gè)類似物/微升增加到800x103個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)所述對照組合物中，所述白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物/微升；至少5個(gè)所述對照組合物具有白細(xì)胞計(jì)數(shù)的測定參數(shù)，并且至少5個(gè)所述對照組合物具有紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度的測定參數(shù)，并且至少5個(gè)所述對照組合物具有血小板計(jì)數(shù)的測定參數(shù)；(b)輕輕混合所述對照組合物以便在所述懸浮介質(zhì)中分散所述類似物和所述細(xì)胞；(c)在血液分析儀上分析每一個(gè)所述對照組合物，獲取每一個(gè)所述對照組合物的所述白細(xì)胞計(jì)數(shù)、所述紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、以及所述血小板計(jì)數(shù)的報(bào)告值；以及(d)使用所述對照組合物的所述報(bào)告值和所述測定參數(shù)來確定所述血液分析儀的所述白細(xì)胞、所述紅細(xì)胞、以及血小板計(jì)數(shù)的線性。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述輕輕混合所述對照組合物以便在所述懸浮介質(zhì)中分散所述類似物的混合時(shí)間少于90秒。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，每一個(gè)所述對照組合物都被包含在預(yù)包裝的小瓶中，并且在所述輕輕混合以后在所述血液分析儀上直接使用，而無需人工稀釋。26.如權(quán)利要求25所述的線性對照體系，其特征在于，所述方法使用至少兩個(gè)所含白細(xì)胞類似物的濃度大于120x103個(gè)類似物微升的所述對照組合物。27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，還包括在步驟(c)中，獲取每一個(gè)所述對照組合物的血紅蛋白濃度的報(bào)告值；以及在步驟(d)中，通過使用所述對照組合物的所述報(bào)告值和血紅蛋白測定參數(shù)來確定所述血液分析儀的血紅蛋白測量的線性。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，所述方法進(jìn)一步包括測定不含細(xì)胞顆粒的水溶液，以便建立所述計(jì)數(shù)的背景。29.如權(quán)利要求28所述的方法，其特征在于，所述方法使用14個(gè)以下的所述對照組合物。全文摘要一種線性對照體系，其包括一系列線性對照組合物，各個(gè)線性對照組合物在懸浮介質(zhì)中包含白細(xì)胞類似物和穩(wěn)定化紅細(xì)胞。在該系列對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度從0.2×10³個(gè)類似物/微升提高到800×10³個(gè)類似物/微升，并且在至少一個(gè)對照組合物中，白細(xì)胞類似物的濃度大于120×10³個(gè)類似物/微升。通過輕輕混合，該穩(wěn)定化紅細(xì)胞可促進(jìn)白細(xì)胞類似物在懸浮介質(zhì)中的單分散。該對照組合物進(jìn)一步包含血小板類似物，或者另外包含網(wǎng)織紅細(xì)胞和/或有核紅細(xì)胞類似物。該線性對照體系允許檢驗(yàn)血液分析儀在延伸的濃度范圍內(nèi)對白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板的可報(bào)告的測定范圍和測量的線性。文檔編號G01N33/49GK101535804SQ200780042053公開日2009年9月16日申請日期2007年11月13日優(yōu)先權(quán)日2006年11月14日發(fā)明者內(nèi)里·奧爾蒂斯,西奧多·J·蓋魯洛申請人:貝克曼考爾特公司