一種酶法制備榛子蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酶法制備榛子蛋白的方法，包括：榛子粕粉原料的制備；榛子蛋白萃取液的制備；調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液pH，加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，得到一次酶解液；調(diào)節(jié)一次酶解液pH，加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，得到二次酶解液；調(diào)節(jié)二次酶解液pH進行酸沉處理，得到一次蛋白；調(diào)節(jié)一次蛋白pH，并將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液；調(diào)節(jié)蛋白復溶液的pH，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，得到三次酶解液；調(diào)節(jié)三次酶解液pH進行酸沉處理，得到二次蛋白；對二次蛋白進行微波滅酶處理，既得成品的榛子蛋白。該酶法制備榛子蛋白的方法，工藝安全、制備便捷，提取的榛子蛋白純度高達85.0%以上。
【專利說明】
一種酶法制備榛子蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及榛子蛋白技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酶法制備榛子蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]榛子是“四大堅果”之一，是木本油料作物。其主產(chǎn)地在土耳其，在我國，榛子的大面積栽培種植比較少，但東北、華北的廣大山區(qū)，都有野生品種。榛子含有豐富的脂肪，主要是人體不能自身合成的不飽和脂肪酸，榛子仁中蛋白質(zhì)含量也特別高，明顯的高于其它堅果。鐵嶺棒子蛋白質(zhì)含量達到22%，蛋白質(zhì)中氣基酸含量尚，占49.5%，人體必需的八種氣基酸樣樣都有。通過低溫冷榨脫油后的榛子蛋白質(zhì)含量高達44.6%-50%，開發(fā)前景廣闊。雖然近年來，我國榛子年產(chǎn)量越來越高，但是總體產(chǎn)量還是偏低，所以開發(fā)出一種能高效利用榛子的方法很重要。榛子蛋白是榛子主要營養(yǎng)物質(zhì)之一，目前，水相萃取法是一種應用于植物蛋白中提取比較廣泛的方法，該方法工藝簡單、成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)，但是提取的蛋白的純度只能達到60%?75%。因此，研究一種高純度榛子蛋白的制備方法很有必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對上述技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明提供了一種工藝安全、制備便捷、提取的榛子蛋白純度高的酶法制備榛子蛋白的方法。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種酶法制備榛子蛋白的方法，包括如下步驟:步驟一、榛子柏粉原料的制備;步驟二、榛子蛋白萃取液的制備:將榛子柏粉原料和水混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8?8.5，并進行超聲波輔助萃取，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的PH至8.5?9，并進行超聲波輔助萃取，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液;步驟三、一次酶解:調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的PH至8?8.5，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，得到一次酶解液;步驟四、二次酶解:調(diào)節(jié)一次酶解液的PH至8.5?9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，得到二次酶解液;步驟五、一次酸沉:調(diào)節(jié)二次酶解液PH至4.6?4.7進行酸沉處理，得到一次蛋白；步驟六、堿液復溶:向一次蛋白中加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至10?11，并在溫度為40?50°C下將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液；步驟七、三次酶解:調(diào)節(jié)蛋白復溶液的PH至9?9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，得到三次酶解液;步驟八、二次酸沉:調(diào)節(jié)三次酶解液的PH至4.4?4.6進行酸沉處理，得到二次蛋白；步驟九、微波滅酶:對二次蛋白進行微波滅酶處理，得到滅酶蛋白，將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。
[0005]優(yōu)選的，所述步驟一中榛子柏粉原料的制備過程如下:將榛子去殼粉碎后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的榛子柏，其殘油量為1.1?1.9%，并將脫脂的榛子柏粉碎過篩得到顆粒大小為100?150目篩的榛子柏粉原料。
[0006]優(yōu)選的，所述步驟二中榛子蛋白萃取液的制備過程如下:將榛子柏粉原料和水按料液比Ig: 8?1mL混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8?8.5，并通過超聲波輔助萃取30?40分鐘，萃取溫度為35?40°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水按料液比Ig: 10?15mL混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的pH至8.5?9，并通過超聲波輔助萃取15?20分鐘，萃取溫度為45?50°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液。
[0007]優(yōu)選的，所述步驟三中一次酶解的過程如下:調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的pH至8?8.5，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，一次復合酶采用風味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述風味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量為1:3?6:2?4，且一次復合酶的加入量為榛子蛋白萃取液用量的2000?3000u/g，酶解反應溫度為40?45°C，酶解反應時間為80?90分鐘，超聲強度為1.0?I.lW/cm3，待一次酶解反應結(jié)束，得到一次酶解液。
[0008]優(yōu)選的，所述步驟四中二次酶解的過程如下:調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至8.5?9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，二次復合酶采用原果膠酶+堿性果膠酶+果膠甲酯水解酶，所述原果膠酶、堿性果膠酶和果膠甲酯水解酶的用量為1:4?8:3?6，且二次復合酶的加入量為一次酶解液用量的1500?2000u/g，酶解反應溫度為45?50°C，酶解反應時間為70?80分鐘，超聲強度為1.1?1.2W/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液。
[0009]優(yōu)選的，所述步驟七中三次酶解的過程如下:調(diào)節(jié)蛋白復溶液的pH至9?9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，三次復合酶采用堿性纖維素酶+堿性半纖維素酶，所述堿性纖維素酶和堿性半纖維素酶的用量為1:3?6，且三次復合酶的加入量為蛋白復溶液用量的1000?1500u/g，酶解反應溫度為50?55°C，酶解反應時間為60?70分鐘，超聲強度為1.2?1.3W/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液。
[0010]優(yōu)選的，所述步驟九中微波滅酶的過程如下:對二次蛋白進行微波滅酶處理，微波功率為500?800W，滅酶溫度為80?90 °C，滅酶時間為2?3分鐘，待微波滅酶結(jié)束，得到滅酶蛋白；將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是:本發(fā)明提供的酶法制備榛子蛋白的方法，通過對榛子柏粉原料先后兩次進行超聲波輔助萃取，可使得榛子柏粉原料中的榛子蛋白充分溶出，極大縮短了榛子蛋白的提取時間；通過先后依次進行兩次酸沉和堿液復溶處理，可將榛子蛋白中其它雜質(zhì)有效分離，從而提高榛子蛋白的純度;通過分別依次采用一次復合酶、二次復合酶、三次復合酶進行酶解處理，以提供合適的微環(huán)境來溶解榛子蛋白，有效提高了榛子蛋白的提取率和純度;該酶法制備榛子蛋白的方法，工藝安全、制備便捷，提取的榛子蛋白純度高達85.0%以上。
【附圖說明】
[0012]圖1是本發(fā)明所述酶法制備榛子蛋白的方法的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0013]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。
[0014]如圖1所示，本發(fā)明提供了一種酶法制備榛子蛋白的方法，包括如下步驟: 步驟一、榛子柏粉原料的制備:將榛子去殼粉碎后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的榛子柏，其殘油量為1.1?1.9%，并將脫脂的榛子柏粉碎過篩得到顆粒大小為100?150目篩的榛子柏粉原料；
步驟二、榛子蛋白萃取液的制備:將榛子柏粉原料和水按料液比Ig: 8?1mL混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8?8.5，并通過超聲波輔助萃取30?40分鐘，萃取溫度為35?40°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水按料液比Ig: 10?15mL混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的pH至8.5?9，并通過超聲波輔助萃取15?20分鐘，萃取溫度為45?50°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液;通過對榛子柏粉原料先后兩次進行超聲波輔助萃取，可使得榛子柏粉原料中的榛子蛋白充分溶出，極大縮短了榛子蛋白的提取時間；
步驟三、一次酶解:調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的pH至8?8.5，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，一次復合酶采用風味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述風味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量為1: 3?6: 2?4，且一次復合酶的加入量為榛子蛋白萃取液用量的2000?3000u/g，酶解反應溫度為40?45°C，酶解反應時間為80?90分鐘，超聲強度為1.0?1.1ff/cm3，待一次酶解反應結(jié)束，得到一次酶解液；
步驟四、二次酶解:調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至8.5?9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，二次復合酶采用原果膠酶+堿性果膠酶+果膠甲酯水解酶，所述原果膠酶、堿性果膠酶和果膠甲酯水解酶的用量為1:4?8:3?6，且二次復合酶的加入量為一次酶解液用量的1500?2000u/g，酶解反應溫度為45?50°C，酶解反應時間為70?80分鐘，超聲強度為1.1?1.2ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液；
步驟五、一次酸沉:調(diào)節(jié)二次酶解液PH至4.6?4.7進行酸沉處理，待出現(xiàn)絮狀物后靜置I?1.5小時，離心分離得到一次蛋白；
步驟六、堿液復溶:向一次蛋白中加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10?11，并在溫度為40?50 V下將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液；
步驟七、三次酶解:調(diào)節(jié)蛋白復溶液的PH至9?9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，三次復合酶采用堿性纖維素酶+堿性半纖維素酶，所述堿性纖維素酶和堿性半纖維素酶的用量為1:3?6，且三次復合酶的加入量為蛋白復溶液用量的1000?1500u/g，酶解反應溫度為50?55 °C，酶解反應時間為60?70分鐘，超聲強度為1.2?1.3W/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;通過分別依次采用一次復合酶、二次復合酶、三次復合酶進行酶解處理，以提供合適的微環(huán)境來溶解榛子蛋白，有效提高了榛子蛋白的提取率和純度；
步驟八、二次酸沉:調(diào)節(jié)三次酶解液的PH至4.4?4.6進行酸沉處理，待出現(xiàn)絮狀物后靜置I?1.5小時，離心分離得到二次蛋白；通過先后依次進行兩次酸沉和堿液復溶處理，可將棒子蛋白中其它雜質(zhì)有效分尚，從而提尚棒子蛋白的純度；
步驟九、微波滅酶:對二次蛋白進行微波滅酶處理，微波功率為500?800W，滅酶溫度為80?90°C，滅酶時間為2?3分鐘，待微波滅酶結(jié)束，得到滅酶蛋白；將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。
[0015]實施例1:
將榛子去殼粉碎后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的榛子柏，其殘油量為1.1%，并將脫脂的榛子柏粉碎過篩得到顆粒大小為130目篩的榛子柏粉原料;將榛子柏粉原料和水按料液比Ig:1OmL混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8，并通過超聲波輔助萃取35分鐘，萃取溫度為40°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水按料液比Ig: 15mL混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的pH至8.5，并通過超聲波輔助萃取15分鐘，萃取溫度為50°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液;調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的PH至8.5，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，一次復合酶采用風味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述風味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量為1:3:2，且一次復合酶的加入量為榛子蛋白萃取液用量的2500u/g，酶解反應溫度為40°C，酶解反應時間為85分鐘，超聲強度為1.0ff/cm3，待一次酶解反應結(jié)束，得到一次酶解液;調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，二次復合酶采用原果膠酶+堿性果膠酶+果膠甲酯水解酶，所述原果膠酶、堿性果膠酶和果膠甲酯水解酶的用量為1:6:3，且二次復合酶的加入量為一次酶解液用量的1500u/g，酶解反應溫度為45 0C，酶解反應時間為75分鐘，超聲強度為1.1ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;調(diào)節(jié)二次酶解液pH至4.6進行酸沉處理，得到一次蛋白；向一次蛋白中加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10，并在溫度為50°C下將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液；調(diào)節(jié)蛋白復溶液的PH至9，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，三次復合酶采用堿性纖維素酶+堿性半纖維素酶，所述堿性纖維素酶和堿性半纖維素酶的用量為I: 6，且三次復合酶的加入量為蛋白復溶液用量的1250u/g，酶解反應溫度為50 0C，酶解反應時間為70分鐘，超聲強度為1.2ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;調(diào)節(jié)三次酶解液的PH至4.5進行酸沉處理，得到二次蛋白；對二次蛋白進行微波滅酶處理，微波功率為800W，滅酶溫度為80°C，滅酶時間為3分鐘，待微波滅酶結(jié)束，得到滅酶蛋白；將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。其中，榛子蛋白的提取率為74.2%，純度為87.5%。
[0016]實施例2:
將榛子去殼粉碎后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的榛子柏，其殘油量為1.5%，并將脫脂的榛子柏粉碎過篩得到顆粒大小為150目篩的榛子柏粉原料;將榛子柏粉原料和水按料液比Ig: 8mL混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8.5，并通過超聲波輔助萃取30分鐘，萃取溫度為35°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水按料液比Ig: 12mL混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的pH至9，并通過超聲波輔助萃取20分鐘，萃取溫度為45°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液;調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的PH至8，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，一次復合酶采用風味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述風味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量為1:6:4，且一次復合酶的加入量為榛子蛋白萃取液用量的3000u/g，酶解反應溫度為45°C，酶解反應時間為80分鐘，超聲強度為I.Iff/cm3，待一次酶解反應結(jié)束，得到一次酶解液;調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至8.5，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，二次復合酶采用原果膠酶+堿性果膠酶+果膠甲酯水解酶，所述原果膠酶、堿性果膠酶和果膠甲酯水解酶的用量為1:8:6，且二次復合酶的加入量為一次酶解液用量的1800u/g，酶解反應溫度為50°C，酶解反應時間為80分鐘，超聲強度為1.2ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;調(diào)節(jié)二次酶解液pH至4.7進行酸沉處理，得到一次蛋白；向一次蛋白中加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至11，并在溫度為40°C下將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液；調(diào)節(jié)蛋白復溶液的PH至9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，三次復合酶采用堿性纖維素酶+堿性半纖維素酶，所述堿性纖維素酶和堿性半纖維素酶的用量為1:4，且三次復合酶的加入量為蛋白復溶液用量的1000u/g，酶解反應溫度為550C，酶解反應時間為65分鐘，超聲強度為1.3ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;調(diào)節(jié)三次酶解液的PH至4.6進行酸沉處理，得到二次蛋白；對二次蛋白進行微波滅酶處理，微波功率為500W，滅酶溫度為90°C，滅酶時間為2分鐘，待微波滅酶結(jié)束，得到滅酶蛋白；將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。其中，榛子蛋白的提取率為72.3%，純度為86.8%。
[0017]實施例3:
將榛子去殼粉碎后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的榛子柏，其殘油量為1.9%，并將脫脂的榛子柏粉碎過篩得到顆粒大小為100目篩的榛子柏粉原料;將榛子柏粉原料和水按料液比lg: 9mL混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8，并通過超聲波輔助萃取40分鐘，萃取溫度為40°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水按料液比Ig:1OmL混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的pH至9，并通過超聲波輔助萃取20分鐘，萃取溫度為45°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液;調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的PH至8，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，一次復合酶采用風味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述風味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量為1:4:3，且一次復合酶的加入量為榛子蛋白萃取液用量的2000u/g，酶解反應溫度為40°C，酶解反應時間為90分鐘，超聲強度為I.Iff/cm3，待一次酶解反應結(jié)束，得到一次酶解液;調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，二次復合酶采用原果膠酶+堿性果膠酶+果膠甲酯水解酶，所述原果膠酶、堿性果膠酶和果膠甲酯水解酶的用量為1:4:4，且二次復合酶的加入量為一次酶解液用量的2000u/g，酶解反應溫度為45 °C，酶解反應時間為70分鐘，超聲強度為
1.2ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;調(diào)節(jié)二次酶解液pH至4.6進行酸沉處理，得到一次蛋白；向一次蛋白中加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至11，并在溫度為45°C下將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液；調(diào)節(jié)蛋白復溶液的PH至9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，三次復合酶采用堿性纖維素酶+堿性半纖維素酶，所述堿性纖維素酶和堿性半纖維素酶的用量為1:3，且三次復合酶的加入量為蛋白復溶液用量的1500u/g，酶解反應溫度為550C，酶解反應時間為60分鐘，超聲強度為1.3ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液;調(diào)節(jié)三次酶解液的PH至4.4進行酸沉處理，得到二次蛋白；對二次蛋白進行微波滅酶處理，微波功率為600W，滅酶溫度為85°C，滅酶時間為3分鐘，待微波滅酶結(jié)束，得到滅酶蛋白；將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。其中，榛子蛋白的提取率為73.9%，純度為85.7%。
[0018]盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的圖例。
【主權(quán)項】
1.一種酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟一、榛子柏粉原料的制備； 步驟二、榛子蛋白萃取液的制備:將榛子柏粉原料和水混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的PH至8?8.5，并進行超聲波輔助萃取，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的PH至8.5?9，并進行超聲波輔助萃取，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液； 步驟三、一次酶解:調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的pH至8?8.5，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，得到一次酶解液； 步驟四、二次酶解:調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至8.5?9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，得到二次酶解液； 步驟五、一次酸沉:調(diào)節(jié)二次酶解液PH至4.6?4.7進行酸沉處理，得到一次蛋白； 步驟六、堿液復溶:向一次蛋白中加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10?11，并在溫度為40?50 V下將一次蛋白完全溶解，得到蛋白復溶液； 步驟七、三次酶解:調(diào)節(jié)蛋白復溶液的PH至9?9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，得到三次酶解液； 步驟八、二次酸沉:調(diào)節(jié)三次酶解液的PH至4.4?4.6進行酸沉處理，得到二次蛋白；步驟九、微波滅酶:對二次蛋白進行微波滅酶處理，得到滅酶蛋白，將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。2.如權(quán)利要求1所述的酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步驟一中榛子柏粉原料的制備過程如下:將榛子去殼粉碎后采用六號溶劑浸泡，脫溶后得到脫脂的榛子柏，其殘油量為1.1?1.9%，并將脫脂的榛子柏粉碎過篩得到顆粒大小為100?150目篩的榛子柏粉原料。3.如權(quán)利要求1所述的酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步驟二中榛子蛋白萃取液的制備過程如下:將榛子柏粉原料和水按料液比Ig: 8?1mL混勻制得一次漿液，調(diào)節(jié)一次漿液的pH至8?8.5，并通過超聲波輔助萃取30?40分鐘，萃取溫度為35?40 V，待萃取結(jié)束，離心得到上層的一次萃取清液和下層的一次沉淀;再將一次沉淀和水按料液比Ig:10?15mL混勻制得二次漿液，調(diào)節(jié)二次漿液的pH至8.5?9，并通過超聲波輔助萃取15?20分鐘，萃取溫度為45?50°C，待萃取結(jié)束，離心得到上層的二次萃取清液和下層的二次沉淀;并將一次萃取清液和二次萃取清液合并混勻，即得榛子蛋白萃取液。4.如權(quán)利要求1所述的酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步驟三中一次酶解的過程如下:調(diào)節(jié)榛子蛋白萃取液的pH至8?8.5，并加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，一次復合酶采用風味蛋白酶+木瓜蛋白酶+糖化酶，所述風味蛋白酶、木瓜蛋白酶和糖化酶的用量為1:3?6: 2?4，且一次復合酶的加入量為榛子蛋白萃取液用量的2000?3000u/g，酶解反應溫度為40?45 °C，酶解反應時間為80?90分鐘，超聲強度為1.0?1.lW/cm3，待一次酶解反應結(jié)束，得到一次酶解液。5.如權(quán)利要求1所述的酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步驟四中二次酶解的過程如下:調(diào)節(jié)一次酶解液的pH至8.5?9，并加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，二次復合酶采用原果膠酶+堿性果膠酶+果膠甲酯水解酶，所述原果膠酶、堿性果膠酶和果膠甲酯水解酶的用量為1:4?8:3?6，且二次復合酶的加入量為一次酶解液用量的1500?2000u/g，酶解反應溫度為45?50 0C，酶解反應時間為70?80分鐘，超聲強度為1.1?1.2ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液。6.如權(quán)利要求1所述的酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步驟七中三次酶解的過程如下:調(diào)節(jié)蛋白復溶液的pH至9?9.5，并加入三次復合酶進行超聲輔助酶解，三次復合酶采用堿性纖維素酶+堿性半纖維素酶，所述堿性纖維素酶和堿性半纖維素酶的用量為1:3?6，且三次復合酶的加入量為蛋白復溶液用量的1000?1500u/g，酶解反應溫度為50?550C，酶解反應時間為60?70分鐘，超聲強度為1.2?1.3ff/cm3，待二次酶解反應結(jié)束，得到二次酶解液。7.如權(quán)利要求1所述的酶法制備榛子蛋白的方法，其特征在于，所述步驟九中微波滅酶的過程如下:對二次蛋白進行微波滅酶處理，微波功率為500?800W，滅酶溫度為80?90°C，滅酶時間為2?3分鐘，待微波滅酶結(jié)束，得到滅酶蛋白；將滅酶蛋白水洗至呈中性，并進行冷凍干燥處理，既得成品的榛子蛋白。
【文檔編號】C07K1/30GK106086133SQ201610440496
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月20日
【發(fā)明人】何東平, 張元明, 胡傳榮, 劉零怡, 舒靜, 馬齊兵
【申請人】武漢輕工大學