專利名稱：白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙及其制備、使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及養(yǎng)殖病害病原檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)，具體講是一種白斑癥病毒(white spot syndromevirus，WSSV)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙及其制備、使用方法，其屬于免疫學(xué)和病毒學(xué)交叉技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
白斑癥病毒病是對(duì)蝦養(yǎng)殖中危害嚴(yán)重的疾病之一，導(dǎo)致很高的對(duì)蝦死亡率，給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失。鑒于白斑癥尚無有效的治療方法，快速準(zhǔn)確的病毒分離檢測(cè)技術(shù)已成為各國(guó)學(xué)者研究的焦點(diǎn)之一。目前，白斑癥病毒病的診斷主要是依靠實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)白斑癥病毒檢測(cè)來確診，現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有PCR法；DNA探針原位雜交法；透射電鏡觀察法；光鏡下HE染色觀察法，酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法以及斑點(diǎn)免疫印跡檢測(cè)法等。這些方法，操作程式較為復(fù)雜，需要一定的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，且耗時(shí)較長(zhǎng)，整個(gè)過程需要幾個(gè)乃至十幾個(gè)小時(shí)，達(dá)不到快速、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的目的。PCR法靈敏度高，可用于無癥狀病蝦的檢測(cè)，但其高靈敏度易導(dǎo)致假陽性結(jié)果；酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法及斑點(diǎn)免疫印跡檢測(cè)法，是目前常用的檢測(cè)方法，但被檢組織的內(nèi)源酶可以對(duì)其檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)。因此一種適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖病害病原的快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、現(xiàn)場(chǎng)、無假陽性的檢測(cè)方法的研制勢(shì)在必行，以期達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙及其制備、使用方法是針對(duì)白斑癥病毒病嚴(yán)重危害對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)狀，迫切需要一種簡(jiǎn)便、快速、現(xiàn)場(chǎng)、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法和低等水生生物生理特點(diǎn)而設(shè)計(jì)發(fā)明的，以達(dá)到快速、簡(jiǎn)便、現(xiàn)場(chǎng)、準(zhǔn)確的檢測(cè)目的。
本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，研制了一種白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，具包括適當(dāng)尺寸的不干膠載體板；保減號(hào)為CCTCC-C200421雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的、膠體金標(biāo)記的單克隆抗體E(簡(jiǎn)稱金標(biāo)單抗E)；保藏號(hào)為CCTCC-C200423雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的單克隆抗體F(簡(jiǎn)稱單抗F)和羊抗小鼠1gG(簡(jiǎn)稱羊抗鼠IgG)。在該載體板的兩端部，分別設(shè)有加樣端吸水層和手持端吸水層；在該載體板中部段設(shè)有硝酸纖維膜的檢測(cè)層，在該檢測(cè)層與加樣端吸水層交界處，設(shè)有載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊，該層塊一端部分設(shè)置在加樣端吸水層之下，其另一端部分設(shè)置在該檢測(cè)層之上；在與該層塊延續(xù)的檢測(cè)層上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，該檢測(cè)線和質(zhì)控線處分別包被有單抗F和羊抗鼠IgG。
所述的金標(biāo)單抗E，其制備方法如下(1)膠體金的制備以公知的膠體金的制備工藝將氯金酸溶液與檸檬酸鈉混合，加熱制成膠體金溶液；(2)金標(biāo)單抗E的制備將單克隆抗體E加入到上述(1)步的膠體金溶液中，慢攪混勻，加入牛血清白蛋白，離心后的沉淀用含有牛血清白蛋白、疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液懸起，制成金標(biāo)單抗E液體；(3)載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊的制備將上述(2)步制成的金標(biāo)單抗E液體，噴在玻璃纖維膜上至液體開始滲出為止，冷凍干燥，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 一種白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙的使用方法首先，使用病毒提取裝置，快速地從被檢測(cè)的蝦鰓中提取白斑癥病毒，制備檢測(cè)樣品；然后，手持該試紙的手持端，將該試紙的加樣端吸水層插入或在其上滴加該檢測(cè)樣品，5分鐘內(nèi)在位于檢測(cè)層下端的檢測(cè)線和在位于檢測(cè)層上端的質(zhì)控線處顯示紅色，即雙紅線，表示白斑癥病毒陽性和檢測(cè)試紙有效。
所述的制備檢測(cè)樣品的過程是使用由試管和搗碎棒組成的病毒提取裝置，先將試管中加入液體，然后，取被檢蝦腮加入至試管中，用搗碎棒將其充分搗碎，使病毒釋放于該試管液體中，即制成檢測(cè)樣品。
所述的加入試管中的液體，其是池塘水，蒸餾水，自來水，pH6.0-8.0的磷酸鹽緩沖液，pH6.0-8.0的Tris-氯化鈉緩沖液中的任意一種。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明以現(xiàn)有技術(shù)的實(shí)際特點(diǎn)，研制了一種白斑癥病毒快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙及其制備、使用方法，采用從靶器官中簡(jiǎn)單的提取病毒，直接對(duì)含病毒的檢測(cè)樣品液進(jìn)行檢測(cè)，其原理是白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙采用夾心免疫層析原理，即由金標(biāo)單抗E同檢測(cè)樣品液中的抗原反應(yīng)，形成由金標(biāo)單抗E-白斑癥病毒復(fù)合物，當(dāng)該復(fù)合物層析至硝酸纖維素膜上預(yù)先包被在檢測(cè)線上的單抗F處時(shí)，此處的抗體會(huì)識(shí)別該復(fù)合物中抗原，反應(yīng)的結(jié)果便形成了金標(biāo)單抗E+白斑癥病毒抗原+單抗F的夾心結(jié)構(gòu)，最終是單抗E上標(biāo)記的膠體金顆粒在此固定并累積出現(xiàn)肉眼可見的紅色線，未反應(yīng)的金標(biāo)單抗E則仍繼續(xù)層析前行，當(dāng)?shù)竭_(dá)點(diǎn)預(yù)先包被在質(zhì)控線羊抗鼠IgG處時(shí)，抗體類型為IgG的金標(biāo)單抗E被其結(jié)合住，從而在此處也出現(xiàn)由膠體金顆粒固定并累積而顯現(xiàn)出肉眼可見的紅色線，結(jié)果是檢測(cè)線顯示紅色表示白斑癥病毒陽性；檢測(cè)線不顯示紅色，表示白斑癥病毒陰性，即檢測(cè)樣品中不含白斑癥病毒或是白斑癥病毒含量極低。質(zhì)控線顯示紅色，表示試紙有效；質(zhì)控線處不顯示紅色，說明試紙失效，即或是金標(biāo)抗體E、或是羊抗鼠IgG失活，檢測(cè)結(jié)果無效。本發(fā)明的特點(diǎn)是(1)本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，具有簡(jiǎn)便、快速、現(xiàn)場(chǎng)、準(zhǔn)確、靈敏等特點(diǎn)，無需專門設(shè)施和操作技術(shù)，適于普通養(yǎng)殖戶池邊檢測(cè)。(2)本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙使用方法中，由小管與搗碎棒組成的快速病毒提取裝置，可直接取池塘水或自來水等用于提取病毒的媒介液，無需加入特殊的裂解液；只需將蝦鰓搗碎即可，與傳統(tǒng)病毒提取研磨、離心等方法相比，此法方法方便、簡(jiǎn)單、快速，達(dá)到現(xiàn)場(chǎng)提取病毒檢測(cè)的目的。(3)本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，制備方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性、重復(fù)性好。經(jīng)實(shí)際應(yīng)用證明本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙具有簡(jiǎn)便、快速、現(xiàn)場(chǎng)、準(zhǔn)確、靈敏的特點(diǎn)。
附圖及其具體實(shí)施方式
本發(fā)明的實(shí)施例結(jié)合附圖進(jìn)一步描述如下

圖1白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙示意圖；圖2白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
參見圖1，2本發(fā)明白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，其包括適當(dāng)尺寸的不干膠載體板7；保藏號(hào)為CCTCC-C200421雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的、膠體金標(biāo)記的單克隆抗體E(簡(jiǎn)稱金標(biāo)單抗E)；保藏號(hào)為CCTCC-C200423雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的單克隆抗體F(簡(jiǎn)稱單抗F)和羊抗小鼠IgG(簡(jiǎn)稱羊抗鼠IgG)。在該載體板7的兩端部，分別設(shè)有加樣端4吸水層和手持端1吸水層；在該載體板7中部段設(shè)有硝酸纖維膜的檢測(cè)層2，在該檢測(cè)層2與加樣端4吸水層交界處，設(shè)有載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊3，該層塊3一端部分設(shè)置在加樣端4吸水層之下，其另一端部分設(shè)置在該檢測(cè)層2之上；在與該層塊3延續(xù)的檢測(cè)層2上設(shè)有檢測(cè)線6和質(zhì)控線5，該檢測(cè)線6和質(zhì)控線5處分別包被有單抗F和羊抗鼠IgG。
實(shí)施例1.
所述的單抗E膠體金標(biāo)記方法為(1)膠體金的制備18-20nm膠體金顆粒制備，將0.01％氯金酸溶液100ml與0.1％檸檬酸鈉2.5ml混合，加熱致100℃制成膠體金溶液，該溶液的pH值用0.2％碳酸鉀調(diào)至8.0-8.4，備用；(2)金標(biāo)單抗E的制備將1μl抗體加入1ml膠體金中，混均，加入10％氯化鈉100μl，觀察顏色變化，如果變藍(lán)，則說明抗體不足，再不斷的增加抗體量，直至膠體金顏色不變?yōu)闇?zhǔn)，在此基礎(chǔ)上，將此抗體量增加50-100％，此時(shí)為1ml膠體金標(biāo)記的最適單抗量。用此適宜單抗量進(jìn)行膠體金標(biāo)記，標(biāo)記后的膠體金無沉淀、無非特異性吸附，達(dá)到實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。按此最適單抗量，即單抗E濃度為0.5-2g/L時(shí)，1ml膠體金標(biāo)記的最適單抗量為15-20μl。將單抗E加入到膠體金溶液中，慢攪10min，加入1％牛血清白蛋白，4℃過夜；然后將其在4℃下，18000g離心110min；取離心沉淀，用含有1％牛血清白蛋白、0.02％疊氮鈉的0.01M磷酸鹽緩沖液(PBSKCI 0.2g，NaCI 8.0g，KH2PO40.2g，Na2HPO412H2O 2.9g，蒸餾水1000ml，pH7.4)懸起，制成金標(biāo)單抗E。
實(shí)施例2.
載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊的制備將制成的金標(biāo)單抗E液體，噴在玻璃纖維膜上至液體開始滲出為止，冷凍干燥，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 實(shí)施例3.
本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙檢測(cè)層制備方法為辛酸法提純的抗白斑癥病毒單抗F冷凍干燥后，制備成4mg/ml抗白斑癥病毒單抗F液，用噴膜機(jī)將其噴于硝酸纖維素膜上，形成檢測(cè)線6；同樣，將羊抗小鼠IgG，制備成300μg/ml，用噴膜機(jī)將其噴于硝酸纖維素膜上，形成質(zhì)控線5。兩線相距5mm，質(zhì)控線5近手持端吸水層，檢測(cè)線6近加樣端吸水層。室溫下晾干，再用pH7.4，含10％牛血清白蛋白的0.01M PBS 37℃封閉30min，PBS漂洗晾干。
實(shí)施例4.
本發(fā)明的分別分泌單抗E和F的兩株雜交瘤細(xì)胞，其制備與選擇的方法如下(1)用提純的白斑癥病毒液為抗原，免疫Balb/c小白鼠；(2)將免疫小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，培養(yǎng)得520株雜交瘤細(xì)胞；(3)采用間接免疫熒光法篩選出抗白斑癥病毒的陽性雜交瘤細(xì)胞株；(4)采用有限稀釋法對(duì)其中30株陽性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行了克??；(5)通過免疫電鏡，篩選出20株抗白斑癥病毒囊膜的單抗。
(6)通過不同模式金標(biāo)免疫層析方法選出2株不同的抗白斑癥病毒的單抗E和F，分別作為金標(biāo)單抗與包被檢測(cè)線單抗。其具體實(shí)驗(yàn)方法為通過免疫電鏡選出與病毒囊膜結(jié)合位點(diǎn)最多的單抗E，為金標(biāo)單抗；通過免疫電鏡選出與病毒囊膜結(jié)合位點(diǎn)較多的4種單抗，單抗C、單抗G、單抗A以及單抗F，分別以同濃度、同體積的這4種單抗為包被抗體，同時(shí)檢測(cè)同一白斑癥病毒樣本，結(jié)果單抗F為包被抗體時(shí)，效果最佳(見表1)。因而，選擇單抗E作為金標(biāo)單抗，而單抗F為包被檢測(cè)線的單抗。
表1不同模式檢測(cè)白斑癥病毒的金標(biāo)免疫層析結(jié)果包被單抗單抗C、單抗G、單抗A單抗F金標(biāo)免疫層析結(jié)果+ + +++注++表示檢測(cè)線顯紫紅色為較強(qiáng)陽性；+表示檢測(cè)線顯紅色為陽性；實(shí)施例5.
本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙的使用方法，即白斑癥病毒的檢測(cè)步驟首先，使用病毒提取裝置，快速地從被檢測(cè)的蝦鰓中提取白斑癥病毒，制備檢測(cè)樣品；所述的制備檢測(cè)樣品的過程是使用由試管和搗碎棒組成的病毒提取裝置，先將試管中加入液體，然后，取被檢蝦腮加入至試管中，用搗碎棒將其充分搗碎，使病毒釋放于該試管液體中，即制成檢測(cè)樣品。具體的操作過程是加池塘水，蒸餾水，自來水，pH6.0-8.0的磷酸鹽緩沖液，pH6.0-8.0的Tris-氯化鈉緩沖液中的任意一種至試管0.5ml刻度處，取1-2只成蝦鰓或整只幼蝦，放入試管中，充分搗碎，制成檢測(cè)樣品。
然后，將試紙的加樣端4吸水層浸入試管的檢測(cè)樣品中，液面不要超過MAX線，5分鐘內(nèi)讀結(jié)果。
陽性結(jié)果檢驗(yàn)層2上下呈現(xiàn)兩條紅色的檢測(cè)線5和質(zhì)控線6，表示有白斑癥病毒感染；陰性結(jié)果檢驗(yàn)層2上端部呈現(xiàn)一條紅色檢測(cè)線5，表示無白斑癥病毒感染或其病毒含極低；檢測(cè)結(jié)果無效加樣5分鐘內(nèi)，檢驗(yàn)層2上端質(zhì)檢線5處無紅線出現(xiàn)，表示該試紙失效，檢測(cè)結(jié)果無效。(見圖2)實(shí)施例6.
本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙檢測(cè)的最低病毒量的測(cè)定如下將提純的白斑癥病毒液稀釋用白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果是該試紙檢測(cè)最低病毒量為1μg/ml，結(jié)果見表2。
表2最低病毒量的測(cè)定結(jié)果病毒含量(μg/ml)包被抗體 抗體含量(mg/ml) 1005010.5 0.10.054G94++ +++-- -注++表示檢測(cè)線顯紫紅色為較強(qiáng)陽性；+表示檢測(cè)線顯紅色為陽性；-表示檢測(cè)線無色為陰性。
實(shí)施例7.
本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙檢測(cè)使用方法的重復(fù)性與穩(wěn)定性測(cè)定如下(1)本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙檢測(cè)使用重復(fù)性實(shí)驗(yàn)選擇2種樣品，其分別是患白斑癥病的蝦鰓，正常蝦鰓。用同一批次的膠體金標(biāo)記抗白斑癥病毒的單克隆抗體E制備的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙檢測(cè)以上所選2種樣品，結(jié)果顯示患白斑癥病的蝦鰓樣品為陽性，正常蝦鰓樣品為陰性。同樣樣品，用五個(gè)不同批次的膠體金標(biāo)記抗白斑癥病毒的單克隆抗體E制備的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙結(jié)果同上。
(2)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將本發(fā)明的白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙分別放入4℃與室溫下，每15天用室溫下存放的該試紙檢測(cè)以上2種樣品一次，每30天用4℃下存放的該試紙檢測(cè)以上2種樣品一次。結(jié)果4℃下存放的該試紙有效期12個(gè)月。室溫下存放的該試紙有效期6個(gè)月。
本發(fā)明所用儀器及試劑冰凍切片機(jī)(購自LEICA公司)；熒光顯微鏡(購自O(shè)1YMPUS公司)；倒置相差顯微鏡(購自O(shè)1YMPUS公司)；噴膜機(jī)(購自美國(guó)BIODOT公司)；氯金酸(購自中國(guó)上海試劑一廠，批號(hào)85-01-02，分析純)；1640(購自GIBCO公司)；胎牛血清(購自HYCLONE公司)；HAT(購自GIBCO公司)；羊抗小鼠IgG抗體(購自SIGMA公司)；牛血清白蛋白(購自SIGMA公司)；硝酸纖維素膜(購自MILLIPORE公司)；二甲亞砜(購自SIGMA公司)。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員都會(huì)理解，在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)，對(duì)于上述實(shí)施例進(jìn)行修改，添加和替換都是可能的，其都沒有超出本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，其包括適當(dāng)尺寸的不干膠載體板；保藏號(hào)為CCTCC-C200421雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的、膠體金標(biāo)記的單克隆抗體E(簡(jiǎn)稱金標(biāo)單抗E)；保藏號(hào)為CCTCC-C200423雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的單克隆抗體F(簡(jiǎn)稱單抗F)和羊抗小鼠IgG(簡(jiǎn)稱羊抗鼠IgG)，其特征在于在該載體板的兩端部，分別設(shè)有加樣端吸水層和手持端吸水層；在該載體板中部段設(shè)有硝酸纖維膜的檢測(cè)層，在該檢測(cè)層與加樣端吸水層交界處，設(shè)有載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊，該層塊一端部分設(shè)置在加樣端吸水層之下，其另一端部分設(shè)置在該檢測(cè)層之上；在與該層塊延續(xù)的檢測(cè)層上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，該檢測(cè)線和質(zhì)控線處分別包被有單抗F和羊抗鼠IgG。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，其特征在于所述的金標(biāo)單抗E，其制備方法如下(1)膠體金的制備以公知的膠體金的制備工藝將氯金酸溶液與檸檬酸鈉混合，加熱制成膠體金溶液；(2)金標(biāo)單抗E的制備將單克隆抗體E加入到上述(1)步的膠體金溶液中，慢攪混勻，加入牛血清白蛋白，離心后的沉淀用含有牛血清白蛋白、疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液懸起，制成金標(biāo)單抗E液體；(3)載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊的制備將上述(2)步制成的金標(biāo)單抗E液體，噴在玻璃纖維膜上至液體開始滲出為止，冷凍干燥，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 3.一種由權(quán)利要求1所述白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙的使用方法，其特征在于首先，使用病毒提取裝置，快速地從被檢測(cè)的蝦鰓中提取白斑癥病毒，制備檢測(cè)樣品；然后，手持該試紙的手持端，將該試紙的加樣端吸水層插入或在其上滴加該檢測(cè)樣品，5分鐘內(nèi)在位于檢測(cè)層下端的檢測(cè)線和在位于檢測(cè)層上端的質(zhì)控線處顯示紅色，即雙紅線，表示白斑癥病毒陽性和檢測(cè)試紙有效。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙的使用方法，其特征在于所述的制備檢測(cè)樣品的過程是使用由試管和搗碎棒組成的病毒提取裝置，先將試管中加入液體，然后，取被檢蝦腮加入至試管中，用搗碎棒將其充分搗碎，使病毒釋放于該試管液體中，即制成檢測(cè)樣品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙的使用方法，其特征在于所述的加入試管中的液體，其是池塘水，蒸餾水，自來水，pH 6.0-8.0的磷酸鹽緩沖液，pH 6.0-8.0的Tris-氯化鈉緩沖液中的任意一種。
全文摘要
本發(fā)明是白斑癥病毒現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)試紙，包括不干膠載體板；保藏號(hào)為CCTCC－C200421雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的、膠體金標(biāo)記的金標(biāo)單抗E；保藏號(hào)為CCTCC－C200423雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗白斑癥病毒的單抗F和羊抗小鼠IgG。在該載體板的兩端部，設(shè)有加樣端吸水層和手持端吸水層；在該載體板中部段設(shè)有硝酸纖維膜的檢測(cè)層，在該檢測(cè)層與加樣端吸水層交界處，設(shè)有載有金標(biāo)單抗E的玻璃纖維層塊，該層塊一端部分設(shè)置在加樣端吸水層之下，其另一端部分設(shè)置在該檢測(cè)層之上；在與該層塊延續(xù)的檢測(cè)層上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，該檢測(cè)線和質(zhì)控線處分別包被有單抗F和羊抗小鼠IgG。該試紙制備方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，具有簡(jiǎn)便、快速、現(xiàn)場(chǎng)、準(zhǔn)確、靈敏的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/52GK1664587SQ20051004212
公開日2005年9月7日 申請(qǐng)日期2005年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月7日
發(fā)明者戰(zhàn)文斌, 王曉潔, 林穎博 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)