專利名稱：一種高含量的egcg的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種從茶多酚中得到高含量的EGCG的制備方法。
背景技術(shù)：
EGCG，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是從綠茶中提取的一種成份，它是綠茶主要的活性和水溶性成份，占綠茶毛重的9％-13％；EGCG是綠茶茶多酚的主要組成成分，也是綠茶兒茶素類的主成分，它占綠茶兒茶素類總量的10-15％，兒茶素類包括沒食子酸兒茶素(Gallocatechin，GC)、表沒食子酸兒茶素(Epigallocatechin，ECG)、表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表沒食子酸兒茶素(EGC)和表兒茶素(EC)等，其中抗氧化活性依次為EC＜ECG＜EGC＜EGCG。因為具有特殊的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)，EGCG是綠茶中最有效的抗氧化多酚，具有非常強的抗氧化、抗癌、抗突變等活性?？寡趸钚灾辽偈蔷S生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護細胞和DNA受損害，這種損害相信與癌癥、心臟疾病和其他重大疾病有關(guān)，EGCG的這些功效歸結(jié)于他們對氧自由基的清除能力。EGCG在抗癌和心血管疾病方面擔(dān)當了重要的角色。此外，它也用作腫瘤多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)劑，能夠改善癌細胞對化療的敏感性并減輕對心臟的毒性。許多研究表明EGCG具有抗自由基DNA損害，抗輻射和紫外線，阻止油脂過氧化，減少血清中低密度膽固醇、超低密度膽固醇和甘油三酯的含量，干擾癌細胞生存所需的信號傳遞，抑制飲食中的致癌物質(zhì)，與腸、肝、和肺中的其他酶和抗氧化劑作用共同阻止某些致癌物質(zhì)的活力，清除自由基，抵御污染、日曬和吸煙的影響，防治皮膚老化和起皺。
由于茶葉中各種多酚組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)十分相近，極性強，一般方法很難達到對其單體的分離。如申請(專利)號為01139179.0公開了一種高含量EGCG兒茶素的提取方法，其以普通的黃色茶多酚為原料，在室溫、壓力范圍為0.1～1.0MPa的條件下，經(jīng)過一系列的無害惰性有機溶劑多步逆流萃取后，調(diào)整溶液的pH值在2.5～7.5之間，進行二價或三價金屬鹽沉淀反應(yīng)，沉淀經(jīng)過濾、熱水洗滌和酸溶解，用乙酸乙酯萃取，萃取的有機溶劑相再進行水洗脫酸、減壓濃縮、重結(jié)晶，結(jié)晶后的結(jié)晶物經(jīng)過濾、冷凍、雙重水洗滌，最后進行冷凍干燥而成。該工藝能得到EGCG有效含量為90％的產(chǎn)品，但該工藝過程較復(fù)雜，既有大量有機溶劑的萃取，又有金屬鹽沉淀反應(yīng)，并且還涉及重結(jié)晶等過程，所需溶劑量大，處理量又小，難以工業(yè)化生產(chǎn)。
公開號為CN 1277068A的專利介紹了一種高純度單體兒茶素的高速逆流色譜分離制備方法，它包括配制構(gòu)成固定相、流動相的溶劑體系；使逆流色譜儀柱子中充滿固定相；然后使其主機轉(zhuǎn)動，再將流動相泵入柱內(nèi)；由進樣閥進樣；根據(jù)檢測器譜圖接收目標成分，所用溶劑體系可以是水、脂肪醇、脂肪醇或脂肪酮；或者是烷烴、脂肪醇、水所構(gòu)成的兩相溶劑體系，以上相為固定相，下相為流動相。目前的逆流色譜技術(shù)難以得到含量大于90％的產(chǎn)品，且一次分離樣品量小，分離時間長，目前僅處于研究階段。
綜上所述，上述諸多提取方法雖然可以達到較高純度，但存在的諸多問題限制了它在工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從茶多酚中得到高含量的EGCG的制備方法。
本發(fā)明將公開一種操作簡單、效果明顯的從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法。它以茶多酚為原料，經(jīng)溶解、柱層析、濃縮、結(jié)晶、冷凍干燥后得到高含量的EGCG；采用此制備方法，得到的高含量的EGCG為白色粉末，含量為90％以上(HPLC法測定HighPerformance Liquid Chromatography，高效液相色譜)。
本發(fā)明所述的從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法，所述的原料為EGCG含量為10-40％的茶多酚或茶多酚含量為50％以下的綠茶提取物。
本發(fā)明所述的從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法，其步驟如下1)將原料置于8-10倍于其重量的純凈水中超聲溶解30min；2)將溶解后的溶液通過柱層析，用樹脂進行吸附；3)用相當于進柱液體體積10-12倍的純凈水清洗樹脂；4)用10-15％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深黃再變淺，當流出液顏色接近無色時，停止洗脫；5)用20-25％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深再變淺，當流出液顏色接近無色時，可停止洗脫；6)合并兩次收集的流出液，濃縮；7)在濃縮液中加入少量高含量的EGCG，促進結(jié)晶，放置24h，結(jié)晶；8)將結(jié)晶物用純水沖洗、抽濾，再通過冷凍干燥得到粉末狀的EGCG。
本發(fā)明所述從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法中，柱層析樹脂選自型號為D101的大孔吸附樹脂、型號為HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附樹脂。
本發(fā)明所述一種從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法中得到的EGCG為白色粉末，含量為90％以上(HPLC法測定HighPerformance Liquid Chromatography，高效液相色譜)。
本發(fā)明的優(yōu)點是
1、生產(chǎn)過程中避免使用氯仿、脂肪醇、烷烴等有毒溶劑、有機溶劑的大量使用，避免了環(huán)境污染；2、工藝上采用成熟的柱層析技術(shù)，通過連續(xù)兩次梯度洗脫來實現(xiàn)，工藝簡單、操作方便，避免了工藝復(fù)雜的逆流萃取技術(shù)、逆流色譜技術(shù)，改變了采用柱層析技術(shù)得不到高含量EGCG的觀點；3、得到的EGCG純度高、收率高、產(chǎn)量大、過程短，利于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式
實施例11)將原料(EGCG含量為10％的茶多酚，桂林萊茵生物科技股份有限公司生產(chǎn))置于8倍于其重量的純凈水中超聲溶解30min；2)將溶解后的溶液通過柱層析，用型號為D101的大孔吸附樹脂進行吸附；3)用相當于進柱液體體積10倍的純凈水清洗樹脂；4)用10％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深黃再變淺，當流出液顏色接近無色時，停止洗脫；5)用20％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深再變淺，當流出液顏色接近無色時，可停止洗脫；6)合并兩次收集的流出液，濃縮；7)在濃縮液中加入少量高含量的EGCG，促進結(jié)晶，放置24h，結(jié)晶；8)將結(jié)晶物用純水沖洗、抽濾，再通過冷凍干燥得到粉末狀的EGCG。
實施例2
1)將原料(EGCG含量為40％的茶多酚，無錫太陽綠寶科技有限公司生產(chǎn))置于10倍于其重量的純凈水中超聲溶解30min；2)將溶解后的溶液通過柱層析，用型號為HP20SS的小粒度合成吸附樹脂進行吸附；3)用相當于進柱液體體積12倍的純凈水清洗樹脂；4)用15％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深黃再變淺，當流出液顏色接近無色時，停止洗脫；5)用25％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深再變淺，當流出液顏色接近無色時，可停止洗脫；6)合并兩次收集的流出液，濃縮；7)在濃縮液中加入少量高含量的EGCG，促進結(jié)晶，放置24h，結(jié)晶；8)將結(jié)晶物用純水沖洗、抽濾，再通過冷凍干燥得到粉末狀的EGCG。
實施例31)將原料(茶多酚含量為50％的綠茶提取物，桂林興達制藥廠生產(chǎn))置于8倍于其重量的純凈水中超聲溶解30min；2)將溶解后的溶液通過柱層析，用型號為SP20SS的小粒度合成吸附樹脂進行吸附；3)用相當于進柱液體體積12倍的純凈水清洗樹脂；4)用15％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深黃再變淺，當流出液顏色接近無色時，停止洗脫；5)用25％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深再變淺，當流出液顏色接近無色時，可停止洗脫；6)合并兩次收集的流出液，濃縮；7)在濃縮液中加入少量高含量的EGCG，促進結(jié)晶，放置24h，結(jié)晶；8)將結(jié)晶物用純水沖洗、抽濾，再通過冷凍干燥得到粉末狀的EGCG。
實施例41)將原料(茶多酚含量為30％的綠茶提取物，桂林興達制藥廠生產(chǎn))置于8倍于其重量的純凈水中超聲溶解30min；2)將溶解后的溶液通過柱層析，用型號為SP20SS的小粒度合成吸附樹脂進行吸附；3)用相當于進柱液體體積12倍的純凈水清洗樹脂；4)用15％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深黃再變淺，當流出液顏色接近無色時，停止洗脫；5)用25％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深再變淺，當流出液顏色接近無色時，可停止洗脫；6)合并兩次收集的流出液，濃縮；7)在濃縮液中加入少量高含量的EGCG，促進結(jié)晶，放置24h，結(jié)晶；8)將結(jié)晶物用純水沖洗、抽濾，再通過冷凍干燥得到粉末狀的EGCG。
權(quán)利要求
1.一種從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法，使用低含量的茶多酚為原料，經(jīng)溶解、柱層析、濃縮、結(jié)晶、冷凍干燥后得到高含量的EGCG(EGCG為90％以上，HPLC法測定)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法，包括如下步驟1)將低含量的茶多酚置于8-10倍于其重量的純凈水中超聲溶解30min；2)將溶解后的溶液通過柱層析，用樹脂進行吸附；3)用相當于進柱液體體積10-12倍的純凈水清洗樹脂；4)用10-15％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深黃再變淺，當流出液顏色接近無色時，停止洗脫；5)用20-25％乙醇清洗樹脂，當流出液變淺黃時，開始收集流出液，當流出液顏色由淺黃變深再變淺，當流出液顏色接近無色時，可停止洗脫；6)合并兩次收集的流出液，濃縮；7)在濃縮液中加入少量高含量的EGCG，促進結(jié)晶，放置24h，結(jié)晶；8)將結(jié)晶物用純水沖洗、抽濾，再通過冷凍干燥得到粉末狀的EGCG。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法，其特征在于所述的低含量茶多酚為EGCG含量為10-40％的茶多酚或茶多酚含量為50％以下的綠茶提取物。
4.如權(quán)利要求2所述的一種從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法，其特征在于所述的柱層析，樹脂選自型號為D101的大孔吸附樹脂、型號為HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附樹脂。
全文摘要
本發(fā)明將公開一種操作簡單、效果明顯的從茶多酚中提取高含量的EGCG的制備方法。它以茶多酚為原料，經(jīng)溶解、柱層析、濃縮、結(jié)晶、冷凍干燥后得到含量為90％以上的EGCG(HPLC法測定HighPerformance Liquid Chroma tography，高效液相色譜)。采用本發(fā)明公開的制備方法，分離得到的EGCG純度高、收率高、產(chǎn)量大、過程短，利于工業(yè)化生產(chǎn)；采用成熟柱層析技術(shù)且避免大量有毒、有機溶劑的使用，避免了環(huán)境污染。
文檔編號B01D15/34GK101074224SQ20071009021
公開日2007年11月21日 申請日期2007年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月13日
發(fā)明者孫步祥, 湯凌志, 劉健雄, 韋興, 陳振鵬, 吳柏峰, 王智慧 申請人:桂林萊茵生物科技股份有限公司