專利名稱：一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及毛細管電泳的制備裝置，特別是一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置。
背景技術(shù)：
高效毛細管電泳(capillary electrophoresis，CE)相對于其他分離技術(shù)具有分離效率高，分析時間短，樣品消耗低等優(yōu)點，近年來得到了迅速發(fā)展。CE對蛋白質(zhì)、多肽及其他生物大分子樣品的高分離效率使該系統(tǒng)在目前蓬勃發(fā)展的蛋白組學研究中具有巨大的應(yīng)用前景。CE分析堿性蛋白主要問題在于未處理的石英毛細管壁殘留的硅羥基，與帶正電荷的堿性蛋白質(zhì)形成不可逆吸附，使譜帶展寬，峰托尾，分離重現(xiàn)性顯著降低。該問題的解決策略主要有動態(tài)去活法、壁涂層法和極端PH法。其中，以壁涂層法應(yīng)用最為普遍。涂層技術(shù)可以采用物理吸附或者化學鍵合兩種方式，其中物理吸附技術(shù)(如甲基纖維素或者聚乙烯亞胺等)制柱簡單，但穩(wěn)定性以及重現(xiàn)性較差。而化學鍵合涂層(如線性聚丙烯酰胺，交聯(lián)聚丙烯酰胺等)在毛細管表面形成一層永久性涂層，能夠有效地降低電滲流，減少蛋白的吸附，具有較好的穩(wěn)定性以及重現(xiàn)性。在傳統(tǒng)的交聯(lián)聚丙烯酰胺涂層柱制備系統(tǒng)中，由于無法有效驅(qū)除氧分子或在反應(yīng)過程中無法確保氧分子的再次溶解而使反應(yīng)時間冗長，制柱重復(fù)性差。
實用新型內(nèi)容本實用新型的目的在于提供一種既可去除反應(yīng)聚合液中溶解的氧，又可防止在聚合過程中氧氣的再次溶解的交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置。
本實用新型的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的本實用新型包括反應(yīng)容器及容器蓋，容器蓋密封插在反應(yīng)容器內(nèi)，容器蓋上設(shè)有多個孔。
其中所述容器蓋上孔的個數(shù)為四個，分別為毛細管孔、放空孔、試劑孔及氦氣孔；所述反應(yīng)容器由特氟龍或玻璃或石英或高分子透明材料加工制成；所述氦氣孔與氦氣源之間設(shè)有調(diào)節(jié)閥。
本實用新型的優(yōu)點與積極效果為本實用新型的反應(yīng)容器為透明材質(zhì)制成，可對反應(yīng)過程做動態(tài)觀察；并可實現(xiàn)去除反應(yīng)聚合液中溶解的氧，且可防止在聚合過程中氧氣的再次溶解，進而減少反應(yīng)時間，提高制柱的重復(fù)性。


圖1為本實用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實用新型制備的涂層柱用于毛細管電泳分析堿性蛋白；圖3為本實用新型制備的涂層柱用于毛細管電泳分析枳實提取物。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖對本實用新型作進一步詳述。
如圖1所示，本實用新型包括反應(yīng)容器1及容器蓋2，容器蓋2密封插在反應(yīng)容器1內(nèi)，容器蓋2上設(shè)有四個孔，分別為安放涂層毛細管的毛細管孔3、排放氧氣及氦氣的放空孔4、添加試劑的試劑孔5及放置氦氣管的氦氣孔6，各個孔沒有固定的位置要求。反應(yīng)容器1由特氟龍或玻璃或石英或高分子透明材料加工制成。氦氣孔6與氦氣源之間設(shè)有調(diào)節(jié)閥8，用于調(diào)節(jié)注入反應(yīng)容器1中氦氣的壓力。
制備過程包括柱內(nèi)壁預(yù)處理和聚合反應(yīng)兩步。柱內(nèi)壁預(yù)處理步驟包括將毛細管7順序用NaOH水溶液、純凈水、丙酮清洗，處理后再放入氣相色譜爐箱內(nèi)，在140℃氮吹下干燥后，將含體積百分比為66％的丙基甲基丙烯酸酯乙腈溶液注入到該毛細管7中，在水浴中反應(yīng)2～3小時。然后用丙酮沖洗1小時，在140℃氮吹下干燥后備用。
聚合反應(yīng)步驟包括打開容器蓋2，將丙烯酰胺和甲叉基雙丙烯酰胺混合溶液倒入反應(yīng)容器1中，然后將容器蓋2與反應(yīng)容器1密封好。通過氦氣孔6向反應(yīng)容器1內(nèi)注入氦氣，對丙烯酰胺和甲叉基雙丙烯酰胺混合溶液除氧處理半小時，反應(yīng)容器1內(nèi)的氣體經(jīng)放空孔4排出反應(yīng)容器1外。然后將處理好、備用的毛細管7經(jīng)毛細管孔3插入反應(yīng)容器1內(nèi)，由試劑孔5向反應(yīng)容器1內(nèi)加入過硫酸銨和N，N，N′，N′-四甲基乙二胺溶液。然后調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)閥8，加大氦氣的壓力，迅速將反應(yīng)容器1內(nèi)的溶液壓入已處理好的毛細管7中，4～10分鐘后將毛細管7由反應(yīng)容器1中取出，用純凈水沖洗，然后氮吹干燥。
如圖2所示，制備出的涂層柱用于毛細管電泳分析堿性蛋白時的分析條件為Jasco CE-1575柱上紫外檢測器；毛細管40/34cm(總長/有效)；KH2PO4緩沖液0.02mol/L、PH＝4.0；分離電壓10KV；分離電流25μA；虹吸進樣10cm×15s。圖中9為細胞色素C；10為溶菌酶(lysozyme)；11為核糖核酸酶A。
如圖3所示，制備的涂層柱用于毛細管電泳分析枳實提取物的電泳分離條件為分離電流26μA，其它條件與分析堿性蛋白時的分析條件相同。圖中，12為未知物峰；13為脫氧腎上腺素。
權(quán)利要求1.一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置，其特征在于包括反應(yīng)容器(1)及容器蓋(2)，容器蓋(2)密封插在反應(yīng)容器(1)內(nèi)，容器蓋(2)上設(shè)有多個孔。
2.按權(quán)利要求1所述的一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置，其特征在于所述容器蓋(2)上孔的個數(shù)為四個，分別為毛細管孔(3)、放空孔(4)、試劑孔(5)及氦氣孔(6)。
3.按權(quán)利要求1所述的一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置，其特征在于所述反應(yīng)容器(1)由特氟龍或玻璃或石英或高分子透明材料加工制成。
4.按權(quán)利要求1所述的一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置，其特征在于所述氦氣孔(6)與氦氣源之間設(shè)有調(diào)節(jié)閥(8)。
專利摘要本實用新型涉及毛細管電泳的制備裝置，特別是一種交聯(lián)型聚丙烯酰胺型毛細管電泳涂層柱的制備裝置，包括反應(yīng)容器及容器蓋，容器蓋密封插在反應(yīng)容器內(nèi)，容器蓋上設(shè)有多個孔。所述容器蓋上孔的個數(shù)為四個，分別為毛細管孔、放空孔、試劑孔及氦氣孔；所述反應(yīng)容器由特氟龍或玻璃或石英或高分子透明材料加工制成；所述氦氣孔與氦氣源之間設(shè)有調(diào)節(jié)閥。本實用新型的反應(yīng)容器為透明材質(zhì)制成，可對反應(yīng)過程做動態(tài)觀察；并可實現(xiàn)去除反應(yīng)聚合液中溶解的氧，且可防止在聚合過程中氧氣的再次溶解，進而減少反應(yīng)時間，提高制柱的重復(fù)性。
文檔編號G01N27/453GK2811997SQ200520091720
公開日2006年8月30日 申請日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日
發(fā)明者楊丙成, 田紅哲, 關(guān)亞風 申請人:中國科學院大連化學物理研究所